巨噬细胞分泌的可溶性因子诱导HepG2细胞发生上皮间质化

目的 研究THP-1来源的巨噬细胞对肝癌细胞HepG2的上皮间质化作用(epithelialmesenchymal transition,EMT),探讨肿瘤相关性巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)在肝癌进展中的作用及机制.方法 将THP-1来源的巨噬细胞与HepG2细胞共培养模拟肝癌相关微环境,观察共培养后HepG2细胞的形态变化.利用免疫荧光(immunofluorescence,IF)及Westernblot检测HepG2细胞与巨噬细胞共培养后E-cadherin表达的变化(E-cadherin表达缺失是EMT的标志).通过FlowCytomix检测分析THP-1细胞及THP-1来源的巨噬细胞培养上清中部分细胞因子表达量的差异.结果 HepG2细胞与THP-1来源的巨噬细胞共培养后,其细胞形态发生明显变化,由原来上皮细胞形态转化成为一种梭形的间质细胞形态.IF及Western-blot均显示HepG2细胞共培养后E-cadherin表达明显下调.THP-1细胞激活并分化为巨噬细胞后,白细胞介素IL-8及IL-1β表达量分别增加了40倍和20倍,P＜0.01;肿瘤坏死因子TNF-α表达量增加了8倍,P=0.056.结论 巨噬细胞可诱导HepG2细胞发生EMT,该作用可能与其分泌的细胞因子IL-8及IL-1β和TNF-α增高有关.     

P-STAT6/Tim-3在THP-1细胞极化为M2型巨噬细胞中的作用及机制研究

目的研究P-STAT6/Tim-3在THP-1细胞极化为M2型巨噬细胞中的作用及机制。方法将THP-1细胞采用相应细胞因子分别诱导为M0、M1、M2巨噬细胞,记录细胞形态改变;采用Western blotting鉴定M0、M1及M2表型,检测不同浓度STAT6抑制剂AS1517499对M1、M2极化的影响,检测STAT6、P-STAT6、Tim-3在巨噬细胞M1、M2极化中的表达; CCK-8实验检测不同浓度AS1517499对THP-1细胞的毒性作用。采用SPSS 17. 0软件分析实验数据。结果 THP-1细胞发生M1、M2极化后细胞形态由小圆形变为长梭形及多边形。采用Western blotting结果表明CD80、i NOS在M1组高表达,CD163、Arg-1、P-STAT6及Tim-3在M2组高表达。不同浓度AS1517499使CD163、Arg-1、P-STAT6及Tim-3表达相应降低;药物浓度为10nmol/l、100nmol/l时,对THP-1细胞活力无明显影响;浓度为300nmol/l时,细胞活力出现明显下降; AS1517499的合适药物浓度是100nmol/l。结论外源性细胞因子可通过激活巨噬细胞P-STAT6/Tim-3诱导巨噬细胞发生M2极化; AS1517499可以通过阻断巨噬细胞P-STAT6/Tim-3,抑制THP-1细胞极化为M2型巨噬细胞。     

肿瘤相关巨噬细胞和Sema4D与胃癌浸润转移的关系

目的:研究肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对人胃癌SGC-7901细胞系生物学功能的影响。方法 :采用佛波酯(PMA)、白细胞介素IL-4和IL-13体外诱导人M2型巨噬细胞,细胞免疫荧光鉴定TAMs。Transwell非接触式共培TAMs和胃癌SGC-7901细胞,侵袭实验、迁移实验检测肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响,酶联免疫吸附法(ELISA)检测实验组和空白对照组胃癌SGC-7901细胞上清中分泌型Sema4D的变化。结果:细胞免疫荧光鉴定M2型巨噬细胞诱导成功;在Transwell共培养体系中,TAMs共培养的胃癌SGC-7901细胞形态学发生改变;Transwell侵袭实验、迁移实验表明,细胞侵袭转移力增强(P0.01)。与TAMs共培养的胃癌SGC-7901细胞的上清液分泌型Sema4D蛋白明显增多,较空白对照组差异有统计学意义(1224.13±29.43比637.15±33.84,P0.01)。结论 :TAMs可促进胃癌细胞的浸润转移,其原因可能与分泌型Se m a4D蛋白的表达上调有关。     

