P120ctn基因沉默及过表达对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:利用舌癌原发灶和转移淋巴结细胞系HN4和HN12,通过沉默和过表达P120连环蛋白(P120-catenin,P120^ctn)基因,观察P120ctn的表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin, E-cad)表达和口腔鳞癌迁移和侵袭能力的影响。方法:采用质粒pGFP-V-RS-P120ctn shRNA转染P120ctn高表达的HN4细胞,使HN4中P120ctn的表达显著降低,采用质粒pCMV6-AC-GFP- P120^ctn转染HN12,使HN12过表达P120^ctn,进行P120^ctn和E-cad mRNA和蛋白水平的检测,并通过Transwell细胞迁移及侵袭试验检测转染前后肿瘤细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:用质粒转染HN4细胞后发现,随着P120ctn表达的显著降低,E-cad的mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞迁移和侵袭能力显著提高。反之,HN12细胞被转染后发现,过表达P120^ctn的HN12细胞E-cad的蛋白表达水平也显著提高,细胞迁移和侵袭能力显著降低(P＜0.05)。 结论:在OSCC细胞系中P120ctn的表达与E-cad相关,可能参与了细胞粘附的调控,进而在口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭过程中发挥作用。     

抑制蛋白激酶C对口腔鳞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:利用舌癌细胞系HN4,探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)、P120-连环蛋白(P120-catenin,P120ctn)和E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)在口腔鳞癌中的相互关系及其在肿瘤细胞侵袭和转移中的作用机制.方法:采用质粒pGFP-V-RS-P120ctn shRNA转染HN4,使HN4中P120ctn的表达显著降低,再使用星孢菌素(staurosporine,STS)抑制PKC的表达,进行PKC、P120ctn和E-cad mRNA和蛋白水平的检测;通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移试验等方法,检测PKC被抑制前、后肿瘤细胞迁移和侵袭能力的变化.采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析.结果:当PKC被STS抑制时,HN4/shP120ctn细胞中P120ctn的表达显著升高,E-cad的表达也随之升高,肿瘤细胞的迁移和侵袭能力显著降低(P均＜0.05).结论:PKC可能参与了P120ctn和E-cad表达的调节,与细胞黏附的调控有关,进而在HN4细胞的迁移和侵袭过程中发挥作用.     

蛋白激酶C激活对口腔鳞癌细胞上皮-间质转化的影响

目的:利用舌癌细胞系HN12探索激活蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)对口腔鳞癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法:采用质粒pCMV6-AC-GFP-P120ctn转染HN12细胞,使HN12过表达P120-连环蛋白(P120-catenin,P120ctn),再加入蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)激活剂佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA),采用实时荧光定量PCR、Western blot检测PMA处理前后PKC、P120ctn、E-cad的mRNA和蛋白表达,通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移试验等方法检测细胞的迁移和侵袭能力.结果:当PKC被PMA活化时,细胞形态发生改变,细胞中P120ctn的表达显著降低,E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)也随之降低,间质标记蛋白N-钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)和波形蛋白(Vimentin,Vim)的mRNA和蛋白表达水平显著升高,肿瘤细胞的迁移和侵袭能力显著提高(P＜0.05).结论:PKC可能通过磷酸化调节P120ctn的表达,参与细胞黏附的调控,促进EMT,在口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭过程中发挥作用.     

Twist在口腔鳞状细胞癌中的表达及其与 鳞状细胞癌上皮间质化的关系

目的 观察人口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织中上皮间质化相关蛋白及转录因子Twist的表达,研究Twist在OSCC上皮间质化中的作用及OSCC转移情况的相关性,并探讨其在人OSCC中的临床意义。方法 通过免疫组织化学及原位杂交的方法分别检测30例OSCC组织中上皮源性标记物E-钙黏蛋白（E-cad）和细胞角蛋白（CK）,间质源性标记物N-钙黏蛋白（N-cad）,转录因子Twist蛋白及mRNA的表达情况,并与临床病理资料作对照分析。结果 免疫组织化学结果：在OSCC组织中,Twist、N-cad的表达明显高于正常组织,E-cad及CK的表达明显低于正常组织（P<0.05）;在OSCC中低分化组,Twist、N-cad的表达高于高分化组,E-cad及CK的表达明显低于高分化组（P<0.05）;在有淋巴结转移组中,Twist、N-cad的表达高于无淋巴结转移组,E-cad及CK的表达低于无淋巴结转移组（P<0.05）。原位杂交结果：Twist mRNA在OSCC中低分化组,T3、T4组和有转移淋巴结组的表达分别高于高分化组,T1、T2组和无淋巴结转移组,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 OSCC组织中存在上皮间质化,Twist可使肿瘤细胞的侵袭力增加,促进OSCC的浸润和转移。联合检测Twist、E-cad和N-cad的表达可能会更有效地判断和预测OSCC的转移。     

