慢性丙型肝炎患者DNT细胞及T细胞亚群的研究

目的探讨外周血中CD3+CD4-CD8-(double negative T,DNT)细胞及T淋巴细胞亚群在慢性丙型肝炎(chronichepatitis C,CHC)患者中的表达及意义。方法利用流式细胞仪对92例CHC患者、93例正常健康人外周血中的DNT细胞及T细胞亚群进行检测,并对比分析两者的差异。结果 CHC患者DNT细胞百分比(8.57%±6.16%)高于正常对照组(6.78%±4.50%)(P<0.05),其绝对数在两者间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CHC患者CD4+%,CD4+/CD8+比值低于正常对照组(P值均<0.001),CD8+%高于正常对照组(P<0.001)。结论 CHC患者DNT细胞百分比显著升高及T淋巴细胞亚群比例改变,可能是丙型肝炎病毒感染慢性化的重要原因之一。     

单独感染HCV与HCV/HIV共感染患者外周血T淋巴细胞分化分析

目的 探讨单独感染HCV与HCV/HIV共感染患者外周血T淋巴细胞分化情况.方法 采集单独感染HCV患者(12例)、HCV/HIV共感染患者(27例)以及正常人群(13例)的外周静脉血,检测ALT、AST等生化指标;提取外周血单个核细胞(PBMC),通过流式细胞检测技术检测CD4+T和CD8+T细胞比例.结果 HCV/HIV共感染患者ALT水平[(53.08±9.78) U/L]显著高于单独感染HCV患者[(26.22±4.25)U/L],差异有统计学意义(P=0.0064).处于中期分化状态的CD4+T细胞,在正常人群中所占比例为(35.13±3.24)％,显著高于单独感染HCV患者[(9.01±3.70)％]和HCV/HIV共感染患者[(8.10±2.14)％],差异有统计学意义(P＜ 0.001).正常人群、单独感染HCV患者与HCV/HIV共感染患者晚期分化的CD4+T细胞所占比例分别为(2.52±2.54)％、(14.30±9.85)％及(15.23±11.58)％,正常人群晚期分化的CD4+T细胞比例显著高于单感染HCV与HCV/HIV共感染患者的比例,差异有统计学意义(P＜0.05),单独感染HCV与HCV/HIV共感染患者之间无差异.正常人群处于早期分化和中期分化的CD8+T细胞的比例分别为(42.73±2.08)％、(36.17±2.85)％,均显著高于单独感染HCV患者同期水平[(28.27±4.36)％、(13.15±4.23)％]及HCV/HIV共感染患者[(18.02±2.01)％、(16.60±3.06)％],差异均有统计学意义(P＜0.05);单独感染HCV患者的早期分化CD8+T细胞比例也显著高于HCV/HIV共感染患者,差异有统计学意义(P＜0.05).而处于晚期分化的CD8+T细胞,正常人群所占比例为(12.02±1.54)％,显著低于单独感染HCV患者[(49.30±3.85)％]及HCV/HIV共感染患者[(54.23±2.58)％],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 单独感染HCV及HCV/HIV共感染影响T淋巴细胞的分化状态;HCV/HIV共感染影响处于早期分化的CD8+T细胞比例.     

丙型肝炎病毒核心抗原的检测及其临床意义

目的 探讨HCV 核心抗原在HCV 感染诊断和治疗中的作用.方法 丙肝核心总抗原检测采用酶联免疫法;丙型肝炎抗体检测采用第三代酶联免疫法.所有血清标本均进行HCV-RNA 和肝功能检测.丙肝核酸定量采用PCR- 荧光探针法;肝功能检测采用紫外连读检测法.结果 90 例中,HCV-cAg 检测阳性率为42.22%(38/90).HCV-cAg 阳性组HCV-RNA 阳性率100%(38/38),显著高于HCV-cAg 阴性组的71.15%(37/52).阳性组丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)异常率63.16%(24/38),显著高于HCV-cAg 阴性组的40.38%(21/52),两组间比较(P<0.05).HCV-cAg 阴性组中59.62% (31/52)的患者ALT 在正常范围内(ALT<40U/L),显著高于HCV-cAg 阳性组的36.84%(14/38) ;而HCV-cAg 阳性组中36.84%(14/38)ALT 值均>100U/L,明显高于HCV-cAg 阴性组的9.62%(5/52).两组间比较(P<0.05).丙肝核心抗原HCV-cAg 和HCVRNA有很好的正相关性,HCV-cAg 与ALT 水平也有一定相关性,可以反映肝功损害程度.结论 丙肝核心抗原HCV-cAg是慢性丙肝感染良好的监测指标.     

