鸡血藤活性成份对造血祖细胞增殖的调控作用

目的探讨从中药鸡血藤Spatholobus suberectus Dunn中提取的几种单体(SS8、SS9、SS12、SS17)对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响.方法采用血清药理学方法,通过造血祖细胞培养观察几种单体对骨髓抑制小鼠CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-Meg生长的作用.结果中药鸡血藤中各单体的含药血清可刺激骨髓抑制小鼠CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-Meg的生长,与空白血清对照组相比有显著差异(p＜0.05).结论从中药鸡血藤中提取的几种单体对骨髓抑制小鼠造血祖细胞的增殖有刺激活性,可缓解其造血祖细胞内源性增殖缺陷,其中以SS8的活性最强.     

儿茶素对小鼠造血祖细胞的刺激增殖作用

目的:观察儿茶素对小鼠造血祖细胞增殖作用.方法:通过造血祖细胞培养观察儿茶素对小鼠CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-Meg生长的作用.结果:加入儿茶素工作液后,CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Meg集落数均明显升高.至100 nag·L-1时,各系造血祖细胞集落数均增加至最高,与未加儿茶素的实验组相比均有统计学差异(P<0.01).结论:儿茶素可明显促进小鼠造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Meg)的增殖,并可与造血生长因子起协同效应,具有明显的造血促进作用.     

鸡血藤单体化合物对造血祖细胞增殖的调控作用研究

目的研究从中药鸡血藤(spatholobus suberectus dunn,SSD)中提取的9个单体化合物对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响,明确鸡血藤补血活血作用的主要物质基础。方法采用血清药理学方法,通过造血祖细胞培养观察9个化合物对骨髓抑制小鼠CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-Meg生长的作用。结果腹腔注射鸡血藤各单体后的含药血清对骨髓抑制小鼠造血祖细胞的生长有较强的刺激作用:各单体化合物(除焦性粘液酸、芒柄花苷外)含药血清均可刺激CFU-GM的生长(P<0.01);儿茶素、没食子儿茶素、丁香酸、表儿茶素的含药血清对CFU-E、BFU-E和CFU-Meg的刺激增殖作用与对照组比较亦差异有显著性(P<0.05)。结论从中药鸡血藤中提取的单体化合物可刺激骨髓抑制小鼠造血祖细胞的增殖,缓解其造血祖细胞内源性增殖缺陷,其中儿茶素的刺激增殖活性相对最强,可能是鸡血藤补血活血的主要物质基础。     

五加双参片对60Co辐射小鼠外周血细胞和骨髓三系细胞的影响

目的 探讨五加双参片对60Co辐射小鼠外周血细胞和骨髓造血细胞的作用，了解其作用途径。方法 采用6．0GY60Co辐射小鼠造成严重造血功能损伤，尾静脉采血计数外周血细胞及其分类，取一侧股骨骨髓计数骨髓有核细胞，取另一侧骨髓制片，观察计数骨髓粒系分裂池，成熟池，贮存池骨髓细胞绝对值的动态变化。结果 五加双参片对辐射损伤细胞与骨髓造血细胞有一定保护作用，使损伤脾细胞向正常逆转，加速粒细胞增殖与激活作用，促进成熟池粒细胞成熟进人贮存池、从而进人到外周血循环，对淋巴细胞有激活作用。结论 五加双参片对粒细胞和淋巴细胞有促进增殖作用。     

尿毒症患者血清对小鼠红系祖细胞增殖的影响

目的 通过将尿毒症未透析患者血清与小鼠骨髓细胞进行培养,分析尿毒症患者对小鼠骨髓红系爆式形成单位和红系集落形成单位生长的影响,初步探讨红细胞生成抑制因子是否存在.方法 选择12例尿毒症肾性贫血未经透析患者为实验组,其中男5例,女7例,平均年龄(50±12)岁.另选12例正常健康体检者设为对照组.将实验组、对照组血清分别稀释成不同终浓度(0%用等量堵养液代替血清,1.25%、2.5%、5.0%),采用甲基纤维素细胞培养方法与小鼠骨髓细胞进行培养,观察两组不同浓度血清对小鼠骨髓CFU-E、BFU-E集落生长的影响.结果 实验组中,与对照组相比,各浓度血清共同培养的小鼠骨髓红系造血祖细胞CFU-E和BFU-E的集落数均明显减少,且随血清浓度的增加,小鼠骨髓红系造血祖细胞CFU-E和BFU-E的集落数逐渐减少,各浓度组间差异有统计学意义;在相同浓度时,与实验组患者血清共同培养的小鼠骨髓红系造血祖细胞CFU-E和BFU-E的集落数较与正常对照组血清共同培养的CFU-E和BFU-E集落数明显减少,且差异均有统计学意义.结论 尿毒症患者血清中存在红细胞生成抑制因子,其对红系造血祖细胞的抑制作用具有剂量依赖性.     