P120 ctn/E-cad 在口腔鳞癌细胞迁移和侵袭中的功能

目的：分析P120-连环蛋白（P120-catenin,P120ctn）和E-钙粘蛋白（E-cadherin,E-cad）在口腔鳞癌（oral squamous-cell cancer,OSCC）细胞迁移和侵袭中的功能。方法：采用实时荧光定量PCR、Western blot检测HN4（人舌癌原发灶细胞）和HN12（人舌癌转移淋巴结细胞）中P120ctn、E-cad的mRNA和蛋白表达,通过Transwell细胞侵袭及细胞迁移试验等方法检测HOK（人口腔黏膜角化上皮细胞）、HN4和HN12细胞的迁移和侵袭能力。结果：HN4细胞中P120ctn和E-cad的mRNA和蛋白表达水平明显高于HN12,低于HOK细胞,差异均有统计学意义（P＜0．05）。HN4细胞的侵袭和转移能力显著高于HOK细胞,低于HN12细胞,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论：在OSCC细胞中P120 ctn与E-cad的表达下调,可能抑制了OSCC细胞的侵袭和转移。     

下调性别决定区Y框蛋白9对口腔鳞癌细胞上皮间质转化及克隆能力的影响

目的 探讨下调性别决定区Y框蛋白9（SOX9）对口腔鳞癌（OSCC）细胞上皮间质转化（EMT）及克隆能力的影响。方法 OSCC BcaCD885细胞中转染siRNA control、SOX9 siRNA,同时以不做任何转染的细胞作为control组。实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）和Western blot筛选干扰效果较好的SOX9 siRNA1做后续研究。细胞克隆实验测定细胞克隆形成能力,免疫荧光检测上皮钙黏附素（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达,Western blot检测E-cadherin、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、Vimentin、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移。结果 SOX9 siRNA组细胞中SOX9 mRNA和蛋白水平均明显低于control组（P<0.05）。SOX9 siRNA1细胞克隆形成数目、细胞侵袭和迁移数目明显降低,并且细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平也明显降低,与control组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。SOX9 siRNA1组细胞中Vimentin表达水平降低,而E-cadherin表达水平升高,细胞EMT受到抑制,与control组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 下调SOX9可抑制OSCC细胞EMT和克隆形成,以及细胞侵袭和迁移。     

环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌 细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系恶性生物学行为的影响。方法 纳入OSCC患者40例,使用实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞系和人口腔黏膜角质形成细胞（HOK）中的表达水平。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞,实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203的表达,细胞计数（CCK-8）实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测细胞增殖凋亡侵袭相关蛋白的表达。通过裸鼠成瘤实验观察hsa_circ_0002203对SCC15细胞体外成瘤能力的影响。结果 环状RNA hsa_ circ_0002203在OSCC组织的表达低于癌旁组织（P<0.01）,在OSCC细胞系中的表达低于人类角质形成细胞（P< 0.001）。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞后hsa_circ_0002203的表达增加;SCC15和CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,凋亡水平增加;裸鼠肿瘤体积、质量减小,生长速度降低。结论 环状RNA hsa_circ_ 0002203在口腔鳞状细胞癌中的低表达可以增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡。     