健康汉族人外周血CD4~＋CD8~＋双阳性和CD4~-CD8~-双阴性T淋巴细胞的分布

目的：观察健康汉族人外周血中CD4＋CD8＋双阳性（double positive,DP）T细胞和CD4-CD8-双阴性（double negative,DN）T细胞的分布频率。方法：利用三色流式细胞术分析36例健康成人（〈65岁）、34例健康老年人（≥65岁）和22例免疫抑制者外周血DP T细胞和DN T细胞的分布。结果：老年组外周血DP T细胞比例1.93%±1.52%显著高于免疫抑制组1.23%±0.81%（P=0.05）;但与成人组1.54%±1.24%相比,老年组外周血DP T细胞比例虽然有增高的趋势但未见显著差异。老年组、成人组和免疫抑制组外周血DP T细胞绝对计数分别为（0.028±0.022）×109细胞/L、（0.024±0.017）×109细胞/L和（0.021±0.019）×109细胞/L,三组间差异无显著性。成人组外周血DN T细胞比例为8.81%±5.56%,明显高于老年组的5.52%±3.49%和免疫抑制组的3.72%±1.21%（P值分别为0.012和0.000）;老年组DNT细胞比例也高于免疫抑制组（P=0.025）。老年组、成人组和免疫抑制组外周血DN T细胞绝对计数分别为（0.083±0.069）×109细胞/L、（0.150±0.111）×109细胞/L和（0.057±0.027）×109细胞/L,成人组外周血DN T细胞的绝对数明显高于老年组（P=0.011）及免疫抑制组（P=0.000）,而免疫抑制组与老年人比较则未见显著差异（P=0.155）。成人组外周血更常出现CD3分子表达增高（CD3high）的T细胞。与CD3分子表达正常（CD3norm）的T细胞相比,CD3highT细胞群体中包含大量DN T细胞。结论：年龄≥65岁的健康汉族老年人外周血DP T细胞未见明显增多,但外周血DN T细胞随着年龄增高而明显减低。     

丙型肝炎病毒感染外周血单个核细胞对丙型肝炎的影响

为了研究丙型肝炎病毒(HCV)感染外周血单个核细胞(PBMC)对丙型肝炎的影响,运用非同位素原位杂交法(NISH)和链酶亲和素-生物素(SABC)法分别检测20例慢性丙型肝炎患者PBMC中的HCV-RNA及其T淋巴细胞亚群,同时检测这些患者的肝功能指标。结果显示8例(40．0％)HCV患者的PBMC中的HCV-RNA呈阳性结果。HCV-RNA呈散在颗粒状或弥漫分布,主要位于胞浆中。HCV-RNA阳性组和阴性组的CD+4T细胞比例低于正常对照组,CD+8T细胞比例高于正常对照组,CD+4／CD+8比值下降;而HCV-RNA阳性组的CD+4T细胞比例则又低于阴性组,CD+8T细胞比例高于阴性组,CD+4／CD+8比值出现倒置(P<0．01)。两组的肝功能检查结果之间无显著差异(P>0．05)。提示HCV感染PBMC后引起T淋巴细胞亚群发生变化,使CD+4和CD+8T细胞功能下降或不能很好地协调作用,从而成为HCV持续感染的重要原因之一。HCV感染PBMC对肝脏炎症程度的影响可能不大。     

肝癌患者DNT细胞和T细胞亚群检测的临床意义

目的 探讨肝癌患者外周血中DNT细胞和T淋巴细胞亚群的变化及临床意义.方法 利用流式细胞仪对43例肝癌、36例健康人外周血中的DNT细胞及T细胞亚群进行检测及统计学检验.结果 肝癌患者DNT细胞百分比(9.1±5.5)％高于正常对照组(4.8±.1.4)％,差异有统计学意义(P＜0.05);肝癌组Th细胞、CD4+/CD8+比值低于对照组,Tc细胞高于对照组,差异有统计学意义(均P＜ 0.01).结论 肝癌患者DNT细胞百分比升高及T淋巴细胞亚群比例改变,提示肝癌患者免疫功能异常,为肝癌发病机制研究及免疫治疗提供理论依据.     

