薯蓣皂苷元对HL-60细胞增殖及细胞周期的影响

采用XTT比色法和流式细胞仪技术观察薯蓣皂苷元(Diosgenin，Dio)对人急性髓性白血病细胞株HL-60的增殖抑制作用以及细胞周期变化。结果表明：XTT法检测其24h的半数抑制浓度(IC50)为7．36mg/L．流式细胞仪检测Dio作用24h后，G0/Gl期细胞增多，S期细胞减少，凋亡细胞增多。Dio可明显抑制HL-60细胞的增殖。     

巴西菇多糖对肝癌细胞株凋亡的影响及其机制

目的：研究巴西菇多糖诱导人肝癌细胞株(SMMC—7721)凋亡的作用及机制。方法：采用电镜、DNA电泳、免疫组化法，对SMMC—772l株细胞凋亡以及凋亡抑制基因bcl—2的表达进行检测。结果：SMMC—772l株细胞经巴西菇多糖处理后出现核固缩、膜起泡、凋亡小体形成．琼脂糖凝胶电泳呈现出典型凋亡DNA梯状带．细胞内bcl—2表达较对照组低。结论：巴西菇多糖能诱导SMMC—772l株细胞发生典型凋亡．其抑制细胞内bcl—2的表达，是诱发肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

高良姜挥发油对人HL-60细胞株增殖及凋亡的影响

目的 研究高良姜挥发油对人HL-60细胞株增殖及凋亡的影响.方法 采用CKK-8法检测不同浓度的高良姜挥发油对HL-60细胞增殖的抑制效果,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,并用Hoechst 33342染色法观察细胞凋亡的形态学改变.结果 高良姜挥发油可呈不同程度地剂量依赖性抑制HL-60细胞株增殖,能浓度依赖性阻滞HL-60细胞于G0/G1期,且随其浓度增加诱导细胞凋亡的形态越明显.结论 高良姜挥发油能抑制白血病细胞株HL-60的增殖,并具有阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡的能力.     

γ-IFN、蟾蜍灵单用与联用抑制HL-60细胞的作用

目的：观察γ干扰素(γ-IFN)、蟾蜍灵单用与联用抑制人白血病HL-60细胞的作用。方法：MTT比色法观察上述两种物质对细胞的抑制作用，以流式细胞仪检测细胞周期。结果：(1)γ-IFN可抑制HL-60细胞的增殖，但抑制作用不随其剂量增加而增加；(2)蟾蜍灵可抑制HL-60细胞的增殖，其半数抑制浓度约为0．03μmol／L，随蟾蜍灵浓度增加，抑制程度增加；(3)γ-IFN与蟾蜍灵联用后．抑制作用增强。结论：蟾蜍灵可抑制HL-60细胞的增殖，在γ-IFN联合作用下其作用增强。     

山豆根多糖对小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡的影响

为探讨山豆根多糖对地塞米松诱导的小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡的影响,通过腹腔注射地塞米松建立小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡模型,并采用琼脂糖凝胶电泳、透射电子显微镜和流武细胞术进行观察和检测.结果表明,除空白对照组外,其余各组的琼脂糖凝胶电泳图均出现梯状条带,而且透射电子显微镜观察凋亡对照组和不同剂量山豆根多糖组均可见典型的凋亡特征,胸腺和脾脏淋巴细胞的胞核染色质凝聚呈半月形、C形及凋亡小体,可见巨噬细胞吞噬凋亡小体.流式细胞仪分析显示,不同剂量山豆根多糖组凋亡率与凋亡对照组凋亡率比较有显著性差异(P＜0.01),且随着山豆根多糖剂量增大,凋亡率降低,山豆根多糖腹腔注射剂量为400mg/kg时凋亡率最低,表明山豆根多糖剂量为50～400mg/kg时对地塞米松诱导的小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡有明显的抑制作用.     

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞c-Myc、Bcl-2及PCNA表达的抑制作用

目的：研究蕨类植物半边旗提取物6F对HL—60细胞内c—Myc、Bcl—2及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响，探讨其抗肿瘤作用机制。方法：异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗体与细胞反应后在流式细胞仪上检测上述三种蛋白的表达水平。结果：58—231nmol/L 6F作用HL-60细12h后，c—Myc、Bcl—2及PCNA蛋白表达水平明显下降，并呈剂量效应关系。结论：化合物6F可下调HL—60细胞c—Myc、Bcl—2及PCNA的表达水平，推测这是6F对HL—60细胞具有强烈细胞毒作用并诱导其细胞凋亡的机制之一。     

