山柰酚对人口腔癌KB细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨山柰酚对人口腔癌KB细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:将对数生长期的人口腔癌KB细胞分为对照组及25、50、100、200μmol/L山柰酚处理组;采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,real-time q PCR法检测Bcl-2及Bax基因表达,Caspase-3试剂盒检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达。结果:山柰酚对人口腔癌KB细胞的增殖有明显的抑制作用;与对照组比较,山柰酚各浓度组细胞凋亡率、Bax mRNA表达、Caspase-3活性均显著升高,Bcl-2 mRNA及β-catenin、C-myc、Cyclin D1蛋白表达均显著降低(P0.05或P0.01)。结论:山柰酚具有抑制人口腔癌KB细胞增殖及诱导凋亡作用,该作用与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

汉黄芩素对胃癌细胞SGC7901凋亡、侵袭迁移及Wnt/β-catenin信号通路的影响研究

目的:探讨汉黄芩素对胃癌细胞SGC7901凋亡、侵袭迁移及Wnt/β-连接素(β-catenin)信号通路的影响。方法:常规培养3种常见胃癌细胞株(SGC7901、BGC-823及MKN-45)至对数生长期,采用终浓度0、20、50、100、200μmol/L汉黄芩素处理24、48、72、96 h后采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖情况,分别采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术、划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测各浓度汉黄芩素作用24、48 h后SGC7901细胞的凋亡率及迁移、侵袭能力,Western blotting检测各浓度汉黄芩素作用48 h后SGC7901细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin及下游靶分子C-myc、细胞周期素D1(Cyclin D1)的蛋白水平。结果:汉黄芩素在20~200μmol/L范围内可呈浓度和时间依赖性抑制SGC7901、BGC-823及MKN-45细胞增殖。与汉黄芩素0μmol/L组比较,各浓度汉黄芩素作用24、48 h后SGC7901细胞凋亡率均升高,迁移距离和穿膜细胞数均降低(P0.05);除汉黄芩素20μmol/L组的β-catenin水平外,其余浓度SGC7901细胞β-catenin、C-myc及Cyclin D1蛋白水平均低于0μmol/L(P0.05),其作用呈量-效关系。结论:汉黄芩素对胃癌细胞的增殖有抑制作用,同时可诱导凋亡和抑制细胞侵袭和迁移,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。     

宝藿苷-Ⅰ对人食管癌细胞Eca-109 Wnt/β-catenin信号转导通路的影响

目的研究香加皮中提取的宝藿苷-Ⅰ对人食管癌细胞Eca-109的抑制作用及其对Wnt/β-catenin信号转导通路的影响。方法 RT-PCR技术检测不同质量浓度宝藿苷-Ⅰ作用48 h后,细胞β-catenin、Cyclin D1、Survivin m RNA表达的变化,采用流式细胞术分析Eca-109细胞β-catenin、Cyclin D1、Survivin蛋白的表达。结果宝藿苷-I(25、50μg/mL)作用48 h后,Eca-109细胞β-catenin、Cyclin D1、Survivin mRNA及蛋白表达水平明显下降(P<0.01),12.5μg/mL处理组细胞的β-catenin、Cyclin D1、Survivin mRNA及其蛋白表达水平与对照组相比无显著差异。结论宝藿苷-I可能通过下调β-catenin、Cyclin D1、Survivin mRNA及其蛋白表达,影响Wnt/β-catenin信号转导通路,发挥抑制Eca-109细胞增殖作用。     

槲皮素抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖及与Wnt/β-catenin信号通路的机制

目的:观察槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞增殖和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用,探讨其抗前列腺癌的可能机制。方法:体外培养PC-3细胞,以不同终浓度槲皮素进行处理,设空白组。采用噻唑蓝比色法(MTT)观察槲皮素对PC-3细胞增殖抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪检测槲皮素对PC-3细胞凋亡的影响;采用免疫印迹法(Western blot)和逆转录-PCR(RT-PCR)分析检测槲皮素对β-catenin和下游靶基因细胞周期素D1(Cyclin D1),原癌基因(c-Myc)蛋白表达和转录水平;采用免疫荧光分析检测槲皮素对β-catenin表达的影响;利用荧光酶报告基因分析检测槲皮素对Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果:与空白组比较,槲皮素对PC-3细胞增殖具有明显抑制作用(P0.05),并诱导PC-3细胞凋亡(P0.05)。与空白组比较,槲皮素可显著抑制PC-3细胞β-catenin的蛋白表达和转录活性,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路的传导,抑制下游靶基因的表达水平(P0.05,P0.01)。结论:槲皮素可显著抑制PC-3细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

