DRM1,DRM2参与拟南芥愈伤组织的形成

通过体视显微镜、半薄切片、扫描电子显微镜观察拟南芥DNA从头甲基化酶DRM1,DRM2的双突变体drm1/drm2在愈伤诱导培养基上所诱导的愈伤组织,结果发现:与野生型相比,其种子和根、叶、叶柄等外植体,均具有在同等条件下愈伤组织增多,分裂旺盛的表型。编码拟南芥DNA从头甲基化酶DRM1,DRM2的基因DRM1,DRM2的表达水平也与生长素、细胞分裂素等外源激素浓度相关,由此推测外源激素浓度影响DRM1,DRM2的表达。暗示了DRM1,DRM2可能参与了拟南芥愈伤组织形成过程。     

实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA方法的建立及初步应用

目的:建立实时荧光定量PCR检测长链非编码RNA HULC的方法,探讨其在作为肝癌标志的应用价值.方法:根据Genebank中的HULC lncRNA(AY914050.1)全序列,设计HULC基因的特异引物,构建HULC基因的T克隆载体,命名为pMD18-T-HULC;以pMD18-T-HULC为实时荧光定量PCR检测HULC的标准品,建立实时荧光定量PCR检测HULC的方法并进行方法学评价.应用此方法检测8种肿瘤细胞株、肝癌组织、其它癌及癌旁组织中HULC lncRNA的表达.结果:HULC实时荧光定量PCR检测方法学的最低检测限为1.8× 103拷贝/L,线性范围为1.8× 103拷贝/L至4.6× 109拷贝/L;该法的批内变异系数(CV)＜2.0％,批间CV＜ 8.0％.其在肝癌组织和肝癌细胞株起始表达量为(7.6±3.1)×105拷贝/L至(5.6±3.2)×106拷贝/L,明显高于其它癌和癌旁组织HULC lncRNA表达量(＜1.8×103拷贝/L).新发现膀胱癌细胞株T24中表达量高[(6.7±2.4)×105拷贝/L],但在膀胱癌组织中表达低(＜1.8×103拷贝/L).结论:成功建立了实时荧光定量PCR检测HULC lncRNA的方法,HULC lcRNA可望作为肝癌的标志.     

青扦花粉萌发及花粉管生长过程中的钾离子流及BaCl2和TEA的影响

本文以裸子植物青扦花粉为材料,运用非损伤、选择性电极技术探究了花粉水合、萌发及花粉管生长过程中的钾离子流,以及抑制剂处理后的影响.研究结果显示:(1)钾离子通道抑制剂BaCl2和TEA(氯化四乙胺)处理推迟花粉萌发;(2)BaCl2和TEA处理后,青扦花粉萌发和花粉管伸长均受到抑制;(3)选择性电极检测结果显示对照花粉不同发育时期钾离子均内流,即花粉水合、萌发及花粉管生长均需大量的钾离子.BaCl2和TEA处理后,花粉的钾离子流动态也随之发生改变.培养3~9 h,钾离子呈明显的外流,12~21 h钾离子内、外流基本平衡,24 h钾离子内流.抑制剂处理导致的钾离子流的紊乱使得花粉不能正常萌发、花粉管不能正常生长.因而,钾离子在青扦花粉萌发及花粉管生长过程中具有重要的调控作用.     

LaCl3对“秦冠”苹果成熟花粉管形态及细胞壁成分的影响

本文以Ca2＋通道抑制剂LaCl3处理“秦冠”苹果成熟花粉,观察其对花粉管生长以及细胞壁成分的影响。结果发现较高浓度LaCl3处理花粉后,花粉萌发和花粉管生长均受到明显抑制,花粉管发生弯曲,膨大,甚至出现多个花粉管萌发等现象。花粉管壁的成分也发生变化。荧光显微镜下观察,正常生长的花粉管纤维素和胼胝质在细胞壁上呈均匀分布,其中胼胝质在顶端微弱分布。处理后,花粉管顶端纤维素荧光较对照明亮,胼胝质并未在花粉管顶端积累。运用免疫荧光标记技术及激光共聚焦显微镜观察,酸性果胶质、酯化果胶和阿拉伯半乳聚糖蛋白均存在于正常生长的花粉管壁上。经过处理后,酸性果胶质和酯化果胶质在花粉管顶端积累,阿拉伯半乳聚糖蛋白明显增加。通过显微红外光谱（ FTIR）技术分析,进一步验证了上述处理导致花粉管壁酸性果胶质和酯化果胶以及壁蛋白含量的增加。上述结果表明,LaCl3改变了细胞壁多糖和蛋白分布、含量以及细胞壁的延展性,从而引起花粉管生长的异常。     

