文蛤多肽的体外抗癌活性研究

采用硫酸铵沉淀、有机溶剂分离、Sephadex G-25分子筛层析等实验方法,从文蛤肉中提取了一种低分子量的多肽,命名为Mer2．本文以溴化二苯偶氮盐（MTT）法检测Mer2对体外培养的癌细胞的抑制作用．结果表明Mer2对体外培养的人肝癌细胞株（HepG2）、宫颈癌细胞株（Hela）、胆管癌细胞株（QBC939）、肺癌细胞株（SPC—A-1和LTEP—a-2）的生长均有很强的抑制作用,且抑制效果随着Mer2含量的增高和处理时间的延长而增强,证明Mer2具有广谱的抗癌活性．其中Mer2对人肝癌HepG2细胞株抑制作用最为显著,光学显微镜观察经Mer2细胞培养液处理后的细胞形态发生明显的改变,流式细胞仪实验的结果表明处理后的细胞周期发生明显的改变,并在G0／G1期前出现凋亡峰．     

文蛤抗癌多肽对N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶活力的影响

从文蛤体中分离纯化得到了抗癌多肽,研究该多肽对N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力的影响,结果显示文蛤抗癌多肽对该酶有明显的抑制作用.在本文中,我们将深入地研究其抑制作用机理和抑制效应类型,结果表明:随着文蛤多肽加入量的增大,该酶活力呈指数下降,测得导致酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)为112.9 μg/cm3,该多肽对酶的抑制作用是一种可逆过程,抑制机理表现为混合型抑制类型,对游离酶(E)的抑制常数(KI)和酶-底物络合物的抑制常数(KIS)分别为77.03和697.44μg/cm3,说明文蛤抗癌多肽与游离酶的结合导致酶活力的丧失,明显的强于对酶-底物络合物的抑制效应,底物的存在对该酶被文蛤抗癌多肽抑制作用起了保护作用.     

帘文蛤精子超微结构及与其他双壳贝类的比较

利用扫描电镜和透射电镜技术,详细观察了帘文蛤（Meretrix lyrata）精子的形态和超微结构.研究发现,帘文蛤的精子为典型的原生型,全长42.2±1.8μm,包括头部、中段和尾部三部分.头部为稍弯曲的狭茧形,长约2.4μm,由前端的顶体和其后的细胞核组成,顶体呈倒＂V＂形,前端电子密度较小,后端电子密度较大;核内含有高度浓缩的染色质,可见染色较浅的核泡存在,无核前窝,有明显核后窝和植入窝.中段由5个呈辐射状排列的线粒体和中央的2个相互垂直的中心粒复合体构成,线粒体近球形,由内、外两层膜组成.尾部鞭毛长39.3±1.9μm,由波浪状质膜和包裹其中的轴丝组成.另外,将帘蛤科（Veneridae）尤其是文蛤属（Meretrix）贝类精子超微结构与其他贝类进行了比较和分析,为文蛤属的种类鉴别提供细胞学依据.     

红壳色文蛤选育子代各壳色的形态分化及养殖效果的比较

以红壳色为目标性状,于2009年进行了文蛤(Meretrix meretrix)的群体选育研究,建立了红壳色选系子一代(Fl),对子一代壳色种类、分布频率及其数量性状进行了统计、测量和分析,并对各壳色的形态、生长速度做了研究.结果表明,文蛤壳色具有多态性,红色、黄色、白双、黄双、波纹的分布频率分别为75.58%、8.55%、0.53%、14.83%、0.50%.红壳色亲本的子代中出现红色∶花色=3∶1,符合孟德尔遗传模式.聚类分析与欧氏距离矩阵结果表明,文蛤波纹与黄色遗传距离最近,白双与黄双遗传距离相近,与红壳色的遗传距离最远.主成分分析显示白双文蛤与黄双文蛤在空间分布上相对重叠,波纹文蛤与黄色文蛤具有较高的重叠率,而红壳色文蛤相对分散,从而进一步说明5种壳色文蛤的遗传距离关系.经过1a同池养殖,子代壳长多数已达到10～30 mm,红壳色文蛤的日生长率为0.20%,花壳色文蛤的日生长率为0.18%,且红壳色文蛤的相对比较生长速度比花壳色文蛤快10.41%.红壳色文蛤选育子代的壳长与壳宽、壳高、粒重存在一定的回归关系.红壳色文蛤壳长对壳宽、壳高、粒重的回归方程分别为:y1=0.502 4x1-0.556 0(R2=0.992 0)、y3=0.8103x3+0.620 0(R2=0.995 6)、y5=0.000 3x25.9029(R2=0.991 9),花壳色文蛤壳长对壳宽、壳高、粒重的回归方程分别为:y2=0.495 3x2-0.419 2(R2=0.990 9)、y4=0.798 5x4+0.793 5(R2=0.995 6)、y6=0.000 4x26.845 8(R2=0.993 4).研究结果为文蛤的红壳色定向选育奠定了理论基础.     

