磷酸化蛋白质组学技术及其在肿瘤研究中的应用

磷酸化蛋白质组是指机体细胞在特定时间和空间上表达的所有磷酸化蛋白质;磷酸化蛋白质组学是在整体水平上研究磷酸化蛋白质在细胞中的组成成分、表达水平、修饰状态及相互作用规律的学科.近年来,磷酸化蛋白质学技术已广泛应用于肿瘤研究,为阐明肿瘤的发生机制,提高肿瘤的诊治水平提供了重要信息.     

LGT蛋白质组阳性肿瘤患者血清VEGF含量的观察报告LGT系列论文之七

目的：了解LGT（lost goodwill target）蛋白质组阳性表达肿瘤患者血清中VEGF含量的变化规律及临床意义。方法：对30例LGT蛋白质组阳性表达的肿瘤患者分别采用ELISA（双抗体双夹心法）技术检测本组患者空腹血清VEGF含量并用美国赛费吉（Ciphergen）公司制造的蛋白质指纹仪及该公司提供的弱阳离子交换芯片（WCX2）按其操作方法（SELDI检测技术）配对检测肿瘤患者空腹血清中的蛋白质指纹，对有病情加重的患者均检查两次以上。以指纹图上质荷比（M／Z）为11100＋H—11900＋H之间出现一峰簇样（cluster）的指纹标志为LGT阳性诊断标准，并按蛋白质指纹检测次数分成二组。对二组内VEGF与正常参考值以及二组间分别进行统计学显著性检验。结果：VEGF在LGT蛋白质组持续阳性表达组中是增高的，而在仅一次脚蛋白质组阳性表达组中是无变化的，二组之间有显著性差异的。结论：脚蛋白质组持续阳性表达，表明肿瘤已进行性发展，进入肿瘤加速期，所以SELDI技术检查肿瘤患者蛋白质组指纹有助于对顸后的判断和对治疗的选择，配合VEGF检查有重要的协同作用。     

蛋白质芯片技术在肿瘤检测中的应用

蛋白质芯片技术在肿瘤研究领域中进展最快。随着肿瘤细胞的发生，肿瘤患者体内某些蛋白质会发牛上调或下调，或声生新的与肿瘤关联的异常蛋白，而蛋白质芯片技术可以描绘出患者体液中所有蛋白质表达情况。根据正常与异常的蛋白质表达谱的差异，从而建立肿瘤的指纹谱，指纹谱的优点是不受任何单个肿瘤标志物的特异性灵敏度的限制，可以及早地反映肿瘤的发生、发展状况。对肿瘤的早期诊断、病情监测、     

LGT蛋白质组阳性肿瘤患者的淋巴细胞AgNOR变化的观察报告LGT系列论文之六

目的：了解LGT（lost goodwill target）蛋白质组阳性表达患者淋巴细胞的活性与功能。方法：对30例LGT蛋白质组表达阳性的患者分另tl用北京开隆公司生产的KL型肿瘤免疫图像分析系统及其操作方法检测患者空腹血清的ASNOR值并用美国赛费吉（Ciphergen）公司制造的蛋白质指纹仪及该公司提供的弱阳离子交换（WCX2）芯片按其操作方法（SELDI检测技术）配对检测肿瘤患者空腹血清中的蛋白质指纹，对有病情加重的患者均检查两次以上。以指纹图上质荷比（M／Z）为11100＋H—11900＋H之间出现一峰簇样（duster）的指纹标志为LGT阳性诊断标准，并按蛋白质指纹LGT检测阳性次数分成二组。对二组内AgNOR值与正常参考值之间进行统计学显著性检验。结果：LGT蛋白质组持续表达阳性组和LGT蛋白质仅查一次阳性组的AgNOa检测值均较正常值低。结论：LGT蛋白质组表达阳性的患者其淋巴细胞活性和免疫功能是低下的。     

蛋白质组研究——分子水平的辨证论治

1基本概念 蛋白质组（proteomel）的概念，最早于1994年由澳大利亚学者Wilkins提出，指的是一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质。蛋白质组研究的内容是一个细胞或一个组织的基因组所表达的全部蛋白质，是研究细胞或机体全部蛋白质的表达方式及其活动方式，     

蛋白质组学在肝癌研究中的应用

蛋白质组学以细胞组织或器官表达的所有蛋白质为研究对象,通过双向凝胶电泳生物质谱技术及生物信息学等方法,达到分离、鉴定、分析蛋白质的目的.在我国肝癌死亡率高,位居第二,预后差.以蛋白质组学的方法,通过比较肿瘤与正常肝组织之间蛋白质组的表达差异,发现新的肝癌肿瘤标志物,寻找与肝癌发生、发展、转移的相关蛋白,为肝癌治疗提供新的靶点.     

