四君子汤对脾虚大鼠腮腺唾液淀粉酶分泌障碍及VIP-cAMP信号通路的影响

目的:观察四君子汤对脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌障碍治疗效果,并揭示其作用机制。方法:大鼠皮下注射利血平0.5 mg/kg,正常对照组大鼠注射等量生理盐水,共8 d;造模结束后模型动物分为模型组和四君子汤组,四君子汤组灌胃给予四君子汤,模型组和正常对照组灌胃给予等量双蒸水,给药4 w后进行取材。麻醉动物,取左侧腮腺,缝合伤口,大鼠稍清醒时,用10%冰乙酸溶液20μL刺激大鼠舌尖,1次/min,共刺激30次;处死,取下右侧腮腺。检测腮腺组织唾液淀粉酶活性(sAA)c、AMP及VIP含量、PKA活性和VAMP8、SNAP-23蛋白表达。结果:四君子汤组大鼠腮腺内sAA与正常对照组大鼠无显著差异,模型组大鼠酸刺激后sAA活性显著高于正常对照组大鼠,酸刺激前VIP含量、PKA活性各组大鼠无显著差异;酸刺激后,正常对照组大鼠VIP及cAMP含量、PKA活性显著升高,模型组大鼠VIP轻微升高,cAMP含量、PKA活性显著低于正常对照组,四君子汤组大鼠VIP及cAMP含量、PKA活性有一定程度恢复。模型组VAMP-8蛋白表达与正常对照组比较无显著差异,SNAP-23蛋白表达有所下降;与模型组比较,四君子汤组大鼠SNAP-23、VAMP-8蛋白表达增强。结论:四君子汤对利血平脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌障碍有一定疗效,可能通过恢复脾虚大鼠腮腺细胞VIP-cAMP信号通路改变起到治疗作用,包括提高VIP含量和提高SNAP-23和VAMP-8蛋白表达。     

利血平致脾虚大鼠唾液蛋白分泌改变及其机制的探讨

目的观察利血平致脾虚大鼠唾液蛋白分泌的改变并探讨其机制。方法利血平组大鼠20只皮下注射0.4mg/(kg.d)利血平9d造模,对照组大鼠20只注射生理盐水9d;10d时两组各随机抽取10只大鼠检测酸刺激前后唾液淀粉酶活性(sAA)比值,眼眶静脉采血检测血清的血管活性肠肽(VIP)和环磷酸腺苷(cAMP),处死动物取腮腺检测VIP和cAMP,取腮腺HE染色病理组织学观察和透射电镜计数腮腺酶原颗粒。两组剩余大鼠均停止注射并正常饲养40d,检测以上项目。结果利血平组大鼠较对照组食量明显减少、体重下降。10d时:利血平组sAA活性比值(0.39±0.18)显著低于对照组(0.80±0.21,P0.01),25d已恢复正常并持续至40d(与本组10d比较,P0.05;与对照组比较,P0.05);HE染色病理组织学检查未见两组腮腺有明显病理改变,透射电镜发现利血平组的单位观察视野腮腺酶原颗粒数(41.4±4.9)高于对照组(34.6±5.2,P0.01);血清VIP利血平组(22.5±13.1mg/L)低于对照组(38.5±14.1mg/L,P0.05),腮腺VIP两组差异无统计学意义;血清cAMP利血平组(125.8±15.5μmol/L)高于对照组(105.3±16.7μmol/L,P0.05),腮腺cAMP两组差异无统计学意义。40d时各项检测指标两组比较差异无统计学意义。结论利血平致脾虚大鼠酸刺激下唾液蛋白分泌减少,可能与VIP和cAMP调节途径有关。     

四君子汤对利血平致脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌的影响

目的观察脾虚证大鼠唾液淀粉酶分泌情况及四君子汤治疗作用。方法雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组,模型组,大鼠皮下注射利血平,空白组大鼠注射等量生理盐水,共8d;造模结束后将模型组分为中药组和模型组,中药组给予灌服四君子汤,模型组和正常组给予灌服等量的双蒸水,灌服4周后进行取材。麻醉动物,取下左侧腮腺,缝合伤口,等大鼠稍清醒时用10%冰乙酸溶液20μL刺激大鼠舌尖,1次/min,共刺激30min;处死,取下右侧腮腺。检测腮腺淀粉酶活性、电镜下观察腮腺内酶原颗粒数量、腮腺组织病理。结果模型组大鼠酸刺激后腮腺内残余的淀粉酶活性和酶原颗粒高于正常组大鼠,经四君子汤治疗后脾虚大鼠的唾液淀粉酶的分泌基本恢复正常,各组腮腺组织没有明显病理改变。结论四君子汤对利血平所致脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌障碍有明显治疗作用,机制与腮腺组织病理学无关。     

