杯本处理方法对多聚酶链反应的影响

对多聚酶链反应扩增条件相同情况下，５种标本处理方法ＨＢＶ ＤＮＡ检测进行了比较。结果证实，酶消化法、碱变性法和微波法ＨＢＶ ＤＮＡ检出率高于直接法和热变性法，而且酶消化法，碱变性法和微波法的敏感性明显高于直接法和热变性法。综合比较这５种ＰＣＲ方法，碱变性法和微波法不仅敏感性高、简便和快速，而且抗污染性强，结果稳定可靠，值得推广应用。     

双带PCR提高检测血清HBV—DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ。该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性，与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品）和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品），ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA含量与e抗原关系

分别用定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）法和酶标法（ＥＬＩＳＡ）检测６４例慢性乙型肝炎患血清ＨＢＶ－ＤＮＡ含量与乙肝病毒血清标记物（ＨＢＶ－Ｍ）。结果显示，ｅ抗原阳性组与ｅ抗原阴性血清ＨＢＶ－ＤＮＡ含量分别为１０＾７．９１±４．１６ｃｏｐｙ／ｍｌ和１０＾５．８２±３．２８ｃｏｐｙ／ｍｌ，二组相比具有显性差异（Ｐ〈０．０５），此结果进一步证实，ｅ抗原阳性是乙肝病毒体内复制的指标，但同时也有３２．９％（２     

应用PCR检测多种肝病242例血清HBV－DNA和HBVM对比研究

应用ＰＣＲ检测多种肝病２４２例血清ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＢＶＭ对比研究徐镇平，张贤康，瞿瑶，黄超聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术可在体外成百万倍扩增ＨＢＶ－ＤＮＡ的某一片段，使检测乙肝病毒的敏感性达到最低血清感染水平（１０２毒粒／ｍｌ）。我们用ＰＣＲ法检测２４...     

检测人巨细胞病毒的免疫—PCR方法的建立

目的：依据免疫－ＰＣＲ基本原理，建立检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）活动性感染的免疫＿ＰＣＲ方法。方法：我们建立的免疫－ＰＣＲ方法与酶联免疫ＥＬＩＳＡ不同之处是，用ＰＣＲ扩增生物素化线性ＰＢＶ２２０ＤＮＡ代替ＥＬＩＳＡ的酶催化底物，经琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色观察分析扩增产物异条带，判断结果。结果：用本法检测ＨＣＭＶ的敏感性高于ＥＬＩＳＡ法１０＾３－１０＾５倍，可检测到５个感染ＨＣＭＶ细胞；而检测ＨＳ     

乙型病毒性肝炎的基因诊断

对１２０例乙肝病毒（ＨＢＶ）感染者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ用ＰＣＲ技术进行检测，结果表明，ＰＣＲ法的敏感性阳性检出率７５．８％，明显高于ＥＬＩＳＡ法（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和ＨＢＣＡｂ）的阳性率分别为６１％、３８％和６２％）；ＰＣＲ检测ＨＢｓＡｇ和ＨＢＡｂ一血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率分别为２６％、５２％和２４％，ＰＣＲ检测三者均为阳性血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率为１００％慢性迁延肝炎、慢性活动性肝炎     

乙型肝炎病原检测方法的比较及其临床意义探讨

本文通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ法）、斑点杂交法（Ｄｏｔ ｂｌｏｔ）以及酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ法）对５５例疑有乙型肝炎的病人进行了检测。结果显示：在乙型肝炎病原基因（ＨＢＶＤＮＡ）检测上，ＰＣＲ法的敏感性显著高于Ｄｏｆｂｌｏｔ法（Ｘ＾２＝４．２５１ Ｐ〈０．０５）。乙型肝炎病原基因诊断可以直接检测血液中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的存在情况，并能检出低水平的病毒复制。从而弥补了ＥＬＩＳＡ不能完全反映ＨＢＶ     

聚合酶链反应和原位杂交检测成人肾炎肾组织HBV DNA

目的 探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染与成人肾小球肾炎（肾炎）之间的联系,及研究ＨＢＶ对肾脏的致病作用。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和原位杂交（ＩＳＨ）技术检测３９例血清ＨＢＶ标志物阳性的成人肾有活检组织ＨＢＶ ＤＮＡ的存在状态。结果 用ＰＣＲ法测定肾活检组织抽提物ＨＢＶ ＤＮＡ１７／３９例阳性（４３．６％）,其中５例ＰＣＲ阳性者再且地高辛素标记的ＨＢＶ ＤＮＡ探针原位杂交,测定肾活检石腊包埋切     