喉鳞形细胞癌比较蛋白质组的初步研究

目的:研究喉癌及癌旁喉正常黏膜组织蛋白质组的差异表达.方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离喉癌及癌旁喉正常黏膜组织总蛋白质,考马斯亮蓝染色显色、ImageMaster 2D软件分析所获得的双向凝胶电泳图谱,找出差异表达的蛋白质点.取差异表达的蛋白质点进行质谱鉴定.结果:获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱,并找出在喉癌和癌旁喉正常黏膜组织差异表达的33种蛋白质.其中有22种蛋白质在喉癌组织中表达上凋,11种蛋白质表达明显下调.随机取10个在喉癌组织中表达上调的蛋白点进行质谱指纹图分析,查询数据库初步鉴定出了8个蛋白质.结论:本研究建立了分辨率和重复性较强的喉癌及喉正常黏膜组织蛋白质组表达图谱,且两者蛋白质的表达明显不同,差异表达的蛋白质可能成为潜在的诊断喉癌的肿瘤标志物和治疗靶分子,对探讨喉癌的发生机制有重要意义.     

应用SELDI-TOF-MS技术建立肝细胞癌病人血清蛋白质指纹图谱筛选模型

目的 研究肝细胞癌（HCC）病人、乙型肝炎病毒（HBV）携带者、健康人血清蛋白质表达的差异，以建立HCC血清蛋白质指纹图谱筛选模型。方法 用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术（SELDI—TOF—MS）获得HCC病人、HBV携带者及健康人血清中的蛋白质指纹图谱，用计算机软件比较分析，并建立HCC的血清蛋白质指纹图谱模型筛选模型。结果 HCC组与非肿瘤组共有11种蛋白质有显著性差异；以其中4种蛋白质生物标志物（相对分子质量3448、6883、4467和3134）组建的筛选模型检测灵敏度为94．6％，特异度为92．3％。结论 建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分HBV携带者与HCC病人，SELDI—TOFMS在HCC的诊断及肿瘤特异性蛋白质生物标志分子的筛选等方面具有一定价值。     

大肠癌并肝转移的蛋白质组学研究

目的采用蛋白质组学技术研究有转移组和无转移组大肠癌组织蛋白质组表达的差异,分析和鉴定两组间特异表达的肿瘤蛋白质,探索大肠癌并肝转移发生的机制. 方法用等电聚焦/SDS聚丙烯酰胺双向凝胶电泳对比分析20例大肠癌患者原发灶、癌旁肠黏膜和肝转移灶中蛋白表达,经肽质量指纹谱分析、鉴定差异蛋白质.结果双向电泳图像对比分析表明,癌旁大肠黏膜组织、癌原发灶和肝转移灶中蛋白质表达有明显差异.在肝转移组中存在AnnexinA2蛋白和JE0350蛋白特异表达,磷酸丙酮酸水合酶和CAC15744蛋白表达上调;在无肝转移组存在CAD80231和A38983蛋白特异表达,AAH01166蛋白表达上调. 结论大肠癌并肝转移者与无肝转移者在蛋白质组表达上存在一定的差异.对这些差异蛋白质的进一步深入研究,可帮助了解大肠癌易发生远处转移的蛋白质组学机制及采取相应的处理对策.     