宝藿苷-I对人食管癌细胞Eca-109Wnt/β-catenin信号转导通路的影响

目的 研究香加皮中提取的宝藿苷-I对人食管癌细胞Eca-109的抑制作用及其对Wnt/β-catenin信号转导通路的影响.方法 RT-PCR技术检测不同质量浓度宝藿苷-I作用48 h后,细胞β-catenin、Cyclin D1、Survivin m RNA表达的变化,采用流式细胞术分析Eca-109细胞β-catenin,Cyclin D1、Survivin蛋白的表达.结果 宝藿苷-I(25、50 μg/mL)作用48 h后,Eca-109细胞β-catenin、Cyclin D1、Survivin mRNA及蛋白表达水半明显下降(P<0.01),12.5 μg/mL处理组细胞的β-catenin、Cyclin D1、Survivin mRNA及其蛋白表达水平与对照组相比无显著差异.结论 宝藿苷-I可能通过下调β-catenin、Cyclin D1、Survivin mRNA及其蛋白表达,影响Wnt/β-catenin信号转导通路,发挥抑制Eca-109细胞增殖作用.     

天南星多糖对人肾癌细胞系GRC-1增殖及凋亡作用的影响

目的:探讨天南星多糖(ARPS)对人肾癌细胞系GRC-1的增殖、凋亡及Wnt/β-连接素(β-catenin)信号通路的影响。方法:采用RPMI-1640培养液常规培养获对数生长期的GRC-1细胞后,给予0,20,50,100,200 mg·L~(-1)ARPS处理,0 mg·L~(-1)ARPS组为空白组,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各浓度ARPS处理24,48,72和96 h的增殖抑制率,分别采用AnnexinFITC/PI双染法和PI单染法检测各浓度处理48 h后的细胞凋亡率和细胞周期情况,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各浓度处理48 h后Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin及下游靶分子原癌基因(C-myc),细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白水平。结果:与空白组比较,在20~200 mg·L~(-1),ARPS对GRC-1细胞的增殖有明显抑制效果,细胞增殖抑制率随ARPS作用时间的延长和质量浓度的增加而升高,总体上抑制效应呈剂量和时间依赖的方式,以上差异均有统计学意义(P0.05),50~200 mg·L~(-1)ARPS的早期凋亡率及20~200 mg·L~(-1)ARPS的晚期凋亡率和总凋亡率均升高(P0.05),20,50,100,200 mg·L~(-1)ARPS组的G_0期/G_1期高于空白组,S期,G2期/M期及β-catenin,C-myc和Cyclin D1蛋白水平均低于0 mg·L~(-1)ARPS(P0.05),20~200 mg·L~(-1)各质量浓度间的以上指标的差异均有统计学意义(P0.05)。结论:ARPS对人肾癌细胞系GRC-1的增殖有一定抑制作用,同时可诱导细胞凋亡和G_0/G_1期阻滞并可抑制Wnt/β-catenin通路激活。     

白芍提取物调控miR-564 表达对白血病细胞增殖及凋亡影响的研究

目的:探讨白芍提取物对白血病细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:选用白血病细胞K652为研究对象,分为对照组、白芍提取物不同浓度(20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL)组、miR-NC组、miR-564组、白芍提取物30μg/mL+anti-miR-NC组及白芍提取物30μg/mL+anti-miR-564组。采用MTT法检测各组细胞活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-564表达,蛋白质印迹法检测各组细胞中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果:与对照组比较,白芍提取物不同浓度组K652细胞活性、Cyclin D1均降低(P0.05),P21表达水平升高(P0.05);白芍提取物30μg/mL组Bcl-2蛋白表达水平降低(P0.05),细胞凋亡率、Bax蛋白及miR-564表达水平升高(P0.05)。与miR-NC组比较,miR-564组K652细胞活性、Cyclin D1及Bcl-2蛋白表达水平均降低(P0.05),细胞凋亡率、P21、Bax蛋白及miR-564表达水平均升高(P0.05)。与白芍提取物30μg/mL+anti-miR-NC组比较,白芍提取物30μg/mL+anti-miR-564组K652细胞活性、Cyclin D1及Bcl-2蛋白表达水平均升高(P0.05),细胞凋亡率、P21、Bax蛋白及miR-564表达水平均降低(P0.05)。白芍提取物30μg/mL+anti-miR-NC组各检测指标与白芍提取物组30μg/mL组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:白芍提取物可能通过上调miR-564表达抑制白血病细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