HBV感染者外周血单个核细胞中HBV DNA的检测

目的；研究乙型肝炎毒（ＨＢＶ）感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中ＨＢＶ ＤＮＡ的存在及其与血清ＨＢＶ ＤＮＡ的关系。方法：用ＰＣＲ法及斑点杂交法对５０例ＨＢｓＡｇ（＋）的感染者ＰＢＭＣｓ ＨＢＶ ＤＮＡ进行检测。同时用ＰＣＲ法检测感染者血清ＨＢＶ ＤＮＡ。结果：ＰＣＲ法和斑点杂交法分别从３５份和３２份ＰＣＭＣｓ检出率均为６０．０％左右。ＰＣＲ法检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率为３６．０％。结论：Ｈ     

外参照PCR及其产物酶联杂交定量检测HBV DNA

建立一种敏感,特异和精确的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因ＰＣＲ及其产物的酶联杂交定量分析技术。方法：（１）常规ＰＣＲ法扩增ＨＢＶ ＤＮＡ质粒和血清ＨＢＶ ＤＮＡ,引物（ＳＰ１,ＳＰ２）为一对ＨＢＶ ＤＮＡ Ｓ区基因特异引物,扩增片段长３１９ｂｐ,ＳＰ２的５′端用生物素修饰。扩增条件经过严格优化组合,以最大限度减少非特异片段,包括引物二聚体产生。设定５个不同梯度的ＨＢＶ ＤＮＡ外参照管,制作标准曲线。（     

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBVDNA定量检测相关性分析及临床应用价值

目的探讨乙型肝炎（乙肝）患者前S1（Pre S1）抗原检测和乙型肝炎病毒（HBV）DNA检测以及乙肝病毒血清标志物（＂乙肝五项＂）之间的关系,同时研究Pre S1抗原和HBV DNA在乙型肝炎诊断中的重要性。方法对537例乙肝患者血清用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定Pre S1抗原和HBV血清学标志物,用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法进行HBV DNA检测,并对检测数据采用χ2检验进行比较分析。结果 537例乙肝患者血清中,HBV DNA总阳性率为52.70%;前S1抗原总阳性率为49.35%,两者间比较差异无统计学意义（χ2=1.21,P〉0.05）,而且Pre S1抗原和HBV DNA检测的符合率为93.62%。在HBV DNA阳性乙肝患者中Pre S1抗原检测阳性率为89.05%,HBeAg检测阳性率为37.46%,两者间差异有统计学意义（χ2=30.79,P〈0.01）。结论 Pre S1抗原与HBV DNA具有高度相关性,并且能够比HBeAg更敏感地反映乙肝病毒的复制情况,Pre S1抗原可作为血清标志物检测的重要补充,更适合在无条件进行HBV DNA检测的基层医院开展。     

胎儿宫内感染乙型肝炎病毒的实验研究

目的探讨胎儿宫内乙型肝炎病毒(HBV DNA)感染的实验诊断方法及其临床意义.方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对156例乙肝表面抗原(HBsAg)阳性孕妇的母血和产后婴儿脐血及婴儿外周血的乙型肝炎血清学标志物(HBV-M)和HBV DNA进行检测.结果156例HDsag阳性孕妇所生婴儿脐血和婴儿外周血HBsAg的检出率为8 3%(13/156)、6.4(10/156),HBeAg检出率分别为7.1%(11/156)、5.1%(8/156),母血、脐血、婴儿外周血HBV DNA阳性检出率分别为36.5%(57/156)、28.2%(44/156)、23.7%(37/156);57例HBV DNA阳性孕妇血病毒含量(拷贝数/ml的对数值)为7.34±2.28,37例阳性婴儿外周血HBV DNA含量为6.08±0.96;与婴儿外周血检测结果相比较,脐血中HBsag、HBeAg的阳性率不仅存在23.1%和37.5%的假阳性,HBV DNA也存在16.7%(7/42)的假阳性;在HBeAg或HBV DNA阳性孕妇中,婴儿外周血HBV DNA的检出率分别为73.8%(31/42)、64.9%(37/57),显著高于HBeAg或HBV DNA阴性者5.3%(6/114),(P＜0.01):婴儿外周血中HBV DNA阳性率随孕妇HBVDNA含量增加而显著增加(P＜0.005),其HBV DNA的含量与母血呈正相关,(r=0.39).结论婴儿脐血HBV检测是诊断胎儿宫内HBV感染的筛选指标,而婴儿外周血的检测才具有确诊意义;HBV DNA定量检测是胎儿宫内HBV感染和感染程度最为直接、敏感的诊断方法;孕妇HBeAg、HBV DNA阳性是胎儿宫内感染HBV的高危因素.     

