肺炎患儿痰标本采集时机对痰细菌学检验的影响

[目的]探讨小儿肺炎病人痰细菌学标本采集时机,提高痰细菌学检查的阳性率。[方法]将2012年3月—2012年12月602例需要采集痰标本的肺炎患儿作为研究对象,采用自身对照法,患儿入院后随时采取的痰液标本为对照组,第2天晨起未进食采集的痰标本为观察组,对两组痰标本进行细菌学对照分析。[结果]观察组培养出细菌362株,阳性率为60.13%;对照组培养出细菌275株,阳性率为45.68%,观察组细菌培养阳性率明显高于对照组(P0.01)。观察组标本合格率高于对照组。[结论]通过改进小儿痰培养标本的采集时机可以提高痰细菌学检验标本的合格率及阳性率,为临床合理使用抗生素提供依据。     

快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的PCR方法学评价

摘要：目的：对PCR法直接检测标本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药基因mecA的可靠性进行评估。 方法：用经细菌表型鉴定的70株临床标本分离株进行方法学评估,其中MRSA 22株,非MRSA 48株,检测其最低检测限、重复性、灵敏度和特异性。同时对269份临床标本,包括67份痰液、82份血液、68份尿液以及52份无菌体液进行PCR检测和细菌表型鉴定,分析结果符合率。 结果：PCR法的最低检测限为5×10⁴ CFU/mL;菌数5×10⁶和5×10⁴ CFU/mL标本的批内变异系数（CV）为0.81%、0.94%,批间CV为1.48%、2.03%;检测经表型鉴定的菌株,敏感性和特异性均达到100%。痰液标本PCR检测和细菌表型鉴定符合率为98%,血液、尿液和其他体液标本均为100%。 结论：PCR法检测mecA耐药基因,方便、快速且最低检测下限和重复性等性能指标均比较理想,与表型鉴定符合率较高,适于临床应用。     

肺炎患儿痰标本采集时机对痰细菌学检验的影响

[目的]探讨小儿肺炎病人痰细菌学标本采集时机,提高痰细菌学检查的阳性率.[方法]将2012年3月-2012年12月602例需要采集痰标本的肺炎患儿作为研究对象,采用自身对照法,患儿入院后随时采取的痰液标本为对照组,第2天晨起未进食采集的痰标本为观察组,对两组痰标本进行细菌学对照分析.[结果]观察组培养出细菌362株,阳性率为60.13％;对照组培养出细菌275株,阳性率为45.68％,观察组细菌培养阳性率明显高于对照组（P＜0.01）.观察组标本合格率高于对照组.[结论]通过改进小儿痰培养标本的采集时机可以提高痰细菌学检验标本的合格率及阳性率,为临床合理使用抗生素提供依据.     

快速分离培养基的简易制备方法及其临床应用

目的制备用于临床标本快速分离病原菌的培养基,以提高临床标本细菌培养的检出速度。方法在实验室制备分离培养基过程中按一定比率加入商品化BD快速血培养液,并使用标准菌株和临床标本进行实验观察。结果将标准菌株及临床标本按不同的标本类型分别接种于普通组分离培养基和快速组分离培养基,使用快速分离培养基可显著提高临床标本细菌分离培养速度至8 h左右,两组培养基中血琼脂平板典型菌落溶血结果符合率95.7%(22/23);细菌鉴定结果符合率为98.6%(144/146)。结论快速分离培养基的制备过程简单、对细菌分离效果良好,可显著提高细菌标本检验速度,为临床细菌性感染疾病的快速诊断提供了有效的途径。     

396例住院患者痰培养细菌学分布及耐药性分析

目的研究住院患者痰培养细菌学分布及耐药性,为指导临床合理使用抗菌药物提供依据。方法采用常规细菌分离培养和鉴定技术以及药敏试验方法,对396例呼吸道感染患者痰标本进行了细菌学检验和耐药性分析。结果从396例患者痰标本中共分离病原菌92株,阳性率为23.23%。检出革兰阴性杆菌76株,占检出总数的62.8%;大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和不动杆菌居前3位,构成比依次为32.2%、15.7%和9.1%。检出真菌29株,占24.0%,以白色念珠菌为主。检出革兰阳性球菌12株,占9.9%,主要为葡萄球菌。痰标本检出的革兰阴性杆菌对临床常用抗菌药物普遍耐药。结论呼吸道感染患者痰标本检出病原菌主要是革兰阴性杆菌,真菌检出率居第2位,临床感染病原菌普遍耐药。     