金龙胶囊对艾滋病病毒感染者的治疗作用 (附20例报告)

目的探讨金龙胶囊对艾滋病病毒感染者的免疫增强作用.方法对20例艾滋病病毒感染者予金龙胶囊,分为小剂量组(15例,每日9个胶囊)和大剂量组(5例,每日12个胶囊),连续服用3个月,治疗前后测定患者的病毒载量和CD4淋巴细胞计数.结果治疗后,病毒载量除3例减少＞0.5 log,8例上升＞0.5 log以外,其余均＜±0.5 log,无明显变化;CD4细胞计数:治疗后80%小剂量组的CD4细胞计数自(0.1864±0.1109)×109/L升至(0.3007±0.1646)×109/L,平均升高(0.1143±0.1547)×10/9L;大剂量组自(0.2572±0.1276)×109/L降为(0.2424±0.1613)×109/L,平均下降(0.1480±0.1204)×109/L.结论金龙胶囊可增强艾滋病病毒感染者的免疫功能,但无明显的抑制艾滋病病毒作用.     

HCV/HIV合并感染者肝功能和机体免疫功能的研究

目的研究HCV/HIV合并感染者的肝功能变化、机体免疫等情况,探讨其合并感染及单独感染的机制。方法用生化分析仪测定肝功能,流式细胞术测定CD4~+和CD8~+T细胞,实时荧光定量PCR检测HCV-RNA,ELISA检测HCV抗体。结果 HCV/HIV合并感染者的ALT、AST与HCV感染患者相比明显更高;HCV/HIV合并感染患者的CD4~+、CD8~+T细胞比例明显低于HCV感染者的比例;HCV/HIV合并感染患者的HCV-RNA载量比单独感染者的高;36.7%的HCV/HIV合并感染者出现抗HCV阴性,13.3%单独感染HCV者出现阴性结果,差异均有统计学意义(P0.05);而两组患者的ALB、TBIL及血清球蛋白相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论 HCV/HIV合并感染的病毒载量增多,抗体阴性率升高,CD4~+、CD8~+T细胞比例降低,免疫抑制加重,免疫功能更加低下,肝脏的损伤严重,肝病的发展进程也更快。     

老年人巨幼细胞性贫血的特点

[目的]探讨60岁以上老年人巨幼细胞性贫血的特点.[方法]回顾性分析54例老年组巨幼细胞性贫血的临床资料,与同期48例非老年组巨幼细胞性贫血患者作比较.[结果]老年组巨幼细胞性贫血,血红蛋白、白细胞、血小板计数均较非老年组低,前者分别为(54.5±13.5)g/L,(2.2±0.9)×109/L、(45.5±25.6)×109/L,后者为(71 ±17.5)g/L、(2.9±1.0)×109/L、(57.1±28.6)×109/L,(P＜0.05).全血细胞减少前者较后者明显,分别为53.7%与27%.叶酸和维生素B12治疗后,老年组血红蛋白恢复正常的中位时间亦较非老年组长,分别为29日与21日(P＜0.05).老年组巨幼细胞性贫血误诊为心脑血管疾病11例(误诊率占20%),非老年组1例(误诊率占2%).[结论]老年人巨幼细胞性贫血,三系细胞减少较明显,全血细胞减少发生率高,贫血恢复较慢,病情较重,易误诊为心脑血管疾病.     

丙型肝炎病毒慢性感染与IL-8、IP-10、Mig表达相关性研究

目的探讨HCV慢性感染与CXC趋化因子mRNA表达水平的相互关系.方法以Real-time PCR法动态检测慢性丙肝患者IFN-α联合利巴韦林治疗前、治疗3、6个月后IL-8、IP-10、Mig mRNA的表达水平.以趋化因子与GAPDH比值为趋化因子的最终相对表达量.结果慢性丙肝患者HCV-RNA平均水平2.09×106 拷贝/ml,IL-8、IP-10、Mig mRNA表达水平分别为(1.243 7±0.071 2)、(0.682 8±0.073 8)、(0.668 3±0.075 4),与正常对照相比,差异有显著性(P<0.01).IFN-α治疗3个月后HCV-RNA平均水平6.70×103 拷贝/ml,IL-8、IP-10、Mig mRNA表达水平分别为(1.089 1±0.094 6)、(0.551 2±0.090 2)、(0.560 2±0.096 0),与治疗前相比,差异有显著性(P<0.001).IFN-α治疗6个月后HCV-RNA平均水平3.86×102 拷贝/ml,IL-8、IP-10、Mig mRNA表达水平分别为(1.012 2±0.058 6)、(0.439 5±0.091 3)、(0.420 5±0.084 4),与治疗前相比,差异有显著性(P<0.01).HCV 1b和HCV 2a型患者各趋化因子表达水平相似,差异无显著性(P>0.05).结论慢性丙肝患者PBMC内IL-8、IP-10、Mig mRNA表达升高,其表达水平与体内HCV-RNA复制水平有关,但与HCV基因型无关.IFN-α能显著抑制HCV复制,间接下调IL-8、IP-10、Mig mRNA表达水平.IFN-α这种综合作用效果,对降低患者体内炎性反应,控制病情发展十分有利.     

