仿刺参糖胺聚糖对骨髓抑制贫血小鼠外周血及骨髓细胞周期的影响△

目的：观察仿刺参糖胺聚糖(HGAG)对环磷酰胺诱导的骨髓抑制贫血小鼠外周血及骨髓细胞周期的影响。方法：将40只雄性昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、HGAG治疗组(1,5,15mg.kg_-1),每组8只。除正常组外其余各组腹腔注射环磷酰胺100mg.kg_-1制备贫血小鼠模型,每天1次连续3天,并于造模当日起,HGAG给药组腹腔注射不同浓度的HGAG,正常组和模型组腹腔注射生理盐水,每天1次连续7天。用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法、流式细胞术分别检测HGAG对贫血小鼠外周血、骨髓有核细胞数和骨髓细胞周期的影响。结果：HGAG低、中、高剂量组能显著升高外周血WBC和HGB,且高剂量组还能明显升高外周血RBC和PLT。HGAG三个剂量组能显著增加小鼠骨髓有核细胞数和脾脏指数,而且能够促进骨髓G₀/G₁期细胞向S期及S期细胞向G₂/M期细胞的转化,显著升高增殖指数。结论：HGAG能够解除细胞周期阻滞,促进骨髓造血细胞的增殖,增加外周血细胞、骨髓有核细胞的数量和升高脾脏指数,从而促进骨髓抑制贫血小鼠造血功能的恢复     

刺梨汁对骨髓抑制小鼠造血功能的调控作用

目的 探讨刺梨汁对环磷酰胺合并⁶⁰Co致骨髓抑制小鼠造血功能的影响,研究其促进血细胞上调的作用机制。方法 双抗体夹心法检测外周血象、骨髓基质中红细胞生成素（EPO）、血小板生成素（TPO）、粒细胞生长因子（GCSF）的量。结果 刺梨汁能明显改善骨髓抑制小鼠外周血象;能有效平衡微环境中TPO的量;改善EPO的表达;对骨髓抑制小鼠骨髓细胞上清中GCSF有明显的正调控作用。结论 刺梨汁能提高骨髓抑制小鼠外周血血细胞和骨髓有核细胞计数;可促进骨髓抑制小鼠骨髓细胞从G₀/G₁期进入增殖周期;并能有效调节骨髓微环境中TPO、EPO、GCSF的表达,从而促进骨髓抑制小鼠的造血功能,可作为一种治疗贫血的辅助保健药物。     

三尖杉酯碱对小鼠白血病L-1210细胞和正常骨髓干细胞的影响

用放射自显影技术观察了三尖杉酯碱对小鼠白血病L-1210细胞周期的影响。氚标记的胸腺嘧啶脱氧核苷脉冲标记试验证明,接种后第6天的L-1210细胞的一代周期时间(T_C)为15.8小时,其S期(T_S),G₁期(T_G1),G₂期(T_G3)及M期时间(T_M)分别为10.7,2.0,2.7,0.4小时。腹腔注射三尖杉酯碱30μg/只一次,L-1210细胞的有丝分裂指数(MI)明显降低,其标记指数(LI)及每个细胞的标记颗粒数也明显减少,由S期向G₂及M期移行时间延长。鉴于三尖杉酯碱的限制性毒性为骨髓抑制,我们用脾集落形成试验(CFU-S)研究了三尖杉酯碱对CFW纯种小鼠骨髓干细胞的影响。实验表明,三尖杉酯碱的剂量小于0.5mg/kg时,对骨髓干细胞无明显影响。当剂量高于此剂量时,三尖杉酯碱对骨髓干细胞的杀伤呈剂量依赖性。实验证明,人参总皂甙对三尖杉酯碱的骨髓毒性有一定保护作用。     