810nm弱激光对M1型骨髓源性巨噬细胞的作用及其机制

目的 :体外建立M1型骨髓源性巨噬细胞(bone marrow derived macrophage,BMDM)-弱激光照射模型,探讨弱激光照射对M1型BMDM炎症因子分泌的影响及其可能机制。方法:体外分离BALB/c小鼠BMDM,应用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)条件性培养基培养,流式细胞术检测巨噬细胞标志物F4/80的表达,确定所获得细胞为纯度较高的BMDM。应用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激24h诱导原代BMDM向M1型BMDM方向极化。将细胞随机分为弱激光治疗(low level laser therapy,LLLT)组和对照组,LLLT组采用810nm波长激光照射,光斑面积4.5cm2,照射功率密度2m W/cm2,照射持续440s,最终获得照射能量为4J,对照组置于暗箱,不进行照射。应用CCK8实验测定细胞活性,RT-PCR检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interlukin-1β,IL-1β)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthases,i NOS)的m RNA表达情况,ELISA检测TNF-α及IL-1β蛋白分泌,Western blot测定i NOS和M1型巨噬细胞极化的重要转录因子核因子-κB p65(nuclear factor-kappa B,NF-κB p65)的表达。组间比较采用独立样本t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果:LPS刺激后,使用弱激光照射的M1型BMDM细胞活性显著提高,升高至对照组的2.313±0.630倍(P0.05)。LLLT组IL-1βm RNA表达为0.586±0.145,对照组为1.000±0.022,两组比较有统计学差异(P0.05);LLLT组TNF-α的m RNA表达为0.862±0.152,对照组为1.000±0.082,两组比较无统计学差异(P=0.082);LLLT组i NOS的m RNA表达为0.720±0.039,对照组为1.000±0.024,两组比较有统计学差异(P0.05)。对照组TNF-α为270.478±26.831pg/ml,LLLT组为209.365±5.600pg/ml,两组比较有统计学差异(P0.05);对照组的IL-1β为98.941±12.430pg/ml,LLLT组为77.076±2.023pg/ml,两组比较有统计学差异(P0.05)。对照组的i NOS蛋白表达为1.005±0.075,LLLT组为0.210±0.010,两组比较有统计学差异(P0.05);对照组NF-κB p65蛋白表达为1.006±0.260,LLLT组为0.428±0.169,两组比较有统计学差异(P0.05)。结论:810nm LLLT M1型BMDM可抑制其炎性因子IL-1β及i NOS的m RNA表达,下调炎性因子IL-1β及TNF-α的分泌,降低M1型BMDM表面标志物i NOS的表达,同时显著下调M1型巨噬细胞经典极化转录因子NF-κB p65的表达。810nm LLLT可调控M1型巨噬细胞的极化状态,抑制其炎性因子分泌,该调控作用和其下调M1型巨噬细胞经典极化转录因子NF-κB p65有明显相关性。     

抑制miR-223表达促进巨噬细胞的M2型激活

目的观察microRNA-223(mi R-223)在巨噬细胞M2型激活中的表达及作用。方法运用慢病毒载体感染的方式在巨噬细胞中过表达或敲低miR-223的表达;应用qPCR检测不同激活状态及转染状态巨噬细胞中miR-223的表达;应用Elisa及流式细胞术检测M2型巨噬细胞的激活状态;应用Transwell迁移实验和划痕实验检测乳腺肿瘤细胞的迁移情况。结果 miR-223在单核/巨噬细胞中的表达明显高于肿瘤细胞,在单核细胞向巨噬细胞分化过程中miR-223表达下调,且IL-4或与肿瘤细胞共培养激活的巨噬细胞下调显著。敲低miR-223的表达而不是增加其表达能够促进M2型巨噬细胞标记物CCL18、IL-10和CD206的表达,并促进共培养肿瘤细胞的迁移。结论 miR-223可作为靶向肿瘤微环境调控肿瘤转移的靶点。     