肽核酸钳制PCR早期检测乙型肝炎病毒YMDD耐药变异

目的建立乙型肝炎病毒肽核酸钳制PCR（PNA-PCR）耐药监测方法,以提前监测乙型肝炎病毒YMDD耐药株的产生。方
法选取rtM204I（ATT）、rtM204V（GTG）突变型质粒与野生型质粒rtM204（ATG）按照不同比例混合后,用PNA-PCR法及直接测
序法对耐药位点进行检测,评价两种方法的灵敏度及特异性;选取临床耐药检测患者血清标本85例,采用PNA-PCR法及直接
测序法进行耐药检测,比较两种方法的耐药检出率。结果PNA-PCR法可在105倍野生型YMDD基因背景下检测出突变,灵敏
度为0.001%,可检测到最低限为101拷贝。而直接测序法可检测的基因突变的最低极限为104拷贝,检测灵敏度为10%。85例
临床耐药检测患者中,PNA-PCR法YMDD检测阳性率为85.9%（73/85∶YIDD∶40,YVDD∶23,YIDD+YVDD∶10）,而PCR产物
直接测序法检阳性率仅为40%（34/85∶YIDD∶21,YVDD∶11,YIDD+YVDD∶2）。阴性对照,两种方法均未测出HBV病毒,两种
方法的特异性均较好。结论PNA-PCR方法在灵敏度及特异性上均优于直接测序法,而且操作简便,快捷,在科研和临床上都有
很好的应用前景。
     

不同分子生物学方法检测乙型肝炎病毒DNA的研究

目的：研究不同分子生物学方法检测乙型肝炎病毒（HBV）DNA的敏感性及影响因素。方法：用饱和酚抽提和血清蛋白变性后聚合酶链反应（PCR－1和PCR－2）检测48例慢性肝病患者的HBVDNA，并与分子斑点杂交法（Dot－H）检测结果进行比较。结果：Dot－H、PCR－1和PCR－2法对HBVDNA的检出率分别为70．83％、87．50％和91．67％，PCR－1和PCR－2中有17．02％表现为交叉阳性，慢性肝炎患者的检出率高于肝硬化患者，HBeAg阳性者高于其它HBV血清标志物（HBVm）阳性者。结论：PCR检测HBVDNA的敏感性高于Dot－H，所用PCR包含的多种引物可以提高HBVDNA的检出率。     

基因芯片技术检测乙、丙型肝炎病毒临床研究

探讨基因芯片技术在乙、丙型病毒检测的作用。方法用迈科锐HBV、HCV联合基因芯片检测血清HBV-DNA和HCV-RNA。结果基因芯片检测42例HBV-DNA的检出率为86％(26/30),符合率为88％(37/42),假阳性为8％(1/12)。检测HCV-RNA检出率为71％(5/7)。符合率为92％(39/42),假阳性为2％(1/35)。结论 HBV、HCV联合基因芯片检测HBV-DNA和HCV-RNA有较好的敏感性和特异性。     

乙型肝炎患者血清HBV DNA与HBV-M检测比较分析

目的：探讨不同免疫标志物的乙型肝炎（乙肝）患血清HBVDNA阳性率及其临床意义。方法：用PCR方法检测乙肝患血清HBVDNA，用ELISA方法检测乙肝五项标志物即HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb。结果：212例HBsAg,HBeAg,HBcAb均阳性的标本HBVDNA也全部阳性，阳性率为100%；158例HBsAg,HBeAb,HBcAb均阳性的标本，HBVDNA62例阳性，阳性率为39.2%,HBsAg,HBcAb阳性标本55例。其中30例HBVDNA阳性，阳性率为54.5%; 三抗体HBsAb,HBeAb,HBcAb阳性标本40例，其中5例HBVDNA阳性，阳性率为12.5%。结论：PCR方法更灵敏。只有检测HBVDNA才能确证HBV的真实感染和得制情况。     