Toll样受体mRNA在人肾癌细胞786-0和正常肾细胞HK-2中的表达及意义

目的 探讨Toll样受体(TLR)在肾癌发生、发展中的作用和意义.方法 培养人肾癌细胞786-0(786-0实验组)和正常肾细胞HK-2(HK-2对照组).实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测TLR1～TLR10 mRNA在786-0实验组及HK-2对照组细胞中的表达规律.结果 786-0实验组和HK-2对照组细胞均表达TLR1～TLR6、TLR8～TLR10,而不表达TLR7.TLR1、TLR2、TLR4～TLR6、TLR8、TLR10在786-0实验组表达均高于HK-2对照组细胞[(4.40±0.19)×10-2、(1.77±0.24)×10-2、(5.03±0.62)×10-2、(3.93±0.86)×10-2、(6.11±0.48)×10-2、(1.89±0.47)×10-2、(2.84±0.57)×10-2比(0.84±0.27)×10-2、(0.40±0.04)×10-2、(0.95±0.73)×10-2、(0.56±0.25)×10-2、(0.49±0.16)×10-2、(0.20±0.07)×10-2、(0.27±0.08)×10-2,P＜0.01],而TLR3、TLR9在786-0实验组与HK-2对照组细胞的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TLR在人肾癌细胞和正常肾细胞细胞中的表达有差异,TLR1、TLR2、TLR4～TLR6、TLR8、TLR10在人肾癌的发生、发展中可能发挥一定的作用.

Abstract：

Objective To investigate the expression of toll-like receptors (TLR1-TLR10) in human renal carcinoma cell 786-0 and normal renal cell HK-2 and discuss the significance of TLRs in the development of renal carcinoma. Methods Human renal carcinoma cell 786-0 ( experimental group) and normal renal cell HK-2 (control group) were cultured. The expression of TLR1-TLR10 was detected by realtime fluorogenic quantitative PCR (FQ-PCR). Results The FQ-PCR analysis demonstrated that 786-0 cell line and HK-2 cell line expressed TLR1-TLR6 and TLR8-TLR10 mRNA. Yet neither had an expression of TLR7. Moreover, the expression levels of TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR6, TLR8 and TLR10 in the experimental group were significantly higher than those in HK-2 cell line [(4.40 ±0.19) × 10-2, ( 1.77 ±0.24) × 10-2,(5.03 ±0.62) × 10-2,(3.93 ±0.86) × 10-2, (6.11 ±0.48) × 10-2,(1.89 ±0.47) ×10-2,(2.84±0.57) × 10-2 vs (0.84 ±0.27) × 10-2,(0.40 ±0.04) × 10-2,(0.95 ±0.73) × 10-2,(0.56±0.25) ×10-2,(0.49 ±0.16) × 10-2,(0.20 ±0.07) × 10-2,(0.27 ±0.08) × 10-2,P＜0.01].There was no significant change in the expressions of TLR3 and TLR9 between 786-0 and HK-2 cell line (P ＞0. 05). Conclusion The expressions of TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR6, TLR8 and TLR10 are significantly higher in 786-0 cell line than those in HK-2 cell line. They may play key roles in the development of renal carcinoma.     