血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏中应用分离胶试管的方法探讨

目的探讨血培养的细菌快速鉴定和药敏实验,与常规法(转种后取得的纯菌落鉴定及药敏试验)的符合率。方法血培养仪器报警阳性后,无菌吸取一定量的培养液至含分离胶的试管中,2 000 rpm离心15 min后吸取分离胶上层含菌液体,直接进行细菌鉴定和药物敏感试验;同时与转种后取得的纯菌落鉴定及药敏试验常规方法结果进行比较。结果 66株血培养阳性标本离心集菌直接鉴定和转种菌落常规鉴定结果符合率达85%以上;药敏试验结果符合率>95%。离心集菌法比常规法提前近24 h。结论血培养阳性标本使用分离胶的试管离心集菌后直接进行细菌鉴定及药敏试验,可以缩短检验时间,且与常规法的实验结果符合率高。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染及其耐药性分析

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)医院感染临床分布及耐药情况,为临床合理用药提供参考依据。方法采用标本检验和药敏试验方法,对病人标本进行MRSA分离鉴定和药敏试验,并对结果进行分析。结果从病人标本中分离的320株金黄色葡萄球菌中检出MRSA 68株,检出率为21.3%。MRSA菌株主要分离自痰液和咽拭子标本,占61.8%;其次是脓液,占16.2%。MRSA感染患者主要来源科室为ICU和神经外科居多。临床分离的MRSA对苯唑西林、青霉素G耐药率100%;对红霉素、四环素耐药率>50%。结论该医院MRSA感染者主要分布于ICU,以痰标本和咽拭子分离率最高,MRSA普遍耐药。     

近3a高原地区军队总医院医院感染情况分析

对我院近3 a来医院感染的菌群分布及耐药情况分析如下。1对象和方法1.1对象标本全部来自我院2002-10-30~2005-10-30临床各科送检样品分离所得。依据卫生部临床检验中心相关要求,统计血液、尿液和痰液三种样品的细菌分离数。其中,血液分离菌608株(送检3 285份)、尿液分离菌1 244株(送检6 639份)、痰液分离菌780株(送检4 214份),共计2 632株。1.2检测方法不同样品接种相应培养基,35℃18~24 h培养,分离菌株后鉴定。药敏纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司,于-20℃以下干燥保存,并要求在有效期内使用。药物敏感性试验采用纸片扩散法(K-B法)…     

痰标本分析前涂片镜检的临床价值分析

目的对634例痰标本进行分析前涂片革兰染色镜检的结果与其培养结果进行比较,了解痰培养标本分析前涂片镜检的临床价值。方法收集634例痰标本,肉眼观察痰标本分析前的性状、颜色等,然后进行涂片、革兰染色、镜检,根据涂片镜检结果,将痰标本分为A、B、C三大类。同时对上述痰培养标本进行培养鉴定,分析比较镜检结果与细菌检出率的关系。结果 634例痰培养标本中,涂片结果合格标本495例,占78.08%;不合格标本139例,占21.92%。共检出457株细菌。在495例涂片结果合格的标本中,检出408株细菌,细菌检出率为82.42%,合格痰培养标本涂片结果与培养结果的符合率为71.72%。在139例涂片结果不合格的标本中,检出49株细菌,检出率为35.25%。肉眼观察痰培养标本分析前的性状,黏性、血性和脓性痰的合格率和细菌检出率明显高于水样或泡沫样痰;在不同颜色痰标本中,无色痰的合格率和细菌检出率低于其他颜色的痰标本。结论痰培养标本分析前做涂片革兰染色镜检可以筛除不合格的痰标本,提高痰培养的细菌检出率,对检验结果的正确与否具有重要价值。     

全自动细菌鉴定仪对血培养阳性标本直接鉴定及药敏试验比较

目的探讨全自动细菌鉴定仪对血培养阳性标本直接鉴定及药敏试验的临床应用价值和与常规法(转种后取得的纯菌落上机鉴定及药敏试验)的符合率。方法将血培养阳性标本的培养液混匀于专用接种水中,再接种于专用鉴定扳上直接上机做细菌鉴定和药敏试验,并与转种后取得的纯菌落上机鉴定及药敏结果进行比较。结果74份血培养阳性标本直接上机与转种菌落上机鉴定结果符合率达94.4%以上,血培养阳性的标本直接上机与转种菌落上机的药敏试验结果符合率>95%。而直接法比常规法提前了近24h。结论对血培养阳性标本进行直接鉴定及药敏试验缩短了检验时间,为菌血症的治疗争取了时间,而且与常规法的实验结果符合率高。     

