结核分支杆菌耐药分子机制的检测技术的研究

目的：探讨结核分支杆菌对异烟肼、利福平耐药的分子机制，建立快速检测耐药分支杆菌基因型的分子生物学方法。方法：采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR—SSCP)同时检测结核分支杆菌敏感株和耐异烟肼、利福平耐药株的KayG基因、rpoB基因突变。结果：78株结核分支杆菌临床分离株均未发现KatG、rpoB基因缺失。以结核分支杆菌H37RV为对照，36株药物敏感株的KarG、rpoB基因SSCP图谱均正常。42株同时耐异烟肼和利福平的多耐药株中，KatG和rpoB基因突变率分别为66．7％(28／42)，90．5％(38／42)。结论：结核分支杆菌耐异烟肼、利福平耐药性的产生是由于KatG基因和rpoB基因突变所致。应用PCR-SSCP技术可同时快速检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药性。     

氟喹诺酮类药物治疗老年初治肺结核疗效观察

目的观察和评价3种含氟喹诺酮类药物的化疗方案治疗老年初治肺结核的疗效及安全性。方法将197例初治老年患者随机分为四组,化疗方案分别为：左氧氟沙星组：异烟肼利福平乙胺丁醇（吡嗪酰胺）左氧氟沙星／4异烟肼利福平[2HRE（Z）V／4HR];氧氟沙星组：异烟肼利福平乙胺丁醇（毗嗪酰胺）氧氟沙星／4异烟肼利福平[2HRE（Z）O／4HR];环丙沙星组：异烟肼利福平乙胺丁醇（吡嗪酰胺）环丙沙星／4异烟肼利福平[2HRE（Z）C／4HR];对照组：异烟肼利福平乙胺丁醇（吡嗪酰胺）／4异烟肼利福平[2HRE（Z）／4HR],均为6个月化疗方案,采用全程督导化疗管理。结果全部患者依照化疗方案完成治疗,其中含氟喹诺酮类药物组痰菌转阴率分别为88：9％、87．5％、81．1％,对照组为59．7％;含氟喹诺酮类药物组治疗显效率分别为82．2％、79．2％、75．7％,对照组为59．7％;含氟喹诺酮类药物组治疗有效率分别为93．3％、91．7％、97．3％,对照组为82．1％。含氟喹诺酮类药物治疗组疗效明显优于对照组（P〈0．05）。而左氧氟沙星、氧氟沙星及环丙沙星在初治性肺结核治疗中效果相差不大,但环丙沙星药物不良反应发生率高于左氧氟沙星及氧氟沙星。结论氟喹诺酮类药物用于抗结核治疗疗效肯定,对于老年初治肺结核推荐选用左氧氟沙星或者氧氟沙星。     

福建地区汉族人群N-乙酰基转移酶基因多态性

目的 探讨福建地区汉族人群N—乙酰基转移酶(NAT2)基因多态性分布规律。方法 应用自动实时荧光Light—Cycler技术，对168名福建地区汉族健康人NAT24个位点的基因多态性进行检测，并与其它人群比较。结果 NAT2多态位点各基因型频率分别为：NAT2*4／NAT2*4(39．2％)，NAT2*4／NAT2*6A(28．0％)，NAT2*6A／NAT2*7A／B(14．3％)，NAT2*4／NAT2*7A／B(10．7％)，NAT2*4／NAT2*5A(3．6％)，NAT2*6A／NAT2*6A(3．0％)，NAT2*7A／B／NAT2*7A／B(1．2％)。等住基因频率分别为：NAT2*4(60．4％)，NAT2*6A(24．1％)，NAT2*7A／B(13．7％)，NAT2*5A(1．8％)；未检测到NAT2*5A纯合变异体和NAT2*14A突变等位基因。结论 福建地区汉族人群N-乙酰基转移酶(NAT2)基因多态分布与日本人接近，与欧美人显著不同。     

N-乙酰基转移酶2基因多态性研究进展

N-乙酰基转移酶2是人体内重要的Ⅱ相代谢酶,可催化芳香胺类和杂环胺类物质的乙酰化过程。我国人群中NAT2基因以快乙酰化基因表型为主,最常见的基因型为NAT2*4A、NAT2*6A、NAT2*7B。NAT2慢乙酰化代谢基因型与膀胱癌的发生相关,与异烟肼所致的药物性肝炎相关。研究NAT2基因多态性对评价肿瘤的发生、判断预后及指导药物个体化治疗、减少或减轻药物不良反应有着重要的意义。     