玉米雄性不育基因ms10花药发育的超微结构研究

我们选用玉米雄性不育基因ｍｓ１０做为试验材料，由于它是一个有利于潜力的材料。我们首抚对其发育不同时期的花药进行了超微结构研究，结果发现不良株和可育株存在着明显的差异。当四分体分开后，不育析地小孢子不能继续发育，也不能分出花粉壁物质而产生一种特殊的丝状结构，在绒毡层细胞内表面也不产生乌氏体，而是产生同小孢子表面相似的丝关结构。     

三裂叶豚草花粉形态及雄配子体发育的研究

三裂叶豚草（Ambrosia trifida L.）是世界公认的恶性杂草。它的危害性主要在于其花粉对人体产生严重的致敏作用。本文利用扫描电子显微镜对三裂叶豚草的花粉外部形态进行了观察,并利用石蜡切片和光学显微镜对其雄配子体发育进行了系统研究。结果表明：花粉粒球形,外壁呈刺状纹饰,三孔沟。花药壁由4层细胞组成,分别为表皮、药室内壁、中层和绒毡层。绒毡层发育类型为变形绒毡层。小孢子母细胞胞质分裂为连续型,四分体主要为四面体形。成熟花粉粒为3-细胞型。     

'秦冠'苹果花粉培养及微丝骨架的变化

以'秦冠'苹果花粉为试材,采用花粉离体培养法,研究了不同培养基组分以及温度对苹果花粉萌发的影响.结果表明:(1)蔗糖和硼酸在一定质量浓度范围内,对苹果花粉萌发及花粉管生长起促进作用,但超过一定质量浓度时则起抑制作用.秦冠苹果花粉最适的培养基为20%蔗糖和0.01%硼酸,花粉的萌发率可以达到60%.在此基础上,以Alexa Fluor 488phalloidin作为肌动蛋白微丝的探针,运用激光共聚焦显微镜技术,观察了苹果花粉萌发过程中微丝骨架的分布变化动态;(2)在未水合的苹果花粉粒中,均匀分布着短小弯曲、颗粒环形微丝.在水合而未萌发的的花粉中,微丝呈网状分布在胞质中,萌发沟部分肌动蛋白束网络较致密,中央胞质部分较疏松.花粉萌发后,微丝转变为平行排列,向花粉管伸长的方向延伸聚集,与花粉管纵向平行排列;(3)生长异常的花粉管内其微丝状态也异常.     

Latrunculin B处理后青杄花粉管微丝骨架和细胞超微结构的观察

本文应用荧光探针标记技术和透射电子显微镜研究微丝抑制刺(latrunculin b,LATB)处理青杄花粉管后,对其微丝骨架和超微结构的影响.结果表明:LATB剂量依赖性地抑制青杄花粉萌发和花粉管生长;应用荧光探针FTTC-鬼笔环肽标记花粉管中的微丝,发现用正常培养基培养的花粉管中,束状的F-actin以与花粉管长轴平行的方向排列,从花粉管基部一直延伸到花粉管亚顶端,而LATB处理导致微丝的解聚.通过透射电镜观察发现,LATB处理使花粉管顶端的透明区消失,顶端区域被一些空泡、脂粒等占据,线粒体膜破裂,高尔基体片层断裂成泡状结构以至解体.上述研究结果表明:微丝抑制荆LATB通过破坏花粉管微丝的组装和超微结构影响青秆花粉萌发及花粉管生长,因此微丝在青秆花粉萌发、花粉管极性生长模式的建立和维持过程中起重要作用.     

Latrunculin B处理后青杆花粉管微丝骨架和细胞超微结构的观察

本文应用荧光探针标记技术和透射电子显微镜研究微丝抑制剂（latrunculin b,LATB）处理青秆花粉管后,对其微丝骨架和超微结构的影响。结果表明：LATB剂量依赖性地抑制青秆花粉萌发和花粉管生长;应用荧光探针FITC-鬼笔环肽标记花粉管中的微丝,发现用正常培养基培养的花粉管中,柬状的F—actin以与花粉管长轴平行的方向排列,从花粉管基部一直延伸到花粉管亚顶端,而LATB处理导致微丝的解聚。通过透射电镜观察发现。LATB处理使花粉管顶端的透明区消失,顸端区域被一些空泡、脂粒等占据,线粒体膜破裂,高尔基体片层断裂成泡状结构以至解体。上述研究结果表明：微丝抑制剂LATB通过破坏花粉管微丝的组装和超微结构影响青秆花粉萌发及花粉管生长,因此微丝在青扦花粉萌发、花粉管极性生长模式的建立和维持过程中起重要作用。     