银杏叶多糖抑制人白血病细胞增殖的试验研究

[目的]明确银杏叶多糖(PGBL)对白血病的治疗价值。[方法]以干燥银杏叶为材料,提取PGBL;向100μl对数增长期的人急性早幼粒白血病HL-60细胞悬液中分别加入100μl含PGBL50、100、200μg/ml的RPMI-1640培养液,以加入100μlRPMI-1640纯培养液为对照,研究不同浓度(50、100、200μg/ml)PGBL对HL-60细胞增殖的抑制率。[结果]50、100、200μg/ml PGBL对人急性早幼粒白血病HL-60细胞增殖均有不同程度的抑制作用,且随着药物浓度和作用时间的增加,抑制作用增强,即PGBL对HL-60细胞增殖的抑制作用存在剂量-时间依赖性;方差分析结果表明,PGBL对HL-60细胞增殖的抑制率显著高于对照(P<0.01)。[结论]PGBL对HL-60细胞增殖具有较好的抑制作用,且该抑制作用具有浓度-时间依赖性。     

大田软海绵酸对HL-7702肝细胞毒性效应的研究

[目的]探讨大田软海绵酸（okadaic acid,OA）对HL-7702肝细胞的毒性效应。[方法]通过细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）、细胞形态学观察及流式细胞术等方法,从细胞增殖、细胞凋亡等方面探讨OA对HL-7702肝细胞的毒性效应。[结果]与溶剂对照组相比,OA对HL-7702肝细胞增殖有明显的抑制作用,细胞增殖抑制率随着OA浓度的增加而增加,同时随着染毒时间的延长,细胞增殖抑制率也明显增加;与对照组相比,作用HL-7702肝细胞24h后,5nmol/LOA可明显诱导细胞发生凋亡。[结论]OA可以通过抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡的方式对HL-7702肝细胞产生毒性效应,且呈现剂量-效应关系。     

苦参素对D-氨基半乳糖苷诱导的肝细胞凋亡的干预研究

[目的]研究氧化苦参碱对肝细胞凋亡的影响。[方法]采用D-氨基半乳糖苷(D-GalN)诱导人源HL-7702肝细胞发生凋亡,探索最佳的凋亡诱导参数,建立肝细胞凋亡模型,并运用建立的体外肝细胞凋亡模型,探讨氧化苦参碱的抗凋亡作用。[结果]D-GalN在60mmol/L浓度下与HL-7702肝细胞孵育8 h为最优建模条件,在此处理条件下经凝胶电泳可见细胞凋亡特征性的DNA ladder;且与对照组相比,HL-7702细胞处理后其ALT、AST、SOD、MDA、Caspases-3水平均显著升高(P0.05)。[结论]D-GalN诱导的HL-7702肝细胞凋亡的发生机制可能与线粒体信号转导途径有关,而氧化苦参碱对D-GalN引起的肝细胞凋亡具有较强的干预作用,其抗凋亡机制可能与抑制Caspases-3、CytC、TNFα和TGF-β1等凋亡因子和诱导抗凋亡因子HO-1表达有关。     

硝普钠诱导体外培养的海马神经元凋亡的研究

目的：观察一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）对体外培养的海马神经元凋亡的影响。方法：用终浓度分别为0、25、50、100、200、400、600μmol/L的SNP处理海马神经元24h，用MTT比色法分析细胞存活率，倒置显微镜、Hoechst 33258荧光染色观察凋亡的形态学改变，DNA琼脂糖凝胶分析凋亡的生化特征。结果：SNP可剂量依赖性的降低神经元的存活率，当SNP浓度为50μmol/L时，其存活率为56.2%；倒置显微镜观察可见神经元胞体固缩，突起断裂，网络消失；荧光显微镜可见染为高亮蓝色的典型凋亡小体，其细胞核明显固缩、凝聚和断裂，且随SNP剂量的增加，出现凋亡小体的细胞明显增多；50、100、200μmol/L SNP处理海马神经元，电泳图谱显示清晰的DNA梯度。结论：SNP可诱导培养的海马神经元凋亡。     