miR-155在食管鳞癌中的表达及临床意义

目的分析食管鳞癌中微小RNA-155(mi R-155)基因的表达情况及其与食管鳞癌临床病理特征的关系。方法收集2010年1月至2012年11月河南省肿瘤医院胸外科确诊为食管鳞癌并手术治疗的54例患者的新鲜食管癌组织及癌旁正常黏膜组织,其中男47例,女7例;年龄45~82岁,中位年龄为61岁;Ⅰ+Ⅱ期40例,Ⅲa+b期14例。采用SYBR Green q RT-PCR方法检测患者癌组织及对应癌旁正常黏膜组织中mi R-155的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系。结果 mi R-155在食管鳞癌组织中的表达显著低于癌旁正常黏膜组织(Z=-4.258,P=0.000);食管鳞癌中mi R-155的相对表达水平与淋巴结转移显著相关(P=0.040),但与吸烟(P=0.430)、饮酒(P=0.429)、年龄(P=0.769)、性别(P=0.671)、浸润程度(P=0.230)、分化程度(P=0.896)及p TNM分期(P=0.407)等均无显著相关性。结论食管鳞癌中mi R-155的相对表达下降,可能导致机体炎症、免疫反应及相关抑癌机制的失调,进而可能促进了食管鳞癌的发生和发展。     

非转移性黑色素瘤糖蛋白B在急性肾缺血再灌注损伤中的表达及与巨噬细胞表型的关系

目的 观察非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein B,Gpnmb)在急性肾缺血再灌注损伤(IRI)肾脏和尿液中的表达,分析其与M1、M2表型巨噬细胞的相关性,探讨其在IRI免疫炎性反应损伤中的作用.方法 C57BL/6J小鼠被随机分为3组:正常对照组(n=4)、假手术组(n=4)、IRI组(n=12).以双侧肾蒂血管阻断30min建立IRI模型.PAS染色观察肾脏病理改变;免疫荧光双染色及流式细胞术检测Gpnmb和巨噬细胞标志物F4/80蛋白的表达及分布;实时荧光定量PCR检测Gpnmb及M1型巨噬细胞表型(CD40、CCR7)及M2型巨噬细胞表型(CD163、MMR)在肾脏中的mRNA表达;Western印迹和ELISA法检测小鼠尿液中Gpnmb的表达.结果 IRI小鼠肾脏肾小管上皮细胞脱落,肾间质内可见大量炎性细胞浸润.实时荧光定量PCR结果显示,与正常对照组、假手术组比较,IRI组小鼠肾脏Gpnmb mRNA于造模后第1天和第2天升高,差异有统计学意义(P＜ 0.01),第3天下降至接近正常水平.免疫荧光双染色及流式细胞术检测结果均显示Gpnmb蛋白主要表达在F4/80阳性的巨噬细胞内.Gpnmb mRNA表达与M1型巨噬细胞表型(CD40、CCR7)的mRNA表达无相关性,与M2型巨噬细胞表型(CD163、MMR)的mRNA表达呈正相关.Western印迹和ELISA结果示IRI组小鼠在造模后第1天尿液中的Gpnmb表达显著升高,与正常对照组和假手术组比较差异有统计学意义(P＜0.01),第3天降至接近正常水平.结论 Gpnmb在IRI肾脏的巨噬细胞和尿液中呈高表达,并与M2型巨噬细胞相关,提示Gpnmb可能参与了巨噬细胞的分型和急性肾损伤的炎性反应过程,临床上也可用作AKI早期诊断的生物学标志物.     