CPS4显色培养基在分离鉴定泌尿道病原菌中的价值

目的：评估CPS4显色培养基在分离鉴定泌尿道病原菌的诊断价值。方法收集2013年1～12月武汉大学中南医院临床科室送检的中段尿细菌培养标本1074份,以CPS4显色培养基与传统方法分别进行分离鉴定,并比较鉴定结果。结果传统方法分离出病原菌464株,其中大肠埃希菌229株（占49．4％）,其次是肠球菌98株（占21．1％）,检出复合菌株29例;用CPS4显色培养基分离出病原菌466株,检出复合菌株33例,与传统方法的分离培养性能基本一致,直接鉴定大肠埃希菌、肠球菌、变形杆菌及克雷伯菌属－肠杆菌属－沙雷菌属－枸橼酸杆菌属群（KESC群）的符合率达97％以上,且直接鉴定的细菌数占泌尿系统病原菌85．3％。结论 CPS4显色培养基能简便、快速地分离鉴定临床常见的泌尿道病原菌,且混合菌感染的分离鉴定更优,有利于泌尿道感染的快速诊断。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定丝状真菌的影响因素分析

  目的  评估菌株培养条件、培养天数以及结果判定截断值(cut-off value, COV) 3种因素对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)鉴定丝状真菌能力的影响。  方法  将78株受试丝状真菌分别接种到沙堡弱葡萄糖琼脂(sabouraud dextrose agar, SDA)、土豆葡萄糖琼脂(potato dextrose agar, PDA)两种培养基及28、35℃两种培养温度共4种组合的培养条件下进行培养, 并于培养第2、3、4、5天以及第7天对其进行MALDI-TOF MS分析, 根据鉴定率的差异筛选菌株MALDI-TOF MS鉴定用最佳培养条件和培养天数; 下调MALDI-TOF MS结果判定COV, 分析其对MALDI-TOF MS丝状真菌鉴定率的影响。  结果  受试菌株在SDA和PDA两种培养基间的MALDI-TOF MS鉴定率无显著性差异(χ²=0.467, P=0.792), 但28℃培养温度下的鉴定率高于35℃培养温度(χ²=7.195, P=0.027);培养第2、3天种水平(40.3%和34.3%)和属水平(44.8%和46.3%)鉴定率均较高; 将MALDI-TOF MS种水平判定COV由 > 2.0下调至 > 1.7后, 受试菌株种水平判定率显著提升(85.9%比32.1%, χ²=40.119, P < 0.01)且不增加错误鉴定率。  结论  丝状真菌以SDA或PDA培养基28℃培养2~3 d, 并以分值> 1.7作为种水平判定COV, 可有效提高MALDI-TOF MS对丝状真菌的鉴定能力。     

Protein markers for identification of Yersinia pestis and their variation related to culture

The detection of high consequence pathogens, such as Yersinia pestis, is well established in biodefense laboratories for bioterror situations. Laboratory protocols are well established using specified culture media and a growth temperature of 37 °C for expression of specific antigens. Direct detection of Y. pestis protein markers, without prior culture, depends on their expression. Unfortunately protein expression can be impacted by the culture medium which cannot be predicted ahead of time. Furthermore, higher biomass yields are obtained at the optimal growth temperature (i.e. 28 °C–30 °C) and therefore are more likely to be used for bulk production. Analysis of Y. pestis grown on several types of media at 30 °C showed that several protein markers were found to be differentially detected in different media. Analysis of the identified proteins against a comprehensive database provided an additional level of organism identification. Peptides corresponding to variable regions of some proteins could separate large groups of strains and aid in organism identification. This work illustrates the need to understand variability of protein expression for detection targets. The potential for relating expression changes of known proteins to specific media factors, even in nutrient rich and chemically complex culture medium, may provide the opportunity to draw forensic information from protein profiles.     

