阪崎肠杆菌自动化核糖体分型的研究

目的 对阪崎肠杆菌食品分离株进行核糖体分型,并分析其分型效果.方法采用杜邦RiboprinterTM指纹图谱分析仪对2株阪崎肠杆菌标准菌株和28株分离株进行核糖体分型,运用BioNumerics数据库软件建立相应的核糖体指纹图谱数据库,进行指纹图谱分析.结果 核糖体分型将2株阪崎肠杆菌标准菌株和28株分离株分成26种核糖体带型,其中22种带型分别对应1株阪崎肠杆菌试验菌株,其他4种带型分别对应2株试验菌株,不同带型之间的最低相似度为31.58%.所有菌株的酶切条带数为10个左右,酶切条带分子量范围位于1～50 kb之间.同时,使用BioNumerics软件对结果进行分群和多维尺度分析,可见核糖体分型主要分为4个群.结论 自动化核糖体分型可以方便快捷的实现阪崎肠杆菌的分型.     

阪崎肠杆菌自动化核糖体分型的研究

目的 对阪崎肠杆菌食品分离株进行核糖体分型,并分析其分型效果.方法采用杜邦Riboprinter~(TM)指纹图谱分析仪对2株阪崎肠杆菌标准菌株和28株分离株进行核糖体分型,运用BioNumerics数据库软件建立相应的核糖体指纹图谱数据库,进行指纹图谱分析.结果 核糖体分型将2株阪崎肠杆菌标准菌株和28株分离株分成26种核糖体带型,其中22种带型分别对应1株阪崎肠杆菌试验菌株,其他4种带型分别对应2株试验菌株,不同带型之间的最低相似度为31.58%.所有菌株的酶切条带数为10个左右,酶切条带分子量范围位于1～50 kb之间.同时,使用BioNumerics软件对结果进行分群和多维尺度分析,可见核糖体分型主要分为4个群.结论 自动化核糖体分型可以方便快捷的实现阪崎肠杆菌的分型.     

上海市单核细胞增生李斯特菌基因分型及耐药性研究

目的了解上海市单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)食品和临床分离株的毒力特点、耐药性及其基因特征。方法采用试管凝集法对89株LM食品和临床分离株进行血清分型,采用聚合酶链反应(PCR)方法对LM中7个毒力基因进行检测,采用琼脂扩散(K-B)法对其进行药敏试验,采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)对89株LM分离株进行分型研究。结果血清分型结果显示1/2a和1/2c是LM优势血清型。只有4株LM食品分离株对四环素显示耐药,其余均为敏感。89株LM食品和临床分离株都含有7种毒力基因。89株食品和临床分离株经双酶切分型可得40条不同的条带,且1株临床菌株的PFGE分型显示其为食品分离株的亚型。结论上海市LM分离株的耐药性并不严重,但是其均为产毒株,且PFGE分型结果显示临床菌株与食品分离株之间有较近的亲缘关系,这提示上海市LM分离株对公共卫生具有潜在的危险,需要对其加强监测。     

联合应用分子血清分型与二元基因分型检测单核细胞增多性李斯特菌的研究

目的了解食品中单核细胞增多性李斯特菌(LM)的分子血清型分布,并探索二元基因分型方法在LM分型检测中的意义。方法对2005年-2012年间河北省分离自食品的154株LM进行分子血清分型与二元基因分型分析。结果 154株LM中,1/2a型菌株最多,占52.60%,其次为1/2c型(22.08%)、1/2b型(15.58%)和4b型(9.74%)。二元基因分型可将154株LM分为31个BT(Binary Type)型,分辨力(DI值)为92.28%。二元基因型与分子血清型综合分析,可将154株LM分为34个型别,DI值为92.56%。通过对进化树分析可见,大多数BT型仅见于一种血清型,仅少数BT型见于2种血清型,提示二元基因型和分子血清型是否存在一种紧密的关系,尚需进一步研究证明。结论分子血清分型与二元基因分型综合应用于LM的分型研究,分型能力强,且具有操作简便、快速、高通量的优势,便于推广,可应用于暴发确认与溯源检测。     

广东省食物中毒暴发疫情中沙门菌和金黄色葡萄球菌自动化核糖体基因分型研究

目的 为了解广东省常见食源性致病菌沙门菌和金黄色葡萄球菌（金葡菌）的遗传物质多态性特征,探索其鉴定及溯源方法。方法运用自动化核糖体基因分型系统,用EcoRⅠ酶或PvuⅡ酶,对广东省分离的沙门菌和金葡菌进行分子分型研究。应用BioNumerics软件比对不同来源、时间和地点的分离株,分析菌株间的相关性。结果使用PvuⅡ酶对32株沙门菌酶切,分为19个核糖体型,使用EcoRⅠ酶对14株沙门菌酶切,分为2个核糖体型。使用EcoRⅠ酶对49株金葡菌酶切,分为31个核糖体型,表现出较大的遗传多样性。结论 自动化核糖体基因分型能有效鉴定沙门菌和金葡菌。沙门菌血清分型与Ribotyping分型无高度相关性,但两者结合,能更有效鉴定菌株间的亲缘关系,确定食物中毒的来源和传染途径。     

