单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的初步研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈栋感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得初步纯化的HFRS病毒血凝素抗原,经鉴定具有较高的血凝滴度和较好的免疫原性。用SDS-PAGE和Wes-tern-blot技木分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3 G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。以上结果表明,该50k血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素结构蛋白的初步研究

本文报告用蔗糖-丙酮法从肾综合征出血热(HFRS)病毒陈株感染的乳鼠小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素单克隆抗体(McAb)3G_1与Se-pharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得了纯化的HFRS病毒血凝素结构蛋白,经特异性试验证实该洗脱物为HFRS病毒血凝素,并有较高的血凝滴度和良好的免疫原性。用SDS-PAGE和     

单克隆抗体对HFRS病毒50K结构蛋白的分析

采用18株抗HFRS病毒McAb,以Western-blotting技术对纯化的该病毒50K结构蛋白进行了分析。结果有7株McAb可与该蛋白反应,这7株McAb的特性(包括感染细胞膜抗原免疫荧光染色模式、中和活性及HI活性等)各不相同,提示它们所针对的抗原决定簇的特性也不同。用ELISA阻断试验等证明,上述7株McAb中,有5株所针对的抗原决定簇之间有部分相同或重叠,并提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。分析结果表明,该50K结构蛋白的特性及结构均较复杂,值得进一步研究。     

双McAb-ELISA夹心法检测HFRS病毒血凝素抗原的实验研究

作者采用抗HFRS病毒血凝素McAb和HRP标记的同一种McAb,建立了检验HFRS病毒血凝素抗原的双McAb-ELISA夹心法。经取代试验和抗原阻断试验均证明本法具有高度特异性,重复性也良好。用本法和血凝试验平行地检测了10批粗提HFRS陈株感染鼠脑的血凝素抗原,检出率分别为100％和70％,而前法滴度明显高于后法(GMT 1:506和1:26),有显著性差异(P<0.01)。用本法检验了10种从不同疫区不同宿主分离的HFRS病毒株的感染鼠脑或Vero—E6培养上清,结果均为阳性,虽血凝素抗原滴度高低不一,却再次说明不同HFRS病毒株血凝素之间有群共同性,因此本法在HFRS的临床诊断,流行病学监测,疫苗效价鉴定中都有实用价值,可取代血凝试验。     

McAb亲和层析纯化HFRS病毒50K结构蛋白及其鉴定

先用硫酸鱼精蛋白和PEG沉淀法从HFRS病毒感染乳鼠脑中提取出粗制病毒抗原。再选择一株的抗HFRS病毒的McAb(5H5)与CNBr活化Sepharose 4B相偶联,制成免疫吸附柱, 并以上述粗制病毒抗原通过免疫吸附柱。用3M KCNS洗脱与McAb特异性结合的抗原,结果可见到一个明显的蛋白洗脱峰,用ELISA从与此峰相应的洗脱物中检出了较高的抗原滴度。而用从正常乳鼠脑提取的对照抗原通过该免疫吸附柱,同样洗脱,结果洗脱物中未捡出抗原活     

肾综合征出血热病毒50kD结构蛋白的抗原位点分析

采用23株抗HFRS病毒McAb,以放射免疫沉淀及ELISA等试验,证实HFRS病毒的50kD蛋白为该病毒的核蛋白(NP)。用抗NP的McAb对经亲和层析纯化的NP以ELISA阻断试验进行抗原位点分析,结果表明该蛋白与一般有囊膜病毒的NP相比,有两点明显的不同。一是HFRS病毒的NP上不仅有组特异性抗原位点,而且有型特异性抗原位点,两者都至少分布在2个区域,这些抗原位点及其分布区域之间有部分重叠或比较靠近。二是HFRS病毒的NP上可能存在中和抗原及血凝抗原位点。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒结构蛋白

用抗肾综合征出血热(HFRS)病毒单克隆抗体(McAb)5H5与CNBr活化的Sepharose 4B偶联,制成免疫吸附柱,并使粗纯化HFRS病毒抗原(从HFRS病毒感染乳鼠脑中提取)遗过免疫吸附柱。用3M硫氰酸钾洗脱与McAb特异性结合的抗原,结果可见到一个高而窄的蛋白洗脱峰,用McAb-ELISA间接夹心法从与此峰相应的洗脱物中检出了较高的抗原滴     