不同证型慢性非萎缩性胃炎患者唾液淀粉酶的活性、蛋白含量、比活力及其N-糖基化程度

目的分析不同证型慢性非萎缩性胃炎患者唾液淀粉酶(sAA)的活性、蛋白含量、比活力及其N-糖基化程度。方法 68例慢性非萎缩性胃炎患者按中医辨证分为脾气虚弱组(24例)、脾虚湿热组(33例)、肝胃不和组(11例),另设健康对照组(36名),采集各组酸刺激前后的唾液,检测sAA活性、蛋白含量、比活力及其N-糖基化程度,并分析sAA活性、蛋白含量的酸刺激前后比值。结果与本组酸刺激前比较,酸刺激后健康对照组sAA活性及蛋白含量均升高,sAA比活力均明显下降(P0.05)。与健康对照组比较,酸刺激后脾气虚弱组、脾虚湿热组sAA活性比值、蛋白含量比值1及糖基化缺失的例数均增高(P0.05),酸刺激前脾虚湿热组sAA比活力高于健康对照组(P0.05)。酸刺激后,健康对照组、脾虚湿热组、脾气虚弱组的sAA比活力均较酸刺激前明显下降(P0.05),但组间比较差异无统计学意义(P0.05)。肝胃不和组的各项分析指标与健康对照组差异无统计学意义(P0.05)。结论慢性胃炎脾气虚弱证及脾虚湿热证sAA的活性、蛋白含量及N-糖基化程度发生异常改变,脾运化功能的强弱可在唾液蛋白质分泌中有较为客观的反映。     

桂枝汤主要成分对PGE2刺激的胚胎大鼠下丘脑神经cAMP-PKA的影响

目的：cAMP-PKA（环磷酸腺苷-蛋白激酶A）是细胞内非常重要的信号转导途径。本实验研究了桂枝汤四个主要组成成分。桂皮酸、桂皮醛、芍药苷及甘草次酸，不同组合对PGE2（前列腺素E2）刺激的胚胎大鼠下丘脑神经细胞内cAMP-PKA水平的影响。方法：用放免法测定不同组合成分作用的细胞cAMP含量和PKA活性。结果：各成分作用时，桂皮酸（0．625μg／mL）、桂皮醛（10、0．625μg／mL）、芍药苷（0．625μg／mL）和甘草次酸（10μg／mL）对细胞cAMP含量或PKA活性有显著的降低作用；在27组不同成分的组合中，有19组对细胞cAMP含量、16组对细胞PKA活性有显著的降低作用。结论：桂皮酸、桂皮醛、芍药苷和甘草次酸的不同浓度组合可能与桂枝汤体温双向调节作用的物质基础有关，其作用可能与调节cAMP-PKA通路有一定的关系。     

基于cAMP-PKA信号通路的虚寒状态大鼠中枢神经递质变化机制研究

目的:探讨虚寒状态下单胺类神经递质的变化及机制,明确cAMP-PKA信号通路在虚寒状态中的作用。方法:氢化可的松塑造大鼠虚寒模型,HPLC法检测脑内单胺类神经递质及代谢产物含量:NE、E、DA、5-HT、5-HIAA、DOPAC,放免法测血浆cAMP、cGMP水平,免疫组化法测肝脏PKA表达。结果:14d虚寒状态组NE、5-HIAA、5-HT含量和cAMP、cGMP水平及PKA表达显著降低;21 d虚寒状态组NE、DOPACT含量和cAMP、cGMP水平及PKA表达显著降低。结论:cAMP-PKA通路可能是介导虚寒状态脑内单胺类神经递质变化的机制之一。     