扇贝多肽在体外对免疫细胞活性的影响及其抗紫外线的氧化损伤作用

采用噻唑盐（MTT）比色方法研究在紫外线辐射损伤条件下扇贝多肽对免疫细胞的保护作用，并探讨扇贝多肽对胸腺细胞和脾细胞活性的影响，结果表明，扇贝多肽具有抗紫外线氧化损伤的作用，可减轻或抑制紫外线对胸腺细胞和脾细胞的氧化损伤，并且呈剂量依赖性，扇贝多肽在0.5%-10.0%的浓度范围内，其抗氧化能力随浓度的增高而增强，在正常条件下可显著增强免疫细胞的活性，并且可拮抗雌激素对免疫细胞的抑制作用。提示扇贝多肽不仅具有抗氧化损伤作用，而且具有免疫增强使用。     

海参花营养成分分析及其提取物对人卵巢癌细胞雌二醇分泌的影响

海参花是雌海参的性腺,在海参加工过程中常被作为下脚料,但它含有丰富的营养成分和多种活性因子,本研究检测了海参花的一般营养物质、元素含量以及氨基酸组成,同时,研究了海参花水提取物和乙醇提取物对人卵巢癌OVCAR 3细胞增殖以及对其雌二醇分泌的影响。结果表明,海参花含水量为86.63%,粗蛋白、粗脂质和粗多糖（干重）占比分别为65.06%、14.82%和1.93%。共检测出17种氨基酸,总氨基酸含量为519.09 mg/kg。其中,必需氨基酸含量为197.04 mg/kg。海参花还含有多种对人体有益的元素。海参花提取物对人卵巢癌OVCAR 3细胞的增殖有明显的抑制作用,海参花水提取物、乙醇提取物均可提高细胞培养液上清液中雌二醇的含量,其中乙醇提取物可显著提高上清液中雌二醇的含量（P<0.01）。以上表明,海参花的营养丰富,其提取物能显著促进人卵巢癌OVCAR 3细胞雌二醇的分泌调节,因此具有很高的开发利用价值。     

益肺饮含药血清对肺癌A549细胞增殖凋亡的影响

目的：研究中药复方益肺饮不同浓度含药血清对肺癌A549细胞增殖凋亡的影响。方法：将SD小鼠分为2组,分别灌胃益肺饮和0.9%氯化钠注射液,获得5%、10%、15%、20%的益肺饮含药血清和10%无药血清。A549细胞进行培养后分为实验组、对照组和空白对照组,实验组加入不同浓度的含药血清,对照组加入10%无药血清,空白对照组加入10%胎牛血清。采用CCK-8法观察各组血清对A549细胞的增殖影响;采用流式细胞仪检测不同浓度含药血清对A549细胞凋亡的影响。结果：与空白对照组相比,各浓度益肺饮含药血清对A549细胞均有明显的增殖抑制作用（P<0.05）,其抑制率随药物浓度递增而增强,5%含药血清组与20%含药血清组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术检测结果表明,不同浓度下含药血清组凋亡率明显优于对照组及空白对照组（P<0.05）;不同浓度含药血清组组内比较,5%、10%、15%各浓度之间两两比较差异有统计学意义（P<0.05）,但15%与20%浓度组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论：益肺饮含药血清对肺癌A549细胞具有明显的增殖抑制、诱导凋亡的作用,并具有一定的浓度依赖性。     

溶藻细菌DH-e代谢产物对东海原甲藻的抑制作用

从浙江沿海地区赤潮多发区分离获得一株对东海原甲藻(Prorocentrum donghaiense)具有高效溶藻作用的细菌DH-e,研究该菌的溶藻作用方式和对东海原甲藻的生理功能与细胞结构的影响.结果发现其溶藻作用方式为间接溶藻,溶藻效应呈现出作用浓度和时间依赖性,作用浓度0.5%~2.0%,时间为32 h时,溶藻率均达80%以上,具有短期高效的溶藻效应;溶藻活性物质分子量小于2 k Da,具有耐低高温、强酸碱的特性;代谢产物对叶绿素a造成严重的破坏和分解,并改变胞内总糖含量,影响生理代谢活性;SEM与AO/EB双染检测发现溶藻活性物质能够破坏藻细胞膜完整性,显著改变藻细胞内部结构,造成内容物大量释放.     