干扰素通过上调BAX蛋白表达诱导肝癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨干扰素(IFN)体外诱导肝癌细胞凋亡及其相关基因表达的作用。[方法]不同浓度的干扰素(IFN)处理肝癌细胞系CBRH-7919细胞不同时间后,光学显微镜下观察其形态学改变,用琼脂糖凝胶电泳检测作用不同时间干扰素对其细胞凋亡的影响,利用细胞免疫组化技术检测不同作用时间下BAX蛋白表达量的变化。[结果]干扰素作用肝癌细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡形态学变化:细胞体积缩小,变形,细胞膜完整;细胞核固缩,染色质凝集,核碎裂,染色质片段化,凋亡小体形成等。琼脂糖凝胶电泳测得随着干扰素浓度的增高,出现典型的DNA LADDER。随着时间的增加BAX蛋白表达量出现增加,尤以48 h较明显。[结论]IFN可以诱导肝癌细胞凋亡,可能是由于IFN上调了BAX蛋白的表达,从而增强了自身对肝癌细胞的凋亡作用。     

半边旗提取物6F对HL-60细胞还原型谷胱甘肽(GSH)水平的影响

目的：观察半边旗提取物6F对HL—60细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)水平的影响，从氧化机测探讨其抗肿瘤作用的机哩。方法：用邻苯二醛(OPT)荧光分光度法测定细胞内还原型谷胱甘肽．结果：58至231nmol/L 6F作用细胞20h及231nmol/L 6F作用细胞6至24h，HL—60细胞内GSH含量均明显降低，呈明显的时间剂量效应关系。结论：化合物6F可降低HL—60细胞内还原型谷胱甘肽水平，推测通过细胞内氧化机制杀伤HL—60细胞并诱导其细胞凋亡是化合物6F抗肿瘤作用机测之一．     

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞的 DNA、RNA及蛋白质生物合成的抑制作用

目的：从DNA、RNA及蛋白质生物合成的角度探讨半边旗有效成分6F抗肿瘤的作用机理。方法：用台盼蓝拒染法测定细胞成活率；[^3H]—TdR，[^3H]—UTP和[^3H]—Leu参入法分别测定细胞DNA、RNA及蛋白质生物合成的水平。结果：6F对HL—60细胞生长有强烈的抑制作用，且具明显的时间和剂量效应关系。6F明显抑制HL—60细胞DNA、RNA及蛋白质生物合成，呈剂量依赖关系。6F对蛋白质合成的抑制作用最强。结论：6F对HL—60细胞生长有强烈的抑制作用，抑制细胞DNA、RNA，特别是蛋白质的生物合成是6F抗肿瘤作用的可能机制之一。     

Cu^2＋胁迫诱导花鲢血细胞凋亡的研究

以花鲢Aristichthys nobilis（Rich）血细胞为研究对象,选用不同浓度的铜离子（Cu^2＋）进行不同时间的胁迫诱导,通过瑞士姬姆萨染色和AO／EB荧光染色,在光学和荧光显微镜下观察细胞形态变化,并统计凋亡率。结果表明：在Cu^2＋的胁迫作用下。花鲢血细胞呈现细胞变圆、核变圆、核边缘化、形成凋亡小体等凋亡形态特征,且凋亡细胞随着Cu^2＋浓度的增加和作用时间的延长而增加。表明Cu^2＋能诱导花鲢血细胞发生典型的凋亡,而且细胞凋亡率与Cd^2＋的浓度和处理时间成明显的剂量一效应关系。     

斑蝥素诱导草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）卵巢细胞系Sf9凋亡的临界条件

为进一步利用昆虫细胞研究斑蝥素对鳞翅目昆虫的毒杀机理,采用细胞形态学观察法和DNA凝胶电泳法研究斑蝥素诱导草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）卵巢细胞系Sf9细胞凋亡的临界条件。结果表明：供试细胞凋亡率与斑蝥素处理剂量、时间呈现密切相关性;在较低剂量处理下,可观察到细胞凋亡。当斑蝥素质量浓度达到6.25μg/mL,处理细胞3 h或3.125μg/mL处理细胞12 h时,斑蝥素处理Sf9导致细胞出现明显畸形、形成凋亡小体等凋亡症状。DNA Ladder条件要求严格,在冰浴条件下,当斑蝥素处理质量浓度达到6.25μg/mL处理细胞24 h时,或者12.5μg/mL处理细胞12 h时,可观察到明显的DNA梯度条带。     