上海市奉贤区188株沙门菌分子分型研究

目的运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术研究上海市奉贤地区沙门菌的分子流行病学特征,为沙门菌病的鉴定溯源及防控预警提供技术支持和数据参考。方法对2012-2016年分离到的188株沙门菌进行PFGE分子分型,运用Bio Numerics V7. 6软件的UPGMA方法进行聚类分析。结果 80株鼠伤寒沙门菌分为57种PFGE带型,菌株间条带相似度为43. 6%～100. 0%,其中52株可分为4组大的克隆系,克隆系Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中既有患者株也有食品株; 75株肠炎沙门菌分为38种PFGE带型,菌株间条带相似度为54. 4%～100. 0%,其中62株为1组大的克隆系,58株为患者株,4株为食品株;33株伦敦沙门菌分为28种PFGE带型,菌株间条带相似度为50. 1%～100. 0%,其中22株可分为3组大的克隆系,克隆系Ⅰ、Ⅱ中既有患者株也有食品株。结论 PFGE分型结果反映了本区鼠伤寒、肠炎、伦敦沙门菌PFGE型别的多样同时具有优势克隆系,而且各优势克隆系有稳定的遗传持久性。奉贤区沙门菌病例与食用污染的生鲜肉制品有密切关系,PFGE分子分型技术在致病菌的传播、追踪和溯源方面更具有针对性。     

PCR法对单核细胞增生李斯特菌食品分离株的鉴定

〔目的〕采用PCR法对常规法分离的八株单核细胞增生李斯特菌 (LM )再鉴定 ,以验证PCR法作为检测LM的有效性及可靠性。〔方法〕八株从食品中分离的LM在BHI培养基纯培养 2 4h后 ,提取基因组DNA ,用PCR扩增hly基因特异性 85 6bp的片段。〔结果〕八株从食品中分离并经传统方法鉴定的LMPCR扩增均出现特异性的条带 ,而其他属的李斯特菌和非李斯特菌未出现特异性的条带。〔结论〕采用hly基因作为PCR扩增的目标基因检测LM具有较好的特异性 ,可用于食品中LM的检测与分离。     

一类罕见硫化氢阴性山夫登堡沙门菌腹泻株的分子溯源

[目的]研究一类罕见硫化氢阴性山夫登堡沙门菌腹泻菌株遗传克隆特征。[方法]收集、分析本地区参加全球沙门菌监测(GSS)腹泻病例中分离的山夫登堡沙门菌生化、编码SPI-1毒力岛基因(hilA、invA)和耐药特征;应用Riboprinter(r)(RP)DNA指纹图谱系统比较表型典型与不典型菌株的核糖体分型;通过Pluse Net China数据库中同型菌株的脉冲凝胶电泳(PFGE)图谱聚类比较分子型谱。[结果]2006年长宁区GSS监测病例分离出19株山夫登堡沙门菌,其中10株属于硫化氢阴性和SPI-1毒力岛缺失的表型变异菌株。RP分型证实发生变异的山夫登堡沙门菌与典型菌株间分属2个不同的克隆。Pluse Net China数据库将包括长宁区19株山夫登堡沙门菌在内的36株山夫登堡腹泻株共分18种PFGE带型。长宁区的表型变异株优势型分属4型(2株)和6型(6株),典型菌株的优势型分属11型(1株)、17型(4株)和23型(2株)。聚类分析显示,表型变异株的克隆在遗传相似度上高于典型株。[结论]分子溯源证实,SPI-1毒力岛缺失的山夫登堡沙门菌变异菌株与典型菌株同样具有引发局部爆发的致病性。2006年长宁区分离的硫化氢阴性山夫登堡沙门菌变种腹泻株与2002年深圳市的1例食物中毒案例分离的2株SPI-1毒力岛缺失株存在同源性。     

2株B群脑膜炎奈瑟菌的分子生物学分析

[目的]探讨分离自大连市开发区2005年和2008年外来人口中2例暴发型脑膜炎死亡病例2株B群脑膜炎奈瑟菌的分子生物学特征及其关联性。[方法]2010年,对2株B群流脑菌株进行脉冲场电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)分型分析。[结果]2株菌PFGE型相似性为100%,应为同一来源;MLST分析结果均为ST5662型。菌株对青霉素、头孢类、阿齐霉素、氯霉素、利福平等多种抗菌药物敏感。[结论]2株B群脑膜炎奈瑟菌分子分型结果一致,为同一科隆。     

艾伯特埃希菌PFGE分子分型及其数据库的建立

目的建立艾伯特埃希菌PFGE分子分型方法,分析不同来源艾伯特埃希菌间的同源关系,并建立其PFGE分型数据库。方法参考非O157大肠埃希菌PFGE分型方法,对从自贡、泸县地区分离的63株艾伯特埃希菌和1株艾伯特埃希菌参考菌株LMG20976进行PFGE分析,利用Bio Numerics 7.5软件分析PFGE图谱并建立数据库,并对分型结果与样本来源、类型、ST型、intimin亚型等进行关联性分析。结果 64株艾伯特埃希菌分型效果明显,被分为46种PFGE带型,分别命名为EASX01001~EASX01046,相似度为55%~100%,包含9种克隆群(≥2种带型形成克隆群),同种带型超过2株的带型共有8种。结论非O157大肠埃希菌PFGE分型方法适用于艾伯特埃希菌分型研究,比MLST技术具有更高的分辨能力,通过图谱分析发现艾伯特埃希菌具有遗传多样性的特点。同时,建立的数据库为深入了解艾伯特埃希菌的分子流行病学特征提供科学依据。