补肾方、补肾健脾方、益气健脾化痰祛瘀方对快速老化模型小鼠心肌葡萄糖转运体蛋白的影响

目的:观察补肾方、补肾健脾方、益气健脾化痰祛瘀方对快速老化模型小鼠心肌葡萄糖转运体蛋白的影响,探讨中医不同治法心肌保护作用的机制。方法:选用快速老化模型小鼠,分为对照组、模型组、补肾方组、补肾健脾方组、益气健脾化瘀祛痰方组。连续灌胃给药3个月,采用生化分析仪检测血清TC和LDL-C,采用ELISA法检测血清IL-6水平,采用HE染色法观察胸主动脉和心肌组织形态,采用油红O染色法观察胸主动脉脂质面积,采用Masson染色法观察胸主动脉胶原纤维的变化,采用Western blot法检测心肌组织GLUT-1和VCAM-1蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组血清TC、LDL-C和IL-6水平明显升高(P0.05,P0.01),胸主动脉和心肌组织病理形态发生改变,心肌组织GLUT-1蛋白表达降低和VCAM-1蛋白表达显著升高;与模型组比较,给药组血清TC和LDL-C水平降低(P0.01),改善胸主动脉和心肌组织的病理变化,益气健脾化痰祛瘀方组血清IL-6水平降低(P0.05),提高心肌组织GLUT-1蛋白表达和抑制心肌组织VCAM-1蛋白表达。结论:补肾方、补肾健脾方、益气健脾化瘀祛痰方对快速老化模型小鼠具有代谢调节、心肌保护、血管保护三重作用,改善衰老所致的心肌能量代谢障碍、血管损伤,炎症反应,其作用机制可能与其干预心肌葡萄糖转运体蛋白有关,以益气健脾化痰祛瘀方效果较为明显。     

益气健脾、益气健脾祛痰化瘀方药对脑老化小鼠神经元保护作用的比较研究

目的:比较益气健脾、益气健脾祛痰化瘀方药对脑老化小鼠神经元保护作用.方法:采用D-半乳糖(D-galactose, D-gal)复制亚急性衰老及脑老化动物模型.以流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测大脑神经元线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP)及凋亡百分率,病理图文分析系统检测大脑神经元密度.结果:益气健脾和益气健脾祛痰化瘀方药均能明显:(1)稳定MMP,益气健脾方药更具优势;(2)抑制大脑皮质神经元密度的下降(对海马神经元密度的作用不显著).益气健脾法方药还能明显降低神经元凋亡百分比(益气健脾祛痰化瘀法作用不显著).结论:益气健脾和益气健脾祛痰化瘀方药均有一定的神经元保护作用,单纯益气健脾方药作用更为显著.     

益气健脾、益气健脾祛痰化瘀法对脑老化小鼠学习记忆功能及神经递质受体表达的影响

目的:观察益气健脾、益气健脾祛痰化瘀法对D-半乳糖(D-gal)所致脑老化小鼠学习记忆功能及神经递质受体表达的影响.方法:采用D-gal复制衰老及脑老化小鼠模型.以Morris水迷宫测试小鼠学习记忆功能;免疫组化技术与病理图文分析系统相结合检测烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor NAChR)和谷氨酸N-甲基-D-门冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate recetor,NMDAR)表达水平.结果:两法均能明显改善脑老化小鼠的学习记忆能力,提高NAChR和NMDAR1的表达水平,益气健脾祛痰化瘀法对NAChR在大脑皮质的表达优于益气健脾法;对NMDAR1的表达两法无明显差异,单纯益气健脾法呈现较好趋势.结论:提高NAChR和NMDAR1表达水平可能是两法改善脑老化小鼠学习记忆功能的部分机制,两法在不同的环节和靶点上各有优势.     

益气健脾法与益气健脾祛痰化瘀法对D-gal衰老小鼠自由基影响的比较

目的：比较益气健脾法与益气健脾祛痰化瘀法对D-半乳糖(D-gal)所致衰老小鼠自由基的影响。方法：测定D-gal诱导的亚急性衰老小鼠血清、心、肝组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性;心、肝组织中丙二醛(MDA)、脂褐素(LDF)水平,并观察益气健脾及益气健脾祛痰化瘀方药对上述指标的影响。结果：益气健脾及益气健脾祛痰化瘀方药能不同程度地提高D-gal致衰老模型小鼠血清、心、肝组织中T-SOD的活性,降低心、肝组织MDA、LPF含量。结论：抑制脂质过氧化反应,提高抗氧化酶活性可能是益气健脾法及益气健脾祛痰化瘀法延缓衰老的共同作用机制之一,两法对不同组织的作用强度有一定差别。     