N-乙酰转移酶2慢乙酰化型异烟肼致抗结核药物性肝损伤1例

目的探讨N-乙酰转移酶2(N-acetyltransferase2,NAT2)基因多态性在指导结核个体化治疗和保障患者用药安全中的作用。方法回顾性分析异烟肼致抗结核药物性肝损伤(anti-tuberculosis drug-induced liver injury, ATB-DILI)病例1例,结合文献对异烟肼所致ATB-DILI的诊断标准、临床特征、防治方法等进行分析。结果患者因治疗结核服用异烟肼0.3 g, 1次/d,用药7 d后出现肝功能损害,停药,给予保肝治疗后缓解。对患者进行NAT2基因多态性,为慢乙酰化型。异烟肼减量至0.1 g, 1次/d,给予预防性保肝治疗,随访患者5个月,未再出现肝功能损伤等不良反应,结核病情控制稳定。结论异烟肼所致ATB-DILI较为常见,通过检测NAT2基因多态性,指导患者调整治疗方案,保障治疗效果的同时保障患者用药安全。     

N乙酰化转移酶2基因多态性与异烟肼所致肝损伤研究进展

N-乙酰转移酶2是人体内重要的Ⅱ相代谢酶,在芳香胺类和肼类化学物质代谢中起重要作用.我国人群中NAT2基因以快乙酰化基因表型为主,最常见的基因型为NAT2*4A、NAT2*6A、NAT2*7B.NAT2慢乙酰化代谢基因型与异烟肼所致的药物性肝炎相关,NAT2*5等位基因频率的差异是导致慢乙酰化频率差异的主要原因之一.研究NAT2基因多态性对指导异烟肼个体化治疗、减少或减轻药物不良反应有着重要的意义.     

CYP2C19基因多态性对肺结核患者利福平血药浓度的影响及个体化用药的研究

目的探讨肺结核患者给予利福平(RFP)后血药浓度的个体差异与肝药酶P450 2C19(CYP2C19)基因多态性的关系,为临床合理用药提供参考。方法 HPLC检测142例肺结核患者利福平的血药浓度。运用PCR-RFLP方法对所有患者的CYP2C19*2和CYP2C19*3位点进行基因型分型,分析基因多态性与RFP血药浓度的相关性。结果不同基因型的肺结核患者RFP血药浓度在个体间存在很大差异,其中CYP2C19*2位点的AA基因型与GG基因型的患者相比,给药后2、4、8 h前者RFP血药浓度明显高于后者,差异有统计学意义(P<0.05);CYP2C19*3位点的AA基因型与GG基因型的患者相比,给药后8 h前者RFP血药浓度明显高于后者,差异有统计学意义(P<0.05),其他基因型之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究结果证实CYP2C19基因多态性影响RFP血药浓度,说明药物遗传学因素对RFP临床合理用药有指导意义。     

利福喷叮治疗肺结核合并乙肝28例的临床分析

目的：探讨利福喷叮治疗肺结核合并乙肝的临床表现。方法：对２８例肺结核合并乙肝病毒携带者用含利福喷叮方案治疗的结果及肝毒副作用进行分析。并以利福平为对照。结果：治疗组和对照组二个月痰菌转阴率分别为７８．５％和８５．１％。Ｘ线表现病灶总吸收率分别为８９．３％和７２．１％，治疗组肝损害发生率小于利福平组。结论：利福喷叮是一种新的、有效的、安全的抗结核药物，疗效与利福平相当，对乙肝病毒携带者肝损害比利福平小，值得临床推广作用。     

两点采样法评估人体NAT2酶的基因型与异烟肼代谢表型、肝功能异常之间的关系

目的通过两点采样法评估NAT2酶的基因型与异烟肼的乙酰化率、肝损害之间的关系。方法选取口服异烟肼达到稳态的患者共57例,分别于服药后2、4 h采取末梢血样。采用超高效液相色谱质谱联用设备(UPLC-MS)测定其中的异烟肼和乙酰异烟肼的药物浓度,计算二者的比率值。任意时间点低于1的比值定义为慢代谢临床表型,其余为中间代谢表型和快代谢临床表型。同时对血样标本提取核酸,测定的N-乙酰转移酶-2(NAT2)的rs1041983点位的SNP情况。根据SNP结果,将基因型分为慢代谢组(TT)、中间代谢组(CT)和快代谢组(CC)。将基因型与代谢表型、肝功能损害发生之间分别进行比对,判断NAT2的药物代谢表型与基因突变类型之间的关系。结果慢代谢与快代谢人群中,两个时间点的药物浓度均有高低,两者之间的可信区间有重叠,无法明确区分。单点代谢产物之间的比值不能全部区分出慢代谢人群。而两个时间点的代谢产物之间的比值可以完全区分快慢代谢人群的基因型。慢代谢基因型人群发生肝功能异常的发生率约84.6%,快代谢人群发生率仅29.5%,两者差异有统计学意义(χ^(2)=12.485,P<0.001)。结论NAT2慢代谢基因型人群发生肝损害的人群比例较高。但基因型只能提示代谢速率的快慢,而不能确定是否必定会发生肝功能损害。两点采样的乙酰异烟肼与异烟肼的比值可以直接作为判断NAT2酶快慢代谢的诊断指标,更具有实际应用价值。最佳参考的比率取值为1。     