microRNA-199b-5p在尤文肉瘤细胞系中的功能研究

目的探讨microRNA-199b-5p(mi R-199b-5p)在尤文肉瘤细胞系中的功能,分析其作用机制,以期为临床生物学治疗提供理论依据。方法取人尤文肉瘤细胞系A673、TC252,分别以mi R-199b-5p寡核苷酸片段(mimic)及其阴性对照(mimic control)转染,作为实验组及对照组。实时荧光定量PCR检测mi R-199b-5p m RNA相对表达量,并与MSCs比较;细胞计数试剂盒8法检测mi R-199b-5p对细胞增殖的影响;流式细胞术法检测对细胞周期及凋亡的影响。双荧光报告基因实验初步检测mi R-199b-5p可能作用的靶基因,Western blot验证靶基因。结果实时荧光定量PCR检测示,对照组A673细胞及TC252细胞中的mi R-199b-5p m RNA相对表达量与MSCs相比均显著下降(P0.05),与实验组对应细胞相比亦显著下降(P0.05)。与对照组对应细胞相比,实验组处于G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,比较差异均有统计学意义(P0.05);而两组G2/M期细胞无明显差异(P0.05)。实验组细胞凋亡率与对照组对应细胞相比显著增高(P0.05)。双荧光报告基因实验检测mi R-199b-5p可能作用的靶基因是细胞周期调节蛋白1(cyclin-L1,CCNL1)和c-Kit。Western blot检测显示,与对照组对应细胞相比,实验组CCNL1和c-Kit蛋白相对表达量明显下调,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 mi R-199b-5p能抑制尤文肉瘤细胞增殖,阻滞细胞周期转换,促进细胞凋亡,其抑制作用是通过靶向CCNL1和c-Kit实现的。     

ABT-737对TAMs与乳腺癌细胞及共培养体系VEGF表达的影响

目的 :研究Bcl-2特异性抑制剂ABT-737对肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、乳腺癌细胞MCF-7及共培养体系上清中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:应用佛波酯(PMA)及白细胞介素-4(IL-4)体外诱导TAM s细胞,Transwell非接触式共培养TAMs和MCF-7细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测共培养后MCF-7细胞增殖情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测TAMs、MCF-7细胞及共培养体系上清VEGF水平。结果:应用PMA及IL-4体外诱导THP-1成为TAMs细胞,MCF-7与TAMs细胞共培养24、48 h后,细胞增殖活性较对照组分别上升了16.16%和33.99%。TAMs、MCF-7细胞及共培养体系分别加入ABT-737,VEGF含量测定值分别为(47.67±8.83)pg/mL、(108.56±10.92)pg/mL和(152.52±7.18)pg/mL,其中MCF-7细胞及共培养体系与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:分泌型VEGF表达水平的增高与TAMs活化及分布有明确相关性,乳腺癌细胞与TAMs间相互作用可能通过Bcl-2-VEGF旁分泌通路实现。     

肿瘤低氧微环境影响巨噬细胞极化的研究进展

巨噬细胞是人体重要的免疫细胞之一,具有可塑性和高度异质性,可极化成不同的表型：经典激活的M1型巨噬细胞和交替激活的M2型巨噬细胞,两者统称为肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）。与正常细胞不同,在肿瘤组织中,由于肿瘤细胞增殖活跃,代谢活动增强,以及脉管系统不发达导致肿瘤组织供氧不足,所以容易导致肿瘤微环境（TME）缺氧。目前认为肿瘤低氧微环境是恶性肿瘤发展的关键驱动因素[1]。TME中的TAMs以M2型为主,具有免疫抑制作用,有利于肿瘤的生长和转移,与不良预后有关。肿瘤低氧微环境如何影响TAMs极化是当前的研究热点,明确其机制可能为临床治疗提供新方案。     