益气健脾化瘀祛痰方对脾虚痰浊动脉粥样硬化巴马小型猪探究行为的影响

目的观察益气健脾化瘀祛痰方对脾虚痰浊动脉粥样硬化(AS)巴马小型猪探究行为的影响。方法将26只巴马小型猪随机分为正常组5只、手术组21只,正常组给予基础饲料,手术组给予高脂饲料喂饲。第2周对手术组小型猪行冠状动脉球囊挤压术,术后将21只小型猪随机分为模型组、中药组和西药组,每组7只。第4周开始对除正常组外的各组小型猪加入跑步过劳训练制备脾虚痰浊AS模型,共持续4周。24周后评价模型,评价后中药组给予益气健脾化瘀祛痰方1.625 g/(kg·d),西药组予单硝酸异山梨酯缓释片1.142 mg/(kg·d)。24周后采用监视仪器对各组小型猪咬物品、咬同伴、拱物品、拱同伴、闻物品、闻同伴6项探究行为进行观察。结果与正常组比较,模型组小猪探究行为中咬同伴、拱物品行为频次下降,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,中药组和西药组探究行为频次均呈上升趋势,但差异无统计学意义(P 0.05);中药组在咬物品、拱物品、闻物品方面频次多于西药组,其中咬物品差异有统计学意义(P0.05)。结论益气健脾化瘀祛痰方可增加脾虚痰浊AS小型猪探究行为活动,且对小型猪探究行为改善作用较单硝酸异山梨酯缓释片更显著。     

益气健脾祛痰化瘀方药对D-gal拟衰小鼠自由基代谢及免疫功能的影响

自由基对细胞成分的有害攻击及机体免疫功能下降是老化的重要机制[1,2],测定自由基产物和相关酶以及免疫功能的变化可反映机体的衰老程度已成为共识.中医延缓衰老研究向以补肾占居优势,然脾胃为后天之本,脾虚气亏亦为衰老的重要原因之一.同时,脾虚易聚湿生痰,痰凝气滞或脾虚气亏,可生瘀血,痰浊瘀血是导致衰老的重要因素.据此立益气健脾祛痰化瘀法作为延缓衰老治则,并选用四君子汤加祛痰化瘀药物观察其对自由基体系及免疫功能有关指标的影响.     

补肾益气化瘀方对衰老大鼠免疫功能的影响

目的：观察补肾益气化瘀方对衰老大鼠免疫功能的改善作用,并探讨其作用机理。方法：Wistar青年大鼠70只,随机分成空白对照组、模型对照组、药物（低、中、高剂量）组,共5组（n=14）。除空白对照组外,每组腹腔注射D-半乳糖连续6周,建立亚急性衰老大鼠模型。模型建立后,药物组每天分别用不同浓度补肾益气化瘀方提取液灌胃,空白对照组、模型对照组用生理盐水灌胃,连续4周,然后检测大鼠免疫功能指标。结果：补肾益气化瘀方能明显提高衰老大鼠CD4＋、CD8＋、IL-2及IL-4含量（P≤0.01）,显著提高巨噬细胞吞噬功能及半溶血素含量（P≤0.01）,及大鼠脾指数、胸腺指数。结论：补肾益气化瘀方通过调节细胞因子水平和体液免疫功能,达到抗衰老的作用。     

健脾益气摄血方对ITP模型小鼠外周血象的影响

目的:研究健脾益气摄血治则对ITP小鼠外周血象的影响。方法:制备豚鼠抗小鼠血小板血清(APS),注射于BALB/c小鼠体内造成ITP小鼠模型,模型稳定后给予强的松和健脾益气摄血颗粒干预,检测小鼠外周血象的变化情况。结果:注射APS造模后,小鼠外周血血小板计数减少,白细胞计数升高,血红蛋白含量降低,血小板分布宽度基本无影响;给药干预后,血小板计数回升,白细胞计数降低,但与药物作用不相关,血红蛋白含量回升,血小板分布宽度无影响。结论:健脾益气摄血治则能够有效提升ITP小鼠血小板数量及血红蛋白含量。     