结核分枝杆菌rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度的相关性

目的 研究结核分枝杆菌，rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度强弱之间的关系。方法应用绝对浓度法测定58株结核分枝杆菌对4种－线抗结核药物的药敏特性，对耐利福平结核分枝杆菌的耐药谱进行分析。同时对含有核心突变区的结核分枝杆菌，rpoB基因片段进行PCR扩增和DNA测序，分析rpoB基因突变与多重耐药的关系，以及突变位点和突变性质与利福平耐药强弱的相关性。结果58株结核分枝杆菌中，利福平耐药株36株，敏感株22株。36株耐药株均存在，rpoB基因突变，其中88．9％(32／36)至少对利福平和异烟肼同时耐药。90．O％的利福平高度耐药株(18/20)与rpoB基因531位和526位密码子突变相关。密码子531位和526位各有1株双碱基突变，且均为多重耐药株。结论结核分枝杆菌，rpoB基因突变所致的利福平耐药株大部分对异烟肼耐药，因此单独检测rpoB基因突变即可初步筛选多重耐药的结核分枝杆菌；而rpoB基因的突变位点与利福平耐药程度之间具有一定的相关性。     

四川地区结核分枝杆菌喹诺酮耐药基因突变研究

目的 研究结核分枝杆菌耐喹诺酮类药物的分子机制,探索四川地区耐喹诺酮结核分枝杆菌临床分离株的耐药基因突变特征。方法 采用绝对浓度法检测结核分枝杆菌临床分离株的最小抑菌浓度(MIC),再通过聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和直接测序检测结核分枝杆菌耐喹诺酮类药物临床分离株gyrA耐药决定区(QRDR)突变,并和标准株H37Rv比较。结果 68株临床分离株中,14株喹诺酮药物敏感株和8株低耐药株未发现gyrA耐药决定区基因突变,25株高耐药株、11株低耐药株和10株药物敏感株检测到gyrA基因突变,高耐药株突变率为100％,低耐药株突变率为58％,敏感株突变率为42％,总的突变率为68％。根据SSCP条带,gyrA突变可分成4种类型,测序发现分别为Ser95Thr、Asp94Gly、Ala90Val、Ala83Val突变。结论 结核分枝杆菌耐喹诺酮与gyrA基因突变密切相关,gyrA基因突变是耐喹诺酮结核分枝杆菌耐药性的主要分子机制。     

Polymorphism of N-acetyltransfemse 2 （NAT2） Gene Polymorphism in Shanghai population： Occupational and Non-occupational Bladder Cancer Patient Groups

OBJECTIVE: Arylamine N-acetyltransferases (NATs) are involved in the detoxification of aromatic amines and hydrazine. In order to explore the possible association of NAT2 polymorphism with bladder cancer risk in benzidine exposed or non-exposed Chinese individuals, healthy subjects, subjects with bladder cancer of a former benzidine exposed cohort in Shanghai dyestuff industry and a group of bladder cancer patients without known occupational exposure to aromatic amines were genotyped for NAT2 gene polymorphism. METHODS: NAT2 genotyping was performed with a set of RFLP procedures at seven major polymorphic loci of gene coding area: G191A, C282T, T341C, C481T, G590A, A803G and G857A. RESULTS: The wild allele NAT2 *4 was the most prevalent allele (59%) in healthy individuals. The alleles NAT2*6A and NAT2*7B were also frequently observed (21% and 17%, respectively). In contrast to Caucasians, the percentage of slow acetylators was lower (12% in Chinese vs. 58% in Caucasians, P < 0.001). No relevant differences were observed for homogenous rapid, heterogeneous rapid/slow and homogeneous slow acetylation genotypes between the healthy subjects and both groups of bladder cancer patients. CONCLUSION: The present work did not support the association of slow acetylating genotypes of NAT2 gene with elevated risk of bladder cancer in Chinese whereas it was documented as an important genetically determined risk factor in Caucasians. Different mechanisms might play a role in individual susceptibility to bladder cancer related with aromatic amine exposure in various races or ethnic groups.     