人参皂苷Rg1对移植性白血病模型小鼠的作用

目的 研究人参皂苷Rg₁对移植性白血病模型小鼠的作用。方法 采用免疫磁性分选法（MACS）从K562细胞中分离、纯化CD34⁺CD38^-人白血病干细胞（CD34⁺CD38^- LSCs）,流式细胞术检测分选细胞纯度,台盼蓝染色测定分选细胞活性。将6～8周雌性NOD/SCID小鼠27只随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg₁（200 mg/kg）组,每组9只,模型组和人参皂苷Rg₁组通过尾iv移植CD34⁺CD38^- LSCs构建白血病小鼠模型,ip给药30 d。观察各组小鼠一般情况及腹部包块变化;全自动血常规检测仪检测外周血白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板水平;免疫组化法检测肝、脾脏病理学变化;流式细胞仪分析骨髓细胞周期;CCK-8法检测各组骨髓细胞的增殖能力;细胞免疫荧光染色鉴定骨髓细胞CD34阳性表达情况。结果 分选前K562细胞中CD34⁺CD38^- LSCs细胞群百分比为（9.64±1.14）%,分选后CD34⁺CD38^- LSCs纯度可达（96.45±1.63）%;台盼蓝染色显示分选后细胞活性为（95.26±2.16）%。与对照组比较,模型组小鼠腹部包块明显,生存情况较差,体质量显著下降（P<0.05）;白细胞数显著增高,红细胞数、血红蛋白水平、血小板数均显著下降（P<0.05）;肝、脾脏结构被破坏,有大量白细胞浸润;骨髓细胞周期检测显示G₀/G₁期比例显著下降（P<0.05）,S期比例显著升高（P<0.05）;骨髓细胞增殖活力显著升高（P<0.05）。与模型组比较,人参皂苷Rg₁组小鼠腹部包块明显减小,生存情况好转,体质量显著增加（P<0.05）;白细胞总数显著下降（P<0.05）,红细胞数、血红蛋白水平、血小板数均显著升高（P<0.05）;肝、脾脏结构明显恢复;骨髓细胞G₀/G₁期比例显著升高（P<0.05）,G₂/M期和S期比例显著下降（P<0.05）。细胞免疫荧光检测显示,模型组和人参皂苷Rg₁组中小鼠的骨髓细胞中存在大量的人源白血病细胞。结论 NOD/SCID小鼠尾iv移植CD34⁺CD38^- LSCs可成功构建急性髓系白血病小鼠模型,人参皂苷Rg₁能有效缓解NOD/SCID小鼠的白血病症状。     

λ-卡拉胶寡糖对人脐静脉内皮细胞的增殖抑制作用及凋亡相关基因表达

为了探讨λ-卡拉胶寡糖(λ-carrageenan oligosaccharides， λ-CO)在体外抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖作用及其分子机制， 采用MTT法检测λ-CO对HUVEC存活率的影响， 通过流式细胞技术检测λ-CO对HUVEC增殖周期的影响， 测定细胞凋亡率， 检测用药前后活性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的变化。同时采用半定量RT-PCR方法检测凋亡相关基因mRNA的表达情况。MTT检测结果显示，λ-CO在高浓度(1 mg·mL^-1)能明显抑制细胞增殖。流式细胞仪检测到λ-CO作用HUVEC后， 出现早期凋亡细胞， 且凋亡呈浓度和时间依赖性； 对细胞增殖周期的检测结果显示， 与对照组相比，λ-CO作用后G₁期细胞比例减少， S期比例增加， 并出现凋亡峰； 活化的caspase-3比例亦随用药浓度的加大而增加。RT-PCR检测发现0.3 mg·mL^-1λ-CO作用人脐静脉内皮细胞12、 24和36 h后，细胞TNFα、 p53、 caspase-8、 caspase-3的mRNA表达上调。表明λ-CO能剂量依赖性地诱导HUVEC细胞凋亡， 并引起HUVEC的S期阻滞， 其机制可能与促进TNFα、 p53、 caspase-8、 caspase-3等基因的转录， 使细胞内活化的caspase-3水平增加有关。     

积雪草苷对小鼠胶原诱导性关节炎的抑制作用

研究积雪草苷(asiaticoside)对小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis，CIA)的作用，并初步探讨其作用机制。建立CIA模型，检测小鼠足爪炎症的肿胀度，石蜡切片HE染色对关节组织进行病理检查，MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应，Western blotting法检测关节软组织中环氧酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)蛋白的表达，EIA法测定关节软组织中前列腺素E₂(prostaglandin E₂，PGE₂)水平，ELISA法检测血清中炎症因子TNF-α、IL-6的水平。积雪草苷(10，20及40 mg·kg^-1)灌胃给药能剂量依赖性地减轻CIA小鼠的关节炎症状，抑制CIA小鼠C II胶原诱导的淋巴细胞增殖反应，减少CIA小鼠踝关节软组织中高水平的COX-2表达及PGE₂含量，降低血清中炎症因子TNF-α和IL-6的水平；同时病理检查发现，可以改善局部关节炎症状，抑制CIA小鼠滑膜细胞增生，减轻炎性细胞浸润。结果表明，积雪草苷对CIA具有抑制作用，其机制可能与抑制淋巴细胞增殖、减少COX-2表达及促进炎症因子TNF-α、IL-6释放等有关。     

