MT01对Pg感染的成骨细胞MG63特异性成骨相关因子表达的影响

目的:通过检测MT01对牙周致病菌Pg感染的成骨细胞MG63细胞内特异性成骨相关因子基因表达水平,探讨MT01对感染状态下成骨细胞成骨分化作用的影响。方法:选取生长状态稳定的人成骨样细胞MG63接种于6孔板,分别加入质量浓度1 mg/L的特定序列寡核苷酸MT01和等体积PBS,共孵育3 h后,加入感染复数MOI=100∶1的Pg菌悬液(对照组加等体积PBS)。即实验分为:MT01+Pg、MT01、Pg和空白对照4组,Real-time PCR检测2、4、6、8、12、24 h特异性成骨相关因子Runx2,SP7 mRNA的表达。结果:在有无Pg感染的状态下,MT01均可上调成骨细胞MG63细胞内成骨相关因子Runx2,SP7 mRNA的表达,但在不同时间点,MT01调控Runx2,SP7 mRNA表达上调的能力存在差异。结论:MT01可以促进牙周致病菌感染下的成骨细胞的成骨向分化。     

PEN载体传递ODN对人成骨样细胞细胞周期与成骨分化的影响

目的: 采用新型载体PEN对ODN进行传递,探讨MT01/PEN复合物对人成骨样细胞(MG63)细胞周期及成骨分化的影响。方法: 选取不同装载比例的MT01/PEN复合物,以MT01及S-MT01做对照,分别检测其对MG63细胞周期及成骨分化相关基因ALP活性、BMP2、OCN表达的影响。结果: MT01/PEN组Gl期、G2期细胞百分比降低,S期比例增高(P<0.01),碱性磷酸酶活性增加(P<0.01),OCN、BMP2蛋白表达增高(P<0.05)。结论: 以PEN为载体传递MT01能促进MG63的分化。     

MT01/PEN复合物对人成骨样细胞MG63表达骨保护蛋白和核因子κB受体活化因子配体的影响

目的 应用聚乙烯亚胺阳离子聚合物（PEN）载体装载寡脱氧核苷酸MT01,制备MT01/PEN复合物,检测该复合物对人成骨样细胞MG63表达骨保护蛋白（OPG）和核因子κB受体活化因子配体（RANKL）的影响。方法 制备3种不同配比的MT01/PEN（质量比分别为1∶2、1∶4、1∶6）复合物,以全硫代化修饰MT01（MT01-s）和未修饰的MT01作阳性对照,分别转染MG63细胞。采用酶联免疫吸附测定法和real-time聚合酶链反应法分别检测培养24、48、72 h时各组上清液及细胞内OPG和RANKL的表达水平。结果 经MT01/PEN复合物转染后,上清液及细胞内OPG表达水平均升高（P<0.05）;多数组中RANKL表达水平降低,而OPG/RANKL比值呈升高趋势（P<0.05）;不同质量配比的MT01/PEN均对MG63细胞的成骨具有影响,其中质量比为1∶6时作用最明显。结论 应用PEN作为基因载体装载MT01可增强MT01对MG63细胞的促成骨作用。     

花粉与P123双模板制备的新型多级孔生物活性玻璃对MG63细胞增殖和分化的影响

目的:检测花粉与P123双模板制备的新型多级孔生物活性玻璃对人前成骨细胞系MG63增殖及成骨分化的影响。方法:在材料工作浓度为0.2 g/mL的浸提液(含10%胎牛血清的DMEM)中,培养MG63细胞至1、3、5 d,分别采用MTT比色法检测细胞增殖水平;碱性磷酸酶试剂盒检测细胞内ALP活性;实时定量PCR法测定成骨标志性基因RUNX-2、SP7、COL-1的mRNA表达水平。结果:花粉与P123双模板制备的新型多级孔生物活性玻璃可促进MG63细胞增殖,增强ALP活性表达,上调MG63标志性基因RUNX-2、SP7、COL-1的mRNA表达水平。结论:以花粉与P123双模板制备的新型多级孔生物活性玻璃具有细胞毒性低,且具有促进成骨细胞成骨向分化的潜能。     

人脱细胞真皮基质的结构及与MG63成骨样细胞生物相容性的研究

目的观察脱细胞真皮基质（ADM）的结构及MG63成骨样细胞在其上黏附与增殖的情况。方法ADM为实验组,膨体聚四氟乙烯（e- PTFE）膜为对照组,扫描电镜和光学显微镜下观察两组膜的结构。在两组膜上分别接种MG63成骨样细胞,并设空白对照组。采用细胞活力分析仪检测3组细胞增殖活力,酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶（ALP）表达,扫描电镜观察细胞在膜上接种后第1天和第5天的黏附及增殖情况。结果ADM分为基底膜面和组织面,组织面为鳞片状的结构,基底膜面可见指突结构和毛囊孔。e- PTFE成行排列,由直径比较均一的长椭圆形的裂隙组成。与空白对照组相比,ADM和e- PTFE对MG63成骨样细胞增殖活力和ALP活性无显著影响。扫描电镜观察细胞在两种膜上生长良好,但在ADM膜上,MG63成骨样细胞伸展更充分。结论ADM适于作引导骨再生膜材料,对MG63成骨样细胞的生长无抑制作用,相比较e- PTFE,ADM具有更优良的结构及生物学性能。     