MALDI-TOF MS鉴定马尔尼菲篮状菌的实验条件优化

目的 构建用于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)鉴定马尔尼菲篮状菌的数据库,并探索用于MALDI-TOF MS鉴定马尔尼菲篮状菌的最佳培养条件和前处理方法 .方法 利用8株马尔尼菲篮状菌构建自建数据库,比较不同培养基[沙保弱葡萄糖琼脂培养基(SDA)、沙氏葡萄糖肉汤培养基(SDB)]、培养...     

5种商品化解脲脲原体培养基质量评价研究

目的评价商品化解脲脲原体（Uu）培养基的质量。方法应用标准菌株Uu4和Uu14比较5种培养基（M、K、L、H、A）的敏感性;以固体培养基的结果作为金标准,应用Uu临床菌株比较5种培养基的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及和金标准的一致度。结果 M和K培养基敏感性最高;M、K、L和H培养基的敏感性〉90.00%;M、K、A培养基特异性达到100.00%;M、K、A阳性预测值为100.00%,而M、K阴性预测值最高,均为99.24%;M、K、L和H培养基与固体培养基一致度满意,而A培养基一致度仅相对满意。结论 M、K培养基质量最佳。市场上检测Uu的培养基存在质量差异,临床上选用宜慎重。     

骨骼肌卫星细胞的体外培养与生物学特性(英文)

目的:建立理想的骨骼肌卫星细胞体外培养方法,探讨其生物学特性,以达到应用于组织工程和基因治疗的目的。方法:采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶二步消化法获取大鼠骨骼肌卫星细胞,进行体外原代和传代培养。观察细胞的形态,通过生长曲线、细胞融合率研究骨骼肌卫星细胞的增殖与分化能力,利用免疫细胞化学染色对所获得的细胞进行鉴定。结果:二步消化法适用于骨骼肌卫星细胞的获取。在生长培养基作用下,细胞增殖旺盛;在分化培养基条件下,细胞分化良好,可融合成肌管。α-sarcometric肌动蛋白和肌球蛋白细胞免疫化学染色,骨骼肌卫星细胞弱阳性,肌管强阳性。结论:体外培养的骨骼肌卫星细胞具有良好的增殖与分化能力,适用于组织工程和基因治疗。     

白假丝酵母菌简便培养方法的建立及临床应用研究

目的探讨真菌简便培养方法的临床应用价值。方法收集2006年1月-2013年12月我院门诊及住院患者疑似真菌感染标本，建立真菌简便培养基对收集标本进行培养，并将其与法国梅里埃培养基进行比较；对比新鲜自制简便培养基与2—8℃放置6个月后简便培养基的真菌检出率。结果在2011-2013年收集的307份标本中，简便培养基白假丝酵母菌的检出率为38．4％，而梅里埃培养基的检出率为26．1％，自制简便培养基对阴道分泌物标本、痰标本白假丝酵母菌检出率优于梅里埃培养基，且差异均有统计学意义（P均〈0．05），而尿标本和咽拭子标本中两种方法白假丝酵母菌的检出率差异均无统计学意义（P均〉0．05）。白假丝酵母菌在两种培养基上的菌落形态相似，但梅里埃培养基上白假丝酵母菌菌落显示蓝色，而自制简便培养基白假丝酵母菌菌落呈奶油色，并且均能抑制大部分杂菌的生长。痰标本、阴道分泌物标本及其他标本的白假丝酵母菌检出率在新鲜与2～8℃放置6个月后培养基中差异均无统计学意义（P均〉0．05）。在2006—2010年共2840份阴道分泌物标本中，检出白假丝酵母菌以外的其他致病菌475份，阳性检出率为16．7％（475／2840），其中白假丝酵母菌与其他致病菌双重感染者有87例，阳性检出率为3．1％（87／2840）。结论真菌简便培养基制作简单、成本低廉，对白假丝酵母菌有良好选择性，可向农村基层医疗机构推广使用。     