线粒体蛋白质组学在肿瘤研究中的进展

线粒体DNA的突变和蛋白表达谱的异常,将严重影响细胞的凋亡和能量代谢过程,这一变化可能是恶性肿瘤细胞代谢及功能异常的重要组成部分。蛋白质组学技术可以分析肿瘤细胞或组织在某一时间点内全蛋白的表达情况及活性,而基于亚细胞水平研究的线粒体蛋白质组学较传统蛋白质组学研究有更高的分辨率。线粒体蛋白质组的改变与多种肿瘤相关,随着亚细胞分离技术和蛋白质鉴定技术的发展,线粒体蛋白质组学在寻找新的肿瘤相关特性蛋白研究中显示出越来越重要的意义。     

ITRAQ蛋白技术在消化系肿瘤研究中的应用

蛋白质组学研究策略能高通量地、动态地对比分析健康和疾病不同状态下蛋白质表达谱的改变,可有效地应用于肿瘤标志物的筛选、鉴定、肿瘤分类、治疗效果的评价及肿瘤发生机制等方面的研究,使得肿瘤的诊断、分类、疗效评价由过去应用单一的肿瘤标志物进行判断发展成为现在的应用蛋白质谱或基因表达谱的改变来进行综合判断。蛋白组学研究技术中双向凝胶电泳技术是目前使用较为广泛的、发展最为成熟的蛋白质组学研究方法。双向凝胶电泳技术及其他蛋白质组学研究技术无法进行多组样本的同时研     

37例肺鳞癌中细胞周期蛋白D1的表达及其与预后的关系

目的：研究肺鳞癌中细胞周期蛋白D1的表达及其与预后的关系。方法：采用免疫组化S－P法检测37例肺鳞癌组织中细胞周期蛋白D1的蛋白质表达水平，并研究其与临床及预后参数的关系。结果：细胞周期蛋白D1阳性组肿瘤直径100％大于3cm,肺门淋巴结转移率为52．6％，3年病死率为78．9％；阴性组肿瘤直径大于3cm者为61．6％，肺门淋巴结转移率为16．7％，3年病死率为38．9％，三者组间均有显著差异（P＜0．05）。结论：肺鳞癌中细胞周期蛋白D1的表达与年龄、性别、吸烟及组织学分级无关，与肿瘤大小、淋巴结转移及3年病死率有关。细胞周期蛋白D1参与肺鳞癌的发生、发展，其表达可作为独立的预后指标。     

热休克蛋白、增殖细胞核抗原与非小细胞肺癌预后的相关关系研究

热休克蛋白（HSP）是一组生物体在不良因素下所产生的特殊蛋白，能保护机体或细胞不受或少受伤害．并参与蛋白质的转运、折叠和组装，被称为“分子伴侣”。HSP在肿瘤组织和正常组织中均有表达．但其表达程度存在明显差异。增殖细胞核抗原（PCNA）是真核细胞合成所必需的一种周期蛋白，它协调DNA前导链和后随链的合成，PCNA在许多肿瘤组织中有较高水平的表达。截止至目前，国内外文献中尚未见到有关HSP70及PCNA同时表达对非小细胞肺癌（NSCLC）预后影响的研究。     

双向电泳法分析树舌多糖GF对小鼠HepA癌细胞可溶性蛋白质组表达的影响

目的：探明树舌多糖（GAPS）GF对小鼠HepA癌细胞可溶性蛋白质组表达的影响。方法：昆明种小鼠随机分为2组：肿瘤组和树舌多糖组,接种后各组肌肉注射给药,分别给与生理盐水和树舌多糖GF。连续10天,于末次给药24h,处死小鼠,剥离肿瘤组织。应用2-DE技术检测各组小鼠HepA癌细胞可溶性蛋白的表达。应用PDQuest软件分析电泳结果,找出差异表达的蛋白质点。根据近似等电点和分子量的数值进行数据库和文献综合检索,推测差异点的蛋白质身份。结果：肿瘤组共获得蛋白质点101个,树舌多糖组85个;其中54个蛋白点为肿瘤组特异表达,38个蛋白点为树舌多糖组特异表达;肿瘤组与树舌多糖组共表达的蛋白质点中,有14个点表达量相差两倍以上。第1098号斑点认为可能是抑癌基因PTEN的产物。结论：树舌多糖GF可以影响小鼠HepA瘤细胞多种可溶性蛋白的表达,这种影响很可能与树舌多糖GF的抗肿瘤机制有关;其抗肿瘤的作用靶点之一可能为抑癌基因PTEN。     