钝顶螺旋藻藻蓝蛋白对小鼠红系祖细胞生成的影响

采用小鼠胎肝细胞CFU-E测定技术,以及小鼠骨髓细胞体外CFU-E和BFU-E培养技术。观察钝顶螺旋藻藻蓝蛋白对小鼠红系祖细胞生成的影响。贫血小鼠模型建立采用60Coγ-射线辐照并注射盐酸苯肼。正常小鼠皮下注射藻蓝蛋白(C-PC)(5mg.kg-1)5d后,能明显增加CFU-E和BFU-E的集落数。贫血小鼠皮下注射藻蓝蛋白5d后,C-PC能明显增加白细胞、红细胞和血红蛋白的数量。以C-PC代替培养体系中的促红细胞生成素(EPO)或爆式集落刺激因子(BPA)来培养CFU-E和BFU-E,结果表明C-PC具有较高的EPO样活性,12.5ng的C-PC相当于1.06 U的EPO,其比活性约为84,800U.mg-1C-PC。实验还显示C-PC有较弱的BPA活性。     

巨细胞病毒感染对定向干细胞增殖的影响及黄芪的干预作用

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)感染对定向干细胞(CFU-Gm、CFU-E、BFU-E、CFU-Mk及CFU-TL)体外增殖抑制的影响及黄芪的干预作用。方法:采用造血细胞培养技术,培养、观察、计数CMV-AD169感染CFU-Gm、CFU-E、BFU-E、CFU-Mk及CFU-TL后各祖细胞集落及维持时间;用聚合酶链反应(PCR)和荧光定量PCR技术检测集落细胞内CMV-AD169DNA;根据细胞毒性实验结果,将黄芪作用于CMV感染的CFU-Gm、CFU-E、BFU-E、CFU-Mk及CFU-TL祖细胞,再分别计数集落、峰期及维持时间。结果:(1)CMV感染组CFU-Gm、CFU-E、BFU-E、CFU-Mk及CFU-TL集落数较对照组明显减少(P<0.01);集落维持时间CMV感染组较对照组明显缩短;(2)用PCR在感染组集落细胞内检测到HCMV-DNA的存在;(3)黄芪作用于CMV感染的定向干细胞后,与病毒组比较集落数明显提高(P<0.01),集落增殖提高率分别为CFU-GM27.2%;CFU-E45.2%;BFU-E49.1%;CFU-Mk11.9%,CFE-TL55.2%,且集落维持时间明显延长;(4)荧光定量PCR技术检测集落细胞内CMV-DNA复制较CMV感染组明显减少(P<0.01)。结论:CMV-AD169株在体外能明显抑制CFU-Gm、CFU-E、BFU-E、CFU-Mk及CFU-TL集落细胞的增殖;在体外黄芪有明显抗CMV作用,能促进CMV感染的定向干细胞增殖。     

五加双参片对血虚证小鼠的作用研究

目的 观察五加双参片对血虚证小鼠的作用。方法 采用乙酰苯肼总量为60mg／kg和环磷酰胺总量为160mg／kg联合造成小鼠血虚状态，取血测定小鼠的外周血象，观察模型小鼠的游泳时间和体温。同时了解五加双参片改善血虚证的作用。结果 五加双参片能显著增加模型小鼠的红细胞、血红蛋白和白细胞的数量，并能延长模型小鼠的游泳时间、可使体温升至正常。结论 五加双参片通过补血健髓的作用可显著改善模型小鼠的气血两虚状态。     

五加双参片对小鼠免疫功能的影响

目的 研究五加双参片对小鼠免疫功能的影响。方法 通过给小鼠灌胃五加双参片，观察其对免疫低下小鼠迟发性超敏反应、溶血素生成及对小鼠NK细胞杀伤活性的影响。结果 五加双参片可明显增强免疫低下小鼠的DTH，提高血浆溶血素水平，增强NK细胞杀伤活性。结论 五加双参片可通过提高机体的免疫功能而发挥作用。     