绿茶多酚诱导肝癌细胞凋亡时Caspase-3蛋白活性与mRNA的变化

[目的]研究绿茶多酚(EGCG)诱导肝癌细胞Hep-G2凋亡过程中半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白活性与mRNA的变化。[方法]100 mg/L的EGCG处理Hep-G2细胞48 h,DAPI染色观察细胞形态学,用MTT检测EGCG对Hep-G2细胞生长的影响,流式细胞技术Annexin V-FITC PI法检测不同浓度EGCG诱导细胞的凋亡率,分光光度法检测Caspase-3的活性,用半定量RT-PCR法检测Caspase-3的mRNA变化。[结果]100 mg/L的EGCG作用Hep-G2细胞48 h后,荧光显微镜观察到细胞出现核碎裂和凋亡小体;MTT法检测到EGCG对肝癌细胞Hep-G2的生长均有显著抑制作用,呈浓度依赖性;Annexin V-FITC PI法检测到不同浓度的EGCG作用与肝癌细胞Hep-G2后,凋亡率较对照组明显升高,并随诱导浓度的增加而增加;不同浓度的EGCG处理组和不同时间EGCG处理组的Caspase-3活性和mRNA表达量均比对照组明显升高。[结论]Caspase-3蛋白活性与mRNA上调是EGCG诱导肝癌细胞凋亡的的重要原因和机制。     

马尾松树皮提取物体外抑制人大肠癌细胞生长机理初探

为探讨马尾松树皮提取物(PMBE)体外抑制大肠癌LoVo细胞生长的作用特点和机理,通过MTT、显微镜术、凝胶电泳和流式细胞术,研究PMBE抑制LoVo细胞生长的特点,运用免疫组化和RT-PCR探究相关分子机理。结果表明:PMBE时间-剂量依赖地抑制LoVo细胞的体外生长;PMBE处理后,流式细胞检测发现LoVo细胞周期阻滞于G1或S期,同时可检测到亚二倍体峰的出现;荧光镜检和透射电镜观察可看到LoVo细胞的核皱缩、边集甚或碎裂,以及有凋亡小体形成,其基因组经过凝胶电泳呈现典型的梯形Ladder;RT-PCR和免疫组化结果显示PMBE处理可上调LoVo细胞中p53和p21基因的转录效率,并下调Bcl-2的蛋白表达量。说明PMBE通过上调p53和p21的表达量阻滞细胞周期、下调Bcl-2的表达量诱导细胞凋亡的双重机制,抑制LoVo细胞的体外生长,可供进一步探索相关信号传导通路参考。     

盘花垂头菊中两种新型倍半萜类化合物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

[目的]为开发新型肿瘤治疗药物提供依据。[方法]通过单细胞电泳和流式细胞分析法等技术,研究2种从盘花垂头菊中分离的高含氧甜没药烯型倍半萜化合物(HOBS)对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用。[结果]2种HOBS处理48 h后,SMMC-7721细胞体积变小,且出现膜泡化和凋亡小体。单细胞电泳试验表明SMMC-7721细胞经不同浓度HOBS处理后,DNA碎片在电场中呈彗星状向阳极移动,且彗星样尾迹随药物浓度的增大而增长。HOBS能以剂量依赖的方式诱导SMMC-7721细胞凋亡。当2种HOBS浓度为8μg/ml时,细胞凋亡率分别达36.7%和38.9%。凋亡率随药物浓度的增大而升高,与对照组相比有显著差异,并出现典型的凋亡峰。2种HOB可使细胞内[Ca2+]i水平升高。[结论]HOBS能诱导SMMC-7721细胞凋亡。     

棉酚对多浪羊淋巴细胞凋亡及其对核酸降解的研究

 主要通过使用RPMI 1640培养基培养淋巴细胞、瑞氏—吉姆萨染色、DNA和RNA电泳等方法来研究棉酚对多浪羊淋巴细胞的凋亡效应和对淋巴细胞核酸影响。研究结果表明,经瑞氏—吉姆萨染色4h淋巴细胞出现凋亡小体;DNA和RNA通过琼脂糖凝胶电泳检测在4h分别出现梯状条带和18S降解。可见,当细胞培养液中棉酚浓度为1.35μmol/L,培养淋巴细胞4h后,可抑制多浪羊淋巴细胞的增殖,并且促进凋亡及其核酸的降解。     

海带多糖对小鼠肠黏膜组织SIgA的影响

[目的]研究海带多糖对小鼠肠黏膜组织SIgA的影响。[方法]将40只昆明小鼠随机分为4组,分别以125、250、500μg/g的海带多糖灌胃小鼠15d,以灌胃蒸馏水小鼠为对照,取小肠黏膜,采用试剂盒法测小肠黏膜组织的Siva活性。[结果]250和500μg／g的海带多糖能够促进小鼠肠黏膜对SIgA的分泌量。[结论]海带多糖能够显著增强小鼠肠黏膜组织SIgA活性,并有随剂量增加活性增强的趋势。海带多糖对小鼠的免疫调节可能是通过肠道免疫系统发挥作用。