鸡血藤单体化合物对造血祖细胞增殖的调控作用研究

目的研究从中药鸡血藤(spatholobus suberectus dunn,SSD)中提取的9个单体化合物对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响,明确鸡血藤补血活血作用的主要物质基础。方法采用血清药理学方法,通过造血祖细胞培养观察9个化合物对骨髓抑制小鼠CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-Meg生长的作用。结果腹腔注射鸡血藤各单体后的含药血清对骨髓抑制小鼠造血祖细胞的生长有较强的刺激作用:各单体化合物(除焦性粘液酸、芒柄花苷外)含药血清均可刺激CFU-GM的生长(P<0.01);儿茶素、没食子儿茶素、丁香酸、表儿茶素的含药血清对CFU-E、BFU-E和CFU-Meg的刺激增殖作用与对照组比较亦差异有显著性(P<0.05)。结论从中药鸡血藤中提取的单体化合物可刺激骨髓抑制小鼠造血祖细胞的增殖,缓解其造血祖细胞内源性增殖缺陷,其中儿茶素的刺激增殖活性相对最强,可能是鸡血藤补血活血的主要物质基础。     

人参皂苷Rg3对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察人参皂苷Rg3对雌激素受体阳性的乳腺癌细胞MCF-7增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用MTT法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期分布以及凋亡比率,通过Transwell小室观察细胞侵袭力,RT-PCR法检测细胞中的MMP-9 mRNA的表达。结果 与对照组相比,人参皂苷Rg3能显著抑制MCF-7细胞的增殖;G₀/G₁期及S期细胞比例减少,而G₂/M期细胞比例显著增加;同时细胞凋亡比率亦明显提升,而细胞侵袭指数降低,且呈现良好的剂量、时间依赖性。同时人参皂苷Rg3还能显著抑制细胞中MMP-9 mRNA的表达水平(P<0.05)。结论 人参皂苷Rg3能抑制MCF-7细胞的增殖和侵袭,其作用机制可能与其能降低MMP-9基因的表达有关。     

大黄素可能通过抑制Akt信号通路诱导HL-60细胞凋亡

为研究大黄素(emodin)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡的影响及Akt信号通路在其中的作用, 应用MTT法检测大黄素对HL-60细胞增殖的影响；细胞周期分析、线粒体细胞凋亡流式检测法分析细胞周期变化及细胞凋亡；Western blotting检测Akt信号通路蛋白表达水平的变化。结果显示，大黄素能有效抑制HL-60细胞的增殖，作用48 h的IC₅₀约为20 μmol·L^-1， 并能诱导其凋亡, 随药物作用浓度的增加， 凋亡率也逐渐上升； 大黄素作用后， HL-60细胞G_0/G1期细胞增多， 而S期及G₂期的细胞减少； Western blotting检测结果显示， 大黄素下调HL-60细胞Akt、p-Akt、IκB-α、p-IκB-α、p65、p-p65、mTOR及p-mTOR蛋白的表达。因此,大黄素能有效抑制HL-60细胞增殖，将细胞阻滞于G_0/G1期，诱导其凋亡；Akt信号通路可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖、诱导凋亡的过程。     

Accelerated recovery from cyclophosphamide-induced leukopenia in mice administered a Japanese ethical herbal drug, Hochu-ekki-to

The effect of a Japanese ethical herbal drug, Hochu-ekki-to (HOT), on recovery from leukopenia induced by cyclophosphamide (CY) was investigated. Daily oral administration of 1000 mg/kg HOT into CY-treated mice significantly prevented decrease of leukocyte numbers in the peripheral blood and accelerated recovery from leukopenia. Ginsenoside Rgl extracted from Ginseng radix, a major herb of HOT, was one of the active ingredients. HOT increased numbers of neutrophils and monocytes in the peripheral blood compared with CY-treated control. Moreover, HOT augmented the resistance against Pseudomonas aeruginosa infection. The number of colony-forming units in the spleen (CFU-S) also increased in HOT-treated mice. The frequencies of IL-3-, GM-CSF- and IFN-gamma-producing cells increased in the spleen, bone marrow, liver and IEL on HOT treatment, and HOT clearly augmented the expressions of IL-3, GM-CSF and IFN-gamma mRNA in the spleen, bone marrow, liver and IEL except IL-3 and IFN-gamma mRNA in the IEL. These results suggest that HOT enhances the production of hematopoietic lymphokines, stimulates the proliferation of hematopoietic progenitor cells and consequently accelerates recovery from leukopenia in CY-treated mice. Additionally, IFN-gamma which HOT-augmented the production may contribute the protective effect against the bacterial infection by activating of phagocyte cells.     