全反式维甲酸作用的巨噬细胞对前列腺间质细胞功能的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对前列腺切除术后创面修复过程中的前列腺间质细胞可能作用.方法:将单核巨噬细胞系(THP-1)细胞分成6组:M1型巨噬细胞实验组、对照组、未活化组,M2型巨噬细胞实验组、对照组、未活化组;其中M1型巨噬细胞先后通过PMA、IFNγ活化而成;而M2型巨噬细胞组先后通过PMA、IL-4激活....     

miRNA-135a在肝癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨mi RNA-135a(mi R-135a)在肝癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR检测20例肝癌组织及其癌旁组织中mi R-135a的表达水平,并通过脂质体介导的方法将mi R-135a模拟物(mi R-135a mimics)转染肝癌细胞株Hep G2,采用实时荧光定量PCR测定转染后细胞中mi R-135a的表达水平;通过平板克隆实验和MTT法分别检测转染后细胞克隆形成率和存活率的变化,并对mi R-135a调控相关靶细胞的基因表达水平进行检测,观察mi R-135a在肝癌细胞维持正常功能中的作用。结果 通过对20例肝癌组织及其癌旁组织中mi R-135a的表达水平进行检测,结果 mi RNA-135a的表达在正常组织中相对更高,且两组之间存在显著性差异(P0.05);与阴性对照组比较,转染mi R-135a mimics后Hep G2细胞中mi R-135a表达水平显著提高(P0.05),而形成单克隆能力和细胞存活率均显著下降(P0.05),同时转染组细胞中与mi R-135a细胞调控相关靶基因FOS、PI3、Jak2、Stat3的m RNA表达量相较于NC组均显著降低(P0.05),表明mi R-135a表达提高后抑制细胞形成单克隆能力并降低存活率。结论 mi R-135a在正常组织和肝癌组织中差异表达,同时当mi R-135a表达提高时抑制肝癌细胞形成单克隆能力和降低细胞存活率,表明mi R-135a可能通过一些相关靶基因直接或间接调控Hep G2肝癌细胞的存活,在肝癌的发生过程中可能起到作用,mi R-135a可能成为临床治疗肝癌和预后的重要靶点。     

miR-93-5p靶向调控Smad5表达抑制小鼠C3H10T1/2细胞成骨分化的研究

目的探讨mi R-93-5p是否通过靶向调控其预测靶基因Smad5的表达,从而抑制小鼠MSCs C3H10T1/2细胞的成骨分化。方法构建Smad5 3’-UTR-荧光素酶报告载体(pmi R-RB-REPORTTM),通过双荧光素酶报告基因检测,观察mi R-93-5p对Smad5 3’-UTR荧光素酶活性的影响,鉴定Smad5是否为mi R-93-5p的靶基因。将mi R-93-5p mimics(M组)与mi R-93-5p inhibitor(In组)及其对应的阴性对照组mi R-93-5p mimics阴性对照(MC组)与mi R-93-5p inhibitor阴性对照(In C组)分别转染至C3H10T1/2细胞中,并进行成骨诱导培养,48 h后分别采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,q RT-PCR)及Western blot检测各组细胞Smad5在m RNA及蛋白水平的相对表达量;14 d后通过茜素红染色检测各组细胞外钙盐的沉积情况,了解mi R-93-5p对C3H10T1/2细胞成骨分化的调控效应。结果双荧光素酶报告基因检测结果显示,mi R-93-5p能与Smad5 m RNA3’-UTR特异性结合,抑制其荧光素酶活性(P0.05)。q RT-PCR检测示,M组及In组Smad5的m RNA相对表达量与对应阴性对照组MC组及In C组比较差异均无统计学意义(P0.05);Western blot检测示,M组及In组Smad5蛋白相对表达量与对应阴性对照组比较差异均有统计学意义(P0.05),其中M组较MC组表达量下调,而In组则较In C组表达量上调。茜素红染色示,M组钙盐沉积较MC组明显减少,而In组则较In C组钙盐沉积明显增多。结论Smad5是mi R-93-5p的靶基因,mi R-93-5p可通过靶向调控Smad5的表达,抑制小鼠C3H10T1/2细胞成骨分化。     

