人生长抑素受体亚型mRNA在人粘液表皮样癌细胞中的表达

近年来发现，多种人类肿瘤组织皆高表达人生长抑素受体（ｈＳＳＴＲ）５种亚型中的某几种，其中具有代表性的是ＳＳＴＲ１，２两种亚型。由于它们可介导生长抑素（ＳＳＴ）及其类似物（ＳＳＡ）抑制瘤细胞增殖和分泌而倍受关注。粘液表皮样癌是常见的涎腺恶性肿瘤。低分化...     

蛋白激酶C抑制剂诱导CNE—2Z细胞凋亡的研究

目的和方法：采用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）催化区抑制剂ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）、调节区抑制剂ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ），诱导ＣＮＥ—２Ｚ细胞２４ｈ。结果：（１）ＳＴ、ＳＳ对细胞ＤＮＡ裂解的影响均随浓度增高而逐步增强，作用明显的终浓度分别为１×１０６ｍｏｌ／Ｌ和４×１０５；（２）核形态观察：诱导后部分细胞核变小，核浓缩及核碎裂；（３）ＤＮＡ琼脂糖电泳：诱导后的细胞有典型梯状ＤＮＡ条带；（４）流式细胞仪分析：诱导组Ｇ１期前均有ＤＮＡ亚二倍体峰，即凋亡峰。细胞周期改变：ＳＴ使Ｇ２期增加、Ｇ１、Ｓ期减少；ＳＳ使Ｓ期增加和Ｇ１期减少。结论：ＰＫＣ抑制剂可有效地促进ＣＮＥ－２Ｚ细胞凋亡，但与抑制剂剂量有关，细胞周期的改变可能在ＰＫＣ抑制剂诱导的细胞凋亡中起重要作用。     

GST-人可溶性成纤维细胞生长因子受体1融合蛋白在酵母细胞中的表达及活性测定

目的：表达重组人可溶性成纤维细胞生长因子受体１（ｓｏｌｕｂｌｅ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　１，ｓＦＧＦＲ１），研究其对成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）生物学活性的拮抗作用。方法：采用逆转录－ＰＣＲ（ＰＴ－ＰＣＲ）技术自人肺成纤维细胞获得ｓＦＧＦＲ１　ｃＤＮＡ，测序确证后，将其克隆人酵母细胞表达载体ｐＹＥＸ４Ｔ－１；重组质粒转化入酵母细胞（ＤＹ１５０）中进行诱导表达，表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及 Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ鉴定。利用 ＮＩＨ３Ｔ３细胞增殖抑制实验检测重组人 ｓＦＧＦＲ１的生物学活性。结果：经 ＣｕＳＯ４诱导，酵母细胞表达出重组谷胱苷肽转移酶（ＧＳＴ）－ｓＦＧＦＲ１融合蛋白，此蛋白在凝胶上表现为 １条约 ６０ｋＤ的阳性区带，在 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ实验中可被ＧＳＴ特异性抗体识别。重组ＧＳＴ－ｓＦＧＦＲ１融合蛋白的粗提物在体外能够桔抗ＦＧＦ介导的促ＮＩＨ３Ｔ３细胞增殖的活性。结论：重组ＧＳＴ－ｓＦＧＦＲ１融合蛋白在酵母表达系统中得到有效表达，并具有很好的生物活性。     

D21S11位点定量PCR快速基因诊断先天愚型

为了探讨定量ＰＣＲ方法在分子水平对Ｄｏｗｎ 综合征基因诊断意义,本实验以ＳＴＲ（Ｄ２１Ｓ１１） 做为遗传标记,合成特异引物对１１ 例正常人（６ 例外周血,５ 例羊水）及２８ 例先天愚型患者外周血进行同位素标记ＰＣＲ 扩增后定量分析,结果显示１１ 例正常人中１０ 人呈ＤＮＡ 含量为１ ：１ 关系的两条电泳带,１ 人为１ 条带。２８ 例患者中２４ 人呈ＤＮＡ含量为２ ：１ 的两条带,３ 人为ＤＮＡ 含量为１ ：１：１ 关系的三条带,１ 人为１ 条带。实验表明Ｄ２１Ｓ１１ 位点ＳＴＲ多态是对Ｄｏｗｎ 综合征基因诊断很有应用价值的遗传标记,应用定量ＰＣＲ的方法可在２４ 小时内对先天愚型做出快速、准确的产前及临床基因诊断。     

