应用安瓿内封存方法保存钩端螺旋体菌株的初步观察

应用不同条件和方法对一些钩端螺旋体菌株进行了保存试验。结果显示用柯氏培养基接种的液体培养物封存在安瓿内遮光保存于室温,效果最好。1964一1966年期间封存的133株钩端螺旋体,每一菌株分装10支安瓿。以后定期打开1至5支做暗视野镜检和接种培养。结果表明,封存半年后镜检和培养的阳性率分别为96．7％和98．6％;一年后为94．1％和96．7％;6至8年后为13．5％和49．4％。     

钩端螺旋体遗传物质和毒力因子的研究进展

钩端螺旋体可引起人、兽共患疾病--钩端螺旋体病,其基本结构由圆柱形菌体、鞭毛和外膜组成.经血清型分类法将该体分为24个血清群200多种血清型.该体由大、小两个染色体组成,基因组共约5000kb,推测含4 768个基因.结构基因编码的鞭毛蛋白、溶血素、脂蛋白、脂多糖等可作为毒力因子,在钩端螺旋体致病过程中起主要作用.     

钩端螺旋体的研究进展

广义上钩端螺旋体是指螺旋体目钩端螺旋体科钩端螺旋体属的微生物,随着研究的深入,现该属微生物被划分为钩端螺旋体属（Leptospira）和细丝体属（Leptonema）17个种。由于钩端螺旋体具有独特的形态结构、进化上特殊的地位和医学上的重要意义,一直是研究者和医务工作者关注的对象。钩端螺旋体可引起钩端螺旋体病,该病是一个潜在的、严重的世界性公共卫生问题。其典型症状是黄疸、肾衰竭、出血及心肌炎与心律不齐,     

钩端螺旋体膨胀试验用于快速鉴定菌群的研究

本文报导的膨胀试验,为一种鉴定钩端螺旋体菌群的快速而可靠的方法,经近二年的实验研究和现场考核应用,其结果可归述如下： 1．据我们实验研究,膨胀试验的抗血清浓度以1：500倍稀释为宜(指血清凝溶效价为1：12800之通常定群用诊断血清)。当此稀血清与同群钩端螺旋体各一接种环在玻片上加以混和,并覆以盖玻片,置于400倍暗视野下,于10分钟内观察结果,阳性时,可见钩端螺旋体发生膨张、伸长和部分溶解等显著形态学变化。 2．对304株不同群别的钩端螺旋体地方株(病人37,猪16,鼠251)和国内13群14型标准菌分别进行了膨胀试验定群鉴定,并同时以凝溶试验作对照,结果两者完全相符。 3．膨胀试验具有快速、简单、特异性高等优点。本文结果表明该法较凝溶试验更为优越,特别是可在“非常”条件下用于快速鉴定钩端螺旋体菌群。     

钩端螺旋体外膜蛋白LipL32单克隆抗体的制备及鉴定

LipL32是钩端螺旋体外膜中含量最丰富的蛋白,有很好的免疫原性,且在致病性钩端螺旋体中高度保守。在非变性条件下纯化LipL32重组蛋白,与佐剂混匀后免疫BALB/c小鼠,取脾脏细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,然后用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和有限稀释法分别进行筛选和细胞克隆,获得29株能稳定分泌抗LipL32单克隆抗体的杂交瘤细胞株,它们能识别8个LipL32抗原表位。用这些细胞株制备腹水型抗体,并对特性进行鉴定。用生物素标记这些抗体后两两配对,采用双抗夹心ELISA检测提取自15株致病性钩端螺旋体及其他致病菌的抗原,以评估单克隆抗体的灵敏度和特异度。筛选出1对灵敏度高和特异度好的单克隆抗体,ELISA检测rLipL32的最低浓度为1ng/ml。结果提示,该钩端螺旋体外膜蛋白LipL32单克隆抗体及检测方法有很好的应用前景。     

用改进的Blenden银染色法检查钩端螺旋体

近年来,在钩端螺旋体流行病学调查中,均采用改良镀银染色法,但此法在染色过程中须控制温度(最适为60℃),无特殊恒温设备,不易掌握。为寻求一种简便方法,我站于1982年,在钩体病监测中,按常法取鼠双肾培养后,再取鼠肾作压印片,沿用刘聿太改进的鞭毛染色法中的Blenden银染色法,检查钩端螺旋体(简称钩体),现将结果报告如下。     