补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1表达的影响

目的研究补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织TGF—β1表达的影响，探讨其防治肝纤维化的作用机制。方法建立wistar大鼠CCL4损伤性肝纤维化模型，通过免疫组化及图像分析等方法，观察补肾化瘀方对肝脏病理组织学、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及TGF—β1表达的影响。结果经补肾化瘀方治疗后，用药组肝组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原及TGF—β1表达显著降低（p〈0.05），与模型组比较有显著性差异。结论补肾化瘀方可能通过抑制肝组织TGF—β1的表达，使HSC的增殖活化受到抑制，胶原合成减少，而起到抗纤维化的作用。     

补肾泻肝方对免疫介导再障模型小鼠的影响

为研究补肾泻肝方(主药：熟地黄、制首乌、补骨脂、菟丝子、淫羊藿、牡丹皮、黄连、水牛角等)治疗免疫介导再障的机理。Balb／C小鼠经^60Co5．5Gy γ射线照射后由尾静脉输入取自DBA／2小鼠胸腺淋巴结混合细胞悬液形成免疫介导再障模型。用补肾泻肝方灌喂模型小鼠后检测外周血象、T细胞亚群，应用RT-PCR技术检测IFN-γ基因表达。结果：与模型组相比，治疗组小鼠的周围血象及CD8明显升高、IFN-γ基因高表达则明显减弱。提示：调节免疫紊乱状态、减弱再障时的IFN-γ基因高表达，进而影响造血干／祖细胞增殖、分化可能是该方治疗再障的机理之一。     

补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1/TIMP-1活性的影响

目的:研究补肾化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1/TIMP-1活性的影响,探讨其防治肝纤维化的作用机制。方法:建立Wistar大鼠CCL4损伤性肝纤维化模型,通过免疫组化及图像分析等方法,观察补肾化瘀方对肝组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及MMP-1/TIMP-1表达的影响。结果:经补肾化瘀方治疗后,用药组肝细胞变性程度和纤维化程度明显减轻;Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达明显降低(P<0.05);MMP-1含量明显增加,TIMP-1含量降低,MMP-1/TIMP-1比值显著增加,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:补肾化瘀方可能通过增加MMP-1的产生、减少TIMP-1的分泌而使其对MMP-1的抑制作用减弱,促进了Ⅰ型及Ⅲ型胶原的降解,起到抗纤维化的作用。     

益气健脾方对脾虚模型小鼠的影响

目的:研究益气健脾方对大黄致小鼠脾虚模型的影响,探讨其健脾作用.方法:采用连续灌胃大黄水煎液14天造成小鼠脾虚模型,以补中益气丸为阳性对照,益气健脾方水煎液高、低剂量组进行治疗.观察测定实验动物外周血细胞指标的变化、胸腺及脾脏质量指数、小肠推进率.结果:益气健脾方各剂量组能够显著升高血红蛋白量、红细胞计数、白细胞计数值...     

疏肝健脾补肾方对HBV转基因小鼠病毒学及肝组织病理学的影响

目的：观察疏肝健脾补肾方对乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠病毒复制和肝组织病理学的影响。方法：利用HBV转基因小鼠模型,采用实时荧光PCIK定量对治疗前后血HBVDNA进行检测,光镜下观察治疗后肝病理学变化,免疫组化鉴定HBV核心抗原（HBcAg）在肝组织内的分布。结果：高剂量组、阿德福韦（KDV）组治疗前后血清HBVDNA对数值比较,差异均有非常显著性意义（P〈0．01）。中剂量组、ADV组停药3天后血清HBVDNA对数值与模型组比较,差异有显著性或非常显著性意义（P〈0．05,P〈0．01）。中剂量组、高剂量组、ADV组肝组织HBcAg阳性率均较模型组明显降低,差异有显著性或非常显著性意义（P〈0．05,P〈0．01）。高剂量组肝组织HBcAg阳性率较小剂量组、ADV组明显降低,差异有显著性或非常显著性意义（P〈0．05,P〈0．01）。结论：疏肝健脾补肾方不仅能抑制HBV转基因小鼠病毒复制,而且对肝组织具有明显的保护作用。     

补肾健脾化瘀方对老年小鼠免疫功能及自由基代谢的影响

目的:为验证“正虚挟瘀”是中医衰老的重要原因/机制的可靠性及合理性,我们观察了补肾健脾化瘀方对老年小鼠免疫功能、自由基代谢的影响。方法:老年小鼠连续四周灌服中药后,检测腹腔巨噬细胞产生的IL-1、脾淋巴细胞产生的IL-2、红细胞清除自由基酶(SOD、CAT、GSH-Px)的活性以及肝脑的LPO含量。结果:老年小鼠IL-1、IL-2的产生以及SOD、CAT、GSH-Px的酶活性均明显低于青年小鼠,而肝脑产生的过氧化脂质(LPO)明显增加。给药后,上述指标均可明显得到改善。结论:老年机体确为“虚”和“瘀”并存,进一步为我们的观点提供了实验依据;同时也说明IL-2的产生能力降低除与T细胞本身有关外,还与巨噬细胞、自由基代谢等因素有关。     

