慢性牙周炎龈下菌斑中福赛斯坦纳菌的检测

目的检测慢性牙周炎患者和牙周健康者龈下菌斑中福赛斯坦纳菌的数量和所占比例,探讨福赛斯坦纳菌与牙周炎发生发展的关系。方法采集经常规聚合酶链反应（PCR）法检测福赛斯坦纳菌为阳性的61例慢性牙周炎患者和12例牙周健康者的龈下菌斑,应用TaqMan实时荧光定量PCR法对菌斑的细菌总量和福赛斯坦纳菌的数量进行定量检测,构建含有福赛斯坦纳菌和真细菌靶基因的重组质粒,建立定量标准。结果本研究设计的引物和探针具有良好的特异性和敏感性;慢性牙周炎患者病变位点的福赛斯坦纳菌数量和细菌总量均高于牙周健康者的健康位点,且福赛斯坦纳菌在龈下菌斑中的比例也比健康位点高（P<0.05）;龈下菌斑的细菌数量与探诊深度呈正相关（P<0.001）;龈下菌斑中福赛斯坦纳菌所占比例在不同的探诊深度间无统计学差异（P>0.05）。结论龈下菌斑中福赛斯坦纳菌的数量与牙周状况有密切关系,实时荧光定量PCR法是研究牙周病病因及治疗方法的有效手段。     

实时荧光定量PCR检测牙周炎患者龈下菌斑的分布

目的 应用实时荧光定量PCR技术探索侵袭性牙周炎（aggressive periodontitis,AgP）、慢性牙周炎（chronic periodontitis,CP）患者龈下菌斑中伴放线聚集杆菌(A. actinomycetemcomitans,Aa)、牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis,Pg）的分布规律。方法 采集32例AgP、33例CP、32例牙周健康者的龈下菌斑,构建含有2种待测细菌基因片段的重组质粒,建立定量标准,采用TaqManMGB探针实时荧光定量PCR方法检测样本中细菌数量。结果 本实验构建的引物及TaqManMGB探针特异性及敏感性较好。AgP组龈下菌斑Aa的检出率高于CP组（P＜0.01）,但2种细菌数量在组间无显著差异,两组内Pg的检出率及数量都明显高于Aa（P＜0.001）,另外AgP组Aa的数量、CP组Pg数量与牙周探诊深度密切相关（P＜0.01及P＜0.001）。结论 龈下菌斑Aa的检出率可能与牙周炎类型存在一定关联,Aa可能并不是中国人群样本AgP患者龈下菌斑的优势菌,实时荧光定量PCR对牙周病学研究有广泛应用前景。     

牙龈卟啉菌和牙垢密螺旋体在不同深度牙周袋内的分布

目的:建立检测牙龈卟啉菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)和牙垢密螺旋体(Treponema denti-cola,Td)的实时荧光定量PCR方法,探讨Pg和Td的定植量与牙周状况的关系.方法:建立SYBRGreenⅠ荧光实时定量PCR法检测Pg和Td细菌数量的方法.采集43例慢性牙周炎患者的龈下菌斑并检测Pg和Td的检出率和细菌量,同时记录取样位点的牙周探诊深度.结果:在102～107范围内细菌数与Ct值有良好的线性关系,最低检测到Pg和Td的DNA模板为100拷贝.Pg和Td在慢性牙周炎患者中的阳性检出率、共同检出率和两种细菌数量均随着牙周探诊深度的增加而升高,多组探诊深度间有统计学差异.结论:慢性牙周炎的牙周状况与Pg和Td的细菌数量密切相关.     