环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系恶性生物学行为的影响。方法 纳入OSCC患者40例,使用实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞系和人口腔黏膜角质形成细胞（HOK）中的表达水平。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞,实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203的表达,细胞计数（CCK-8）实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测细胞增殖凋亡侵袭相关蛋白的表达。通过裸鼠成瘤实验观察hsa_circ_0002203对SCC15细胞体外成瘤能力的影响。结果 环状RNA hsa_ circ_0002203在OSCC组织的表达低于癌旁组织（P<0.01）,在OSCC细胞系中的表达低于人类角质形成细胞（P< 0.001）。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞后hsa_circ_0002203的表达增加;SCC15和CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,凋亡水平增加;裸鼠肿瘤体积、质量减小,生长速度降低。结论 环状RNA hsa_circ_ 0002203在口腔鳞状细胞癌中的低表达可以增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡。     

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关功能

目的 分析长链非编码RNA（lncRNA）肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1（AFAP1-AS1）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达及其对OSCC细胞生物行为学的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测OSCC患者（55例）癌组织、癌旁正常黏膜组织及人口腔鳞状细胞癌SCC25、人正常口腔角质细胞株（NOK）细胞中lncRNA AFAP1-AS1的表达,分析AFAP1-AS1与OSCC患者病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线分析AFAP1-AS1与患者预后的关系。AFAP1-AS1 siRNA转染SCC25细胞,细胞计数（CCK-8）及Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭的变化,蛋白质印迹（Western blot）检测侵袭相关蛋白、肌动蛋白纤维相关蛋白1（AFAP1）及Rho GTP酶家族成员蛋白的表达情况,免疫荧光染色检测细胞骨架肌动蛋白微丝结构的变化。结果 OSCC组织中AFAP1-AS1的表达高于癌旁正常黏膜组织,SCC25细胞中AFAP1-AS1的表达高于NOK细胞（P<0.001）。AFAP1-AS1的表达与OSCC的分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关（P<0.05）,AFAP1-AS1高表达患者的生存率低于AFAP1-AS1低表达者（P<0.05）。AFAP1-AS1 siRNA转染后AFAP1-AS1的表达水平下调,SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,AFAP1、RhoA、Rac2、Rab10、RhoGDI和Pfn1的表达上调,RhoC的表达下调,细胞骨架中应力纤维丝减少,肌动蛋白完整性丢失。结论 lncRNA AFAP1-AS1在OSCC组织及SCC25细胞中高表达,与OSCC的发生进展及预后相关。下调AFAP1-AS1能够抑制OSCC的增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过调控肌动蛋白纤维丝的完整性实现的。     

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关功能

目的 分析长链非编码RNA（lncRNA）肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1（AFAP1-AS1）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达及其对OSCC细胞生物行为学的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测OSCC患者（55例）癌组织、癌旁正常黏膜组织及人口腔鳞状细胞癌SCC25、人正常口腔角质细胞株（NOK）细胞中lncRNA AFAP1-AS1的表达,分析AFAP1-AS1与OSCC患者病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线分析AFAP1-AS1与患者预后的关系。AFAP1-AS1 siRNA转染SCC25细胞,细胞计数（CCK-8）及Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭的变化,蛋白质印迹（Western blot）检测侵袭相关蛋白、肌动蛋白纤维相关蛋白1（AFAP1）及Rho GTP酶家族成员蛋白的表达情况,免疫荧光染色检测细胞骨架肌动蛋白微丝结构的变化。结果 OSCC组织中AFAP1-AS1的表达高于癌旁正常黏膜组织,SCC25细胞中AFAP1-AS1的表达高于NOK细胞（P<0.001）。AFAP1-AS1的表达与OSCC的分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关（P<0.05）,AFAP1-AS1高表达患者的生存率低于AFAP1-AS1低表达者（P<0.05）。AFAP1-AS1 siRNA转染后AFAP1-AS1的表达水平下调,SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,AFAP1、RhoA、Rac2、Rab10、RhoGDI和Pfn1的表达上调,RhoC的表达下调,细胞骨架中应力纤维丝减少,肌动蛋白完整性丢失。结论 lncRNA AFAP1-AS1在OSCC组织及SCC25细胞中高表达,与OSCC的发生进展及预后相关。下调AFAP1-AS1能够抑制OSCC的增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过调控肌动蛋白纤维丝的完整性实现的。     