乌贼墨对小鼠造血干细胞、粒-单系祖细胞及外周白细胞的影响

目的探讨乌贼墨对小鼠造血干细胞、粒-单系祖细胞及外周血WBC的影响。方法用不同剂量的乌贼墨灌胃正常小鼠、环磷酰胺(Cy)和辐射骨髓损伤模型小鼠,采用造血祖细胞体外培养方法和实验血液学技术,检测小鼠骨髓造血干细胞生成数(CFU-S)、粒-单系祖细胞集落生成数(CFU-GM)和外周血WBC数量。结果乌贼墨能够显著提高正常小鼠CFU-S,CFU-GM和外周血WBC数量,有效拮抗模型小鼠体内CFU-S,CFU-GM及外周WBC的降低,并显著促进模型小鼠上述各指标的恢复。结论乌贼墨具有显著的促进小鼠骨髓粒系造血作用。其作用机制可能通过调节机体的免疫机能,诱导机体产生粒/单核细胞集落刺激因子和多种细胞因子,促进造血细胞的增殖,并诱导造血细胞向粒单系细胞分化。     

黄芪和当归的主要活性成分配伍对骨髓抑制小鼠造血功能的影响

目的探讨黄芪和当归的主要活性成分配伍对骨髓抑制小鼠模型的促造血作用。方法对芪归1∶1配伍提取物测定5种主要活性成分阿魏酸、芒柄花素、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷含量,以确定配伍剂量。小鼠随机分为空白对照组、模型组和各给药组。空白对照组给予溶剂灌胃7 d;模型组同上灌胃,于d 3腹腔注射环磷酰胺,连续3 d;各药物组灌胃给药,同上造模。检测外周血象、血清造血生长因子(HGF)含量、造血祖细胞集落数。结果芪归配伍提取物和活性成分配伍均可明显增加外周血白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板数(Pt)、血红蛋白(HGB)含量和骨髓造血组织面积,明显增加血清粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促血小板生成素(TPO)、促红细胞生成素(EPO)含量和骨髓粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、巨核细胞集落形成单位(CFU-MK)、红系集落形成单位(CFU-E)和爆式红系集落形成单位(BFU-E)数,两者作用相近。各成分中,阿魏酸可促进WBC和骨髓造血组织面积的恢复;5种成分均可促进RBC和HGB的恢复;阿魏酸和黄芪甲苷可促进Pt的恢复。5个成分均可升高TPO含量;阿魏酸和毛蕊异黄酮可升高GM-CSF含量;阿魏酸、毛蕊异黄酮和毛蕊异黄酮苷可升高EPO含量。除黄芪甲苷外,其它4种成分均可使CFU-GM增加;5种活性成分均可增加CFU-MK、CFU-E;仅阿魏酸可增加BFU-E。结论黄芪当归配伍发挥补血作用的主要药效物质是以上5种活性成分,这些活性成分配伍对促进造血可发挥增效作用。     

青蒿琥酯对小鼠骨髓造血干/祖细胞分化的抑制与毒性作用

目的:观察青蒿琥酯(artesunate,AS)对小鼠骨髓造血干/祖细胞分化的影响。方法:取小鼠骨髓干细胞进行体外液体或半固体定向培养并加入不同浓度的AS,光镜下计数半固体培养的红系集落形成单位(CFU-E)与红系爆式集落形成单位(BFU-E)数量,流式细胞术检测液体定向培养的细胞凋亡和线粒体膜电位变化,同时进行DNAladder凝胶电泳实验。结果:AS可显著抑制CFU-E与BFU-E集落的生成(P<0.05)并具有一定的量效关系;DNAladder凝胶电泳结果显示0.01～1.30mmol/L的AS可明显诱导细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞晚期凋亡/死亡率具有统计学意义(P<0.05);线粒体膜电位的下降程度也与AS浓度正相关(r=0.546,P=0.018)。结论:AS对小鼠骨髓造血干/祖细胞的增殖和分化具有明显抑制作用,小剂量AS可诱导小鼠骨髓造血干/祖细胞发生凋亡,大剂量可直接引起细胞坏死。     

环孢素在体外对再生障碍性贫血的干预作用

目的:观察环孢素(CsA)在体外对再生障碍性贫血(AA)的粒/巨噬系祖细胞(CFU-GM)和红系祖细胞(CFU-E)的作用,为临床应用提供实验依据.方法:采用RPMI1640琼脂和McCoy's5A甲基纤维素半固体平皿法,观察了CsA在体外对54例AA患者CFU-GM和CFU-E的影响,并以30例正常人作对照.结果:①AA患者的CFU-GM、CFU-E较对照组明显减低(P＜0.01).②CsA能明显促进AA患者CFU-GM、CFU-E的增殖,这种促增殖作用随CsA剂量增加而增加.③重型AA患者CFU-GM和CFU-E对CsA的有效率较慢性AA高.④CFU-GM和CFU-E值中、重度减低的AA患者对CsA的有效率较无CFU-GM和CFU-E生长的AA患者高.结论:CsA在体外可促进部分AA患者CFU-GM、CFU-E的增殖,故可作为治疗AA的一种有效方法.     