缬草提取物抗心肌缺血再灌注损伤的实验研究

了解缬草提取物对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法：大耳白种家兔２０只,分为实验组和对照组。结扎冠状动脉左室支１ｈ后松解,观察１．５ ｈ。实验组手术前１ｈ,结扎前１０ｍｉｎ给予缬草提取物１００ｍｇ／ｋｇ（体重）腹腔注射。观察体表标测心电图、心肌ＳＯＤ：ＭＤＡ、ＴＸＢ_２、６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ_１α、ＴＮＦ－α、ＩＬ－β等指标。结果：心电图：结扎后１ｈ,实验组Ｎ－ＳＴ、ΣＳＴ、Ｎ．Ｒ明显低于对照组（ Ｐ＜ ０ ．０５）;松解复灌后１．５ｈ,实验组Ｎ－ＳＴ、ΣＳＴ明显低于对照组（ Ｐ＜ ０．０５）。心肌匀浆：实验组ＸＯＤ、ＭＤＡ、ＴＮＦ－α均低于对照组（ Ｐ＜ ０．０５）;实验组６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ_(１α)／ＴＸＢ_２高于对照组（Ｐ＜０．０５）。实验组ＩＬ－１β略低于对照组,但统计学上无显著差异。结论：缬草提取物有抗心肌缺血再灌注损伤的作用。     

用二核苷酸简单串联重复顺序多态位点进行中国人个体鉴别

为建立二核苷酸简单串联重复顺序（ＳＴＲ）多态位点个体鉴别技术系统，应用６个位于不同染色体呈共显性传递的二核苷酸ＳＴＥ多态位点进行中国汉族人个体鉴别研究，这６个位点是Ｄ１Ｓ１０３、Ｄ４Ｓ１７５、Ｄ５Ｓ１０７、Ｄ１９Ｓ４９、Ｄ６Ｓ８９及Ｄ９Ｓ５８。结果显示：（１）６个ＳＴＲ位点基因型数１４～３９个，等位片段数０～２０个；（２）杂合度观察值及估测值分别为０．６５～０．９１及０．６３～０．９３．多态信息含量０．５９～０．９０；（３）６个位点均符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡；（４）６个位点１５次配对分析中，未见非随机关联；（５）６个位点的亲子关系排除概率０．９９；（６）普通群体中两个无亲缘关系随机个体间６个位点基因型完全一致的概率在１．７×１０－１２～９．２×１０－３３间。结果表明，应用这六个二核苷酸ＳＴＲ位点适于亦足以在中国汉族人中进行个体鉴别．故将此检测及数据处理系统，命名为ＤＮＡ身份号码。     

在石蜡切片中进行微切割-PCR-银染的方法

目的：探索在石蜡切片中应用微切割－ＰＣＲ－银染技术,检测大肠癌的微卫星不稳定性和杂合性缺失。方法：用微切割技术在２８例石蜡切片中提取淋巴细胞和间质细胞、癌旁粘膜腺管、不典型地生腺管、腺瘤腺管和腺癌细胞,每例至少包含３种类型细胞,经蛋白酶Ｋ消化后,直接用于ＰＣＲ扩增,产物进行８％变异聚丙烯酰胺凝胶电泳－银染。共进行了ＴＧＦ－βＲⅡ（Ａ）１０、ｈＭＳＨ２（Ａ）２６－Ｂａｔ２６,ｈＭＳＨ３（Ａ）８,ｈＭＳＨ６（Ｃ）８４个微卫星位点的检测。结果：ｈＭＳＨ３（Ａ）８和ｈＭＳＨ６（Ｃ）８位点在２８例标本全部扩增出目的片段,ＴＧＦ－βＲⅡ（Ａ）１０和ｈＭＳＨ２（Ａ）２６位点则分别有２３例、２２例扩增出目的片段,且ｈＭＳＨ２（Ａ）２６位点有５例癌细胞呈阳性,其中１例同时有腺癌细胞阳性。结论：微切割－ＰＣＲ－银染技术应用于石蜡切     

