蛋白酶和淀粉酶产生菌的筛选及酶学性质分析研究

从牛瘤胃液中筛选出一株性状优良、产蛋白酶和淀粉酶活力较高的菌株,经初步鉴定为枯草芽孢杆菌。结果表明:该菌株产蛋白酶和淀粉酶的最适时间分别在培养的48h和96h,蛋白酶和淀粉酶的最高酶活力分别为221.57U/mL和54.06U/mL,最适温度分别为40～50℃和20～50℃,最适范围pH在6.0～7.0和pH6.0～8.0。     

产纤维素酶酵母菌的筛选及鉴定

研究旨在筛选出产纤维素酶较高的酵母菌,并对其生物学特性探讨。试验从生境中筛选到产纤维素酶较高一株酵母菌,通过菌株形态学和分子生物学对该菌株进行了鉴定,并对这株菌的耐酸性、耐模拟肠液性、产酶特性和抑菌能力进行评定。结果表明,所筛酵母菌Y3为酿酒酵母菌,产纤维素内切葡聚糖酶酶活为3.27 U/ml,纤维素外切葡聚糖酶酶活为2.22 U/ml,木聚糖酶酶活为4.21 U/ml,耐酸性、耐模拟胃液较强,而耐模拟肠液能力较弱,不能产生抗金黄色葡萄球菌的物质。试验筛选到酿酒酵母菌Y3是一株较高产纤维素酶菌株并具有良好的生物学特性,对于提高粮食加工副产物的利用率具有非常重要的现实意义。     

产蛋白酶和纤维素酶纳豆芽孢杆菌(B.Subtilis Natto)的筛选及其生物特性研究

采用酪蛋白平板和羧甲基纤维素钠(CMC-Na)平板初筛法,分别从北京、大连、日本3个产地的纳豆食品中分离筛选到10株产蛋白酶菌株(NY-1~NY-10)和10株产纤维素酶菌株(NS-1~NS-10)。经酶活力测定NY-1为蛋白酶活力最高菌株,NS-1为纤维素酶活力最高菌株。通过2株菌的生长曲线、芽孢形成曲线、产酶动态变化曲线和酶活力传代稳定性试验,得出NY-1的最佳种龄为16 h,最佳芽孢收获时间为28 h,芽孢量的对数值为(6.92±0.047)、蛋白酶产酶高峰时间为18 h,酶活力为(44.12±1.48)U/mL,;NS-1的最佳种龄为14 h,最佳芽孢收获时间为28 h,芽孢量的对数值为(8.41±0.0060),纤维素酶产酶高峰时间为40 h,酶活力为(60.94±1.22)U/mL,蛋白酶和纤维素酶酶活力在7代内保持稳定。     

产蛋白酶和纤维素酶纳豆芽孢杆菌（B.Subtilis Natto）的筛选及其生物特性研究

采用酪蛋白平板和羧甲基纤维素钠（CMC-Na）平板初筛法,分别从北京、大连、日本3个产地的纳豆食品中分离筛选到10株产蛋白酶菌株（NY-1～NY-10）和10株产纤维素酶菌株（NS-1～NS-10）。经酶活力测定NY-1为蛋白酶活力最高菌株,NS-1为纤维素酶活力最高菌株。通过2株菌的生长曲线、芽孢形成曲线、产酶动态变化曲线和酶活力传代稳定性试验,得出NY-1的最佳种龄为16 h,最佳芽孢收获时间为28 h,芽孢量的对数值为(6.92±0.047)、蛋白酶产酶高峰时间为18 h,酶活力为（44.12±1.48） U/mL,;NS-1的最佳种龄为14 h,最佳芽孢收获时间为28 h,芽孢量的对数值为(8.41±0.0060),纤维素酶产酶高峰时间为40 h,酶活力为（60.94±1.22） U/mL,蛋白酶和纤维素酶酶活力在7代内保持稳定。     