miR-150-5p抑制肝癌细胞的迁移和侵袭及其机制

目的:探讨mi R-150-5p在肝细胞癌(HCC)细胞迁移与侵袭中的作用及其调控机制。方法:用荧光定量PCR测定mi R-150-5p在正常肝细胞系L02及HCC细胞系Hep G2中的表达;将Hep G2细胞分成两组,分别转染mi R-150-5p(mi R-150-5p组)与随机序列(对照组),转染后,分别用细胞划痕实验、Transwell小室基质渗透实验检测细胞的迁移和侵袭能力,用Western blot检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果:mi R-150-5p的表达量在Hep G2细胞系中明显降低,为L02细胞系的0.26倍(P0.01)。转染后,mi R-150-5p组的mi R-150-5p水平明显升高,为对照组的9.53倍(P0.001);mi R-150-5p组的细胞划痕愈合率明显低于对照组(54.63%vs.87.51%,P0.01),细胞侵袭数明显少于对照组(138个vs.452个,P0.01);MMP2与MMP9蛋白表达量均明显低于对照组(0.78 vs.1.75;0.82 vs.1.85,均P0.05)。结论:mi R-150-5p在HCC细胞中表达降低,升高mi R-150-5p的表达可抑制HCC细胞的迁移和侵袭,机制可能与其下调MMP2和MMP9表达有关。     

miR-526b在胰腺癌中的表达及作用

目的:探讨mi R-526b在胰腺癌中的表达与作用。方法:用q RT-PCR法检测mi R-526b在52例胰腺癌和癌旁组织,以及在4种胰腺癌细胞系(Bx PC-3、SW1990、PANC-1和As PC-1)和正常胰腺导管上皮细胞系(HPDE6-C7)中的表达。将胰腺癌细胞分别转染mi R-526b模拟物、mi R-526b抑制物及阴性对照序列后,采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术分别测定细胞增殖、侵袭与凋亡情况。生物软件和双荧光素酶报告基因法分析mi R-526b潜在靶基因,并用Western blot和q RT-PCR法及相关性分析验证。结果:mi R-526b在胰腺癌组织中表达量明显低于癌旁组织,在4种胰腺癌细胞系中的表达量均明显低于人正常胰腺导管上皮细胞(均P0.05)。胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,增殖能力明显降低、细胞凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱,而转染mi R-526b抑制物后则呈反向变化(均P0.05)。分析结果显示XRCC5是mi R-526b靶基因;胰腺癌细胞转染mi R-526b模拟物后,XRCC5的m RNA和蛋白表达均明显下调,mi R-526b抑制物后则均明显上调(均P0.05);胰腺癌组织中mi R-526b和XRCC5 m RNA表达水平呈显著负相关(r=-0.456,P0.05)。结论:mi R-526b在胰腺癌中下调表达,mi R-526b低表达可促进胰腺癌细胞增殖、侵袭并抑制凋亡,机制可能与上调其靶基因XRCC5的表达有关。     