丙型肝炎病毒核心抗原在HBV/HCV合并感染者血清中的检测状况及影响因素分析

 【目的】 探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)在乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)合并感染者血清中的检出状况,并分析其影响因素。【方法】检测88例慢性丙型肝炎和62例HBV/HCV合并感染患者血清HCVcAg和HCV RNA,对后者血清进行HBV DNA、HBeAg检测,分析HCVcAg检出率与HBeAg、HBV DNA定量检测关系。【结果】 88例慢性丙型肝炎和62例HBV/HCV合并感染者血清HCVcAg的检出率分别是72.7%(64/88)和38.7%(24/62),χ²= 17.358,P < 0.001,HCV RNA检出率分别是81.8%(72/88)和53.2%(33/62),χ² = 20.11,P < 0.001;62例HBV/HCV合并感染者血清中,HBeAg阳性和HBeAg阴性感染者HCVcAg检出率分别为28.6%(12/42)和60%(12/20),χ² = 5.641,P = 0.011,HCV RNA阳性率分别为42.9%(18/42)和80%(16/20), χ²= 15.452,P < 0.001;HBV DNA阳性和阴性时HCVcAg检出率分别为39.1%(18/46)和37.5%(6/16),?字2 = 0.013,P=0.908;与单纯HCV感染者血清HCVcAg检出率72.7%(64/88),相比较HBeAg阴性合并感染者为60%(12/20),χ²= 1.266,P = 0.261,HBV DNA阴性合并感染者37.5%(6/16),χ²=7.635,P < 0.01。【结论】 HBV/HCV合并感染时HCVcAg检出率较低,可能是由于HBeAg抑制HCV的复制,从而减少HCVcAg的表达所致。     

Detection of hepatitis B viral DNA in liver with polymerase chain reaction

The sensitivity of PCR was determined for detection of HBV DNA in paraffin-embed-ded liver tissue with different methods for sample preparation.Of 8 cases of HBeAg-positiveHBV infection,HBV DNA was detected in 6 by extracting DNA from both frozen and dewaxedsamples,but in none by direct reaction.Of 12 cases subjected to Southern blot hybridization,HBV DNA was detected in 7 by this technique,in 10 by PCR with both methods of DNA extrac-tion and in 3 by direct PCR.The results showed that PCR was sensitive and was comparablewith blot hybridization in detecting intrahepatic HBV DNA.In comparison between differentmethods of sample preparation,the viral detection rate from the dewaxed samples was near thatfrom the frozen ones,while by the direct reaction HBV DNA could be detected only in a fewsamples with high level of infection.     

哺乳期女性乙型肝炎病毒携带者对婴儿的潜在传染性

目的探讨女性乙型肝炎病毒(HBV)携带者对婴儿的传染性,为指导哺乳提供辅助参考。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测80例女性HBV携带者、76名健康体检哺乳期妇女及其婴儿外周血中HBsAg和HBV DNA,携带者均排除产前感染;采用荧光定量PCR技术检测母乳中的HBVDNA,分析HBV携带者女性的婴儿和健康体检女性的婴儿HBV感染率的差异。结果在HBV女性携带者的婴儿外周血中HBV DNA阳性率为80.0%(64/80),HBsAg阳性率为78.8%(63/80);健康体检者女性的婴儿外周血中HBV DNA阳性率为2.6%(2/76),HBsAg未见阳性。结论哺乳期女性HBV携带者对婴儿可能具有传染性。     

HBx基因缺失突变对HBV复制和转录的影响

目的构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,研究HBx缺失对HBV复制和转录的影响。方法以包含HBV全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0为模板,用定点突变技术构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,并酶切和DNA测序鉴定。用SapⅠ单酶切这两种质粒,获得线性的野生型和HBx缺失突变型HBV基因组,经转染试剂PolyJetTMReagent介导分别瞬时转染到HepG2细胞中。在转染后各时间点Western blot检测HBx蛋白的表达,Southern blot和Real-time PCR同时检测细胞质DNA复制和细胞核cccDNA的合成,Real-time PCR分析定量HBV前基因组RNA(pgRNA)的转录。结果在野生组中可检测到HBx蛋白的表达,而在HBx突变组中HBx蛋白的表达低于Western blot的检测范围。两组中各时间点合成的cccDNA水平无统计学差异(P>0.05)。而在转染后96 hHBx突变组中细胞质DNA的复制和pgRNA的转录都分别比野生组减少50%～70%(P<0.05)。结论 HBx缺失虽然不影响细胞核HBV cccDNA的合成,但是它能下调细胞质HBV DNA的复制和pgRNA的转录。