槲皮素对人成骨肉瘤MG-63细胞体外增殖与凋亡的影响

目的：观察槲皮素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法：不同浓度的槲皮素作用于体外培养的MG-63细胞,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测槲皮素对MG-63细胞增殖的抑制能力,流式细胞术（FCM）检测槲皮素对MG-63细胞凋亡的影响。结果：槲皮素可显著抑制MG-63细胞增殖,具有明显剂量和时间依赖性;槲皮素可明显诱导MG-63细胞凋亡。结论：槲皮素能够抑制MG-63细胞增殖,诱导MG-63细胞凋亡。     

极大螺旋藻胞内多糖对体外肿瘤细胞抑制作用的实验研究

研究了极大螺旋藻(Spirulina maxima)胞内多糖对SMMC7721等肿瘤细胞系的生长及凋亡的影响。在体外培养条件下,用半抑制浓度(80,5 mg/L)的极大螺旋藻胞内多糖(IPSⅠ,IPSⅡ)处理肿瘤细胞,并用MTT,SRB,DNA ladder,AnnexinⅤ等方法测定。结果表明,IPSⅠ(80 mg/L)对SMMC7721,A549,HeLa,U251等肿瘤细胞系抑制率分别为64.97%、46.1%、43.3%、27.02%;IPSⅡ(5 mg/L)能诱导SMMC7721细胞凋亡。     

文蛤外套膜组织与细胞培养

以文蛤(Meretrix meretrix Linnaeus)外套膜为材料,采用改良的M199培养基,在不同温度和盐平衡条件下进行组织与细胞培养。培养结果显示,24 h左右外套膜组织边缘有细胞爬出,48 h后开始形成单层新生细胞,并发展为生长晕,7~10 d细胞基本长满培养瓶底。细胞培养可持续30~35 d。作者还描述了培养过程中出现的3种不同形态特征的细胞,并对37℃培养条件下细胞的生长及分裂特征作了描述与讨论。     

文蛤稚贝的摄食、呼吸和排泄研究

利用实验生态学的方法研究了在25℃下文蛤稚贝对4种单细胞藻类的摄食率和不同温度对文蛤稚贝呼吸、排泄的影响。研究结果表明,单位质量的文蛤稚贝在单位时间内滤食4种藻类的质量和个数差异极为显著;温度对文蛤稚贝的耗氧率、排氨率也有显著影响,在12~32℃范围内,耗氧率、排氨率随着温度的升高而增大,O∶N值也随之而升高;在3组试验温度下呼吸Q10的平均值为6.06,排泄Q10的平均值为2.59。     

三丁基锡对文蛤外套膜代谢酶活性的影响

用实验生态学方法，观察浓度为0．1、1、10ng／dm^3的三丁基锡暴露2、8、20d以及恢复7、20d后对文蛤外套膜酸性磷酸酶、碱性磷酸酶以及Na^＋、K^＋-ATP酶活性的影响．结果表明各浓度组的三丁基锡在暴露早期（2d），外套膜中酸性、碱性磷酸酶和Na^＋、K^＋-ATP酶活性与对照组比较没有显著差异，随着暴露时间的延长，高浓度的TBT暴露对AKP表现出激活作用，对ACP和Na^＋、K^＋-ATP酶活性则具有抑制作用．结果显示Na^＋、K^＋-ATP酶可作为有机锡暴露的生物标志物．     

我国沿海三个文蛤地理群的RAPD分析

利用RAPD技术分析了我国沿海辽宁、江苏、广西省3个文蛤地理群的遗传变异,总共用60个随机引物进行了RAPD扩增,其中50个随机引物得到了扩增产物,选取其中15个随机引物的扩增图谱进行相似性系数和遗传距离的计算,结果为辽宁(LW)、江苏(JW)、广西(GW)群体内的遗传距离分别为:0.169±0.034,0.117±0.032,0.108±0.031.LW,JW之间为0.222±0.036;JW,GW之间为0.209±0.043;LW,GW之间为0.316±0.047,同时发现引物s396-900bp的标记为JW和LW所特有;引物s433-250bp标记为JW和GW所特有,由此可作为这3个地理群的分子标记.     