4种重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素-6融合蛋白对环磷酰胺引起的小鼠白细胞减少的恢复作用

目的探讨 4种重组人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 /白细胞介素 6 (rhGM CSF/IL 6 )融合蛋白在小鼠体内的生物学活性 ,观察它们对环磷酰胺所致Balb/c系小鼠白细胞减少及造血功能损坏的影响。方法给小鼠注射环磷酰胺建立实验模型 ,分别同时注射融合蛋白 7d ,于第 13天摘除眼球采血 ,并进行外周血白细胞计数 ,骨髓有核细胞、单个核细胞记数及CFU GM的测定。结果 4种rhGM CSF/IL 6融合蛋白用药组与生理盐水对照组相比 ,小鼠外周血白细胞数 ,骨髓有核细胞和单个核细胞数以及骨髓CFU GM数均有所增加。结论 4种rhGM CSF /IL 6融合蛋白对环磷酰胺所致小鼠外周血白细胞数减少 ,骨髓有核细胞、单个核细胞数和骨髓CFU GM数减少以及造血功能的损坏具有不同程度的恢复作用。     

Effects of neopterin on the hematopoietic microenvironment of senescence-accelerated mice (SAM)

The pteridine neopterin (NP) is produced by monocytes and is known to be a useful marker of immunological activation, although, it remains elusive whether neopterin itself exhibits biological functions. Recently, we found that NP stimulates hematopoietic cell proliferation and differentiation by activating bone marrow stromal cell function. In order to elucidate the biological effect of NP on stromal cells, its effects on hematopoiesis was determined in the mouse model of age-related stromal impairment, senescence-accelerated mice (SAMs). An intraperitoneal administration of NP increased the number of peripheral leukocytes and CFU-GM in the bone marrow and spleen of young SAMs, however, no increase of CFU-GM in old SAMs (stromal impairment) was observed when compared with young SAMs. NP also increased the CFU-GM colony formation of bone marrow and spleen cells from young SAMs in a soft agar culture system, but it did not enhance CFU-GM colony formation of cells from old SAMs cultured in this system. Treatment with NP induced the production of hematopoietic stimulating factors, including IL-6 and GM-CSF, by bone marrow stromal cells from young SAMs but stromal cells from old SAMs did not respond to NP stimulation. Further studies will be required to clarify the mechanism by which NP stimulates the production of hematopoietic growth factors from stromal cells, the results of this study indicate that NP is a potent hematopoietic regulatory factor by activating stromal cell function(s).     

川芎嗪对甘油注射小鼠骨髓细胞转化修复肾小管损伤的影响

目的：通过对于骨髓移植后甘油注射所致肾小管损伤小鼠使用川芎嗪,粒巨噬细胞集落刺激因子（ GM-CSF ）,观察促进骨髓基质细胞增殖的因素在骨髓干细胞对于肾小管损伤后参与修复的影响。方法绿色荧光蛋白标记（ GFP）的C57BL／6转基因小鼠提供骨髓,同种无荧光标记的C57 BL／6小鼠分为生理盐水组（ n＝20）、20％川芎嗪干预组（ n＝20）、GM-CSF组干预组（ n＝20）进行血常规、肾功能、流式细胞仪以及肾脏病理检测,并采用荧光组织化学、免疫组织化学等方法观察绿色荧光在骨髓移植小鼠肾脏的分布及数量。结果经过骨髓移植以及甘油注射肾小管损伤后,三组在流式细胞仪结果中显示干预组GFP阳性细胞偏高（P＜0．05）,而病理结果显示：川芎嗪组病理评分结果较其他两组高（P＜0．05）,而GM-CSF有双向的表现。免疫组化显示干预组均有外源性的肾小管上皮细胞的增多（ P＜0．05）。结论川芎嗪和GM-CSF均可一定程度增强骨髓干细胞对肾小管损伤的修复作用。     