IST支原体培养与PCR解脲支原体检测方法的比较

目的：比较分析ＰＣＲ解脲支原体检测法与ＩＳＴ支原体培养法的结果及两种方法的优缺点。方法：同时采集８８例临床上诊断为非淋菌性尿道炎（ＮＧＵ）、阴道炎患者分泌物标本两份,分别用ＩＳＴ支原体培养法和ＰＣＲ解脲支原体（Ｕｕ）检测法进行对照实验和分析。结果：ＩＳＴ支原体培养法Ｕｕ阳性２５例（２８．９４％）,人型支原体（Ｍｈ）１例（１．１４％）,Ｕｕ＋Ｍｈ５例（５．６８％）。ＰＣＲ检测Ｕｕ阳性３０例（３４．０４％）,其中男性５例ＰＣＲ检测Ｕｕ为阳性,而ＩＳＴ支原体培养法为阴性;女性３例ＰＣＲ检测Ｕｕ阴性,培养法为阳性。两种方法的Ｕｕ阳性率经统计学ｘ２检验（Ｐ＞０．０５）无显著性差别。结论：ＩＳＴ支原体培养法与ＰＣＲ检测Ｕｕ法均能适用于临床Ｕｕ的检测。ＩＳＴ支原体培养法操作简便,不需要特殊仪器;能进行支原体的种类鉴别;有参考病理阈值并可同时做药敏实验,特别适合基层医院的支原体检测工作。     

失血性休克再灌注后血浆内皮素的变化及磷脂酶A_2阻断剂对它的影响

家兔出血性休克再灌注（Ｓ／Ｒ）后，放免分析发现血浆内皮素逐渐升高，同失血前比较第６ｈ有显著差异（Ｐ＜０．０５），假手术组没有改变。磷脂酶Ａ_２阻断剂氯喹、磷酸萘酚喹和抗氧化剂黄芪酮于失血后再灌注前使用可抑制Ｓ／Ｒ后２ｈ内血浆内皮素增高，后两者可更明显降低Ｓ／Ｒ后３０ｍｉｎ的内皮索水平，与失血前比较差异非常好著（Ｐ＜０．０１）。同时，ＨＣＯ~－_３和碱贮备（ＳＢＣ）显著降低，上述三种药物治疗显著增加ＨＣＯ~－_３和ＳＢＣ的含量，它们在Ｓ／Ｒ后２４ｈ明显高于Ｓ／Ｒ组的水平（Ｐ＜０．０１）。结果提示，Ｓ／Ｒ后血浆内皮素上升可能与代谢性酸中毒加重有一定联系。磷脂酶Ａ_２阻断剂和抗氧化剂可能通过早期抑制内皮素的释放，从而减轻２４ｈ后代谢性酸中毒程度。     

慢性腹透病人sIL─2R和STNFR1增高的临床研究

测定了８０例慢性腹透患者（ＰＤ）及６２例血透患者（ＨＤ）的ｓＩＬ－２Ｒ、ＳＴＮＦＲ１，结果表明：①ＰＤ者淋巴细胞活化较ＨＤ者稳定；②透析患者ｓＩＬ－２Ｒ增高不能单用清除减少来解释，可能还存在免疫调节；③高龄者免疫功能（ｓＩＬ－２Ｒ）降低与ＡＬＢ降低有关。认为ｓＩＬ－２Ｒ、ＳＴＮＦＲ１增高可降低宿主炎症反应，可能与长期透析患者极易感染有关     

ANALYSIS OF MOTIF IN TCR Vβ HV4 SEQUENCES BINDING SUPERANTIGEN TSST-1

首先对４１种人和小鼠的Ｔ细胞受体β链可变基因编码肽段（Ｖβ）的氨基酸序列进行多序列对准，就Ｖβ之第四高变区（ＨＶ４）片段进行比较，分析与超抗原毒素休克综合征毒素－１（ＴＳＳＴ－１）结合的四种Ｖβ（小鼠Ｖβ３、Ｖβ１５、Ｖβ１７和人Ｖβ２）之ＨＶ４序列内是否存在特定的氨基酸残基排列模式。结果发现：小鼠Ｖβ３和Ｖβ１７的ＨＶ４具有特异的ＲＦＳＡＸＣＸＳＮＳ模式，而小鼠Ｖβ１５和人Ｖβ２的ＨＶ４则含独特的ＫＦＸＩＸＨ模式。提示：与ＴＳＳＴ－１结合的四种Ｖβ所对应的Ｔ细胞识别表位可能不止一个。     