P120^ctn在口腔鳞癌中的表达及其与细胞黏附的关系

目的：对比口腔鳞癌（oral squamous-cell carcinoma,OSCC）与口腔正常黏膜中P120-连环蛋白（P120-catenin,P120^ctn）和E一钙粘蛋白（E—cadherin,E—cad）的表达,观察P120^ctn和E—cad的表达与口腔鳞癌临床病理参数之间的关系以及它们之间的相互关系。方法：选用人正常口腔黏膜组织26例OSCC标本49例,采用免疫组化方法检测P120^ctn和E—cad的表达。结果：在口腔鳞癌中P120^ctn和E—cad的正常表达率显著低于它们在正常口腔黏膜组织中的正常表达（P〈0．05）。有淋巴结转移组和肌层浸润组的OSCC组织P120^ctn及E-cad的正常表达显著低于无淋巴结转移组和黏膜及黏膜下层浸润组（P〈0．05）。OSCC组织中P120ctn异常表达组的E—cad正常表达率显著低于P120^ctn正常表达组（P〈0．05）,P120^ctn与E—cad高度相关（P〈0．01）。结论：P120^ctn和E—cad在OSCC中的表达具有相关性,且随组织病理改变而改变。     

DZIP1通过影响Wnt/β-catenin信号通路促进口腔鳞状细胞癌增殖、迁移和侵袭

目的 探究DZIP1通过Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞状细胞癌增殖、迁移和侵袭的影响.方法 实时荧光定量PCR和Western blot检测DZIP1和Wnt/β-catenin信号通路相关基因mRNA表达和蛋白表达,CCK-8检测细胞活力,克隆形成实验检测口腔鳞状细胞癌(oral squamous cel...     

Expression of E-cadherin, P-cadherin and N-cadherin in oral squamous cell carcinoma: correlation with the clinicopathologic features and patient outcome.

PURPOSE: Alteration of cadherin expression is associated with the loss of cellular differentiation, the acquisition of an invasive phenotype and a poor prognosis in many types of cancer. This study aimed to evaluate the immunoreactivity of E-, P- and N-cadherins (cad) in oral squamous cell carcinoma and to correlate their expression with clinicopathological features and clinical outcome. The interaction between the cadherins was also investigated. METHODS: A total of 71 tissue samples were examined by immunohistochemical methods on paraffin sections using specific antibodies. RESULTS: In the primary lesions and lymph node metastases, the immunoreactivity of E-cad was reduced and P-cad was over-expressed, but the expression of N-cad was negative (p<0.001, 0.01 and 0.05, respectively). The reduced primary E-cad expression was related to the invasion pattern and lymph node metastasis (p=0.046 and 0.037, respectively). However, the expression of cadherins did not appear to differ significantly in relation to the histological grade, invasion, tumour size, stage of oral SCC or tumour recurrence. A much greater reduction in the expression of E-cad was found in the positive N-cadherin group (p=0.008). Nonetheless, cadherin expression was not significantly associated with failure-free survival or overall survival in this experiment subset. CONCLUSION: The reduced E-cad expression and the aberrant N-cad expression are closely associated with each other in oral cancer cases, and this suggests that cadherin switching from E. cad to N. cad may play a critical role in cancer development and metastasis.     

基质金属蛋白酶9抑制剂对人舌鳞癌SCC-25细胞侵袭、迁移能力的影响及机制探讨

目的 探讨基质金属蛋白酶9（MMP-9）抑制剂对人舌鳞状细胞癌（TSCC）SCC-25细胞侵袭、迁移能力的影响及其相关机制。方法 取对数生长期SCC-25细胞,分别采用0、5、10、20 μmol/L的MMP-9抑制剂BB-94干预,分别设为对照组、实验A组、实验B组和实验C组。采用RT-qPCR和Western免疫印迹测定MMP-9 mRNA及蛋白的表达;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;划痕实验测定迁移能力;Western免疫印迹测定细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、E钙黏附蛋白（E-cad）、间隙连接蛋白43（Cx43）的蛋白表达水平。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果 与对照组相比,实验A、B、C组MMP-9 mRNA及蛋白相对表达量、迁移率降低,穿膜细胞数量/视野减少（P<0.05）;与实验A组相比,实验B、C组MMP-9 mRNA及蛋白相对表达量、迁移率降低,穿膜细胞数量/视野减少（P<0.05）;与实验B组相比,实验C组MMP-9 mRNA及蛋白相对表达量、迁移率降低,穿膜细胞数量/视野减少（P<0.05）。与对照组相比,实验A、B、C组ICAM-1蛋白相对表达量降低,E-cad、Cx43蛋白相对表达量升高（P<0.05）;与实验A组相比,实验B、C组ICAM-1蛋白相对表达量降低,E-cad、Cx43蛋白相对表达量升高（P<0.05）;与实验B组相比,实验C组ICAM-1蛋白相对表达量降低,E-cad、Cx43蛋白相对表达量升高（P<0.05）。结论 MMP-9抑制剂可抑制TSCC细胞侵袭、迁移,且呈剂量依赖性,推测其作用机制与下调ICAM-1表达,上调E-cad、Cx43表达有关。     