探讨沉默LncRNA-H19联合小剂量冬凌草甲素对APL细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默LncRNA-H19联合小剂量冬凌草甲素对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)NB4细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外常规培养NB4细胞,通过转染LncRNA-H19siRNA沉默LncRNA-H19表达,将细胞分为对照组、LncRNA-H19 siRNA组、冬凌草甲素组和联合干预组。采用RT-PCR法检测细胞中LncRNA-H19表达,CCK-8法检测细胞增殖抑制率、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western Blot法检测细胞中目的蛋白表达水平。结果 :LncRNA-H19 siRNA组和联合干预组细胞中LncRNA-H19表达量显著低于对照组(P0.05),细胞增殖抑制率和凋亡率显著高于对照组(P0.05),细胞中β-catenin、Cyclin D1、C-myc、PI3K和AKT蛋白表达量明显低于对照组(P0.05);冬凌草甲素组细胞增殖抑制率和凋亡率明显高于对照组(P0.05),细胞中PI3K蛋白表达量明显低于对照组(P0.05);联合干预组干预效果明显优于LncRNA-H19 siRNA组或冬凌草甲素组(P0.05)。结论:沉默LncRNA-H19联合小剂量冬凌草甲素能显著抑制APL进展,可能与其抑制Wnt/β-catenin和PI3K/AKT信号通路及其下游因子有关。     

小檗碱和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂对胃癌细胞MKN45增殖凋亡及糖代谢影响研究

目的:探讨小檗碱和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂对胃癌细胞MKN45增殖、凋亡和糖代谢的影响。方法:用不同浓度的小檗碱处理MKN45细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性并计算半数抑制浓度(IC_(50)),分别采用24μmol/L的小檗碱(小檗碱组)、Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535(FH535组)以及24μmol/L的小檗碱和FH535联合作用(联合组)MKN45细胞,MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞糖代谢指标己糖激酶、丙酮酸激酶相对活性和培养液上清中乳酸相对含量,Western blot法检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平。结果:与未使用小檗碱作用的MKN45细胞比较,小檗碱可降低MKN45细胞的吸光度值且呈剂量依赖性,IC_(50)值为(24.38±2.81)μmol/L,因此选用24μmol/L的小檗碱用于后续实验。与对照组比较,小檗碱组、FH535组、联合组细胞A值均显著降低,细胞凋亡率均显著升高,丙酮酸激酶、己糖激酶及乳酸相对含量均显著降低,β-catenin和c-myc蛋白表达水平显著降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著升高,且联合组的各检测指标均较小檗碱组和FH535组变化明显。结论:小檗碱和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂均能够抑制MKN45细胞增殖和糖酵解并诱导其凋亡,且二者具有协同作用。     

青龙衣含药血清抑制胃癌SGC-7901细胞生长和诱导凋亡

目的:探讨青龙衣含药血清对胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为空白组、青龙衣低剂量(25 g·kg~(-1)·d~(-1)),中剂量(50 g·kg~(-1)·d~(-1)),高剂量(100 g·kg~(-1)·d~(-1))组及顺铂(5 g·kg·d~(-1))组,连续灌胃给药7 d,空白组灌胃给予等体积生理盐水;末次给药2 h后,颈动脉采血,制备青龙衣含药血清;分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术、烟酸己可碱(Hoechst)染色、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测青龙衣含药血清对SGC-7901细胞增殖、凋亡率、凋亡指数、凋亡相关基因及凋亡信号通路蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,青龙衣含药血清对SGC-7901细胞的增殖具有明显抑制作用(P0.05),青龙衣含药血清处理48 h后的早期、晚期凋亡率,凋亡指数及促凋亡基因Bcl-2相关X蛋白(Bax),Bcl-2相关K蛋白(Bak)mRNA表达均升高,抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)mRNA表达降低(P0.05);青龙衣含药血清组β-链蛋白(β-catenin),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及原癌基因(C-myc)蛋白表达均明显降低(P0.05)。结论:青龙衣含药血清对胃癌SGC-7901细胞的增殖具有抑制作用,该作用可能与诱导凋亡及抑制分泌型糖蛋白(Wnt)/β-catenin通路的活化有关。     