三藤复方对骨性关节炎大鼠细胞因子的影响

目的:研究三藤复方对骨性关节炎大鼠血常规水平及血清中白介素1β(interleukin-1,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)、环氧化酶(cyclooxygenase,COX2)表达的影响。方法:制备体积分数4%木瓜蛋白酶溶液与0.3 mol·L-1半胱氨酸溶液(1∶1)的混合液,分别于第1天、第3天、第7天注入SD大鼠右膝关节造模,每次20μL。将造模成功后的大鼠随机分为以下5组:模型组,雷公藤组,三藤复方高剂量组、中剂量组、低剂量组,另取10只为正常组。对应药物灌胃4周后,检测血常规及血清细胞因子水平。结果:模型组白细胞、粒细胞、淋巴细胞、IL-1β、TNF-α、COX2分别为(15.32±0.67)×109L-1、(6.56±0.45)×109L-1、(7.54±0.52)×109L-1、(70.29±2.86)ng·L-1、(1.22±0.12)μg·L-1、(156.84±3.51)U·L-1,三藤复方高剂量组、中剂量组、低剂量组白细胞分别为(9.12±0.32)×109L-1、(9.72±0.26×)109L-1、(10.34±0.31)×109L-1,中性粒细胞数分别为(2.47±0.38)×109L-1、(3.45±0.37)×109L-1、(5.00±0.49)×109L-1,淋巴细胞分别为(5.45±0.27)×109L-1、(5.94±0.36)×109L-1、(6.12±0.27)×109L-1,IL-1β分别为(48.78±2.73)ng·L-1、(57.42±3.24)ng·L-1、(60.64±2.98)ng·L-1,TNF-α分别为(0.86±0.01)μg·L-1、(0.91±0.02)μg·L-1、(0.92±0.03)μg·L-1,COX2分别为(132.21±3.80)U·L-1、(136.33±3.80)U·L-1、(142.72±3.56)U·L-1。三藤复方各组白细胞、粒细胞、淋巴细胞、IL-1β、TNF-α、COX2均显著低于模型组(P0.05)。结论:三藤复方的抗炎镇痛机制之一可能与通过降低白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数,抑制血清IL-1β、TNF-α、COX2表达有关。     

CD8+CD28-T细胞在哮喘小鼠发病机制中的作用及地塞米松对其的影响

目的 探讨CD8+CD28-T细胞在哮喘发病机制中的作用及地塞米松对该细胞的影响.方法 30只BALB/c小鼠随机分为哮喘组、地塞米松组、正常对照组,各10只.哮喘组和地塞米松组给予卵白蛋白致敏后雾化吸入卵白蛋白溶液,地塞米松组每次雾化吸入前腹腔注射地塞米松1 mg/kg,各组分别于末次雾化激发后测定小鼠的气道反应性;对支气管肺泡灌洗液(BALF)行细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数;取肺组织作HE染色病理切片;测BALF中IgE含量;流式细胞仪检测小鼠血、BALF中CD8+CD28-T细胞占淋巴细胞百分比;分析BALF中IgE、EOS计数与血液中CD8+CD28-T细胞百分比的相关性.结果 哮喘组、地塞米松组气道反应性明显高于正常对照组.哮喘组BALF中细胞总数和EOS计数分别为(5.56±4.06)× 102/L和(3.29±2.23)× 102/L,均明显高于地塞米松组[(2.59±1.69)× 102/L,P=0.044和(1.11±0.73)×102/L,P=0.008]及正常对照组[(0.91±0.65)×102/L,P=0.003和(0.43±0.37)× 102/L,P=0.001)];而后两组之间差异均无统计学意义(均P>0.05).哮喘组、地塞米松组、正常对照组BALF中IgE含量分别为(23.85±5.97)g/L、(13.15±2.22)g/L、(6.54±1.03)g/L,三组间差异有统计学意义(F=38.558,P=0.000).哮喘组、地塞米松组、正常对照组CD8+CD28-T细胞百分比在外周血中分别为(18.68±4.12)%、(13.43±2.90)%、(8.43±4.60)%;在BALF中分别为(1.25±0.40)%、(0.66±0.49)%、(0.21±0.19)%,组间差异均有统计学意义(F=11.837,P=0.001;F=12.885,P=0.000).哮喘组BALF中IgE含量和EOS计数与外周血中CD8+CLY28-T细胞百分比均呈正相关(r=0.864,P=0.012和r=0.804,P=0.029).结论 CD8+CD28-T细胞数量与哮喘小鼠气道炎症有明显相关性,地塞米松可有效抑制哮喘气道炎症并可能抑制了CD8+CD28-T细胞的表达和功能.