DMD基因突变类型及其研究方法

ＤＭＤ基因位于Ｘｐ２１．１—２１．３，由７９个外显子及其相应的内含子约２３００ｋｂ组成，１３９７４ｋｂ的ｍＲＮＡ中１１．３ｋｂ的序列为３６８５个氨基酸残基的抗肌营养不良蛋白（ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎｐｒｏｔｅｉｎ）编码。随着Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹和各种ＰＣＲ技术的引进。在ＤＭＤ基因上已发现了５０种ＲＦＬＰ，１３种ＳＴＲ（Ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｎｒｅｐｅａｔ），８种碱基置换，同时探明了ＤＭＤ基因突变的分子基础包括：（１）基因部分缺失；（２）基因部分重复；（３）基因内连接片段的形成：（４）碱基置换；（５）ＳＴＲ的多态性改变。本文就ＤＭＤ基因突变的类型，突变的原因，以及突变的研究方法作一概述。     

1，25双羟维生素D3对成骨样细胞骨架和基因表达的影响

用荧光免疫法研究了１，２５双羟基维生素Ｄ３对大鼠成骨样细胞（ＲＯＳ１７／２．８）细胞骨架的影响和用斑点杂交技术研究了１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对人成骨样细胞（ＯＳ－７３２）基因表达的影响。结果表明：在１０＾－７ｍｏｌ／Ｌ１，２５（ＯＨ）２Ｄ３连续作用４ｄ后，大鼠ＲＯＳ１７／２．８细胞的微管蛋白和波形纤维蛋白明显改善，纤粘蛋白荧光明显增强。而在１，２５（ＯＨ）２Ｄ３作用前后ＯＳ－７３２细胞ｃ－ｍｙｃ和ｍ     

脑干诱发电位V／I波幅比值和耳蜗电图对椎基底动脉供血不足的诊断价值

本文报告确诊为椎基底动脉供血不足者４２例（８４支耳），对其进行脑干诱发电位（ＡＢＲ）和耳蜗电图（ＥＣｏｃｈＧ）两项检测在本病时的应用价值研究。ＡＢＲ中Ⅰ—Ⅲ波ＩＰＬ延长（＞２．３０ｍｓ）占２０％．Ⅰ—Ⅴ波ＩＰＬ（＞４．５ｍｓ）占１２％，Ｉ／Ｖ比值）１．０占５８％。ＥＣｏｃｈＧ中ＡＰ（Ｎ１）下降占８４．５％，Ｎ２＞Ｎ１占２６％，ＳＰ／ＡＰ比值＞０．３７占２５％。认为利用单项ＡＢＲ或ＥＣｏｃｈＧ检测结果诊断椎基底动脉供血不足是不够全面的。     

ANALYSIS OF MOTIF IN TCR Vβ HV4 SEQUENCES BINDING SUPERAN…

首先对４１种人和小鼠的Ｔ细胞受体β链可变基因编码肽段（Ｖβ）的氨基酸序列进行序列对准，就Ｖβ之第四高变区（ＨＶ４）片段进行比较，分析与超抗病毒素休克综合征毒素－１（ＴＳＳＴ－１）结合的四种Ｖβ（小鼠Ｖβ３、Ｖβ１５、Ｖβ１７和人Ｖβ２）之ＨＶ４序列内是否存在特定的氨基酸残基排列模式。结果发现：小鼠Ｖβ３和Ｖβ１７的ＨＶ４具有特异的ＲＦＳＡＸＣＸＳＮＳ模式，而小鼠Ｖβ１５和３人Ｖβ２的ＨＶ４则含独特     

遗传性非息肉性大肠癌患者中hMLH1和hMSH2基因遗传性突变的分析

目的通过分析遗传性非息肉性大肠癌（ＨＮＰＣＣ）患者错配修复基因的遗传性突变，对患者的家族成员进行遗传咨询和症状前的基因诊断。方法用ＰＣＲ－异源双链体形成、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＤＮＡ序列分析技术，检测１４例ＨＮＰＣＣ、１０例有家族史大肠癌患者的外周血细胞ＤＮＡ，分析其错配修复基因ｈＭＬＨ１、ｈＭＳＨ２的所有３５个外显子。结果确认４／１４的ＨＮＰＣＣ、１／１０有家族史的大肠癌患者携带遗传性错配修复基因的突变，其中２例见于ｈＭＬＨ１基因，３例ｈＭＳＨ２基因。突变类型：３例由碱基缺失导致的移码突变，１例无义突变，１例错义突变。结论ＨＮＰＣＣ的发生与错配修复基因的突变密切相关；在大肠癌患者中检测遗传性错配修复基因的突变不宜仅限于严格符合临床诊断标准的ＨＮＰＣＣ患者。     