miR-200c通过AKT2对骨肉瘤细胞增殖的影响

[目的]探讨过表达mi R-200c通过对AKT2的相关调控对骨肉瘤细胞增殖能力的影响,为骨肉瘤的靶向治疗提供新的依据。[方法](1)检测mi R-200c在正常成骨细胞和4种骨肉瘤细胞株中的表达差异;(2)将mi R-200c转染至骨肉瘤细胞株MG-63中,构建稳定过表达mi R-200c骨肉瘤细胞株;(3)预测mi R-200c与AKT2基因的相关结合位点,构建相应的荧光素酶基因表达载体,连同过表达mi R-200c质粒共转染至骨肉瘤细胞株MG-63中;(4)检测两组骨肉瘤细胞株MG-63荧光素酶活性;(5)检测两组骨肉瘤细胞株MG-63中AKT2表达水平;(6)观察两组骨肉瘤细胞株MG-63的增殖能力。[结果](1)与正常成骨细胞(NHOst)相比,mi R-200c在4种骨肉瘤细胞株(HOS、U2OS、Saos-2、MG-63)中表达量明显降低(P0.05);(2)与mi R-NC组相比,过表达mi R-200c组骨肉瘤细胞株MG-63中AKT2 3′-UTR序列结构野生型(WT)的荧光素酶活性明显降低(P0.05),而突变型(MUT)的荧光素酶活性无明显差异(P0.05);(3)与mi R-NC组相比,过表达mi R-200c的骨肉瘤细胞株MG-63中AKT2表达明显降低(P0.05);(4)与mi R-NC组相比,过表达mi R-200c骨肉瘤细胞株MG-63增殖能力明显下降(P0.05)。[结论]mi R-200c在骨肉瘤细胞中低表达,而过表达mi R-200c通过靶向调控AKT2表达抑制骨肉瘤细胞的增殖。因此mi R-200c可能对未来骨肉瘤的预防及治疗提供新的策略。     

大肠癌组织中肿瘤相关巨噬细胞计数与MMP-2、Ki-67表达的相关性研究

目的:检测肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)计数、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及细胞增殖相关蛋白(Ki-67)在大肠癌中的表达,探讨TAMs与大肠癌侵袭转移、增殖的关系。方法:大肠癌患者标本55例,癌旁组织30例。应用免疫组化SP法,检测TAMs、MMP-2及Ki-67的表达。结果:(1)在大肠癌中TAMs、MMP-2及Ki-67的表达明显高于癌旁组织(P0.05);分化程度越低、淋巴结转移的数量越多、浸润程度越深,其值越高(P0.05)。(2)TAMs与MMP-2(r=0.625,P0.01)、Ki-67(r=0.690,P0.01)的表达呈正相关。结论:TAMs可能通过分泌MMP-2、细胞因子等促进肿瘤的侵袭转移及增殖,为大肠癌分子靶向治疗提供一定的理论依据。     

M2型巨噬细胞/小胶质细胞来源线粒体移植治疗小鼠脊髓损伤的实验研究北大核心CSCD

目的 探讨M2型巨噬细胞/小胶质细胞来源线粒体移植治疗小鼠脊髓损伤的效果。方法 取小鼠小胶质细胞(BV2细胞)分别采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、IL-4诱导其向M1型(M1组)及M2型(M2组)极化,以未作任何干预的细胞作为对照(M0组);光镜下观察细胞形态,免疫荧光染色[精氨酸酶1(Arginase 1,Arg-1)]及流式细胞术[诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、Arg-1]鉴定极化后细胞类型,并通过MitoSox Red与DCFH-DA染色评估细胞线粒体功能。使用差速离心法提取M2组BV2细胞来源线粒体,Western blot法测量氧化磷酸酶链(oxidative phosphorylation,OXPHOS)内各相关复合物(复合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ与Ⅴ)的表达水平,并与M2型BV2细胞比较,以评估是否获得所需线粒体。取36只雌性C57BL/6小鼠随机分为3组(n=12),其中假手术组仅切除T_(10)椎板,脊髓损伤组及线粒体移植组制备T_(10)脊髓损伤模型后,于损伤节段分别注射线粒体储存液及M2型BV2细胞来源线粒体(100μg)。术后采用BMS(Basso Mouse Scale)评分评价小鼠后肢运动功能,取材行免疫荧光染色(iNOS)、LEA-FITC染色及ELISA检测(VEGFA)。结果 极化诱导后,M1组及M2组BV2细胞分别呈现M1型及M2型巨噬细胞特异性形态改变;免疫荧光染色示M2组的M2型巨噬细胞标志物Arg-1染色阳性表达高于M0组及M1组(P<0.05);流式细胞术检测示M1组的M1型巨噬细胞标志物iNOS表达高于M0组及M2组(P<0.05),M2组Arg-1表达高于M0及M1组(P<0.05)。MitoSox Red及DCFH-DA染色示M2组荧光强度均低于M1组(P<0.05),与M0组差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot法鉴定成功提取M2型BV2细胞来源线粒体。动物实验示,线粒体移植组术后21、28 d BMS评分高于脊髓损伤组(P<0.05);术后14 d损伤局部iNOS阳性细胞数低于脊髓损伤组(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05);LEA阳性细胞较其余两组增多;VEGFA表达亦高于其余两组(P<0.05)。结论 M2型巨噬细胞/小胶质细胞来源线粒体可通过促进损伤局部血管新生并抑制炎症性M1型巨噬细胞极化,促进小鼠脊髓损伤修复。     