钩端螺旋体感染早期出现的免疫细胞粘着现象

本文报道家兔皮下接种钩端螺旋体后的免疫细胞粘着现象(Immunoeytoadherence ICA)。感染钩端螺旋体的家兔血液淋巴细胞用波摩那型抗原包被的绵羊红细胞进行ICA检测,发现结合抗原的细胞的增加先于特异性抗体的出现,并伴随着最初的抗体反应。大肠杆菌和鼠疫杆菌感染的家兔淋巴细胞并不出现钩端螺旋体免疫细胞粘着现象,而不同血清型钓端螺旋体间存在交叉反应,说明此现象具有属的特异性,因此ICA试验可望作为观察本病早期免疫反应和早期诊断的一种方法。     

秋季群钩端螺旋体的一个新血清型

1962年7月1日自云南省西双版纳州勐腊县钩端螺旋体病患者的血培养物中分离出钩端螺旋体A6株。经交叉显凝试验和交叉凝集索吸收试验,证明它是秋季群钩端螺旋体的一个新血清型。建议命名为致病性钩端螺旋体南腊血清型(Leptospina inteirogans serovar nanla),A6株为参考株。     

钩端螺旋体外膜疫苗的流行病学效果评价

为了评价国产钩端螺旋体外膜疫苗的流行病学效果。于1998年6－10月,用队列研究和病例对照研究等方法在钩体病流行区5－60岁农业人口 ,观察比较接种组和对照组钩体发病情况。队列研究显示,钩体外膜疫苗对同血清群钩体的保护率为75．17％,效果指烽为4．03。1：2配对调查的疫苗保护率为81．25％,1：3配对结果为73．33％。用筛选法估计的疫苗效果为755。不同研究方法的结果相近,均一致说明,该疫苗的流行病学效果较理想。研究结果还显示,该疫苗对异血清群钩体也有一定的保护作用。     

钩端螺旋体内毒素的研究III．黄疸出血群赖型钩端螺旋体70091株脂多糖含β-羟基-肉豆蔻酸的证明

采用薄层层析及气相色谱分析黄疽出血群赖型钩端螺旋体70091株脂多糖的游离脂肪酸组成,证明其含有革兰氏阴性细菌内毒素所共有的卢一羟基一肉豆蔻酸,从而从化学上肯定了上述钩端螺旋体脂多糖为内毒素。     

问号钩端螺旋体疫苗候选基因LB061的抗原性和保守性研究

目的 克隆表达和鉴定问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株中疫苗候选基因LB061,研究LB061的免疫原性和在不同血清型钩端螺旋体菌中的保守性。方法 生物信息学软件分析预测LB061的特征。构建原核表达质粒pQE31-LB061,经IPTG诱导后用SDS-PAGE及Western印迹法鉴定表达情况。用表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,Western印迹法检测其抗原性和在不同血清型钩端螺旋体中的保守性。Western印迹法检测钩端螺旋体全菌兔抗血清中的LB061抗体。结果 生物信息学预测结果显示,LB061含有DUF839家族结构域。成功克隆了重组质粒pQE31-LB061,表达的重组蛋白能刺激BALB/c小鼠产生抗体(效价为1∶32000),并能与相应抗体反应,具有良好的抗原性。在16株不同血清型的钩端螺旋体中均可检测到LB061蛋白的表达,并在钩端螺旋体赖株全菌兔抗血清中检测到其抗体。结论 LB061蛋白可以作为外膜蛋白刺激宿主免疫系统产生抗体,具有良好的抗原性和保守性。本研究为其作为疫苗候选基因的研究奠定了基础。     

七日热群钩端螺旋体的两个新血清型

本文报告七日热群钩端螺旋体的两个新血清型。A10株钩端螺旋体系I 962年自勐腊县钩端螺旋体病患者分离,命名为云南型钩端螺旋体(Leptospira interrogans serovar yunnan)H27株钩端螺旋体系1964年自河口县钩端螺旋体病患者分离,命名为河口型钩端螺旋体(Le-ptospira interrogans serovar hekou)。     

七日热群钩端螺旋体的一个新血清型

A23株钩端螺旋体系1962年8月3日分离富云南省勐腊县钩端螺旋体病患者血液。经交叉凝集试验、交又凝集素吸收试验和园子血清凝集试验证明是七日热群保林卡那亚群钩端螺旋体的一个新血清型。建议命名为致病性钩端螺旋体曼I芏血清型(Leptospira interrogansserovar manzhucng)。此型感染在勐腊已发现6例。     