氟-羟基磷灰石对骨肉瘤MG63细胞生物学性能的影响

目的 评价氟取代比例为20％的氟-羟基磷灰石(fluor-hydroxyapatite,FHA)对骨肉瘤MG63细胞增殖和成骨分化的影响,以期为FHA的临床应用提供依据.方法 采用化学沉淀法合成FHA,扫描电镜、X射线衍射仪、傅里叶红外光谱仪观察结构并表征.设置FHA组(培养基中加入FHA)、羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)组(培养基中加入HA)和空白对照组(单纯培养基),每组样本量为3,共培养骨肉瘤MG63细胞.甲基噻唑基四唑法检测3组细胞增殖能力,检测3组细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatese,ALP)活性.反转录PCR检测3组细胞成骨分化相关基因(Ⅰ型胶原、ALP、骨钙素和核心结合因子)mRNA表达情况.结果 FHA的X射线衍射图谱主晶相与HA标准图谱一致.培养3d后FHA组细胞增殖(A值为1.87±0.06)显著高于空白对照组(1.25±0.02)(P＜0.05),FHA组与HA组(1.84±0.03)差异无统计学意义(P＞0.05).培养3d后FHA组ALP活性(4.62±0.09)显著高于空白对照组(1.92±0.05)(P＜0.05).与空白对照组相比,FHA上调细胞Ⅰ型胶原、ALP、骨钙素mRNA表达,下调核心结合因子mRNA表达.结论 FHA对MG63细胞增殖和成骨分化相关基因mRNA的表达有促进作用,具有良好的生物相容性.     

特定序列寡核苷酸MT01对牙龈卟啉单胞菌感染的成骨细胞的增殖、细胞周期及凋亡的影响

目的 通过观察MT01对感染状态下成骨细胞细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨MT01对牙周致病菌感染的成骨细胞生物学性能的影响。方法 以人成骨细胞MG63为目的细胞,分别与PBS、MT01、CpG ODN、甲硝唑和庆大霉素共培养3 h后,按感染复数100∶1的比例加入牙周致病菌牙龈卟啉单胞菌共培养,检测培养24 h和48 h后MG63细胞的增殖、细胞周期及凋亡,以PBS作为空白对照,以牙龈卟啉单胞菌和PBS共培养作为阴性对照。结果MT01+牙龈卟啉单胞菌组细胞增殖高于空白对照组（P<0.05）,G₁期细胞百分比低于阴性对照组,而S期细胞百分比高于阴性对照组（P<0.05）,细胞早期凋亡率低于阴性对照组（P<0.05）。结论 MT01可促进感染状态下成骨细胞的细胞增殖,降低G₁期细胞百分比,促使细胞进入S期并抑制细胞早期凋亡。     

富血小板血浆对人成骨样细胞MG63增殖能力的影响

目的研究富血小板血浆（PRP）对人成骨样细胞MG63增殖能力的影响,探讨PRP的生物学功能。方法采集健康志愿者的静脉血,两次离心法制备PRP,氯化钙加人凝血酶激活后离心提取PRP萃取液。碱性磷酸酶（ALP）染色检测不同体积分数PRP（0、1%、2%、3%）对MG63分化活性的影响,碘化丙啶（PI）荧光染色观察PRP作用下MG63细胞形态的变化,免疫细胞化学检测PRP对MG63表达转化生长因子-β（TGF-β）的影响,扫描电子显微镜（SEM）观察PRP对MG63在人工骨材料表面生长情况的影响,CCK-8法检测PRP对MG63增殖活性的影响,流式细胞术（FCM）检测经PRP培养后不同时间MG63的细胞周期,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PRP作用下MG63中Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）mRNA的表达量。结果ALP检测见3%PRP组ALP阳性细胞染色最深,并随体积分数的增加染色强度增加,且PRP组细胞均出现不同程度的脱片现象。PI荧光染色见PRP组细胞核荧光染色较对照组增强。免疫细胞化学检测见3%PRP组TGF-β表达量最高（P＜0.05）。SEM观察：PRP组材料表面MG63密集,生长状态良好。CCK-8法测定细胞增殖活性,显示4.8%PRP组吸光度A450 nm值高于对照组（P＜0.05）。FCM检测表明：PRP组第2天S期细胞百分比高于对照组（P＜0.05）;第10天PRP组G0/G1期细胞百分比高于对照组（P＜0.05）;除第6天外,PRP组G2/M期细胞百分比均高于对照组。RT-PCR结果表明：PRP组MG63的Col-ⅠmRNA表达量较对照组明显上调。结论适宜体积分数的PRP对MG63的增殖、迁移和相关蛋白、基因的表达有促进作用,PRP具有统一、协调细胞生物学行为的作用。     