Abstract：

Objective To explore whether or not CD8+ CD28- T cell play a pathogenic role in asthma and detect the effects of dexamethasone ( DXM ). Methods A total of 30 mice were randomly divided into 3 groups: asthmatic group, DXM group and control group ( n = 10 each). The asthmatic and DXM groups were sensitized twice and inhaled ovalbumin. The DXM Group received an intraperitoneal injection of DXM lmg/kg before inhaling ovalbumin. After successful modeling, 3 mice were selected randomly from each group to measure the airway responsiveness. Also a bronchoalveolar lavage cytological study was performed and lung tissue sections were prepared for histopathologic examination to evaluate the airway inflammation. The content of IgE in bronchoaleolar lavage fluid ( BALF) was detected with a murine IgE ELISA kit. And the fractions of CD8 + CD28- T cell of peripheral blood and BALF were tested by flow cytometry to analyze the correlation between IgE, eosinophils ( EOS) of BALF and CD8 + CD28 - T cell of blood. Results The airway hyperresponsiveness in asthmatic and DXM groups were significantly higher than that in the control group. The number of total cells and EOS of BALF in the asthmatic group [ ( 5. 56 ±4. 06) × 102/L; (3. 29 ±2. 23) × 102/L] were significantly higher than that in control group [ (0. 91 ±0.65)×102/L, P = 0.003; (0.43 ±0.37) × 102/L, P = 0.001] and DXM group [(2.59 ±1.69) ×102/L, P =0.044; (1. 11 ±0.73) ×l02/L, P = 0.008]; while the DXM group was insignificantly higher than the control group (P=0. 234, P=0. 363). There were significant differences in the contents of IgE of BALF for the asthmatic, DXM and control groups [ (23. 85 ±5. 97) g/L, (13. 15 ±2.22) g/L, (6.54±1. 03) g/L, F = 38. 558, P = 0. 000 ] . The percentages of CD8 + CD28- T cell in peripheral blood in asthmatic and DXM groups [ (18. 68 ±4. 12)% and ( 13.43 ± 2. 91) % ] were significantly higher than those in control mice [ (8. 43 ± 4. 60) % , both P < 0. 05 ]. The percentages of CD8 + CD28 - T cell of BALF in asthmatic group and DXM group [(1.25±0. 40)% and (0. 66 ± 0. 49) % ] were also significantly higher than those in control mice [ (0. 21 ± 0. 19) % , both P < 0. 05 ]. The percentages of CD8 + CD28 - T cell of blood and BALF in the DXM mice were significantly lower than those in asthmatic group. The correlations between IgE ( r = 0. 864, P = 0. 012), EOS ( r = 0. 804, P = 0.029) and CD8 + CD28- T cell were significant. Conclusion The fraction of CD8 + CD28- T cell is closely correlated with the inflammation of asthmatic airway. The airway hyperresponsiveness and inflammation in asthmatic mice may be relieved by DXM through its effect of inhibiting the expression of CD8 + CD28- T cell.     

原发性肝癌患者外周血自然杀伤细胞受体NKG2D的表达及意义

目的 探讨原发性肝癌患者外周血自然杀伤(NK)细胞受体NKG2D表达的变化,并分析其对NK细胞杀伤活性的影响.方法 用流式细胞仪分析20例原发性肝癌、23例乙型肝炎后肝硬化、20例慢性乙型肝炎及20名健康者的外周血NK细胞数量及其NKG2D的表达情况,并用酶标仪检测各组样本NK细胞的细胞毒活性.结果 原发性肝癌患者的NK细胞杀伤率、NK细胞NKG2D的表达率(中位数)、NKG2D+NK细胞数(中位数)、NK细胞中NKG2D的表达水平(中位数)及NK细胞数[(25±7)%、6%、0.7×107/L、15、(1.1±0.6)×108/L]均明显低于正常组[(63±7)%、36%、8.3×107/L、116、(27±1.1)×108/L]和乙肝组[(41±8)%、16%、2.8×107/L,49、(1.9±1.1)×108/L],差异均有统计学意义(均P＜0.05);与肝硬化组[(29±10)%、7%、0.6×107/L、29、(1.5±1.2)×108/L]比较也略低,但只有NK细胞NKG2D的表达水平两组差异有统计学意义(P＜0.05),其余两组间差异均无统计学意义(均P＞0.05).NK细胞的活性与NK细胞数、NK细胞NKG2D的表达率、NKG2D+NK细胞数、NK细胞NKG2D的表达水平均呈正相关关系(r=0.657、0.770、0.927、0.734,均P＜0.01).结论 原发性肝癌患者外周血NK细胞活性及其细胞表面NKG2D的表达明显降低,NKG2D的表达与NK细胞的活性密切相关,提高NK细胞表面NKG2D的表达水平可为原发性肝癌的过继免疫治疗开创新的思路.     