应用MALDI-TOF-MS分析大肠癌血浆相关蛋白差异表达

目的 通过对大肠癌患者血浆蛋白质组学表达差异的研究,以期寻找大肠癌早期诊断及新相关特异的性标志物.方法 采用弱阳离子(MB-WCX)磁珠结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MAL-DI-TOF-MS)技术检测样品血浆蛋白质质谱,运用Ciphergen ProtemChip Software 3.2.1软件及Biomark Wizard 5.0软件进行数据分析筛选,并对差异表达显著的质谱峰于Swiss-Prot及TrEMBL蛋白数据库进行检索.结果 通过对比研究大肠癌组、大肠腺瘤组及正常对照组血浆差异表达质谱峰,共发现23个差异表达蛋白质谱峰,其中在大肠癌组中4个显著差异高表达(P＜0.05),荷质比(M/Z)分别为6 683、8 700、9 187、9 342;虽在大肠腺瘤组与正常组蛋白质谱峰表达无显著性差异(P＞0.05),但三组间荷质比为6 683、8 700蛋白表达呈一定递进性趋势;检索Swiss Prot蛋白质数据库结果:M/Z 6 683是成纤维细胞生长因子受体-l(FGFRl),其余均为未知蛋白,有待进一步鉴定.本研究通过表达差异蛋白建立诊断模型对大肠癌预测的准确率、敏感性、特异性分别为89.19％、83.33％、84％.结论 运用MALDI-TOF-MS技术分析大肠癌血浆蛋白质差异表达对大肠癌早期诊断以及发现或寻找新的肿瘤标志物可能具有一定的临床价值.     

蛋白质组学技术进展及在中药现代化研究中的应用

蛋白质组（proteome）是指一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质。同一基因组在不同细胞、不同组织中的蛋白质表达情况各不相同．即使是同一细胞，在不同的发育阶段、不同的生理条件甚至不同的环境影响下，其蛋白质的存在状态也不尽相同。蛋白质组是一个在空间和时间上动态变化着的整体。蛋白质组学（proteomics）是指以蛋白质组为研究对象，从整体的角度，分析细胞内动态变化的蛋白质组成与活动规律。     

差异蛋白质组学样品的制备

差异蛋白质组学是运用蛋白质组研究手段,对正常和病理状态下组织或细胞中蛋白质表达数量、位置和修饰状态的差异比较,发现与病理状态或疾病相关的特异蛋白质。差异蛋白质组学可阐明某些疾病的发病机制,筛选肿瘤特异性标记,发现新治疗靶点等,对肿瘤早期诊断、治疗有重要意义。而蛋白质样品的制备又是实验中最关键的一步。     

蛋白质组学在消化系统肿瘤中的研究进展

随着蛋白质组学相关技术的迅速发展，蛋白质组学已成为当今细胞生物学领域中极其活跃的学科。蛋白质组学的核心技术包括双相电泳、质谱分析、蛋白质组信息学。蛋白质组学从新的角度研究肿瘤，寻找肿瘤标记蛋白，进而阐明其表达水平的变化与肿瘤发生、发展不同阶段的相互关系，对肿瘤的早期诊断具有重要意义。作者就蛋白质组学研究相关技术、策略及其在消化系统肿瘤中的应用作简要综述。     

肝癌小鼠血清蛋白质图谱的建立及初步分析

目的:应用双向凝胶电泳技术(2-DE)寻找正常小鼠和H22肝癌小鼠血清之间差异表达的蛋白。方法:建立H22肝癌小鼠实验模型,对正常组和肿瘤组血清进行蛋白分离并用ImageMaster 5.0软件进行比较分析正常组和肿瘤组血清蛋白质组图谱,通过比对分析筛选出差异表达蛋白。结果:正常组和肿瘤组比较发现62个差异表达的蛋白点,其中在肿瘤组有18个表达上调,25个表达下调,10个在肿瘤组特异表达,9个在肿瘤组表达缺失。结论:肝癌的发生机制与差异性蛋白的异常表达密切相关。     

KAI1基因与肿瘤侵袭、转移、预后的关系

KAI1基因是1995年发现的肿瘤转移抑制基因，它表达的蛋白质属于TM4SF。KAI1基因的表达对大多数的肿瘤转移起抑制作用，但在个别肿瘤转移中的作用各学者看法不同。作者对近年来关于KAI1基因的结构以及与肿瘤侵袭、转移和预后关系的研究作一综述。