柞蚕溶菌酶真核表达系统的构建及重组蛋白纯化分析

利用甲醇营养型毕赤酵母对柞蚕溶菌酶进行高效重组表达。首先根据毕赤酵母密码子偏爱性对柞蚕溶菌酶成熟肽基因进行密码子优化,将优化后的基因序列ApLyz克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA中,构建重组表达载体pPICZαA-ApLyz。重组载体经电转化整合入毕赤酵母菌株GS115基因组中,并利用高质量浓度Zeocin(500μg/mL)抗性平板筛选得到高拷贝转化子。摇瓶发酵显示,甲醇诱导72 h后,高拷贝菌株发酵液中溶菌酶活性为450 U/mL(313 U/mg总蛋白),酶活约为单拷贝菌株的3.1倍。纯化后的重组柞蚕溶菌酶分子质量约14 kDa,酶活为3 870 U/mL,比酶活为20 262 U/mg。酶学性质分析显示,重组柞蚕溶菌酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH为4.5,具有较好的热稳定性。     

芽孢杆菌FJ-01-R的分离鉴定及固体发酵条件的探讨

从池塘底泥分离到11株菌,3株菌产碱性蛋白酶菌,经鉴定碱性蛋白酶活性最高的FJ-01-R为芽孢杆菌,并对该菌株固体发酵产酶条件进行了优化。优化结果为发酵终止时间48h,温度32℃,初始含水量60%,初始pH值8,细菌分泌碱性蛋白酶酶活由原来的250U/g增加到540U/g,提高1.15倍。     

坎儿井水产蛋白酶菌株X-34产酶条件及其部分酶学特性研究

从吐鲁番坎儿井水样为实验材料,筛选出一株产生蛋白酶活性较高的X-34菌株,经生长特点、菌体及菌落形状和生理生化指标和16S r RNA基因序列比对分析,将该菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并对其产酶条件和部分酶学特性进行实验研究,结果显示:该菌株最佳产酶条件为:时间为48 h,温度为37℃;初始pH为7;装液量为80 mL,碳源为葡萄糖,氮源为牛肉膏。该蛋白酶的作用最适温度为40℃,反应最适pH为7.5。在最适条件下,X-34菌株产生的蛋白酶活力达到1558 U/mL。     

益生性酵母菌的筛选与鉴定

采用YPD平板从青海牦牛瘤胃和西藏青稞酒糟中筛选酵母菌,并对其进行形态学、分子生物学特性、生理生化特性和益生特性鉴定。试验结果表明:从青海牦牛瘤胃中筛选到马克斯克鲁维酵母菌3株,从西藏青稞酒糟中筛选到酿酒酵母菌4株,毕赤酵母菌2株,其中毕赤酵母菌JZ10起酵时间短,环境适应性强,有广泛的药物敏感性且对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌有强抑制作用,具有良好的生长特性和益生特性,为后续酵母菌作为饲料添加剂提供一定的参考依据。     

产蛋白酶菌的分离鉴定及产酶条件优化

本试验菌源取自肉牛瘤胃液,首先用酪蛋白水解圈法初选出16株产蛋白酶菌株,综合HE值和蛋白酶活性,选出一株蛋白酶活性最高A18作为后续试验菌株,该菌株蛋白酶活为415.82 U/mL,通过形态和分子鉴定确定此菌株为米曲霉菌。单因素试验确定接种量为4%、培养温度为30℃、培养时间为60 h,通过响应面分析法及多次重复试验,得出接种量4%、温度29℃、时间55 h为其最佳产酶条件,最高酶活达527.57 U/mL,比优化之前提高了22.6%。     

大兴安岭森林土壤中纤维素降解真菌的分离及产酶条件优化

为了获得高酶活性的常温纤维素酶产生菌,试验采用纯培养的方法以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为碳源在28℃下对内蒙古大兴安岭森林土壤中的纤维素降解真菌进行筛选,以细菌18S rDNA通用引物PCR扩增后进行序列同源性比对确定种属,以3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)测定纤维素酶活性,并对酶活较高的菌株进行产酶条件优化。结果表明:共分离到2株酶活性较高的常温纤维素降解真菌W14和DAZJ3,菌株W14为草酸青霉(Penicillium oxalicum),菌株DAZJ3为Oidiodendron tenuissimum;2株菌的最佳产酶条件:初始pH值为6、以酵母膏为碳源、培养温度分别为35℃(菌株W14)和30℃(菌株DAZJ3)、培养时间为4 d,羧甲基纤维素(CMC)酶活性可分别达到103.89 U/mL和158.36 U/mL。说明菌株W14和DAZJ3是两株具有较强应用潜力的常温纤维素降解真菌。     

