沙眼衣原体感染对大鼠早期妊娠的影响

目的检测沙眼衣原体(CT)感染后妊娠大鼠子宫内膜热休克蛋白70(HSP70)和整合素α4β1的表达,探讨CT感染对妊娠的影响.方法取正常未孕大鼠、阴道接种CT后妊娠大鼠和正常妊娠大鼠孕4～8d子宫作切片,采用免疫组织化学方法,研究CT感染对早期妊娠子宫HSP70和整合素α4β1表达的影响.结果 HSP70在未孕及妊娠大鼠子宫均有表达,其主要存在于子宫内膜固有层的基质细胞及蜕膜细胞,整合素α4β1存在于内膜上皮、腺上皮和基质细胞.CT感染后(实验组)妊娠大鼠子宫内膜HSP70的阳性表达在孕4～6d较正常妊娠组(对照组)及未孕组明显增强,差异有显著性(P< 0.01);在孕7～8d与对照组相比无明显差异,但强于未孕组.而整合素α4β1的阳性表达在孕4～6d弱于对照组(孕第5d尤为明显),强于未孕组,差异有显著性(P< 0.01).结论 (1)大鼠生殖道感染CT引起胚泡着床期(4～6d)HSP70的高表达,且主要存在于子宫内膜固有层的基质细胞及蜕膜细胞,内膜上皮、腺上皮中未见表达,推测CT生殖道感染可能影响母体子宫内膜蜕膜细胞的增殖,干扰妊娠,引起不孕或流产.(2)生殖道感染CT引起胚泡着床期整合素α4β1的低表达,并与HSP70表达的变化趋势相反,推测CT生殖道感染可影响孕早期胚泡植入,其不良妊娠结果可能通过HSP70与整合素α4β1的共同作用导致.     

CT感染大鼠子宫内膜植入窗期基质金属蛋白酶的表达

目的 通过大鼠生殖道沙眼衣原体（chlamydia trachomatis,CT）感染模型研究CT初次感染后妊娠大鼠在子宫内膜植入窗期基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）的表达对胚胎着床的影响。方法选择成年雌性SD大鼠30只,随机均分为对照组和感染组,感染组通过阴道接种CTD型株,而后在妊娠大鼠的植入窗期（即妊娠第5、6、7天）分别处死大鼠,采用链菌生物素蛋白一过氧化酶连接法和免疫组化测定两组子宫内膜种植窗期MMP-9及TIMP-1。采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文小报告管理系统测定感染组和对照组中MMP-9＼T1MP-1在单位面积中各项免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度值,并通过SPSS软件对数据差异显著性进行分析。结果在两组大鼠的子宫内膜中MMP-9均呈阳性表达。腺上皮细胞、腔上皮细胞和基质细胞胞浆内均可见棕黄色颗粒沉着,上皮细胞染色强度大于基质;感染组的表达较对照组弱,差异有显著性（P〈0．05）。TIMP-1表达特点和MMP-9相似,感染组的表达也较对照组弱,差异有显著性（P〈0．05）。结论生殖道感染CT后,妊娠大鼠子宫内膜植入窗期MMP-9及TIMP-1的低表达,可能是影响胚胎着床、导致不孕的重要因素。     

Caveolin-1在围植入期小鼠子宫内膜组织中的动态变化

目的检测caveolin-1在胚胎植入过程中小鼠子宫内膜组织中的表达,探讨其在胚胎植入过程中的作用。方法选择成年雌性昆明小白鼠42只,随机均分为7组(处于动情期的未孕组、妊娠3.5天组、妊娠4.5天组、妊娠5.5天组、妊娠6.5天组、妊娠7.5天组、妊娠9天组),采用免疫组织化学和RT-PCR方法检测子宫内膜组织中caveolin-1蛋白及mRNA水平在围植入期的变化。结果 (1)caveolin-1在胚胎植入前期(0d、3.5d)小鼠子宫内膜组织中的表达高于胚胎植入期(4.5d、5.5d、6.5d),差异有显著性(P<0.05)。(2)caveolin-1在胚胎植入后期(7.5d、9d)小鼠子宫内膜组织中的表达高于胚胎植入期(4.5d、5.5d、6.5d),差异有显著性(P<0.05)。(3)caveolin-1在胚胎植入后期小鼠子宫内膜组织中的表达略高于胚胎植入前期,但差异无显著性(P>0.05)。结论 Caveolin-1在胚胎植入前期和后期均高表达,植入期低表达。这种变化提示caveolin-1是影响胚胎植入的重要因素之一。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-7′在大鼠胚胎植入过程中的差异表达与调节

胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP-7)已经证实在人的妊娠过程中起了重要作用,但在大鼠中尚未见报道.在过去的研究中曾利用抑制消减杂交(SSH)方法分析了植入前和植入期的基因表达谱,发现IGFBP-7存在差异表达.通过RNA印迹和原位杂交,分析了IGFBP-7部分序列(编码区531～928nt,称作IGFBP-7′)在大鼠妊娠早期子宫中的时空表达模式.用RT-PCR方法检测了其在不同组织器官及假孕、人工诱导蜕膜化和延迟着床激活大鼠子宫中的表达模式.结果显示:在大鼠妊娠第5天IGFBP-7′mRNA的表达量开始增加,第5.5和6天表达量显著高于植入前期.IGFBP-7′mRNA主要表达于子宫腔上皮和腺上皮.IGFBP-7′mRNA表达无组织特异性,在大鼠的下丘脑、垂体、卵巢、子宫、心、肝、脾、肺、肾等器官均有表达,在假孕的D1～D6大鼠子宫中均有表达,但无显著性差异,诱导蜕膜化后IGFBP-7′mRNA的表达量也无明显变化,但在延迟着床激活的大鼠子宫中表达显著增加.这些结果提示,在植入期IGFBP-7′的表达增加主要是由胚泡引起的,而非蜕膜化.在大鼠妊娠早期,IGFBP-7′的表达增加可能有利于胚胎植入的发生.     

妊娠大鼠子宫和胎盘IL-1 β表达及IFN-γ对其表达的影响

为探讨妊娠过程中白介素 1β (IL 1β)表达的变化及干扰素 γ (IFN γ)对其表达的影响 ,以妊娠Spre qne Dawley大鼠为模型 ,采用逆转录 -聚合酶链反应的方法检测了妊娠不同时期子宫和胎盘IL 1βmRNA表达的动态变化及IFN γ对子宫和胎盘IL 1βmRNA表达的影响。实验结果表明 ,在胚泡植入子宫内膜前 ,子宫组织内IL 1βmRNA的表达较高 ,胚泡刚植入时 ,IL 1βmRNA的表达显著降低 ,之后 ,随着胚胎的发育和胎盘的增生 ,子宫组织内IL 1βmRNA的表达逐渐升高。妊娠早、中、晚期胎盘IL 1βmRNA没有显著性差异。注射超生理剂量的IFN γ后 ,植入前期、植入后期及妊娠中期和妊娠晚期IL 1βmRNA的表达均显著减少 ,胎盘IL 1βmRNA的表达在妊娠晚期出现下降。上述结果提示 ,高剂量的IFN γ对妊娠一定时期的大鼠子宫和胎盘IL 1βmRNA的表达有抑制作用     

沙眼衣原体感染对大鼠着床期间子宫内膜E-cadherin的影响

目的 研究沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,CT）感染后大鼠着床期间子宫内膜上皮钙粘蛋白（E-cad-herin,E-cad）的变化。方法 大鼠雌雄合笼建立早孕模型,取正常和CT感染后妊娠4-7d的子宫组织,免疫组化SP法检测E-cad的表达。结果 正常和感染后妊娠组E-cad的表达均存在先上升后下降的趋势,表达峰值均在妊娠第6d,CT感染组低于正常组,且存在显著性差异（P〈0.05）;其表达部位在子宫内膜上皮细胞的胞膜或/和胞浆,蜕膜细胞无或少量表达。结论 沙眼衣原体感染后可能通过影响子宫内膜黏附分子E-cad的表达,破坏子宫内膜微环境,进而干扰早期妊娠。     

沙眼衣原体感染对大鼠着床期间子宫内膜上皮及其β-连接素表达的影响

目的研究沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis,Ct)感染后大鼠着床期间子宫内膜形态学改变及β-连接素(β-catenin,β-cat)的变化。方法大鼠雌雄合笼建立早孕模型,取正常妊娠和Ct感染后妊娠大鼠子宫,采用扫描电镜(SEM)观察子宫内膜超微结构改变及免疫组化检测β-cat的表达。结果SEM显示对照组子宫内膜腔上皮细胞排列紧密,细胞间隙较窄;实验组腔上皮细胞排列疏松,间隙变宽;免疫组化定性结果示β-cat妊娠4-6d主要定位于内膜上皮细胞膜,妊娠7d在蜕膜细胞膜;半定量结果示在感染组与正常组妊娠第5d其表达量达到高峰,但感染组弱于正常组,且两者之间有显著性差异(P<0·05)。结论Ct感染后可能通过影响子宫内膜黏附分子的表达,破坏着床的微环境;同时影响上皮细胞之间的连接,从而干扰早期妊娠。     