阿胶有效组分对辐射损伤小鼠造血系统的保护作用研究

目的：研究阿胶有效组分A、B对放射损伤小鼠造血系统的保护作用机制。方法：小鼠3.5Gy ^137Se全身辐射造模,每日给药A（1.0g/kg和2.0g/kg）和B（0.8g/kg和1.6g/kg）,d25处死动物。检测小鼠骨髓和脾造血干/祖细胞集落红系暴增式集落形成单位（BFU-E）、红系集落形成单位（CFU-E）、粒细胞巨噬细胞集落生成单位（CFU-GM）、脾表面结节数量,荧光酶标仪检测骨髓细胞活性氧（ROS）含量,Elisa测定小鼠外周血粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、IL-6、红细胞生成素（EPO）、IFN-γ、β型转化生长因子（TGF-β）和血清及肝组织匀浆内超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧物酶（GSH-Px）含量。结果：A、B组分能促进射线损伤小鼠外周血白细胞和红细胞的升高,保护骨髓和脾造血干/祖细胞集落BFU-E、CFU-E、CFU-GM,增加脾表面集落形成单位（CFU-S）数量和血清中GM-CSF、IL-6含量,降低骨髓细胞内ROS含量,提高血清内SOD、GSH-Px和肝脏内SOD含量。结论：从体外模拟人胃、肠的消化系统能够分离阿胶有效补血活性成分,这种成分保护辐射损伤小鼠造血系统的机制可能与保护贫血小鼠造血微环境、刺激机体表达相关造血细胞因子和增强机体抗自由基能力有关。     

基因重组干扰素γ体外对骨髓增生异常综合征患者治疗作用的研究

目的方法:用基因重组干扰素γ(IFN-γ)体外对41例骨髓增生异常综合征(MIDS)患者造血祖细胞的作用进行了观察,结果结论:①IFN-γ体外对正常对照组患者的CFU-E和CFU-GM无明显促增殖作用。而对MDS患者CFU-E和CFU-GM有明显促增殖作用。其作用为剂量依赖型,在1~U/ml时作用最小,100~U/ml时作用最强;②IFN-γ对MDS原CFU-E和CFU-GM增殖正常组加入IFN-γ后集落数增加最明显,而对增殖明显减低组集落效无明显增加;③IFN-γ对MDS不同FAB亚型患者CFU-E和CFU-GM作用不同,其中对RAEB-T型患者有效率较高。     

五加双参片对小鼠巨噬细胞功能的影响

目的 观察五加双参片对正常小鼠及免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数及吞噬百分率的影响。方法 选用正常昆明系小鼠及地塞米松造成免疫低下小鼠为研究对象，观察对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数。结果 五加双参片不但能提高正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬红细胞的功能，而且能对抗总量40mg／kg地塞米松所致巨噬细胞功能的降低。结论 五加双参片通过提高吞噬细胞功能，对阻止感染和促进感染的恢复具有重要作用。     

五加双参片对顺铂所致大鼠肾损伤保护作用的实验研究

目的 研究五加双参片对顺铂肾毒性的预防作用。方法 采用雄性SD大鼠随机分为生理盐水组、顺铂组、五加双参片组和五加双参片 顺铂组，连续ig给药10d后采样，分别测定肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾皮质组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性，红细胞SOD活性和血清MDA含量，并观察肾脏形态结构的改变。结果顺铂组血清Scr、BUN明显升高，红细胞SOD活性降低，血清MDA含量升高；肾皮质组织MDA含量升高SOD活性降低。五加双参片 顺铂组血清Scr、BUN降低，红细胞SOD活性明显降低，血清MDA明显降低，肾皮质组织MDA含量降低，SOD活性升高；酶组化和病理切片显示肾脏结构较顺铂组明显改善。结论 五加双参片可减轻顺铂肾毒性，其机制可能与抑制顺铂所致血液和肾皮质脂质过氧化反应增强有关。     