分泌抗肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制及其应用的研究

研制肾综合征出血热(HFRS)病毒血凝素单克隆抗体(McAb),用亲和层析法纯化该病毒血凝素,对探讨其血凝素性质、致病与免疫机理中的作用,临床检验诊断、疫苗效果评定,亚单位疫苗及特异性免疫治疗制剂的研制均有重要意义。本文从7个方面进行总结。(1)建立分泌抗HFRS病毒血凝素McAb杂交瘤细胞系56株,鉴定其中10株证明9株为抗血凝素McAb,6株有中和     

单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染乳属保护作用的研究

本文进一步观察了自制的24株抗HFRS病毒血凝素McAbs对感染HFRS病毒新生乳鼠的保护作用。将HFRS病毒陈株100LD_(50)腹腔感染昆明种小鼠的新生乳鼠后24h,腹腔分别接种24株抗HFRS病毒McAb,观察McAb对感染新生乳鼠的保护作用。结果发     

MbAb-ELISA间接夹心法检测HFRS患者血清中血凝抑制抗体的研究

为了防治肾综合征出血热(HFRS)需要建立一种在试管内检测特异的保护性抗体的方法。本文采用抗HFRS病毒血凝素单克隆抗体(McAb)和粗制HFRS病毒血凝素抗原,建立了一种McAb-ELISA间接夹心法。经取代试验,抗体阻断试验都表明有高度特异性。以本法曾检测了63例临床诊断为HFRS患者血清中血凝抑制抗体,同时平行地与血凝抑制试验比     

双McAb-ELISA夹心法检测HFRS病毒血凝素抗原的实验研究

本文作者采用抗肾综合征出血热(HFRS)病毒血凝素单克隆抗体(McAb)和辣根过氧化物酶标记的同一McAb,建立了检验HFRS病毒血凝素抗原的双McAb-ELISA夹心法。经取代试验和抗原阻断试验均证明本法有高度特异性。与各种正常对照抗原试验均为阴性,     

肾综合征出血热病毒血凝素纯化及免疫学性状分析

应用高压液相色谱法对粗制肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）血凝素分离纯化获得具有血凝活性的蛋白，效价１８０，分子量为５６６００。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蔗糖密度梯度超速离心分析显示具有均一的分子量和浮密度，多株位点特异性ＭｃＡｂ分析证实，该蛋白有血凝抗原和中和抗原决定簇，免疫小鼠可产生特异性抗－ＨＦＲＳＶ抗体，其中和效价４０，血凝抑制效价６４。     

McAb对肾综合征出血热病毒感染乳鼠的保护作用

本文用肾综合征出血热(HFRS)病毒陈株腹腔感染乳鼠，测定单克隆抗体(McAb)对感染乳鼠的保护作用。结果表明，被动使用McAb对感染乳鼠有明显的保护作用。保护力大小与病毒感染剂量、抗体使用剂量及抗体使用时间均有关。本实验测定了25份抗HFRS病毒血凝素莹克隆抗体(McAb)的保护作用，其中3株有明显的保护作用．并分析了McAb的活体保护作用与其体外血凝抑制活性及中和活性的关系。     

单克隆抗体对HFRS病毒两种粗制抗原相对亲和力的测定

采用ELISA测定32株抗HFRS病毒McAb对该病毒两种粗制抗原的相对亲和力,发现每一株McAb对两种病毒抗原的亲和力相同或基本相同,而各株McAb对同一病毒抗原的亲和力则有所不同,有些差别很大。按50％最大结合浓度分析,可分为3组。1组13株McAb为0.003～0.8μg/ml,Ⅱ组9株McAb为0.1～8μg/ml,Ⅲ组10株McAb为50～300μg/ml。这一结果为选择应用这些McAb提供了依据。     

肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制与鉴定

本文报道,从肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染乳鼠鼠脑中提取高滴度的血凝素(HAN),以该血凝素免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。融合率为60％和78％,阳性孔率为15％和44％。IFA筛选后共获得56株分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系。对其中1A_3,2A_(11),1B_3,3D_8,2F_7,1G_4,1G_9,3G_1,3G_(11),2H_1十株细胞系用有限稀释法进行了3～4次克隆化,阳性克隆率达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养巳6个多月,仍能稳定地分泌单克隆抗体。冻存的细胞系经复苏后仍能稳定地分泌McAb。应用血凝抑制(Hl)试验证明其中9株为特异性分泌抗HFRSVHHAN McAb 的杂交瘤细胞系,1株(2A_(11))是抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系,其中(1:81920)和3G_1(1:40960)具有高滴度的血凝抑制活性。应用微量细胞培养中和试验(NT)证明其中6抗1A_8,1B_3,3D_8,1G_4,3G_1,3G_(11))具有中和活性.尤其3D_8(1:5120)和3G_1(>1:10240)有较高的中和效价。IFA测定了10株杂交瘤细胞的McAb与HFRSV陈株抗原片反应的抗体效价,其中培养上清为1:40～1:320,杂交瘤腹水为1:1万～1:8万。10种单克隆抗体与JEV、HSV-I和正常Vero-E_6细胞抗原片均无交叉反应。但均能与不同疫区、不同宿主分离的HFRSV陈株81-14A,A9和R_(22)抗原片反应,说明HFRSV血凝素McAb具     

特异性单克隆抗体对肾综合征出血热病毒感染成年裸鼠保护作用的观察

研究证实抗肾综合征出血热病毒(HFRSV)血凝素单克隆抗体(McAb)对野鼠型HFRS病毒人工感染的小白鼠乳鼠有很好的保护作用。将McAb接种孕鼠后对新生子代乳鼠也可产生被动保护作用。本实验用该McAb对HFRS病毒攻击的成年裸鼠的保护作用进行了观察。     

抗家鼠型肾综合征出血热病毒单克隆抗体对感染乳鼠保护作用的初步研究

以家鼠型HFRS病毒R22株100LD_(50)感染2～4日龄乳鼠。于感染后0、48、96及120h分别经腹腔注射对该株病毒具有中和活性的单一McAb或混合McAb,同时设该病毒免疫血清、单注射该病毒和Sp2/0腹水3种对照,观察McAb对感染乳鼠的保护作用,观察时间为35d。结果在感染后96h内注射单一McAb、混合McAb及免疫鼠血清的保护率均可达100％,而Sp2/0腹水对照组与病毒对照组的乳鼠均在感染后第13～16d发病死亡。在死亡乳鼠的脑,肺组织中检出了HFRS病毒抗原,而在保护存活乳鼠的脑、肺组织中均未检出病毒抗原。McAb对感染乳鼠的保护率与其浓度相关。在感染后24h分别注射不稀释、10~(-1)、10~(-2)和10~(-3)稀释的混合McAb,其保护率依次为100％、88.7％、55.6％和16.7％。     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病对50,000道尔顿结构蛋白

以HFRS病毒感染的乳小白鼠脑为原材料,用硫酸鱼精蛋白和PEG沉淀法制备粗纯病毒抗原。将此粗纯抗原通过抗HFRS病毒McAb与Sepharose 4B偶联制成的免疫吸附柱,并用3M的KCNS洗脱,获得了SDS-PAGE单点纯的特异性病毒结构蛋白。该蛋白分子量为50,000道尔顿,具有较高的抗原滴度和良好的免疫原性。     

McAb对肾综合征出血热病毒感染乳鼠的保护作用

本文用肾综合征出血热(HFRS)病毒陈株腹腔感染乳鼠,测定单克隆抗体(McAb)对感染乳鼠的保护作用。结果表明,被动使用McAb对感染乳鼠有明显的保护作用。保护力大小与病毒感染剂量、抗体使用剂量及抗体使用时间均有关。本实验测定了25份抗HFRS病毒血凝素单克隆抗体(McAb)的保护作用,其中3株有明显的保护作用,并分析了McAb的活体保护作用与其体外血凝抑制活性及中和活性的关系。     

单克隆抗体亲和层析法粗提HFRS病毒的初步研究

用McAb亲和层析法粗提HFRS病毒81-14A株感染BHK细胞培养上清液,效果较满意。病毒抗原获得率为48.07％。经McAb亲和层析法洗脱,病毒抗原,蛋白峰基本一致。特异性试验证明洗脱物为HFRS病毒抗原。SDS-RAGE经氨银染色主要有4条区带。