阳极氧化处理后的新型钛合金表面成骨细胞OPG、RANKL基因表达研究

目的:新型钛合金Ti-24Nb-4Zr-7.9Sn(TNZS)经过阳极氧化(anodic oxidation,AD)技术处理后,分析其表面的人成骨样MG63细胞骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)基因表达水平.方法:将人成骨样MG63细胞接种于Ti-6Al-4V、TNZS、AD-TNZS表面,采用半定量RT-PCR法检测OPG、RANKL mRNA的表达量.结果:人成骨样MG63细胞在AD-TNZS表面的OPGm RNA表达量有所提高,而RANKL mRNA的表达量3组材料间无明显差异.结论:阳极氧化处理的TNZS钛合金可能通过影响骨保护素、细胞核因子-κB受体活化因子配体调节成骨细胞、破骨细胞的平衡,从而促进种植体植入后的骨重建.     

牙龈卟啉单胞菌感染MG63细胞对细胞周期的影响

目的:通过体外建立牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)感染MG63细胞模型,探讨P. gingivalis ATCC 33277菌株感染MG63细胞对细胞周期的影响及发生机制。方法:P. gingivalis ATCC 33277菌株感染MG63细胞,MTT法检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期的分布,实时定量PCR和蛋白印记方法检测Cyclin D、Cyclin E的表达。结果:MOI为100∶1,P. gingivalis ATCC 33277菌株感染MG63细胞,能够抑制细胞增殖,同时导致细胞在G1期发生停滞,Cyclin D、Cyclin E基因和蛋白在24 h、48 h均有明显下降,与对照组相比有统计学差异。结论:牙龈卟啉单胞菌感染MG63细胞Cyclin D、Cyclin E基因和蛋白表达下调,抑制细胞的增殖,导致细胞停滞在G1期。     

PEN载ODN MT01复合物性能检测及其对成骨细胞增殖的影响

目的:检测PEI衍生物PEN装载ODN MT01复合物性能及PEN/ODN MT01复合物转染MG63细胞对细胞增殖影响。方法:以PEN为载体静电装载ODN MT01, Nanodrop测定PEN与ODN MT01不同质量比时装载效率;琼脂糖凝胶电泳检测PEN装载ODN MT01能力;马尔文粒度电位仪检测PEN/ODN MT01复合物粒度及电位;PEN装载ODN MT01-Cy5转染MG63细胞,观察荧光强度及进行FCM 检测;MTT检测转染PEN/ODN MT01复合物细胞增殖率。结果:PEN/ODN MT01复合物随质量比增加表面由负电转为正电,粒径大小90~110 nm;ODN MT01与PEN质量比为1∶6时,装载率高达77.67%,且转染MG63细胞荧光强度最大;PEN/ODN MT01复合物与对照组相比明显促进MG63细胞增殖。结论:PEN与ODN MT01质量比为1∶6时,可以高效装载ODN MT01,且可以明显促进MG63细胞增殖。     

机械牵张对人成骨细胞ALP活性及I型胶原表达的影响

目的　观察机械张力对成骨细胞碱性磷酸酶 (ALP)活性和I型胶原基因表达的影响。方法　通过Flexercell细胞体外拉伸力学装置对人成骨细胞MG 6 3进行牵张加载实验 ,用生化方法和RT PCR反应检测细胞受张力刺激 6、12、2 4和 4 8h后的ALP活性和I型胶原mRNA的表达变化。结果　机械张力能明显增强MG 6 3细胞的ALP活性。I型胶原mRNA的表达在张力作用后 6～ 12h减弱 ,2 4h后表达升高 ,4 8h最高。结论　机械张力不仅能促进成骨细胞ALP的分泌活性 ,而且还能对成骨细胞胶原合成产生影响。     

新型钛合金阳极氧化后对成骨细胞增殖、分化的影响

目的研究新型医用钛合金Ti-24Nb-4Zr-7.9Sn(TNZS)经过阳极氧化(AD)技术处理后对成骨细胞增殖和分化的影响。方法将人成骨样MG63细胞接种于Ti6Al4V、TNZS、AD-TNZS表面,采用MTT法检测成骨细胞的增殖情况,考马斯亮蓝G250染色法检测细胞总蛋白质含量,对硝基苯磷酸盐法检测碱性磷酸酶(ALP)活性。结果人成骨样MG63细胞在Ti6Al4V、TNZS以及AD-TNZS表面均能良好生长,细胞增殖率、细胞总蛋白含量未见明显差异(P>0.05);但培养至4、7d时,AD-TNZS组细胞ALP活性明显高于其他组(P<0.05)。结论阳极氧化处理的TNZS钛合金可促进成骨细胞的分化。