巴西蘑菇多糖对造血干、祖细胞生成的影响

目的:探讨国产巴西蘑菇多糖对造血干、祖细胞生成的影响及其作用机制。方法:应用造血细胞培养技术、流式细胞仪(FACS)、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)观察药物对小鼠骨髓细胞及人脐血单个核细胞的影响。结果:经过巴西蘑菇多糖处理的动物,造血干细胞(CFU-S)、粒-单祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E)和纤维母细胞(CFU-F)各组数值明显上升,与对照组比较,P均<0.01;FACS检测显示,实验组CD33+细胞明显上升,在诱导的d 7达高峰;经RT-PCR检测结果表明,巴西蘑菇多糖诱导人脐血单个核细胞48 h后,粒单细胞克隆刺激因子(GM-CSF)mRNA的表达量是对照组的2.72倍。结论:巴西蘑菇多糖可促进造血干、祖细胞生成并可促进人脐血单个核细胞GM-CSF基因表达。     

重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子融合蛋白单次给药对恒河猴造血细胞的动员作用

目的研究重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子融合蛋白（GW003）对造血细胞的动员作用。方法 7只健康成年恒河猴单次皮下注射GW003 150μg/kg,分别于给药前后不同时间检测外周血细胞数和进行造血细胞集落培养。结果 GW003对健康成年恒河猴造血祖细胞、白细胞、中性粒细胞、未成熟粒细胞及单核细胞均有明显的动员作用,给药后18 h呈现高峰。注射GW003后10 h,外周血粒-巨噬系细胞集落形成单位（CFU-GM）、混合系细胞集落形成单位（CFU-Mix）、巨核系细胞集落形成单位（CFU-MK）数分别增至药前的1.8、1.9、1.4倍,红系爆式形成单位（BFU-E）和红系集落形成单位（CFU-E）数则增至1.7和1.5倍。结论 GW003对正常猴外周血干/祖细胞（PBS/PC）有明显动员作用,有望成为一种新的、高效的造血细胞动员剂。     

N-乙酰半胱氨酸对化疗所致骨髓抑制的改善作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对化疗所致骨髓抑制的改善作用。方法 1 体内实验:将C57BL/6j小鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺(Cy)所致骨髓抑制模型对照组(ip给予生理盐水)以及模型＋NAC 30,90和270 mg·kg^-1组,每天1次,连续10 d。给药第4天一次性ip给予Cy 380 mg·kg^-1制备骨髓抑制小鼠模型。造模后第1,2,3,4和7天,鼠尾静脉取血20 μl检测外周血像,同时取一侧股骨骨髓,检测骨髓单个核细胞(BM-MNC)数目;造模后第1天,检测BM-MNC凋亡和细胞内活性氧(ROS)水平。2 体外实验:C57BL/6j小鼠一次性ip给予Cy 380 mg·kg^-1后第3天,取BM-MNC进行造血祖细胞培养,在培养体系中加入NAC 0.01, 0.1, 1和5 mmol·L^-1,于第7~12天检测造血祖细胞粒红巨噬巨核系集落形成单位(CFU-Mix)、粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)和红系爆式形成单位(BFU-E)数目,观察NAC体外对骨髓抑制模型小鼠造血祖细胞增殖分化的影响。结果 1 体内实验:与正常对照组相比,ip给予Cy后第1~4天,模型组BM-MNC和外周血白细胞(WBC)数目显著下降,造模后第7天仍未恢复正常。与模型组相比,造模第2天,NAC 270 mg·kg^-1组WBC数目降低;其余各时间点,NAC各治疗组的WBC数目无明显差异,NAC 30和90 mg·kg^-1组WBC最低值于造模后第4天出现。与模型组比较,造模后第1天NAC 30和90 mg·kg^-1组ROS水平降低,BM-MNC凋亡率无明显差异; 造模后第1~2天BM-MNC明显增加。2 体外实验:与正常对照组相比,模型组造血祖细胞CFU-Mix,CFU-GM和BFU-E数目均明显降低;与模型组比较,NAC 0.1 mmol·L^-1能够增加骨髓抑制小鼠骨髓造血祖细胞CFU-GM和BFU-E数目,但NAC 5 mmol·L^-1减少模型小鼠CFU-GM,BFU-E和CFU-Mix数目。结论 NAC通过降低ROS水平对化疗所致骨髓抑制有一定的改善作用。