养殖文蛤体内寄生的一种吸虫幼虫及宿主组织病理学

作为文蛤吸虫病害研究的基础资料,报道了寄生在文蛤体内的1种复殖吸虫幼虫的形态结构及宿主由此所产生的组织病理学变化。研究表明：该吸虫分别为咆蚴和尾蚴。咆蚴圆筒形,内含不同发育阶段的尾蚴。成熟尾蚴体成扁平舌状,具有口吸盘、腹吸盘,1对眼点和1条细长无刺的尾巴。该吸虫主要侵占生殖腺,少部分幼虫进入附近的消化盲囊、鳃、肾等部位。轻微感染者,生殖滤泡萎缩,生殖细胞发育滞后;严重感染的宿主,生殖腺完全被侵占并耗尽。消化盲囊、鳃、肾等器官组织也因幼虫感染呈现不同程度的病理学变化;严重者上皮细胞水肿或脱落,肌肉组织结构紊乱或溶解等。本工作同时显示,吸虫寄生可诱发宿主血淋巴细胞大量增生,并产生凝集、组织浸润及形成包囊等免疫反应。     

文蛤外套腔中一种寄生桡足类的扫描电镜观察

本文应用扫描电镜对寄生于文蛤外套腔中的一种桡足类Ｏｓｔｒｉｎｃｏｌａｋｏｅ的外部形态进行了观察。该桡足类是作者于１９８８和１９８９年秋季，在江苏南部沿海文蛤大批死亡原因调查时，在文蛤外套腔中发现的。寄生于贝类的桡足类在我国属首次报道。     

Effects of tributyltin at environmental levels on monooxygenase system of digestive gland in hard clam Meretrix meretrix

The effects on ethoxyresorufin O-deethylase (EROD), NADPH-cytochrome c reductase and NADH cytochrome b5 reductase activities of digestive gland in Meretrix meretrix exposed to tributyltin (TBT) at environmental levels (0.1,1.0, 10.0 ng/dm3 as stannum concentration), in experimental condition, were evaluated. The EROD, NADH cytochrome b5 reductase activities were significantly inhibited after exposure to 10.0 ng/dm3 TBT for 8 and 20 d, the NADPH cytochrome c reductase activities were significantly inhibited after exposure to 0.1,1.0 and 10.0 ng/dm3 TBT for 8 d and to 1.0 and 10.0 ng/dm3 for 20 d, as compared with the matched control, while NADH cytochrome b5 reductases and NADPH cytochrome c reductase activities were induced after exposure to 10.0 ng/dm3 TBT for 2 d. The EROD activity in the 10 ng/dm3 group, and the NADH cytochrome b5 reductases activities in 1.0 and 10.0 ng/dm3 groups, were significantly induced when transferred to clean recovery tanks for 7 d. The three enzymic activities in the clams exposed to TBT were recovered to the level corresponding to that of the control group after transfer to clean recovery tanks for 20 d. NADPH cytochrome c reductase activity in Meretrix meretrix seems to be more sensitive to exposure of TBT than that of the EROD and NADH cytochrome b5 reductases. The results suggest that induction and inhibition by TBT to the monooxygenase system enzymic activity in Meretrix meretrix would simultaneously exist. The enzymic activities were inhibited by exposure for a long time. The results suggest that inhibition of the monooxygenase system should be an indication of the exposure to environmentally relevant concentrations of TBT for a long time.     

龙须菜在滩涂贝藻混养系统中的生态作用模拟研究

2005年5-7月,在室内采用实验生态学方法对壳长为48.35 mm±4.27 mm文蛤(Meretrix meretrix Linnaeus)成贝和龙须菜(Gracilaria lemaneiformis Weber-van Bosse)的4种配比(生物量配比分别为0∶1、1∶1、2∶1、4∶1)进行了混养实验,每周测定养殖水体中营养盐变化情况以及文蛤、龙须菜的存活和生长情况等。实验表明,加入了大型藻类的文蛤养殖系统,相对于空白对照组,其氨氮、亚硝氮和磷酸盐浓度显著降低,NH4-N从5.52μmol/L降至1.30μmol/L、NO2-N从0.31μmol/L降至0.06μmol/L,而PO4-P从0.48μmol/L降至0.006μmol/L。实验结束后,文蛤及龙须菜生长情况良好,文蛤特定生长率最高达到了0.84%,龙须菜最高则达到了1.79%。本实验条件下,在文蛤成贝养殖系统中加入大型藻类,对养殖水体中的NH4-N、NO2-N、PO4-P有明显的吸收效果,吸收率分别为86%、98%和99%,起到了良好的生态作用。