结核分枝杆菌异烟肝耐药基因突变的研究

目的：了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼（INH）分离株katG基因突变情况,探讨快速检测结核分枝杆菌耐药基因型的分子药敏检测方法。方法：用PCR单链构象多态性（PCR－SSCP）和PCR直接测序法（PCR－DS）检测30株结核分枝杆菌临床分离株的katG基因。结果：以结核分枝杆菌H37Rv标准株对照观察所有INH敏感株的PCR－SSCP和PCR－DS图谱,均未发现异常;而在12株INH耐药株中,有4株无PCR－SSCP和PCR－DS图谱异常,占INH耐药株的33．4％;有5株在94位发生核苷酸错义突变,占INH耐药株41．7％,有3株在96位发生核苷酸同义突变,占INH耐药株的25％。结论：多数结核分枝杆菌对INH是由于其katC基因突变所致,可先用PCR－SSCP筛选突变株,再用PCR－DS方法测定其突变位点,达到快速检测结核分枝杆菌INH耐药基因型的目的。     

代谢酶NAT2多态性与大肠息肉及腺瘤的复发

目的：研究代谢酶基因NAT2多态性与大肠息肉及腺瘤复发的关系,探讨其与大肠癌遗传易感性。方法：在1980年,建立了4076例大肠癌高危人群队列,这4076例均有大肠腺瘤或息肉史。从高危人群中随机抽取52例息肉,腺瘤复发2次以上者为复发组,另抽取52例无复发者为对照,从抗凝外周血白细胞中提取DNA,采用聚合酶链反应－限制性内切酶片段长度多态性（PCR－RFLP）方法分析。比较NAT2的多态性分布差异,结果：NAT2野生型Wt/Wt频率在无复发组（17／52,32．7％）明显高于复发组（8／52,15．4％）,杂合型在复发组频率为40／52（76．9％）,与无复发组频率30／52（57．7％）比较,均有显著意义（P＜0．05）,以Wt/Wt基因型的危险度（OR）为1,则Wt/M*基因型的OR为2．96,95％CI为1．091－8．009,M＊／M＊基因型的OR为2．125,95％CI为0．666－6．781。在复发与无复发组中,未发现NAT2快速与慢速酶的差异,结论：NAT2野生型（Wt/Wt)可能是大肠腺瘤复发的保护因素,但未发现NAT2快速与慢速酶在大肠腺瘤复发中的差异。     

Polymorphism of N-acetyltransferase 2 (NAT2) Gene Polymorphism in Shanghai population:Occupational and Non-occupational Bladder Cancer Patient Groups

INTRODUCTION Arylamine N-acetyltransferases (NATs, EC 2.3.1.5) are involved in the detoxification of aromatic amines and hydrazine[1]. NAT2 polymorphism affects individual抯 acetylation ability for these substances[2]. Individuals can be phenotyped for th…     

肺结核患者结核分枝杆菌利福平基因突变特征及耐药情况

目的 探讨肺结核患者当中的结核分枝杆菌利福平基因发生突变的特征,同时分析其耐药情况,为耐药结核病的预防和治疗提供科学依据。 方法 选取2016年6月—2018年12月杭州师范大学附属医院收治的肺结核患者532例,依据其痰液中的结核分枝杆菌耐药性分为耐药株(218株)及敏感株(314株)。测定2组菌株的rpoB基因序列及最低抑菌浓度(MIC)值水平。 结果 218株耐药菌株中180株为单重突变耐药菌株,rpoB基因结构分析发现,发生比率最高的突变密码子分别为526位(13.2%)、531位(74.4%)。206株(94.5%)耐药菌株出现至少1个突变位点,且均位于耐利福平决定区(RRDR),12株(5.5%)耐药菌株突变位点在RRDR之外。有4株耐药菌株在RRDR之内发生同义突变,4株耐药菌株在RRDR之外发生同义突变。H37Rv密码子未发生任何突变。有8株敏感菌株发生同义突变在RRDR之外。单重突变菌株的RIF平均MIC值水平为(47.34±2.04)μg/mL,显著低于多种突变菌株平均MIC值水平[(118.24±3.95)μg/mL,t=107.636,P<0.001]。526单密码子平均MIC值水平与531单密码子突变菌株的MIC值水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。多重密码子突变菌株的MIC值水平为(116.03±5.06)μg/mL高于单重密码子平均MIC值水平[(47.08±1.31)μg/mL,t=85.530,P<0.001]。 结论 利福平耐药性机制可能与rpoB基因的起始端531位、526位等突变相关,rpoB基因序列可用于预测结核分枝杆菌中的利福平耐药情况及表型。      