培养条件对混菌发酵产酶的影响

本试验通过单因子试验研究pH值对混菌发酵产CMC酶、蛋白酶的影响,得出发酵基质的最佳pH值为5.0;通过单因子试验研究混菌比例对混菌发酵产酶的影响,得出混菌发酵产CMC酶的最佳混菌比例为4：2：2,产蛋白酶的最佳混菌比例为2：4：2;研究单菌发酵产CMC酶、蛋白酶的情况,测得单菌发酵产CMC酶的最高酶活力为3424.96U/g,产蛋白酶的最高酶活力为92.16U/g;而混菌发酵产CMC酶的最高酶活力为4892.80U/g,产蛋白酶的最高酶活力为437.76U/g。通过正交试验研究温度、pH值、转速这3个因素对混菌发酵产CMC酶、蛋白酶的影响,测得混菌发酵产CMC酶的最佳条件是：pH5.0、温度38℃、转速150r/min;产蛋白酶的最佳条件是：pH6.0、温度38℃、转速140r/min。     

高产蛋白酶枯草芽孢杆菌JNB001产酶条件的优化

为了进一步提高枯草芽孢杆菌JNB001产蛋白酶的能力,试验利用单因素及正交试验从起始pH、发酵温度、接种量、装液量、菌龄等方面对产酶条件进行优化。结果表明,最佳培养条件为:起始pH 7.0;发酵温度35℃;接种量7%;装液量35mL/250mL;菌龄18h;发酵时间36h。菌株JNB001经优化发酵条件后,测定其蛋白酶活力可高达371.66U/mL。该试验结果为无害化生物处理罐的优化设计等后续应用研究奠定了基础。     

氮离注入选育β-葡聚糖酶高产为菌株的研究

为获得工业化生产的高产β-葡聚糖酶菌株,试验采用低能氮离子(N )注入诱变筛选的方法,对出发黑曲霉(Aspergillus niger)菌株Y2449进行改良,获得高产菌株SD16.突变株黑曲霉SD16产β-葡聚糖酶酶活由出发菌Y2449的73.00 U/mL提高到493.24 U/mL,产量提高到亲株的7倍,高产菌株SD16经连续5代培养传代,产酶性能稳定.     

内蒙古锡林郭勒盟酸乳清中酵母菌的分离鉴定

[目的]探究内蒙古锡林郭勒盟牧区传统奶酪加工副产物酸乳清中酵母菌的生物多样性。[方法]采用传统微生物分离培养技术从采集自内蒙古锡林郭勒盟的2份酸乳清样本中分离纯化酵母菌,利用ITS基因序列分析方法鉴定种属并构建系统发育树。[结果]从2份酸乳清样本中共分离到18株酵母菌,归属为4个种,分别为酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）(n=2)、发酵毕赤酵母菌（Pichia fermentans）(n=2)、库德里阿兹威氏毕赤酵母菌（Pichia kudriavzevii）(n=2)、马克斯克鲁维酵母菌（Kluyveromyces marxianus）(n=12),其中,马克斯克鲁维酵母菌（Kluyveromyces marxianus）为优势菌种。[结论]该研究揭示了内蒙古锡林郭勒盟牧区传统奶酪加工副产物酸乳清中酵母菌的生物多样性,为酸乳清的综合利用及产业化生产提供了参考。     

反刍动物微生态制剂高活性菌种的筛选与比较

该研究的目的是对8株酵母菌和4株霉菌生物学活性进行比较研究,筛选出优良高活性菌株.方法:通过对8株酵母菌的生物量、粗蛋白含量、活菌数、发酵香味及4株霉菌生物量和产酶能力等指标的测定,筛选优良菌株作为试验基础菌种.结果表明,酿酒酵母BC和BD、产朊假丝酵母BY、热带假丝酵母BR和黑曲霉H3,以其优良的生产性能被选为反刍动物微生态制剂试验用菌种.     