血小板衍生生长因子D在舌鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探究血小板衍生生长因子D（PDGF-D）在舌鳞状细胞癌（TSCC）中的作用。 方法采用免疫组化方法检测127例人TSCC组织样本和15例癌旁组织样本中PDGF-D的表达,使用SPSS 20.0经t检验分析PDGF-D的表达强度与TSCC患者的性别、年龄、TNM分期、临床分期的关系。经Cox回归分析PDGF-D表达强度同TSCC患者生存期的关系。构建PDGF-D低表达和高表达细胞系,通过克隆形成实验、Transwell转移和侵袭实验,分析PDGF-D对TSCC细胞生物学行为的影响。通过蛋白免疫印迹分析PDGF-D表达变化对于上皮间质转化（EMT）相关蛋白的影响。 结果免疫组化结果显示,TSCC原发灶中PDGF-D的表达较高,癌旁组织中PDGF-D表达较低（P<0.001）。统计分析显示,PDGF-D的表达同TNM分期、临床分期和淋巴结转移情况相关。生存分析显示,PDGF-D高表达患者的5年生存率明显低于PDGF-D低表达患者（P=0.0446）,PDGF-D作为独立预测因素具有统计学意义（HR=2.643,P<0.05）。体外细胞实验结果显示,PDGF-D高表达细胞系克隆形成集落数增多（P<0.001）,侵袭实验（P<0.001）和转移实验（P=0.044）中细胞转移数目增多,而PDGF-D低表达细胞系克隆形成实验中形成集落数减少（P=0.026）,侵袭实验（P<0.001）和转移实验（P<0.001）中细胞转移数目减少。蛋白免疫印迹结果显示,PDGF-D高表达会使间质相关指标表达增多、上皮标志减少;PDGF-D低表达则相反。 结论PDGF-D的表达同患者的预后相关。PDGF-D的表达可作为预测TSCC预后的独立风险因素,通过影响EMT影响TSCC细胞的增殖、侵袭和转移。     

Wnt1在口腔鳞癌中的表达及其与淋巴结转移关系的研究

目的 :研究Wnt信号传导通路中Wnt1蛋白在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达水平,初步探讨Wnt1在OSCC淋巴结转移中的作用。方法:采用免疫组织化学方法,检测60例OSCC中Wnt1的表达情况;采用Western blot法检测5对OSCC临床标本和配对癌周组织中Wnt1的表达;通过实时定量PCR法和Western blot法分别检测高、低转移潜能的HN-12和HN-4口腔鳞癌细胞系中Wnt1基因和蛋白的表达水平;采用生长曲线、划痕实验和Transwell法,分别检测重组蛋白Wnt1对2种细胞的生长情况、迁移能力和侵袭能力的影响。结果:24例淋巴结转移的OSCC中高表达Wnt1,16例未有淋巴结转移的OSCC中低表达Wnt1,Wnt1的表达在两组之间差异有统计学意义(P<0.01);高转移细胞系HN-12较低转移细胞系HN-4在m RNA水平和蛋白水平上Wnt1表达显著增高;重组蛋白Wnt1,能够提高肿瘤细胞的生长、迁移和侵袭能力。结论:Wnt信号通路中的关键分子Wnt1在OSCC中有表达,且与淋巴结转移相关,为进一步探讨Wnt信号通路影响肿瘤转移的分子机制奠定基础。