7株结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分离株embB基因测序分析

目的 :探讨结核分枝杆菌对乙胺丁醇 (EMB)产生耐药性的分子机制 ,建立直接快速检测结核分枝杆菌EMB药物敏感性的实验方法。方法 :采用PCR扩增技术对 7株耐乙胺丁醇结核分枝杆菌进行PCR扩增 ,扩增产物经纯化后 ,直接在ABI3 77型全自动测序仪上进行DNA测序分析。结果 :7株EMB耐药株的embB基因测序有 5株 ( 71.4% )发现点突变 ,其中Met(ATG)→Lle(ATA) 1例 ,Met(ATG)→Lle(ATC) 1例 ,Met(ATG)→Lle(ATT) 2例 ,Met(ATG)→Val(GTG) 1例 ,另外 2株EMB耐药株的embB基因测序未发现突变位点。结论 :embB3 0 6位氨基酸Met被置换是结核分枝杆菌对乙胺丁醇产生耐药性的重要机制 ,测序分析可确认耐药基因的突变位点 ,是快速检测耐乙胺丁醇结核菌的有效方法     

毒物代谢酶基因多态性与阿尔茨海默病遗传易感性的相关研究

目的 探讨细胞色素P450 1A1基因和N-乙酰基转移酶基因多态性与阿尔茨海默病的关系.方法 采取病例对照研究方法及聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术分析135例散发性AD与138例正常健康对照组的细胞色素P450 1A1基因MSP1位点及NAT2基因型在阿尔茨海默病患者与正常人之间的分布差异.结果 细胞色素P450 1A1各基因型在两组中分布差异无显著性意义;NAT2基因慢乙酰化型基因型在AD组中的分布频率(21.5%)明显高于对照组(12.3%),OR值达1.947.结论 细胞色素P450 1A1基因MSP 1的多态性与阿尔茨海默病的遗传易感性无关;N-乙酰基转移酶基因多态性与AD的遗传易感性相关.     

结核分枝杆菌异烟肼耐药基因突变的研究

目的 :了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼 (INH)分离株katG基因突变情况 ,探讨快速检测结核分枝杆菌耐药基因型的分子药敏检测方法。方法 :用PCR单链构象多态性 (PCR SSCP)和PCR直接测序法 (PCR DS)检测 30株结核分枝杆菌临床分离株的katG基因。结果 :以结核分枝杆菌H3 7RV 标准株对照观察所有INH敏感株的PCR SSCP和PCR DS图谱 ,均未发现异常 ;而在 12株INH耐药株中 ,有 4株无PCR SSCP和PCR DS图谱异常 ,占INH耐药株的33 4% ;有 5株在 94位发生核苷酸错义突变 ,占INH耐药株 41 7% ,有 3株在 96位发生核苷酸同义突变 ,占INH耐药株的 2 5 %。结论 :多数结核分枝杆菌耐INH是由于其katG基因突变所致 ,可先用PCR SSCP筛选突变株 ,再用PCR DS方法测定其突变位点 ,达到快速检测结核分枝杆菌INH耐药基因型的目的     

CYP1B1基因多态性与妊娠期肝内胆汁淤积症易感性的关系

目的研究CYP1B1基因外显子2密码子119(G-T)和外显子3密码子432(C-G)多态性与妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)发病的关系。方法分别应用等位基因特异性PCR(AS-PCR)技术和人工修饰双等位基因特异性引物扩增(diASA-AMP)法,对100例ICP患者和100例正常对照孕妇CYP1B1基因外显子2密码子119(G-T)和外显子3密码子432(C-G)多态性进行分析。结果1CYP1B1基因密码子119多态分析表明ICP组T等位基因频率高于对照组(P<0.05),ICP组基因型GG、GT、TT频率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。与野生型(GG)相比,ICP组GT基因型和TT基因型增加ICP的发病风险(OR值分别为2.435和3.600);2CYP1B1基因密码子432多态分析表明两组均未检测到GG突变型,基因型CC、CG频率和等位基因C、G频率的比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CYP1B1基因外显子2密码子119多态性可能与成都地区ICP易感性有关。