Study of vascular smooth muscle cell calcification induced by hyperphosphate and intervented by phosphonoformic acid

Objective:To evaluate the effects of different concentrations of phosphate on calcium deposition and osteocalcin level in cultured bovine aortic smooth muscle cell,investigate the mechanism of hyperphosphatemia to evoke calcification of vascular smooth muscle cell and observe the effects of phosphonoformic acid(PFA)in different concentrations on vascular calcification.Methods:The bovine aortic smooth muscle cells(BASMC)were cultured.Calcium deposition and the expression of osteocalcin of BASMC in different concentrations of phosphate(1.5mmol/Land2.0mmol/L)and PFA were determined by o-cresolphthalein complexone and radioimmunity methods,respectively.Osteocalcin mRNA expressions were determined by RT-PCR.Results:After six or nine days of BASMC cultured,the calcium deposition in Pi 2.0 mmol/L group was more than that in Pi 1.5 mmol/L group[(77.187±11.692)μg/(mg·protein)vs(25.768±1.750)μg/(mg·protein),P＜0.01 and(125.399±16.677)μg/(mg·protein)vs(29.046±2.635)μg/(mg·protein),P＜0.01 respectively].The calcium deposition was dependent on time and dosage of phosphate treatment.After 72 h culture the osteocalcin in Pi2.0 mmol/L group was more than that in Pi1.5 mmol/L group[in supernatant,(1.503±10-2±2.601×10-3)ng/(μg·protein)vs(2.981×10-3±8.382×10-4)ng/(μg·protein),P＜0.001],the same was found in osteocalcin mRNA expression[OC/GAPDH,(1.906±0.132)vs(0.748±0.037),P＜0.001].Compared to Pi 1.5mmol/L group,bovine smooth muscle cells(BSMC)cultured in media containing Pi 2.0 mmol/L phosphate levels increased calcium deposition[On day 6,(77.187±11.692)μg/(mg·protein)vs (25.768±1.750)μg/(mg·protein),P＜0.001].Elevated phosphate treamaent of BSMCs also enhanced the expression of the osteoblastic differentiation marker osteocalcin[On day 3,Pi 2.0 mmol/L group vs Pi 1.5mmol/L group,(1.503×10-2±2.601×10-3)ng/(μg·protein)vs(2.981×10-3±8.382×10-4)ng/(ug·protein),P＜0.001].PFA decreased ciacium deposition and osteocalcin expression statistically[Pi 2.0 mmol/L PFA1.0 mmol/L group vs Pi 2.0 mmol/L group,ciacium deposition,(37.729±5.899)μg/(mg·protein)vs(77.187±11.692)μg/(mg·protein),P＜0.001];Osteocalcin in supernatant,(4.529±10-3±1.250×10-3)ng/(μg·protein)vs(1.503×10-2±2.601×10-3)ng/(μg·protein),P＜0.001;osteocalcin mRNA expression,OC/GAPDH,(0.642±0.092)vs(1.89±0.165),P＜0.01].Conclusion:Hyperphosphate may directly promote calcium deposition and the osteocalcin expression of BASMCs.It may be a new explanation for the phenomenon of vascular calcification in hyperphosphatemic conditions.Hyperphosphatemia is an independent factor to stimulate vascular calcification.PFA can inhibit calcium deposition and osteocalcin expression induced by elevated phosphate.PFA may be a new medicine to treat vascular calcification induced by elevated phosphate.     

丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床应用探讨

[目的]探讨HCV核心抗原在HCV感染诊断和治疗中的作用。[方法]对173例HCV感染患者血清和82例健康对照者血清,使用ELISA法分别检测抗-HCV、总的HCV核心抗原,使用荧光定量RT-PCR检测HCV RNA。[结果]173例HCV感染者抗-HCV均为阳性。HCV RNA阳性率为49.7%(86/173);HCV核心抗原阳性率为36.4%(63/173)。二者差异有统计学意义(P<0.05)。86例HCV RNA阳性标本中,HCV核心抗原阳性60例(69.8%);HCV核心抗原阴性26例(30.2%)。82例健康对照者抗-HCV、HCV核心抗原、HCV RNA均为阴性。[结论]在没有HCV RNA检测资格的实验室,HCV核心抗原检测可作为病毒存在和复制的一个指标,作为抗-HCV检测的补充试验。     