采用唾液淀粉酶活性指标对脾虚模型大鼠唾液采集方法的评价研究

目的:评价脾虚模型大鼠唾液采集方法的可行性。方法:采集利血平所致脾虚组大鼠和正常组大鼠各24例酸刺激前后的唾液,其中刺激后的唾液以0.4 mol/l 0.50 cm×0.50 cm柠檬酸滤纸,每隔2.5 min刺激大鼠舌尖30 s,获得刺激后0~5 min、6~10 min和11~15 min的唾液。Bernfeld法测定唾液淀粉酶(s AA)活性,计算s AA活性比值。结果:脾虚组衰竭明显,体质量比正常组显著降低;正常组与分组前所有大鼠刺激前和刺激后s AA活性及其活性比值比较差异无统计学意义;脾虚组酸刺激前的s AA活性与正常组比较差异无统计学意义,酸刺激后3个时间段的s AA活性和活性比值均比正常组显著降低。结论:建立唾液采集方法经s AA活性分析,表现出与人较为一致的趋势,可以用于脾虚大鼠s AA相关研究。     

平郁胶囊对慢性应激抑郁大鼠受体后信号传导通路的影响

目的：观察平郁胶囊对慢性应激抑郁大鼠受体后信号传导通路重要调节因子cAMP, PKA, PKC的影响。方法：Wistar雄性大鼠，随机分为空白组，模型组，平郁胶囊低、中、高剂量组，阳性药帕罗西汀组。除空白组外其余各组大鼠均单笼孤养，并且给予电击足底、冰水游泳、热烘、夹尾等不可预见刺激，周期为21 d。取出大脑的海马和皮质，用放射性免疫法检测其cAMP的含量，用Elisa法检测其PKA和PKC的含量，用放射性同位素法检测其PKA和PKC的活性。结果：模型组大鼠海马和皮质内的cAMP含量、海马内PKA含量及活性、皮质内PKC含量均显著低于正常组，平郁胶囊及阳性药帕罗西汀均能使之上调。结论：平郁胶囊可能是通过调节受体后cAMP-PKA信号传导通路而发挥抗抑郁作用。     

卒中后抑郁大鼠受体后信号转导的变化及中药的干预作用

目的:从受体后信号转导通路上重要调节因子cAMP、PKA及PKC的角度,探讨卒中后抑郁模型受体后信号转导的变化及中药颐脑解郁方的干预作用.方法:在卒中后抑郁大鼠模型上,采用放射性同位素等方法,观察PSD大鼠脑前皮质及海马cAMP含量、PKA及PKC活性的变化及中药颐脑解郁方的干预作用.结果:卒中后抑郁模型大鼠前额叶皮质、海马cAMP含量及PKA活性明显低于正常组,中药颐脑解郁方能使之上调;模型组PKC活性明显高于正常组,颐脑解郁方能使之下调.结论:卒中后抑郁模型脑皮质及海马受体后cAMP-PKA信号通路系统下调而PKC信号通路上调,中药颐脑解郁方的抗抑郁作用可能与调节受体后cAMP-PKA及PKC信号通路有关.     

苔黑酚葡萄糖苷对L02细胞肝药酶CYP3A的调控作用研究

目的观察苔黑酚葡萄糖苷对体外培养的正常肝细胞株L02中CYP3A的影响,探讨苔黑酚葡萄糖苷是否通过cAMP-PKA信号通路调控CYP3A的活性。方法分别用cAMP-PKA信号通路中蛋白激酶A(PKA)激动剂环腺苷酸(cAMP)类似物8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)及其抑制剂H-89、苔黑酚葡萄糖苷干预L02细胞,MTT法检测细胞活力,完整细胞免疫组化法检测PKA蛋白表达,红霉素-N-脱甲基法检测CYP3A活性,Western blotting检测细胞中孕烷X受体(PXR)蛋白表达。结果与对照组(加入不含药的无血清培养基)相比,苔黑酚葡萄糖苷处理后的细胞CYP3A的活性增强,PKA、PXR蛋白表达增强,与8-Br-cAMP的作用相似。结论苔黑酚葡萄糖苷可通过cAMP-PKA信号通路调控CYP3A的表达,表明其可能是仙茅表现出辛热药性的主要成分之一。     

活血生津中药对头颈部肿瘤患者放疗中唾液腺的影响

目的：探讨活血生津中药制剂对头颈部肿瘤患者放疗中唾液腺功能的保护作用。方法：将５０例首程放疗的头颈部肿瘤患者随机分为观察组（中药加放疗，２４例），对照组（单纯放疗，２６例）。对放疗前及放疗不同剂量时的口干程度、唾液流速及淀粉酶分泌速度进行比较。结果：随放疗剂量的增加，两组口干程度增加，唾液流速与淀粉酶分泌速度下降。放疗中观察且口干程度曲线较对照组明显平坦。放疗至２０、４０、６０Ｇｙ时观察组唾液流速     