Evaluation of CPS ID 2 chromogenic agar as a single medium for urine culture

The CPS ID 2 (CPS) chromogenic agar was compared to routine media for use in the isolation, enumeration, identification, and susceptibility testing of bacteria recovered from urine specimens. Of 487 urine specimens, 318 were culture negative, 12 were positive on CPS only, 16 positive on routine only, and 141 positive on both. The enumeration of microorganisms agreed for 96 of the 141 cultures. Fewer organisms were recovered on CPS for 25 cultures, more for 20 cultures. The identification of bacteria from CPS and routine media agreed for all isolates. Susceptibility testing was performed for 100 isolates. The categorical susceptibility test results from isolates grown on CPS agreed with results from routine media for 77 isolates. For the remaining 23 isolates, one or more discrepancies were seen involving 16 different antimicrobial agents; 27 minor, 1 major, and 6 very major errors. After additional testing, there were 10 confirmed errors, 7 minor and 3 very major errors. This study demonstrates that CPS agar is a reliable medium for culturing urine. Susceptibility testing directly from this medium resulted in low error rates for all antimicrobial agents tested.     

人阴道黏膜干细胞的筛选与培养

背景:目前国内外学者已经从人类或啮齿类等动物的皮肤、毛囊、角膜、口腔黏膜、肠道黏膜、牙齿断端、唾液腺等上皮组织中成功分离出干细胞,并应用于组织创伤修复的实验中,但人阴道黏膜干细胞的分离和应用的实验较少.目的:探讨人阴道黏膜干细胞的分离、筛选与适合的体外培养方法.设计:以细胞为对象的观察基础实验.单位:广州医学院第三附属医院(原广州市第二人民医院)妇产科.材料:实验于2004-10/2005-08在中山大学中山眼科中心实验室完成.实验室级别:卫生部眼科学重点实验室、广东省眼科视觉科学重点实验室、广东省教育厅眼科视觉科学重点实验室、广东省"五个一科教兴医工程"重点实验室.孕2周健康成年雌性昆明小鼠,由广州中医药大学实验动物中心提供.无细菌与病毒感染的患者的阴道黏膜标本5份,由广州医学院第三附属医院(原广州市第二人民医院)妇科提供.方法:采用胰酶、胶原酶混合消化法获得阴道黏膜细胞.将丝裂酶素C处理的小鼠成纤维细胞作滋养层细胞.采用Ⅳ型胶原快速黏附法筛选人阴道黏膜干细胞,并采用免疫细胞化学方法鉴定.将所筛选的人阴道黏膜干细胞与原代人阴道黏膜细胞分别用采用碘化丙啶一步荧光染色法、流式细胞仪分别检测其细胞周期.以4组方法体外培养原代人阴道黏膜干细胞:滋养层细胞 上皮细胞完全培养液、滋养层细胞 DMEM/F12(3∶1)、无滋养层细胞 上皮细胞完全培养液、无滋养层细胞 DMEM/F12(3∶1).培养至12 d,比较各组CK19、CK10阳性细胞比例、克隆形成率与凋亡前能传代的次数.主要观察指标: ①所筛选的人阴道黏膜干细胞与原代人阴道黏膜细胞的G0/G1细胞比例、CK19、CK10阳性细胞的比例.②比较4种不同方法培养人阴道黏膜干细胞的CK19、CK10阳性的细胞比例、克隆形成率以及能传代的次数.结果:所筛选的人阴道黏膜干细胞与原代人阴道黏膜细胞的G0/G1细胞比例、CK19、CK10阳性的细胞比例均有统计学差异(P < 0.05).其中采用滋养层细胞 上皮细胞完全培养液培养人阴道黏膜干细胞12d,其克隆形成率与CK19阳性细胞比例最高,CK10阳性细胞比例最低,体外培养人阴道黏膜干细胞能稳定传15代以上.结论:①Ⅳ型胶原快速黏附法可有效筛选人阴道黏膜干细胞.②滋养层细胞 上皮细胞完全培养液为体外培养原代人阴道黏膜干细胞的较佳方法.     

Use of real-time polymerase chain reaction for identification of methicillin-resistant Staphylococcus aureus directly from positive blood culture bottles

The utility of real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) testing for detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) directly from positive blood culture bottles was evaluated. One hundred forty-two blood cultures showing Gram-positive cocci in clusters were detected. Each blood culture sample was tested for the presence of MRSA by PCR analysis (SmartCycler) via detection of the mecA and orfX genes. In parallel, they were plated on standard media for identification and characterization. PCR analysis directly from the blood culture bottle required a total time of 120 min (45 min for preparation and 75 min for the reaction). By comparison, conventional laboratory procedures required between 48 and 72 h. The overall test accuracy was 97% with a high positive likelihood ratio and a low negative likelihood ratio.