一氧化氮对小鼠胚胎围植入期子宫VEGF及其受体表达的调节

为研究NO在胚胎植入中的作用机理 ,本文采用子宫角注射、原位杂交及Westernblot方法研究了一氧化氮 (NO)在小鼠胚胎植入过程中对血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体表达的调节。受试小鼠于妊娠第三天 (D3 )在一侧子宫角内注射一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂N 硝基 L 精氨酸甲酯 (L NAME)或者L NAME与NO的供体硝普钠 (SNP)合用 ,另一侧子宫角为对照侧 ;收集并分别检测了D5,D6和D7天小鼠子宫中VEGF及其受体mRNA和蛋白的表达情况。结果显示 :与对照侧相比 ,L NAME处理后小鼠胚胎围植入期子宫中VEGF及其受体mRNA的表达有不同程度的下降 ;对VEGF及其受体蛋白表达水平检测表明 ,抑制的NO产生也使VEGF及其受体蛋白在小鼠围植入期子宫中的表达有不同程度的降低。当NOS抑制剂和NO的供体SNP同时注射小鼠时 ,VEGF及其受体mRNA和蛋白表达都恢复到正常水平。以上结果表明 ,在小鼠胚胎植入中NO可通过调节VEGF及其受体的表达参与血管新生 ,从而对胚胎植入起到调节作用     

IL-1β对不同妊娠时期大鼠子宫与胎盘 TGF-β1表达的影响

为探讨妊娠过程中白介素-1β(IL-1β)对转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,以妊娠Spreqne-Dawley大鼠为模型,采用宫角注射、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹方法。检测了妊娠不同时期大鼠子宫和胎盘中IL-1β对TGF-β1 mRNA水平及蛋白水平表达变化的影响。结果显示,植入期和妊娠晚期IL-1β能降低子宫TGF-β1的表达水平,植入后期和妊娠中期能提高TGF-β1的表达水平,对植入前期TGF-β1的表达无显著性影响;IL-1β能抑制妊娠早期胎盘TGF-β1的表达,妊娠晚期能促进其表达。结果提示,在妊娠过程中,IL-1β能够调节TGF-β1的表达,并且这种作用具有阶段特异性和组织特异性。     

妊娠大鼠子宫和胎盘中 TGF-β1 的表达及 IFNγ 对其表达的影响

采用半定量 RT-PCR、蛋白质印迹和免疫组化等方法,对大鼠妊娠过程中子宫和胎盘转化生长因子β1(TGF-β1) 的动态表达和表达定位,及体内注射超生理剂量的γ干扰素 (interferen-gamma, IFNγ) 后 TGF-β1 的表达进行检测,探讨了妊娠子宫和胎盘中 TGF-β1 的表达规律、定位及与 IFNγ的关系 . 正常妊娠各个时期大鼠子宫和胎盘中均能检测到 TGF-β1 mRNA 和蛋白质的表达 . 半定量 RT-PCR 结果表明：妊娠早期 (D1~D9) 子宫 TGF-β1 mRNA 的表达呈递增趋势,胚泡植入前 (D4) ,子宫 TGF-β1 mRNA 的表达较低,胚泡植入早期 (D6) TGF-β1 mRNA 的表达显著升高,植入后期 (D9) TGF-β1 mRNA 的表达达高峰,妊娠中期 (D15) 和妊娠晚期 (D19) TGF-β1 mRNA 的表达逐渐降低;妊娠早 (D9) 、中 (D15) 、晚期 (D19) 胎盘中 TGF-β1 mRNA 的表达呈时效递增, D15 胎盘中 TGF-β1 mRNA 的表达高于 D9 (P<0.01) , D19 胎盘中 TGF-β1 mRNA 的表达高于 D15 (P<0.01). 免疫组化结果显示,妊娠早期 TGF-β1 主要在子宫蜕膜中表达,中晚期主要在滋养层表达 . 生殖道肌肉注射超生理剂量的 IFNγ能下调 TGF-β1 的表达,且呈一定的剂量依赖关系 . 提示：在妊娠不同时期子宫和胎盘中 TGF-β1 的表达呈显著的时空动态变化, IFNγ酌对 TGF-β1 mRNA 的表达有调节作用 .