黄芪多糖通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝癌细胞凋亡研究

目的探讨黄芪多糖通过Wnt/β-catenin信号通路对人肝癌Hep G2细胞增殖及凋亡的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Hep G2细胞增殖能力和存活率;Annexin V-FITC/PI双染和Caspase-3活性检测细胞凋亡;荧光素酶实验检测黄芪多糖(100、200 mg/L)处理后Hep G2细胞Wnt/β-catenin通路活性改变;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting法检测细胞内的β-catenin、c-myc和CyclinD1表达水平。结果与对照组比较,随着黄芪多糖质量浓度的增加和作用时间的延长,Hep G2细胞存活率显著降低(P0.05)。与对照组比较,黄芪多糖100、200mg/L组Hep G2细胞凋亡率显著升高(P0.05);凋亡关键因子Caspase-3的相对活性显著升高(P0.05),cleaved Caspase-3蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低;荧光素酶活性显著降低(P0.05);β-catenin、c-myc和Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01)。结论黄芪多糖通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制凋亡相关基因Bcl-2的表达,促进Hep G2细胞凋亡。     

土槿皮乙酸通过调控PAX2对宫颈癌细胞的影响

目的探讨土槿皮乙酸通过调控PAX2对宫颈癌细胞的影响及其分子机制。方法 MTT法检测细胞增殖情况;shRNA干扰技术构建PAX2低表达Hela细胞株,分为空白组、阴性对照组、sh-PAX2组、土槿皮乙酸组、土槿皮乙酸+sh-PAX2组;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;Transwell小室迁移实验检测各组细胞迁移能力;String预测PAX2潜在作用蛋白;Western blot检测蛋白表达;免疫荧光实验观察各组细胞中β-catenin的定位。结果土槿皮乙酸可时间-浓度依赖地抑制宫颈癌细胞增殖。各宫颈癌细胞中PAX2蛋白表达与土槿皮乙酸对各细胞的IC_(50)均呈负相关(P0.05)。土槿皮乙酸可抑制Hela细胞中PAX2蛋白表达;土槿皮乙酸和低表达PAX2均可诱导Hela细胞凋亡并抑制其迁移,可降低Bcl-2、Cyclin D1、Survivin、MMP2、MMP9、β-catenin和p-β-catenin蛋白和升高BAX蛋白表达(P0.05),可使Hela细胞中β-catenin的进核量减少。结论土槿皮乙酸在宫颈癌细胞中抑制PAX2表达和Wnt/β-catenin信号通路进而诱导细胞凋亡并抑制其转移。     

马钱子碱对人结肠癌细胞SW480增殖和周期的影响及机制研究

目的探讨马钱子碱对人结肠癌细胞株SW480的增殖和周期的影响及可能的分子机制。方法将试验分为空白对照组和马钱子碱高(8μmol/L)、中(4μmol/L)、低剂量组(2μmol/L),细胞生长曲线检测马钱子碱干预前后各组SW480细胞的增殖情况;流式细胞术检测马钱子碱对各组SW480细胞周期的影响;RT-PCR检测马钱子碱对SW480细胞中Wnt3a、β-catenin、C-myc、CyclinD1的mRNA表达的调节作用;Western Blot试验检测马钱子碱对SW480细胞中Wnt3a、β-catenin、C-myc、CyclinD1蛋白表达的调节作用。结果细胞生长曲线表明,在一定范围内,马钱子碱给药浓度越高,对SW480细胞增殖的抑制作用越显著,以高剂量组为最优。流式细胞术试验表明,马钱子碱可显著升高G2/M期的SW480细胞数量,从而将SW480周期阻滞在G2/M期。RT-PCR和Western Blot试验结果显示,马钱子碱干预后Wnt3a、β-catenin、C-myc、CyclinD1的mRNA和蛋白表达相较于正常对照组其表达明显降低。结论马钱子碱可通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞SW480增殖并将SW480细胞周期阻滞在G2/M期。     