健脾补肾化瘀方对小鼠Lewis肺癌的抑瘤增效作用的研究

目的:探讨健脾补肾化瘀方对肺癌的抑制和化疗的协同增效作用。方法:选择小鼠移植性Lewis肺癌为模型,分别观察健脾补肾化瘀方以及与顺铂(DDP)联合应用时的抑瘤率。结果:健脾补肾化瘀方对小鼠移植性Lewis肺癌有显著的抑制作用(P0.01),并能显著增强DDP对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用(P0.05)。结论:表明健脾补肾化瘀方对动物移植性肺癌有抑制和对化疗药物的协同增效作用。     

健脾补肾化瘀方对小鼠Lewis肺癌的抑瘤增效作用的研究

目的:探讨健脾补肾化瘀方对肺癌的抑制和化疗的协同增效作用。方法:选择小鼠移植性Lewis肺癌为模型,分别观察健脾补肾化瘀方以及与顺铂(DDP)联合应用时的抑瘤率。结果:健脾补肾化瘀方对小鼠移植性Lewis肺癌有显著的抑制作用(P0.01),并能显著增强DDP对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用(P0.05)。结论:表明健脾补肾化瘀方对动物移植性肺癌有抑制和对化疗药物的协同增效作用。     

益气健脾祛痰化瘀法对脾虚痰浊动脉硬化巴马猪水液代谢的影响

目的:观察脾虚痰浊动脉硬化(AS)巴马小型猪水液代谢的变化及益气健脾、祛痰化瘀法的作用。方法:将20头巴马小型猪随机分组,正常组、模型组、益气健脾组及益气健脾祛痰化瘀组各5头。以高脂饮食、跑步劳倦结合冠脉球囊拉伤法制备脾虚痰浊AS病证结合模型至24周。正常组巴马小型猪喂正常饲料,模型组巴马小猪行冠脉球囊拉伤后予高脂饲料结合跑步过劳制备脾虚痰浊AS模型。益气健脾组及益气健脾、祛痰化瘀组在模型组制备基础上,于高脂饲料中添加相应的中药颗粒剂。观察48周后各组巴马小猪的血清钾、钠、氯、尿素氮、肌酐的含量,血清水液代谢调节激素精氨酸加压素(AVP)、心房利钠肽(ANP)、醛固酮(ALD)以及肾组织水通道蛋白(AQP)1、2、3、4、钠钾ATP酶蛋白(Na~+-K~+-ATPase)表达变化。结果:与正常组相比,模型组血清钾、钠、氯、尿素氮、肌酐水平无变化(P>0.05),ANP、AVP上调(P<0.05),ALD有上调趋势(P>0.05),模型组肾组织AQP1、2、3及钠钾ATP酶蛋白表达下调(P<0.05),AQP4表达上调。与模型组比较,益气健脾、祛痰化瘀组ANP下调(P<0.05),AVP、ALD下调(P>0.05),益气健脾组AVP下调(P>0.05);益气健脾组及益气健脾、祛痰化瘀组肾组织AQP1、2、3表达均上调(P<0.05),AQP4表达下调;益气健脾组钠钾ATP酶蛋白表达上调(P<0.05)。结论:脾虚痰浊AS模型未见血清离子紊乱,但水液代谢调节激素中ANP、AVP、ALD有上调,肾组织AQP1、2、3下调,下调,AQP4表达上调;益气健脾及益气健脾祛痰化瘀法可上调肾组织AQP1、2、3,下调AQP4。益气健脾祛痰化瘀法可下调水液代谢调节激素,益气健脾法可上调钠钾ATP酶。益气健脾、祛痰化瘀法在恢复水液代谢调节激素方面优于益气健脾组。     