定量PCR技术检测正畸患者牙龈卟啉单胞菌的变化

目的采用荧光实时定量PCR技术,研究正畸患者的龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）在总细菌中的构成比是否产生变化。方法挑选30例正畸治疗六个月以上患者为实验组,30例未带矫治器的牙周健康者为对照组,分别记录牙周临床指标（包括菌斑指数、龈沟出血指数、探诊深度）,和龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌在总细菌中的构成比,并比较两组患者的差异。结果菌斑指数实验组为1．60±0．58,对照组为1．09±0．72,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。探诊深度实验组为（2．72±0．64）mm,对照组为（2．13±0．18）mm,两组比较差异有极显著的统计学意义（P〈0．001）。龈沟出血指数实验组为1．4±0．47,对照组为1．32±0．52,两组间比较差异无统计学意义（P=0．78）。牙龈卟啉单胞菌在总细菌中的构成比,实验组0．45％±0．07％和对照组0．05％±0．01％比较,P〈0．0001,差异有统计学意义。结论正畸患者龈下菌斑中,牙龈卟啉单胞菌在总细菌中的含量增加,荧光实时定量PCR技术可监测其变化,提示正畸期间保持牙周清洁的重要性。     

牙龈卟啉单胞菌与牙周基础治疗关系的实验研究

目的应用TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应法检测慢性牙周炎患者牙周洁刮治术（SRP）治疗前后龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌（P. gingivalis）的变化,分析P. gingivalis与SRP疗效之间的关系,探讨应用实时荧光定量聚合酶链反应监测和评价SRP的可能性。方法选择20例中重度慢性牙周炎患者为研究对象,检查SRP治疗前后的临床指标,包括探诊深度（PD）、临床附着丧失（CAL）和探诊出血（BOP）;采集SRP治疗前后的龈下菌斑共142个样本,应用TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应检测样本中的P. gingivalis。构建含有P. gingivalis扩增片段的重组质粒,建立定量标准。结果慢性牙周炎患者SRP治疗后PD、CAL和BOP均明显下降（P<0.001）;治疗前P. gingivalis检出率为80.28%,治疗后下降为54.23%;治疗前P. gingivalis数量与PD相关,Kendall相关系数为0.70（P<0.001）,治疗后牙周袋内细菌数量明显减少（P<0.001）。治疗前牙周袋内P. gingivalis的定植数量与PD、CAL和BOP的改善无相关性（P>0.05）,但治疗后治疗有效位点P. gingivalis数量减少程度明显大于治疗无效位点（P<0.05）,细菌减少量与PD改善弱相关（r=0.25,P=0.04）。结论SRP治疗可以明显改善临床症状,降低P. gingivalis检出率和绝对数量;治疗前P. gingivalis定植水平对临床指标的改善没有影响,治疗后P. gingivalis数量下降程度可以反映治疗效果。TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应可以用于牙周炎治疗效果的监测和评价。     

不同牙周状况龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌和福赛斯坦纳菌的分布

目的 分析中国牙周健康者和慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌和福赛斯坦纳菌的分布情况,探讨两种细菌在中国慢性牙周炎患者中的分布及其致病机理.方法 收集65例牙周健康者、62例慢性牙周炎患者的龈下菌斑,采用16S rRNA PCR方法检测牙龈卟啉单胞菌和福赛斯坦纳菌的分布.结果 牙周健康者牙龈卟啉单胞菌和福赛斯坦纳菌的检出率分别是21.6%、12.3%,慢性牙周炎患者病变位点两菌检出率分别为74.2%、58.1%,牙周炎健康位点两菌的检出率分别是22.6%、4.8%.牙周炎病变位点两种细菌的检出率均明显高于牙周健康者和牙周炎健康位点(P＜0.001);福赛斯坦纳菌在牙周健康者中的检出率高于牙周炎健康位点(P＜0.05);牙周健康者和牙周炎健康位点牙龈卟啉单胞菌的检出率没有差异.慢性牙周炎患者两菌联合检出率为51.6%.结论 牙龈卟啉单胞菌、福赛斯坦纳菌以及两种细菌联合感染与牙周炎密切相关.     