华北地区繁缕属Stellaria L.的花粉扫描电镜观察

利用扫描电子显微镜对华北地区繁缕属植物11种2变种进行了观察和研究。结果表明：华北繁缕属植物的花粉为球形,极少长球形;萌发孔类型为散孔型,萌发孔8~18个;孔膜突出或下陷,具疣状或颗粒状附属物;表面纹饰为刺状,夹杂有小穴分布。孔膜的特点、孔穴的密度、萌发孔的数目等在种内表现出了多变性。花粉形态在该属内表现出较高的一致性,但在类群的划分方面意义不大。     

激光诱导杨树单性生殖的研究

试验选用杨树材料２５种,结合水增杂交和组织培养技术,用Ｈｅ－Ｎｅ和ＣＯ２激光不同剂量照射离体花药、子房、花粉和水培枝雌雄花序等结果发现Ｈｅ－ｎｅ激光照射剂量２０（Ｊ．ｃｍ＾－２）是一个有效剂量值。与对照比较,激光诱导花药愈伤组织能促使花粉的芽分花。用未授粉的子房诱导孤雌生殖,应用激光刺激效应,还可使分化率提高。经对分化期根尖细胞 人,激光处理比对照绵畸变率提高３倍以上,同时加大了二倍性和混倍性细胞     

微波处理菘蓝种子的子叶发育与生物光子辐射的相关性

比较研究不同时间长度的微波辐照菘蓝种子对种子萌发率、淀粉酶活性、转氨酶活性、蛋白酶活性、蛋白质含量、游离氨基酸含量、总DNA含量、子叶发育状况及其生物光子辐射强度的影响.采用微波辐射浸泡3h的菘蓝(Isatis ind igotica Fort)种子.与对照相比,四种处理均能不同程度提高菘蓝种子萌发率、淀粉酶活性、转氨酶活性、蛋白酶活性,促进蛋白质、游离氨基酸、DNA合成,促进子叶发育,提高了生物光子辐射强度.低剂量微波辐射能提高种子生理生化代谢机能,促进种子萌发和幼苗生长发育,研究发现8 s微波预处理效果最为显著.     

水稻花粉白苗原质体的超微形态观察

通过透射电镜观察了水稻花药培育产生的白苗、再分化白苗及绿苗,发现花粉绿苗的叶绿体和水稻正常植株的叶绿体在超微形态上是相同的。但是在花粉白苗质体观察中未发现能发育成正常叶绿体的质体中心及发育完好的基粒片层和基质片层。在观察中还发现花粉白苗原质体形成有增殖分裂和直接形成两种方式,但不论哪种方式其初始原质体都具有内、外二层被膜(而每层又都是双层的。)内膜内有大量的核糖核蛋白体。当原质体继续发育时内     

牙体玻璃离子充填材料边缘微渗漏的激光扫描共聚焦显微镜与金相显微镜比较研究

目的:在两种不同显微镜下定量观测人离体牙充填玻璃离子水门汀后边缘微渗漏的情况,并对两种方法进行比较.方法:选取新鲜无龋前磨牙,备洞,充填玻璃离子水门汀,37℃水浴条件下分别置于0.1%罗丹明B荧光染料或1%甲基蓝溶液浸染,激光扫描共聚焦显微镜和金相显微镜下分别测量染液渗入深度,定量评价微渗漏程度,对两种方法的检测结果进...     

实时荧光定量PCR检测人肝癌组织皮层肌动蛋白基因

目的建立实时荧光定量PCR检测皮层肌动蛋白基因表达水平的方法。方法提取人肝癌组织总RNA,RT—PCR扩增CTTN和GAPDH基因片段并分别构建两片段阳性表达载体。采用SYBR Green I实时荧光定量PCR绘制两基因拷贝数标准曲线,实测人肝癌标本并进行方法学评价。结果成功构建pMD18-T（＋）／CTTN和pMD18-T（＋）／GAPDH重组质粒。CTTN和GAPDH基因模板拷贝数分别在1．6×10^3-1．6×10^7和1．6×10^4-1．6×10^7之间时标准曲线有良好线性关系,R^2分别为0．996和0．985。由Ct值统计两基因组内变异系数分别为0．11％～2．25％和0．75％-3．63％;组间变异系数分别为0．83％～1．48％和0．47％～1．36％。组间无统计学差异（P〉0．05）。结论成功建立实时荧光定量PCR检测人肝癌组织CTTN基因的方法,为研究人肝癌组织CTTN基因表达水平奠定了方法学基础。     