清热养阴消肿汤对鼻咽癌放疗所致唾液腺损伤患者唾液分泌及细胞免疫功能的影响

目的观察清热养阴消肿汤对鼻咽癌放疗所致唾液腺损伤患者唾液分泌及细胞免疫功能的影响。方法将2017年5月—2018年5月湖南中医药大学第一附属医院收治的76例鼻咽癌放疗所致唾液腺损伤患者随机分为2组,对照组38例于放疗当日给予生理盐水含漱治疗,观察组38例在对照组基础上于放疗当日另给予清热养阴消肿汤治疗,连续治疗8周,比较2组治疗后临床总有效率及卡氏评分(KPS评分)、放射性唾液腺损伤(LENT/SOMA评分)、唾液分泌功能(唾液流速、淀粉酶分泌速度)及细胞免疫功能(CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+、NK细胞)的改善情况,并统计2组治疗期间不良反应发生情况。结果观察组总有效率为76.3%(29/38),显著高于对照组总有效率55.3%(21/38)(P<0.05);观察组治疗后KPS评分较治疗前明显升高(P<0.05),对照组治疗后KPS评分较治疗前明显降低(P<0.05),2组治疗后LENT/SOMA评分均明显降低(P均<0.05),且观察组治疗后KPS评分和LENT/SOMA评分改善均明显优于对照组(P均<0.05);2组治疗后唾液流速和淀粉酶分泌速度均明显下降(P均<0.05),但观察组治疗后唾液流速和淀粉酶分泌速度均明显高于对照组(P均<0.05);观察组治疗后CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+、NK细胞均明显升高(P均<0.05),且均高于对照组(P均<0.05),CD8+水平降低(P<0.05),且低于对照组(P<0.05);对照组治疗前后CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+、NK细胞比较差异无统计学意义(P均>0.05);2组治疗期间均未出现严重不良反应,部分患者出现血常规异常经对症治疗后均恢复正常。结论清热养阴消肿汤能够有效改善鼻咽癌患者放疗后唾液腺功能损伤,促进唾液分泌,提高机体免疫力,且不良反应较少。     

运脾消食方对厌食症儿童唾液淀粉酶活性、血红蛋白含量影响的研究

目的:观察运脾消食方对厌食症儿童唾液淀粉酶活性、血红蛋白含量的影响.方法:将98例患者随机分为两组,治疗组49例服用运脾消食方(由焦三仙、炒白术、法半夏、陈皮、鸡内金、使君子、三棱、胡黄连、佩兰等中药组成),4周为1个疗程,治疗2个疗程.对照组49例口服小儿健脾化积口服液,疗程同治疗组.对治疗前后患儿的主、次要症状进行分级量化并进行疗效评定,并观察治疗前后身高、体重、唾液淀粉酶活性、血红蛋白含量的变化.结果:总有效率治疗组为95.92％,对照组为77.55％,两组比较,运脾消食方组在总有效率、症状、体征、唾液淀粉酶活性、血红蛋白含量改善等方面均明显优于小儿健脾化积口服液组(P＜0.01或P＜0.05).结论:运脾消食方对改善小儿厌食症的症状、体征疗效显著,并能增强患儿唾液淀粉酶活性、增加血红蛋白含量.     

外燥对小鼠气管上皮纤毛运动与呼吸道液分泌的影响

目的：观察外燥对小鼠气道组织、气管纤毛运动（CM）与呼吸道液黏多糖（RS）的影响。方法：72只无特定病原体（SPF）级昆明小鼠随机分为常温常湿组、常温燥组、温燥组、凉燥组，每组18只。第7天与第14天检测病理组织学、CM和RS情况。结果：温燥组小鼠第14天气管上皮鳞状化生、气管纤毛片状缺损、肺泡瘀血、水肿等较第7天加重，约40％浆液腺上皮黏液腺化生；凉燥组小鼠气道病变比温燥组略轻，约20％浆液腺上皮黏液腺化生。与常温常湿组比较，温燥组小鼠第7天与第14天CM加快，第7天RS增高但第14天减缓（P〈0．01）；凉燥组小鼠第7天RS减少，第14天升高且CM加快（P〈0．01）。结论：温燥通过损伤气道纤毛一黏液毯屏障、腺体结构而致肺津生成减少与宣输失司，是燥咳的重要病机之一。凉燥组小鼠RS增加与CM加快，与凉伤肺阳而致肺津不化，凝成痰饮有关。CM与RS可为研究外燥病机提供量化指标。     