补肾、健脾和补肾健脾方对尾部悬吊大鼠钙、磷代谢的影响

目的:观察补肾、健脾和补肾健脾3方对模拟失重大鼠钙、磷代谢的作用,比较其促进骨矿化能力的异同.方法:大鼠随机分为正常对照、悬吊、补肾、健脾和补肾健脾共5组.后4组大鼠头低位-30度尾部悬吊连续21 d模拟失重,补肾、健脾和补肾健脾组大鼠从实验第1天开始依次按2.4,3.2,5.7g·kg-1·d-1给予补肾方、健脾方和补肾健脾方灌胃,其余各组大鼠灌服等容积的生理盐水.实验第22天取材,双能X射线骨密度仪测左侧胫骨骨密度,全自动生化分析仪检测血和尿中钙磷含量,EDTA法检测粪钙和饲料钙含量.结果:较之正常对照组,悬吊组大鼠左侧胫骨骨密度显著降低(P＜0.01),血钙和血磷含量、钙的表观吸收率明显降低(P＜0.01),尿钙、尿磷、粪钙含量明显增高(P＜0.01);较之悬吊组,补肾健脾组大鼠左侧胫骨骨密度、血钙和血磷含量、摄入钙量、钙的表观吸收率明显升高(P＜0.01),尿钙、尿磷、粪钙含量明显降低(P＜0.01),补肾组和健脾组大鼠左侧胫骨骨密度、血钙升高(P＜0.05),钙的表观吸收率均明显升高(P＜0.01),补肾组大鼠血磷含量明显升高(P＜0.01),尿钙、尿磷含量显著降低(P＜0.01),粪钙含量降低(P＜0.05),健脾组大鼠血磷和摄入钙量增加(P＜0.05),尿钙、尿磷和粪钙含量降低(P ＜0.05,P＜0.01);较之补肾健脾组,补肾组和健脾组大鼠左侧胫骨骨密度、血钙含量降低(P＜0.05),补肾组大鼠钙的表观吸收率明显降低(P＜0.01).结论:补肾、健脾和补肾健脾3方均能改善模拟失重引起的钙磷代谢异常,健脾方在促进钙吸收和维持血钙处于正常水平方面对补肾方具有协同增效作用.     

补肾祛痰化瘀法对载脂蛋白E基因敲除小鼠氧化应激水平的影响研究

目的评估不同周龄载脂蛋白E（ApolipoproteinE,ApoE）基因敲除小鼠的氧化应激水平,并探讨补肾祛痰化瘀法对ApoE基因敲除小鼠氧化应激水平的影响。方法将成年组及老年组ApoE基因敲除小鼠共32只随机分为中药组及对照组,并取相同遗传背景的C57BIV6J小鼠共16只随机分成成年正常组及老年正常组,连续给予补肾祛痰化瘀法组方灌胃12周,成年组至28周龄、老年组至44周龄时予检测脑组织超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase,GSH．Px）活力,及丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平;并进行甲苯胺蓝染色观察海马CAl区神经细胞分布情况及尼氏体数量,免疫组化法检测8-羟基脱氧鸟苷（Oxo．2’-deox—yguanosine,8-OHDG）表达情况。结果氧化应激水平均符合正态分布,故采用单因素方差分析进行数据统计。ApoE基因敲除小鼠及C57小鼠28周龄时脑内氧化应激水平无明显差异;随着小鼠的周龄的增加,至44周时,老年ApoE基因敲除小鼠对照组其脑内MDA及8-OHDG表达水平明显增高,而SOD及GSH—Px表达水平明显降低,与老年正常组C57小鼠的脑内氧化应激水平具有明显差异（P〈0．05）;而老年中药组与老年正常组相比,无明显差异。结论老年ApoE基因敲除小鼠氧化应激水平较高,而补肾祛痰化瘀法具有一定的抗氧化作用,可抵抗部分机体氧化作用,并控制机体氧化应激水平。     

益气补肾中药对自然流产模型小鼠NK细胞的影响

目的:观察益气补肾中药对自然流产模型小鼠脾脏、母胎界面组织NK细胞表达的影响。方法:以雌性CBA/J和雄性DBA/2为模型,孕0天始灌服益气补肾中药,并与环孢素A(CSA)对照,孕9天、14天流式分析脾脏、母胎界面NK细胞的表达。结果:孕9天各用药组NK细胞在脾脏及母胎界面的表达较阴性对照组明显降低(P<0.01或P<0.05);孕14天各用药组NK细胞在脾脏的表达较阴性对照组明显降低(P<0.05);孕14天中西医结合组NK细胞在母胎界面的表达较阴性对照组明显降低(P<0.05),而中药组、CSA组与阴性对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论:益气补肾中药可下调自然流产模型小鼠孕9天及14天脾脏NK细胞表达及孕9天母胎界面NK细胞表达;益气补肾中药与CSA协同可下调自然流产模型小鼠孕14天母胎界面NK细胞表达,具有一定的免疫调节作用。