药用植物北细辛小孢子发生及雄配子体发育的研究

利用光学显微镜和扫描电子显微镜研究了药用植物北细辛(Asarum heterotropoides)小孢子发生及雄配子体的发育过程.结果表明:北细辛有12枚雄蕊,上下两轮各6枚,相间排列.花药的着生方式为背着药,成熟花药开裂方式为纵裂.花药横切面呈碟形,具4个小孢子囊.小孢子母细胞减数分裂属于同时型,小孢子在四分体中的排...     

平场定量相位显微镜在骨髓间充质干细胞线粒体动力学观察中的应用研究（特邀）

分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,传代纯化后接种至共聚焦培养皿,置于自主研发搭建的平场定量相位显微镜下,利用荧光及相位双通道证实线粒体特征后,进行长时间无标记观察,分析平场定量相位显微镜观察到的线粒体分裂、融合过程,以及细胞凋亡过程中的线粒体变化。平场定量相位显微镜无标记观察到的线粒体可与荧光标记的线粒体完全重叠,表明平场定量相位显微镜可以清晰观察线粒体并进行无标记高分辨率成像。同时,平场定量相位显微镜可以对培养条件下的骨髓间充质干细胞进行长时间无标记观察,并高分辨率记录线粒体分裂、融合过程。此外,还利用平场定量相位显微镜首次完整记录了CCCP作用下线粒体的变化,该变化直观地呈现了线粒体途径的细胞凋亡过程。平场定量相位显微镜可以对培养的细胞进行长时间无标记高分辨率观察,为线粒体动力学的研究提供了一种新的观察手段。     

PTEN在氯化锂-匹罗卡品癫痫模型中的表达研究

目的：检测第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten ,PTEN）在癫痫模型大鼠中的表达情况,初步探讨其在癫痫发病中的作用。方法：成年雄性SD 大鼠腹腔注射氯化锂-匹罗卡品（lithium -pilocarpine ）构建癫痫模型,分别在癫痫发作后不同时间点（1 d、3 d、7 d、14 d、30 d）提取海马组织,利用荧光定量PCR和western blot分别测定PTEN mRNA和蛋白质的表达。结果：荧光定量PCR和western blot显示,PTEN mRNA 和蛋白质在癫痫发作后1 d的表达显著降低（P＜0．05）,到30 d 时仍维持在较低的水平（P＜0．05）。结论：PTEN在氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马组织中表达的降低,提示PTEN可能参与了癫痫的发生发展过程。     

枣果实同化物韧皮部卸载和运输途径研究

目的:为揭示中宁圆枣果实同化物韧皮部卸载和运输途径.方法:该研究采用荧光活细胞示踪和激光共聚焦显微镜CLSM方法实时观察不同发育时期中宁圆枣果实同化物韧皮部卸载运输途径.结果:膨大前期CF或同化物通过共质体联系从韧皮部卸出到了周围的薄壁组织中,果实的韧皮部中及其周围的薄壁细胞中均具有明显的CF绿色荧光,Texas-Re...     

一种两亲性荧光探针体外检测牙菌斑生物膜的方法

牙菌斑生物膜与口腔疾病的发生密切相关,因此开发新型的牙菌斑生物膜检测方法具有重要应用价值。本文建立了一种基于两亲性荧光探针TR4的牙菌斑生物膜体外检测方法。该荧光探针由疏水部分四苯基乙烯（ TPE）、棕榈酸和亲水多肽R4组成,三者的功能分别是荧光生发、粒子组装与静电吸附,从而实现紧密结合牙菌斑生物膜并发光。 TR4与牙菌斑生物膜作用时间短、反应条件简单,室温孵育1 min后检测其荧光强度变化,即可实现对牙菌斑生物膜快速、便捷的检测分析。荧光光谱也证实TR4荧光强度与牙菌斑生物膜浓度正相关,有望实现牙菌斑生物膜的定量检测。进一步通过透射电镜和共聚焦显微镜观察发现TR4探针通过静电吸附作用聚集在牙菌斑生物膜表面并自组装形成纳米粒子,从而诱导荧光基团TPE发光。