Epstein—Barr病毒在人上皮细胞中的增殖和表达

为了研究Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒在人上皮细胞的存在方式，构建了真核表达质粒ｐＳＧ－ＣＲ２－Ｈｙｇ，并用电脉冲介导基因转移法把该质粒转入人羊膜上皮细胞（ｗｉｓｈ细胞），用Ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ Ｂ筛选出抗性细胞，用ＣＲ２单克隆抗体测定，约２５％ｗｉｓｈ细胞表达ＣＲ２。再用ＥＢ病毒感染此细胞，培养一定时间后，与鼻咽癌（ＮＰＣ）病人血清反应，通过间接免疫荧光法检测，发现１３％的细胞呈阳性结果。     

金黄色葡萄球菌中毒休克综合征毒素1在大肠杆菌中的分泌型表达

中毒休克综合征毒素１（Ｔｏｘｉｃｓｈｏｃｋｓｙｎｄｒｏｍｅｔｏｘｉｎ－１，ＴＳＳＴ－１）在中毒休克综合征（Ｔｏｘｉｃｓｈｏｃｋｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＴＳＳ）的发病过程中起重要作用。本研究应用ＰＣＲ和ＤＮＡ重组技术，构建了ＴＳＳＴ－１分泌型表达载体ｐＲＴＳ２０并在大肠杆菌细胞周质表达出分子量为２２×１０３的重组ＴＳＳＴ－１，表达量约占周质总蛋白的６％～８％。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交表明，表达产物具有特异的抗原活性。对ＴＳＳＴ－１生物学特性、结构功能关系有待进一步研究。本文对ＴＳＳＴ－１抗毒素的制备具有一定的参考意义。     

DIG—DNA探针检测弓形虫核酸

应用ＰＣＲ技术，对弓形虫Ｂ１基因的部分序列进行体外扩增，获得２０７ｂｐ的特异性核酸片段，并通过地高辛配基（Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ）标记作为探针，通过斑点杂交试验检测弓形虫核酸。实验表明，该探针能与ＲＨ、ＳＨ１、ＺＳ１、ＺＳ２及ＧＬ１株弓形虫核酸特异性杂交，最低检测量为２５ｐｇ纯化弓形虫核酸。在急性感染弓形虫的小鼠，该探针可于感染后第２天（２４ｈ后），从组织（肝、脾、及肾）中检测到弓形虫核酸，第３天（４８ｈ后）可从部分小鼠（１／５）外周血中检测到弓形虫核酸。表明该探针具有特异、敏感、快速、实用的特点，可望用于弓形虫病的早期诊断，适用于基层及流行病学调查。     

高血压病患者遗传性红细胞Na~＋－Li~＋逆向及Na~＋－K~＋同向转运研究

对５３个至少双亲之一患高血压病（ＥＨＴ）的家庭和２５个正常血压（ＮＴ）者家庭（包括父、母及一个子女）成员的红细胞（ＲＢＣ）Ｎａ￣＋－Ｌｉ￣＋逆向转运（ＳＬＣ）及Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋同向协同转运（ＳＰＴ）功能，作它们与平均血压（ＭＡＢＰ）间的家庭内部相关分析，并计算其多基因累加遗传力（ｈ２），发现：（１）在ＮＴ、ＮＴ＋ＥＨＴ家庭，ＲＢＣ的ＳＰＴ和ＳＬＣ的双亲均值都和其子女的相应值呈正相关，但配偶间不相关，提示系遗传性传递；（２）ＳＰＴ和ＳＬＣ的ｈ￣２在ＮＴ和ＮＴ＋ＥＨＴ家庭分别为０．３２５０、０．４５１４和０．５７７０、０．７８２９，ＳＬＣ的ｈ￣２较ＳＰＴ的大；（３）双亲ＳＬＣ均值与子女的ＭＡＢＰ呈正相关，而ＳＰＴ则不相关，提出ＳＬＣ与血压遗传间的联系较ＳＰＴ密切，可能成为预测ＥＨＴ的“遗传标记”；（４）ＳＬＣ与ＳＰＴ值均存在“母体效应”。