牙周炎患者牙周袋内硫化物水平与牙龈卟啉单胞菌的关系

目的分析牙周袋内硫化物的检出率、浓度与牙龈卟啉单胞菌的关系。方法选取慢性牙周炎初诊患者20名,采集龈下菌斑,用定量PCR方法检测菌斑中牙龈卟啉单胞菌,同时用金刚探针牙周诊断仪测量同一取样位点的硫化物水平,并记录临床探诊深度、出血指数。结果牙龈卟啉单胞菌的检出率（92％）明显高于硫化物的检出率（34％）（P〈0．05）;在深牙周袋、出血的位点,硫化物的检出率、浓度均明显高于浅牙周袋、不出血的位点（P〈0．05）;而在深牙周袋、出血的位点,牙龈卟啉单胞菌的检出率和浓度无显著性增高;在硫化物检测阳性的位点牙龈卟啉单胞菌的数量高于硫化物检测阴性的位点,但差异无统计学意义。结论牙周袋内硫化物的水平不是反映牙龈卟啉单胞菌数量的敏感指征,但可在一定程度上反映牙周组织的破坏程度和炎症的存在。     

牙龈卟啉单胞菌在龈下菌斑和颊黏膜中的检测

目的　检测牙周健康者及牙周炎患者在颊黏膜和龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的阳性率,探讨其与牙周炎发生和发展的关系。方法　选取40例牙周健康者和39例慢性牙周炎患者,分别收集颊黏膜和龈下菌斑样本,提取细菌DNA,设计细菌通用引物和牙龈卟啉单胞菌的特异引物用于PCR扩增,检测牙龈卟啉单胞菌的阳性率。结果　牙周健康组菌斑样本和颊黏膜样本牙龈卟啉单胞菌的阳性率分别为37·5%和32·5%,而牙周炎组菌斑样本和颊黏膜样本牙龈卟啉单胞菌的阳性率分别为69·23%和46·15%。牙周炎组菌斑的牙龈卟啉单胞菌阳性率高于牙周健康组,颊黏膜的牙龈卟啉单胞菌阳性率在组间无统计学差异;牙周炎组菌斑牙龈卟啉单胞菌阳性率高于颊黏膜, 牙周健康组两部位阳性率无统计学差异。结论　牙龈卟啉单胞菌除在菌斑中有高检出率外,在颊黏膜中也有较高的检出率,提示颊黏膜也是牙周细菌在口腔定植的重要部位,牙龈卟啉单胞菌也可在健康人群中检出,提示其有可能是口腔内固有菌群之一。     

3种寡核苷酸探针对龈下菌斑中牙周致病菌的检测

目的　采用寡核苷酸探针研究龈下菌斑中3种牙周致病菌的分布。方法　利用3种寡核苷酸探针对 60例慢性牙周炎患者60个患病位点、10例健康人的10个健康对照位点龈下菌斑中的牙龈卟啉单胞菌、福赛类杆菌、牙密螺旋体进行检测。结果　牙周炎位点龈下菌斑中的牙龈卟啉单胞菌、福赛类杆菌、牙密螺旋体的检出率分别为91·67%,90·00%和95·67%,明显高于健康对照位点;有83·33%的牙周炎位点同时检出3种致病菌,3种细菌检出情况为两两正相关(P<0·01)。结论　牙龈卟啉单胞菌、福赛类杆菌、牙密螺旋体在慢性牙周炎患者龈下菌斑中的检出率很高,它们间可能存在相互协同致病作用。     

维吾尔族慢性牙周炎中牙龈卟啉单胞菌菌fimA毒力基因型的分布

目的：分析维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA毒力基因型的分布情况。方法：收集52例维吾尔族慢性牙周炎患者的龈下菌斑，采用16SrRNA PCR法检测牙龈卟啉单胞菌，并根据菌毛fima毒力基因型的特异引物，用聚合酶链反应（PCR）检测Ⅱ型fimA和Ⅳ型fima菌株的分布。结果：16SrRNA PCR法检测牙龈卟啉单胞菌在龈下菌斑中阳性检出率是76．9％。牙周袋PPD〉6mm位点龈下菌斑标本的P．gingivalis检出率高于4〈PPD≤6mm采样的位点，2组差异有统计学意义（P〈0．05）。牙龈卟啉单胞菌菌毛．fimA毒力基因型在牙龈卟啉单胞菌感染者的检出率分别是：Ⅱ fimA型为37．5％，ⅣfimA型为22．5％。结论：维吾尔族慢性牙周炎患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌有较高的检出率。牙龈卟啉单胞菌存在fima毒力基因多态性。