褐藻糖胶对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226中Wnt/β-catenin通路的影响研究

目的探讨褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡过程中Wnt/β-catenin通路的变化。方法应用褐藻糖胶诱导多发性骨髓瘤细胞株RPM18226的凋亡,观察多发性骨髓瘤细胞株经10,25,50,100μg/m L浓度褐藻糖胶分别作用24,48,72 h后细胞增殖抑制率。将细胞分为3组:空白组不予药物干预,褐藻糖胶组给予25μg/m L褐藻糖胶培养,Wnt通道抑制剂(DKK-1)组给予DKK-1培养。用Annexin V-FITC/PI双染法检测3组RPMI822细胞凋亡率,通过Western blot方法检测3组β-catenin与c-myc蛋白表达情况。结果随褐藻糖胶浓度的增高和作用时间的延长,细胞增殖抑制率明显增高(P均<0.05)。褐藻糖胶组细胞凋亡率明显高于空白组;褐藻糖胶组和DKK-1组β-catenin和c-myc蛋白表达水平均明显低于空白组(P均<0.05),褐藻糖胶组与DKK-1组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论褐藻糖胶能够诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226发生凋亡,与DKK-1作用相当,并且褐藻糖胶能够有效抑制多发性骨髓瘤细胞株中Wnt/β-catenin通路的活化状态,为有效治疗多发性骨髓瘤患者提供了理论依据。     

鼠尾草酸对人结肠癌细胞增殖抑制作用及增强其对5-氟脲嘧啶敏感性的研究

目的 研究鼠尾草酸（carnosic acid,CA）抑制人结肠癌细胞SW480增殖和增强化疗药物5-氟脲嘧啶（5-Fluorouracil,5-FU）敏感性的作用及机制。方法 结晶紫染色法检测CA对SW480增殖的抑制作用,流式细胞技术分析和MTT法检测CA和5-FU联合使用对人结肠癌细胞SW480凋亡和细胞活力的影响。采用β-catenin荧光素酶报告基因（TOP-Flash）检测CA作用后SW480细胞内β-catenin活性改变。不同浓度CA处理SW480后,Western blot检测β-catenin蛋白质表达水平变化,RT-PCR法检测其下游基因Cyclin D1和P-gp（P-glycoprotein）的mRNA表达水平变化。结果 CA对人结肠癌SW480细胞增殖有抑制作用,且CA能够增强5-FU对结肠癌细胞凋亡和细胞活力的影响。CA处理后细胞内β-catenin转录活性明显降低,Western blot法和RT-PCR法结果显示CA下调了β-catenin的蛋白水平及下游基因Cyclin D1和P-gp mRNA表达。结论 CA能够抑制人结肠癌SW480细胞增殖和增强5-FU的抗肿瘤效果,其机制可能与抑制β-catenin活性并下调其下游基因Cyclin D1和P-gp表达有关。     

白屈菜红碱对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的观察白屈菜红碱(che lerythrine)对人胃癌BGC 823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法通过M TT实验检测白屈菜红碱对细胞生长的抑制率,AO/EB的荧光核染色观察细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果M TT实验显示白屈菜红碱抑制BGC 823细胞的生长呈时间、浓度依赖的方式,显微镜下观察到AO/EB的荧光核染后凋亡的细胞,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,在白屈菜红碱质量浓度为1.5、2.0、2.5μg/mL且培养24 h时,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在S和G2/M期。结论白屈菜红碱能有效地诱导BGC 823细胞凋亡,而且其诱导的凋亡具有周期依赖性。     

氯化两面针碱体外诱导人口腔鳞癌KB细胞G2／M期阻滞及凋亡的研究

目的探讨氯化两面针碱对人口腔鳞癌KB细胞周期和凋亡的影响及相互关系。方法应用MTT比色法测定氯化两面针碱对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测氯化两面针碱对细胞周期的影响;Hoechst33258检测细胞凋亡;透射电镜观察细胞超微结构。结果氯化两面针碱在体外呈浓度依赖性显著抑制KB细胞的生长,48hIC_(50)为(2.36±0.22)μg/ml;与空白组相比,经3μg/ml氯化两面针碱作用,G_2/M期细胞比例显著增多;6μg/ml时凋亡细胞比例最高,可见典型的核染色质凝集、碎裂;9μg/ml时,细胞凋亡率明显下降,同时镜下可见大量坏死细胞。结论氯化两面针碱抗KB细胞的方式与其剂量密切相关,低浓度时以G_2/M期阻滞为主,中浓度时诱导凋亡,高浓度时则致其坏死。     

灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 灵芝三萜(10、50、100 μg/mL)作用HepG2人肝癌细胞24、48、72 h,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡.100 μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,Western blot检测c-myc、cyclinD1、caspase-3、caspase-8、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达.分别以20 μmol/L XAV-939、20 mmol/L LiCl及100 μg/mL灵芝三萜联合20 mmol/L LiCl干预HepG2细胞,MTT和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡.结果 灵芝三萜(10、50、100 μg/mL)抑制HepG2细胞增殖(P<0.05),诱导细胞凋亡(P<0.05).100 μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,细胞caspase-3、caspase-8蛋白表达上调(P<0.05),而c-myc、cyclinD1、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达下调(P<0.05).20 μmol/L XAV-939干预能抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡(P<0.05),20 mmol/L LiCl则能在一定程度上减弱灵芝三萜对HepG2细胞增殖的抑制和细胞凋亡的诱导作用(P<0.05).结论 灵芝三萜能够通过Wnt/[β-catenin信号通路调节c-myc、cyclinD1、caspase-3、caspase-8蛋白表达,抑制肝癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

白皮杉醇对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468抗肿瘤作用及机制

目的:考察白皮杉醇(PIC)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468增殖、凋亡及细胞周期的作用,并对其作用机制进行探讨。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法考察PIC(0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μmol·L-1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞成活率的影响,并计算半抑制率(IC50);采用碘化丙啶(PI)染色观察PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对MDA-MB-468细胞周期的影响;采用细胞凋亡检测(Annexin V-FITC/PI)双染法观察PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞的诱导凋亡作用;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)观察不同浓度PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对MDA-MB-468细胞增殖、凋亡蛋白的影响,并用Western blot对分泌型糖蛋白Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路相关蛋白进行检测。结果:MTT比色法结果显示,与空白组比较,PIC(5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μmol·L^-1)可呈浓度依赖性地抑制MDA-MB-468细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),IC50为(39.4±4.6)μmol·L^-1;作用48 h,PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)呈浓度依赖性地升高MDA-MB-468细胞处于细胞周期G0/G1期细胞(P<0.01);呈浓度依赖性地诱导MDA-MB-468细胞凋亡(P<0.01),其中,PIC(20.0μmol·L^-1)诱导细胞凋亡率为49.87%;PIC(10.0,20.0μmol·L^-1)可明显降低MDA-MB-468细胞中β-catenin及原癌基因(C-myc),黏附因子(CD44)蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01);PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)可显著抑制蛋白激酶B(Akt)磷酸化,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白的磷酸化,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达水平(P<0.01);增强半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和磷酸化β-catenin的蛋白表达(P<0.01)。结论:PIC可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制MDA-MB-468细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而诱导其凋亡。     

毒痰瘀脾虚方含药血清对HepG2肝癌细胞影响的实验研究

目的:研究毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中相关基因及细胞侵袭、迁移、凋亡的影响。方法:采用RT-qPCR实验观察毒痰瘀脾虚方含药血清对Hep G2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达的影响;Transwell细胞侵袭和迁移实验,观察其对Hep G2肝癌细胞侵袭和迁移的影响;AnnexinV-FITC双染流式细胞法检测其对Hep G2肝癌细胞凋亡的影响。结果:RT-qPCR结果显示,与阴性组比较,毒痰瘀脾虚方含药血清能下调HepG2肝癌细胞Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA的表达,差异有统计学意义(P0.01或P0.05);Transwell细胞侵袭实验和迁移实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞的侵袭(P0.01),对细胞的迁移无明显影响(P0.05);细胞凋亡实验结果显示,毒痰瘀脾虚方含药血清能促进Hep G2细胞的凋亡,与阴性组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论:毒痰瘀脾虚方含药血清能抑制Hep G2细胞侵袭,促进细胞凋亡,并能抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin mRNA、MMP2 mRNA、Cyclin D1 mRNA表达。