活血解毒方对干燥综合征小鼠颌下腺AQP5表达的影响

目的:探讨活血解毒方对干燥综合征(SS)模型小鼠颌下腺AQP5表达的影响。方法:以BABL/C小鼠为正常组,选取NOD小鼠为SS模型并随机分为模型组、活血解毒方组(HXJD)和白芍总苷胶囊组(TGPC),给药后观察各组小鼠颌下腺形态学和分泌功能的改变,并采用SABC法检测各组小鼠颌下腺AQP5表达水平的变化。结果:药物干预8周后,模型组较正常组表达AQP5明显降低;与模型组比较,TGPC组和HXJD组AQP5表达均显著升高;TGPC组和HXJD组之间AQP5表达无明显差异。结论:活血解毒方可改善SS模型鼠颌下腺腺泡的分泌功能,提高其颌下腺指数,增加SS模型鼠的唾液分泌量;其作用机理与上调AQP5的表达水平有关。     

参苓白术散对脾虚证小鼠血清淀粉酶、D-木糖、胃泌素及小肠组织学变化的研究

目的:研究参苓白术散对脾虚证小鼠血清淀粉酶、D-木糖、胃泌素含量及小肠组织细胞形态变化的影响,并探讨参苓白术散治疗脾虚证的机制。方法:将小鼠随机分为4组:空白对照组、利血平模型组、利血平﹢参苓白术散低剂量组、利血平﹢参苓白术散高剂量组。观察各组小鼠体征改变,测定血清淀粉酶和D-木糖的含量、放免法测定血清胃泌素含量、观察小肠组织细胞形态变化。结果:参苓白术散小剂量1.5g/(kg.d)可以改善模型小鼠的体征、血清淀粉酶、D-木糖、胃泌素的含量增加、使模型小鼠小肠病理改变得以很好的恢复。结论:参苓白术散能通过影响动物小肠的吸收、分泌功能及胃和胰腺的分泌功能及修复损伤的小肠组织细胞起到治疗脾虚证的作用。     

狭基线纹香茶菜对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究狭基线纹香茶菜对四氯化碳(CCl4)所致大鼠急性肝损伤的保护作用。方法:60只大鼠随机分为正常组、模型组、高、中、低剂量给药组、阳性药对照组6个组。给药组按15,7.5,3.75 g.kg^-1剂量,以狭基线纹香茶菜水提物灌胃;阳性药对照组按45 mg.kg^-1给联苯双酯;每天1次,连续10天。给药第1,4,7,10天(共4次),模型组和给药组按2 mL.kg^-1腹腔注射10%CCl4造模。第11天,末次给药24 h后,取血,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)及总胆红素(T-Bil),同时测体重、肝脏重、脾重和胸腺重,求脏器系数,并取肝组织作病理观察。结果:狭基线纹香茶菜可显著降低急性肝损伤大鼠血清ALT,AST,ALP水平和T-Bil含量,对肝重量增大和胸腺萎缩有抑制作用。病理检查结果也显示有明显的保肝作用。结论:狭基线纹香茶菜对CCl₄所致大鼠急性肝损伤有保护作用。     

灵芝孢子粉对重症急性胰腺炎大鼠免疫功能的调整作用

目的：探讨灵芝孢子粉对重症急性胰腺炎（SAP）导致的免疫功能低下的调整作用。方法：采用胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠法造成SAP模型;SD大鼠随机分为假手术组、模型组、奥曲肽治疗组、灵芝孢子粉治疗组及灵芝孢子粉奥曲肽联合治疗组;术后分时段观察血清淀粉酶含量的变化,并于给药7天后检测各组肠黏膜内sIgA的含量、IL-2的含量、吞噬细胞的吞噬功能,同时观察胰腺组织的病理学变化。结果：SAP模型出现明显的免疫功能低下。经治疗后发现,灵芝孢子粉能使sIgA和IL-2的含量增加,吞噬细胞的吞噬功能增强,与其他治疗组相比有显著性差异（P〈0.05）。结论：灵芝孢子粉可提高SAP模型大鼠的免疫功能,可为进一步治疗SAP奠定基础。