生物活性透明质酸对脂多糖诱导的人树突状细胞和巨噬细胞炎症应答作用

目的探讨经人透明质酸酶PH20特异处理的重组HA,即生物活性透明质酸(B-HA)对脂多糖(LPS)诱导的人树突状细胞(DC)和巨噬细胞炎症应答的影响。方法 DC细胞和人急性单核细胞白血病单核细胞株(THP-1)经不同浓度的B-HA预先处理,加入LPS刺激不同时间,收集细胞和培养上清,采用实时荧光定量PCR和ELISA方法检测细胞因子mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 THP-1细胞实验中,与LPS组相比,B-HA 20 mg/ml不仅能够显著降低促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)的表达量,同时能够显著增加抗炎因子白细胞介素-10(IL-10)的表达量。其细胞中TNF-α、IL-8和IL-10 mRNA表达水平分别为24.41±1.94、35.76±4.19和14.99±0.07,而LPS组分别为38.48±1.47、62.7±1.93和2.27±0.16,差异均具有统计学意义(t=5.781、P=0.0290,t=5.695,P=0.0300,t=15.20、P=0.0040)。细胞上清中三者蛋白表达水平分别为(1 609.00±75.66)pg/ml、(213.10±9.14)pg/ml和(496.3±41.92)pg/ml,LPS组分别为(3 018±102.8)pg/ml、(587.4±3.140)pg/ml和(243.3±20.23)pg/ml,差异均具有统计学意义(t=11.04、P=0.0080,t=38.74、P=0.0007,t=5.434、P=0.0320)。在人外周血分化的DC细胞实验中,B-HA对细胞因子TNF-α、IL-8和IL-10的表达均无显著影响(P均0.05)。结论 B-HA能有效调节人巨噬细胞炎性因子的表达,抑制其炎症反应;对人DC细胞的炎症反应无显著影响,提示B-HA对人炎性免疫细胞的炎症反应作用具有选择性。     

miR-137与胃癌侵袭能力的关系研究

目的:探讨胃癌组织mi R-137的表达及其与胃癌细胞侵袭能力间的关系。方法:用q RT-PCR检测胃癌组织与癌旁组织mi R-137的表达,分析mi R-13表达与胃癌临床病理特征的关系;分别用q RT-PCR与Transwell侵袭实验检测3种胃癌细胞(AGS、SGC7901、BGC823)及正常胃黏膜细胞(GES1)mi R-137的表达与穿膜。结果:胃癌组织中mi R-137表达量明显低于癌旁组织(P<0.05),mi R-137表达与胃癌患者T分期有关,T分期越高mi R-137表达量越低(P<0.05);各胃癌细胞mi R-137表达量均低于正常胃黏膜细胞,且胃癌细胞侵袭力越强胃癌细胞mi R-137表达量越低(P<0.05);穿膜细胞数与mi R-137表达量之间呈明显负相关(r=-0.8881,P<0.05)。结论:胃癌组织mi R-137表达降低,且mi R-137表达量越低提示胃癌细胞侵袭能力越强。