树突状细胞免疫功能与慢性丙型肝炎病毒感染相关分析

目的:探讨树突状细胞(DC)与慢性丙型肝炎患者体内病毒持续感染的关系。方法:密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),贴壁培养2 h,吸去悬浮细胞,联合应用GM-CSF、IL-4刺激正常人及HC患者外周血DCD的增殖及成熟。观察DC外部形态;流式细胞仪检测各组的DC数量(CMRF-44标记法)及DC表面CD86、CD80、HLA-DR的表达水平;ELISA法检测培养7 d的DC上清中IL-12和IFN-的水平。结果:实验组DC细胞数为(7.5±3.3)×106/L,明显低于对照组的(14.9±5.1)×106/L(P<0.01)。实验组DC表面CD86、CD80和HLA-DR表达的阳性率分别为(52.16±13.12)%(、37.26±11.31)%、(29.76±13.34)%,对照组分别为(83.21±15.22)%(、47.93±12.19)%(、38.26±10.58)%,两者相差明显(P<0.05)。培养上清中IL-12平均值为(398±105)ng/L,干扰素γ平均值为(7912±832)ng/L,分别低于对照组(813±216)ng/L和(13407±1532)ng/L(P<0.05)。结论:DC的免疫功能低下与慢性丙型肝炎患者HCV感染的持续化有关。     

抗菌药在急性上呼吸道感染患者中的应用效果观察

目的观察抗菌药在急性上呼吸道感染患者中的应用效果。方法将海安县人民医院2010年10月至2011年12月收治的急性上呼吸道感染患者104例遵照知情同意原则按照数字表法随机取样分为两组,均给予抗病毒治疗,全程应用抗菌药物组（全程抗菌组）50例,延后应用抗菌药物组（延后抗菌组）54例,对两组的用药效果进行比较分析。结果延后抗菌组总有效率为96.3%,全程抗菌组为92.0%,组间差异无统计学意义（P〉0.05）;延后抗菌组的病程为（4.3±0.6）d,显著短于全程抗菌组的（5.5±0.7）d（t=9.179,P=0.001）;延后抗菌组复诊率为7.4%,显著低于全程抗菌组的22.0%（χ2=4.479,P〈0.05）;延后抗菌组不良反应发生率为11.1%,全程抗菌组为26.0%,组间的差异有统计学意义（P〈0.05）;治疗后3 d和1周延后抗菌组患者的白细胞计数（9.4±0.7）×109/L和（6.6±0.5）×109/L、粒细胞（0.73±0.06）和（0.61±0.06）、C反应蛋白（19.1±1.8）mg/L和（7.2±0.6）mg/L比较全程抗菌组的白细胞计数（7.1±0.6）×109/L和（6.8±0.5）×109/L、粒细胞（0.60±0.06）和（0.60±0.06）、C反应蛋白（12.1±1.2）mg/L和（7.7±0.6）mg/L的改变更为明显,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论抗菌药物在急性上呼吸道感染患者中的应用效果满意,延后应用抗菌药物能够明显缩短病程,并且安全性更好,是临床首选的治疗方案。     

连续应用重组人血小板生成素联合泼尼松治疗初治免疫性血小板减少症的临床研究

目的评价连续应用重组人血小板生成素(rh TPO)联合泼尼松治疗成人初治免疫性血小板减少症(ITP)的疗效及安全性。方法 119例初治ITP患者,男53例,女66例,随机分为试验组(59例)和对照组(60例)。对照组仅使用泼尼松治疗,泼尼松用法为起始剂量1 mg/kg/d。试验组在应用泼尼松基础上联合应用rhTPO 1.5万U/d×14 d;继之1.5万U,biw,用至90 d。比较两组患者的血小板水平、有效率及药物的不良反应。结果在第8、15,22、30、180 d,试验组血小板水平均高于对照组,检测结果分别为105±91×10~9/L对67±68×10~9/L(P=0.011);164±112×10~9/L对93±68×10~9/L(P=0.000);161±83×10~9/L对115±74×10~9/L(P=0.002);145±64×10~9/L对115±64×10~9/L(P=0.012)和124±54×10~9/L对101±66×10~9/L(P=0.040),差异有统计学意义。基线及第90 d,两组血小板水平的差异无统计学意义(P0.05)。试验组泼尼松使用剂量少于对照组且第15、22、30、90 d,试验组的空腹血糖水平低于对照组,两组的差异有统计学意义(P0.05)。结论连续应用rhTPO联合泼尼松治疗成人初治重症ITP患者,起效迅速,作用持久,不良反应少,可减少泼尼松的使用剂量。