螺旋藻多糖对小鼠移植性肿瘤化疗后造血恢复及相关细胞因子的影响

目的：研究螺旋藻多糖（polysaccharide from spirulina platensis,PSP)对小鼠移植性肿瘤化疗后造血恢复及相关细胞因子的影响。方法：通过右前肢皮下接种肿瘤细胞形成小鼠移植性实体瘤，给予PSP边疆灌胃10d,d4给予环磷酰胺（CTX）腹腔注射连续3d。于d11，分别了外周细胞，骨髓有核细胞及CFU－S计数，用紫外分光光度计检测骨髓DNA含量，用双抗体夹心ELISA法检测血清中IL-1,IL-3,GM-CSF,TNF含量。结果：CTX可造成明显骨髓抑制，而PSP则提升了外周血细胞，增加了骨髓中有核细胞计数和DNA含量以及促进了CFU－S形成。此外，PSP还增加了血清中IL－1，IL－3，GM－CSF，TNF含量。结论：PSP可能通过促进内源性细胞因子的分泌来实现其促进小鼠移植性肿瘤化疗损伤后的造血恢复。     

Effect of SCG, 1,3-beta-D-glucan from Sparassis crispa on the hematopoietic response in cyclophosphamide induced leukopenic mice

Sparassis crispa Fr. is an edible mushroom recently cultivable in Japan. It contains a remarkably high content of 6-branched 1,3-beta-D-glucan showing antitumor activity. Using ion-exchange chromatography, a purified beta-glucan preparation, SCG, was prepared. In this study, we examined the hematopoietic response by SCG in cyclophosphamide (CY)-induced leukopenic mice. SCG enhanced the hematopoietic response in CY induced leukopenic mice by intraperitoneal routes over a wide range of concentrations. SCG enhanced the hematopoietic response in CY-treated mice by prior or post administration. Analyzing the leukocyte population by flow cytometry, monocytes and granulocytes in the peritoneal cavity, liver, spleen and bone marrow (BM) recovered faster than in the control group. The ratio of natural killer cells and gammadelta T cells in the liver, spleen and peritoneal cavity was also increased. In contrast, CD4+ CD8+ cells in the thymus were temporarily significantly decreased by the administration of SCG. Interleukin-6 (IL-6) production of CY+SCG-treated peritoneal exdated cells (PECs), spleen cells and bone marrow cells (BMCs) were higher than that of the CY-treated group. By in vitro culture of CY-treated PEC and spleen cells, IL-6 production was enhanced by the addition of SCG. These facts suggested the possibility that IL-6 might be a key cytokine for the enhanced hematopoietic response by SCG.     

Opposite effects on tumor growth depending on dose of Achyranthes bidentata polysaccharides in C57BL/6 mice

We report here the investigation on the effects of Achyranthes bidentata polysaccharides (ABPS) against Lewis lung cancer (LLC) in C57BL/6 mice. Depending on its doses administered in vivo, ABPS was shown to have inhibitory as well as stimulative effects on tumor growth in LLC-bearing C57BL/6 mice. ABPS at low dose could significantly inhibit LLC growth, while high dose treatment of ABPS stimulated, rather than inhibited, LLC growth in C57BL/6 mice. Tumor cell cycle analysis revealed that more tumor cells arrested at G2/M phase after daily low dose intraperitoneal injection of ABPS for consecutive 15 days. The spleen weight increased markedly in LLC-bearing C57BL/6 mice treated with high dose of ABPS. However, the spleen cytotoxicity activity was significantly despaired in mice of high dose treatment of ABPS. Furthermore, we demonstrated that the expressions of IL-6 mRNA and TNF-alpha mRNA were markedly up-regulated in spleens from mice treated with a high dose of ABPS by RT-PCR reactions, suggesting that the low dose of ABPS inhibits tumor growth via its effect on tumor cell cycle distribution, rather than activation of NK activity as previously suggested. We postulate that the stimulation of tumor growth by high dose of ABPS is associated with dysfunction of NK cell and up-regulation of IL-6 mRNA and TNF-alpha mRNA expression in murine spleen.     

微载体—基质细胞造血模型中小鼠骨髓细胞c—kit基因的表达

目的：检测小鼠原始造血细胞c-kit基因表达以评价体外模拟骨髓造血微环境。方法：建立微载体－基质细胞体外造血模型。根据已发表的小鼠c-kit基因序列设计引物，采用RT－PCR方法检测c-kit mRNA水平，并测定祖细胞集落产率。结果：小鼠骨髓造血细胞2周培养实验显示，粒系－巨噬系造血祖细胞集落产率（CFU－GM／10^5）：模型组比液体悬浮培养和单纯微载体基质细胞培养对照组集落产率之总和高2．1倍（t=2.869,P＜0．05）；原始造血细胞的c-kit基因表达水平（OD比率）：模型组比两个对照组之总和高3．1倍（t=2.858,P＜0．05）。结论：在没有外加细胞因子的条件下，微载体－基质细胞造血模型可抑造血干、祖细胞过度分化与耗竭，维持其c-kit mRNA较高的表达水平。