反刍动物微生态制剂高活性菌种的筛选与比较

该研究的目的是对8株酵母菌和4株霉菌生物学活性进行比较研究,筛选出优良高活性菌株。方法：通过对8株酵母菌的生物量、粗蛋白含量、活菌数、发酵香味及4株霉菌生物量和产酶能力等指标的测定,筛选优良菌株作为试验基础菌种。结果表明,酿酒酵母BC和BD、产朊假丝酵母BY、热带假丝酵母BR和黑曲霉H3,以其优良的生产性能被选为反刍动物微生态制剂试验用菌种。     

反刍动物微生态制剂高活性菌种的筛选与比较

该研究的目的是对8株酵母菌和4株霉菌生物学活性进行比较研究,筛选出优良高活性菌株。方法:通过对8株酵母菌的生物量、粗蛋白含量、活菌数、发酵香味及4株霉菌生物量和产酶能力等指标的测定,筛选优良菌株作为试验基础菌种。结果表明,酿酒酵母BC和BD、产朊假丝酵母BY、热带假丝酵母BR和黑曲霉H3,以其优良的生产性能被选为反刍动物微生态制剂试验用菌种。     

脂肪酶产生菌的筛选、诱变及产酶条件的研究

从长春市油脂厂采集的土壤样品中分离到1株脂肪酶活力较高的白地霉1522(其发酵液酶活力为35U/mL)。以此为出发菌株,经紫外线、氯化锂、盐酸羟胺、亚硝基胍等诱变筛选后,获得1株高活力脂肪酶产生菌N79(其发酵液酶活力达80U/mL)。对诱变株N79最适培养条件的研究表明,其最适培养基组成为:蛋白胨4%,山梨醇0.75%,橄榄油0.5%,MgSO4·7H2O 0.1%;产酶最适发酵条件是,培养液起始pH为6.0～6.5,发酵温度为26～30℃,通气量为每250mL三角烧瓶中盛培养液30mL,发醇时间为32～36h。在量适培养条件下,其发酵液酶活力可达到105-115U/mL。白地霉N79的发酵液经硫酸铵盐析制得脂肪酶粗制品,它在聚乙烯醇橄榄油乳化液系统中,水解橄榄油的最适pH为7.8,最适温度为42℃,在pH4-8、4℃下存放24h及pH7.5、40℃下保温15min,酶活力不变。     

缫丝废水发酵产蛋白酶的菌种筛选及发酵工艺优化

试验旨在研究筛选菌株发酵缫丝废水生产蛋白酶。试验从自然环境取样,筛选得到能利用缫丝废水发酵产蛋白酶的菌株Z416,形态学观察和分子生物学鉴定该菌株为硝基愈创木胶类节杆菌(Paenarthrobacter nitroguajacolicus),并通过单因素和正交设计试验优化了该菌株的产酶条件组合。结果显示,发酵液乳糖添加量4%、发酵培养基初始pH值7.5、接种量16%、摇床转速180 r/min、发酵温度33 ℃、发酵时间84 h为最优发酵方案。在此条件下,菌株Z416酶活力达到17.89 U/mL,是优化前酶活(3.21 U/mL)的5.57倍。研究表明,该蛋白酶具有应用到禽和猪饲料中的潜力,可以改善畜禽的生长性能。     

布拉酵母与扣囊拟内孢霉混合固体发酵的酶活力测定

试验采用布拉酵母菌和扣囊拟内孢霉混合固体发酵饲料,研究发现扣囊拟内孢霉对布拉酵母发酵有促进作用。对不同固体发酵样品进行α-淀粉酶、糖化酶和蛋白酶的活力测定,并测定相应菌数。淀粉酶活力测定结果表明,混合菌种的最佳培养时间为25 h。糖化酶活力测定结果表明,混合菌种的最佳培养时间为20 h。蛋白酶活力测定结果表明,混合菌种的最佳培养时间为30 h。菌数测定结果表明混合菌种的最佳培养时间为20 h。综合酶活力和菌数的研究结果得出结论:布拉氏酵母菌和扣囊拟内孢霉混合固体发酵的最佳时间为20~25 h。