014 脂多糖抗原诊断钩端螺旋体病相关性葡萄膜炎

钩端螺旋体(简称钩体)病是一种广泛流行的动物源性疾病,尽管目前已有多种商业试剂盒用于诊断系统性钩体病,但试剂盒中起作用的具体抗原的性质仍不清楚。钩体病相关性葡萄膜炎是系统性钩体病的一种晚期并发症,该研究目的在于验证并评估钩体脂多糖(LPS)抗原作为钩体病相关性葡萄膜炎的临床辅助诊断的意义。     

钩端螺旋体外膜菌苗的研究I．菌苗的制备、性质及免疫原性

本文报道有关钩端螺旋体外膜菌苗的研究结果。通过不同孔径微孔滤膜收集盐变细胞(0．85～1．2微米)及纯化外膜(0.45微米),方法简便、省时,且不需贵重仪器,为大量制备钩端螺旋体(以下简称钩体)外膜菌苗提供了新的途径。黄疸出血群及波摩那群钩体外膜,在电子显微镜下的形态大多里圆形成不规则形。其化学组成黄疽出血群外膜中含蛋白质3 7．77％,碳水化合物22．21％及类脂质1 7．77％;后者则含蛋白质59．7 2％,碳水化合物13．69％,类脂质¨．90％。除强碱相似文献   

钩端螺旋体内毒素的研究V.乙二胺四乙酸二钠对钧端螺旋体释放脂多糖的作用

热酚法提取钩端螺旋体脂多糖(LPS)前,用乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na)处理钩体70091株的细胞可以使LPS的产量提高一至两倍,并改善了产品的色泽及溶解度。长久贮存的钩体细胞,LPS分子易受EDTA-Na的作用而使糖链中的组分脱落,导致糖链变短。当钩体LPS分子中糖链短到使脂、糖含量比相等时,钩体LPS从水相转入酚相。     

采用小白鼠分纯钩端螺旋体菌株

近年来,随着钩端螺旋体病的调查研究工作的广泛开展,在实验诊断方面,除进行大量血清学试验外,对钩端螺旋体菌株(以下简称钩体菌株)进行培养,作好菌群鉴定,对生物制品和制订防治措施提供参考。但往往由于在采集标本及实验操作过程中无菌操作不严格,而使分离出的钩体菌株发生污染。用常规方法     

一个新的钩端螺旋体血清群——曼耗群

本文介绍了致病性钩端螺旋体的一个新的血清群——曼耗(Manhao)群的分群结果。曼耗群钩端螺旋体与Javanica,Celledoni Canicola,Cynopte ri,AutumnMis,Australi~,P小mona,Grippotyphosa,Hebdomadis,Bataviae,farassovi．Shetmaai,Panama等群各型没有阳性交叉反应。仅与Pyrogencs群中的alexl型I-IS 616株有共同的抗原因子联系,与P'crogenes群内pyrogenes型等其他型没有交叉反应;另外还与[cterohaemorrhagiae,Ballum群个别型有低度的,不稳定的交叉反应。因此确定曼耗群是钩端螺旋体的一个新血清群。到目前为止,本群各型地方株中除一株是由猪肾分离的外,其余菌株均获自钩端螺旋体桶患者。尚未从其它常见的宿主动物l扣获得过本群钩端螺旋体。     

天花粉对钩端螺旋体生长的促进作用

为了提高钩端螺旋体(以下简称钩体)的检出率,我们从多种中药中筛选出对钩体有促进生长作用的天花粉。实验结果如下: 各型钩体在添加0.1％天花粉柯索夫培养基的生长情况:将添加0.1％天花粉的柯索夫培养基与常规使用的柯索夫培养基各1ml,接种1/1000稀释度钩体培养物0.1ml,混匀,置28℃温箱培养。从第3天到第7天,每天用3mm直径接种环挑取培养物一环,置载玻片上,用暗视野     

小拟袋鼠生态的初步观察

小拟袋鼠[Bandicota nemorivaga(Hodg-son)]俗称大柜鼠(广东音土名)。Bandicota属分布在我国的只有这一种,在台湾甚为普遍。此外Wroughton氏(1919)曾在云南滕越(现名滕冲)发现此鼠。1955年夏,我站在粤中地区进行钩端螺旋体病调查时,得知小拟袋鼠是粤中地区一种很普通的野鼠,同时证明此鼠是钩端螺旋体病的储存宿主之一,与近几年来钩端螺旋体病在粤中地区广泛流行有很密切的关系,因而引起我们极大的注意。1957年夏秋之间,我们在顺德县进行恙虫病、钩端螺旋体病调研的同时,曾对此鼠作了一些初步的研究,材料是很零碎的。现写在这里,希专家们多赐教益。