北京市昌平区食源性金黄色葡萄球菌药敏分析及分子流行病学特征研究

目的 对北京市昌平区2011-2014年分离获得的74株食源性金黄色葡萄球菌耐药谱、毒力因子编码基因携带情况和分子流行病学特征进行研究分析,为金黄色葡萄球菌食源性疾病的预防控制提供参考。方法 依据GB 4789.10-2010进行菌株分离和鉴定,用全自动微生物鉴定及药敏分析系统VITEK2 Compact进行16种药物敏感性试验,并使用检测试剂盒进行－内酰胺酶的检测;利用PCR方法检测分离菌株肠毒素,杀白细胞素和耐热磷酸酶等毒力因子编码基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对分离株进行分子分型。结果 74株金黄色葡萄球菌中68株(91.89%)有不同程度的耐药,其中对青霉素耐药率(87.84%)最高,其次为红霉素(44.59%)和克林霉素(39.19%)。毒力因子检测结果显示肠毒素阳性率64.86%(48/74),产2种以上肠毒素菌株占72.92%(35/48)。耐热磷酸酶阳性率89.19%,杀白细胞素编码基因lukF阳性率77.03%。PFGE分型结果显示除9株菌不可分型外,其余65株菌分为40个不同型别,无优势型别。结论 昌平区2011-2014年分离的食源性金黄色葡萄球菌具有较强的耐药性、分子多态性和毒力因子携带率较高的特征,说明这些菌株可以导致潜在的食品安全问题。     

北京市昌平区农村饮用水中铜绿假单胞菌耐药性及分子流行病学特征研究

目的 了解北京市昌平区农村饮用水中铜绿假单胞菌耐药谱分布、致病性及分子流行病学特征,为该菌污染生活饮用水而引起介水传染病暴发及流行的防控提供参考。方法 按照GB/T 8538-2008进行菌株分离和鉴定,并对菌株进行药物敏感性试验、毒力基因检测及脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）。结果 36株铜绿假单胞菌多分离于出厂水（27株）,对哌拉西林（PIP）、哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、头孢他啶（CAZ）、头孢吡肟（FEP）、氨曲南（ATM）、亚胺培南（IPM）、美罗培南（MEM）、阿米卡星（AN）、庆大霉素（GM）、妥布霉素（TM）、环丙沙星（CIP）、左氧氟沙星（LEV）12种抗生素完全敏感。36株铜绿假单胞菌共有4种毒力基因谱（T1~T4）,T1型（lasI、lasR、rhlI、rhlR、toxA、plcH、rhlAB、lasB）为主要毒力基因谱（25株,69.44%）。36株菌有11个PFGE型别,其中0003、0010为本地区优势PFGE型别。结论 昌平区农村生活饮用水中铜绿假单胞菌主要分离于出厂水,无耐药性,主要PFGE型别为0003和0010,主要毒力基因谱为T1型。     

广东省江门市一起副溶血弧菌食物中毒分离株的病原学特征分析

目的 分析广东省江门市2017年某公司发生的一起副溶血弧菌食物中毒分离株的血清型别、耐药表型和分子特征。方法 对该起食物中毒事件分离到的15株副溶血弧菌进行血清学分型,抗生素敏感性检测,耐热直接溶血毒素基因（tdh）、耐热相关溶血毒素基因（trh）、GS-PCR和orf8基因的PCR检测,脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型分析。结果 15株副溶血弧菌分离株经生化鉴定、血清学鉴定为O3:K6型;抗生素敏感性分析显示,所有菌株均对氨苄西林和头孢唑啉耐药,对其他抗生素敏感;毒力基因PCR检测结果显示,所有菌株均为tdh+trh-型菌株,并且携带GS-PCR和orf8基因;14株病例分离株和1株食物分离株经限制性内切酶（NotⅠ、SfiⅠ）酶切后的PFGE指纹图谱高度相似,仅存在2条带的差异。结论 该起食物中毒的病原体为O3:K6型副溶血弧菌,携带tdh、GS-PCR和orf8基因,具有共同的耐药表型和遗传特征,此次食物中毒事件由2种克隆群的副溶血弧菌引起。     

广州市一起非O1/O139群霍乱弧菌食物中毒分离株的病原特征分析

目的 了解2014年广州市某工厂发生的一起非O1/O139群霍乱弧菌食物中毒分离株的耐药特性及分子特征。方法 对分离到的6株非O1/O139群分离株进行生化鉴定、血清学鉴定、药物敏感性实验、毒力相关基因检测和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型分析。结果 6株分离株经生化鉴定、血清学鉴定为非O1/O139群。药物敏感性分析显示,6株分离株均对氨苄西林、头孢克肟、头孢拉定、阿米卡星、妥布霉素、庆大霉素和多粘菌素B耐药,对诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、呋喃唑酮、四环素、吡哌酸、红霉素和氯霉素敏感。毒力基因聚合酶链反应检测结果显示,所有菌株均携带毒力表达调控基因（toxR）和溶血素基因（hlyA）,未检出霍乱肠毒素基因（ctxA）、毒力协同调节菌毛基因（tcpA）和肠毒素基因（ST）;5株病例分离株和1株冷柜内壁分离株经限制性内切酶NotⅠ消化后的PFGE图谱为同一型别。结论 此次食物中毒的病原体为非O1/O139群霍乱弧菌,具有共同的遗传特征,菌株出现了多重耐药,提示应加强该类菌株的监测,防止大范围扩散或暴发流行。     

2013－2019年北京市昌平区霍乱弧菌病原学和分子流行病学特征分析

目的了解2013 — 2019年北京市昌平区霍乱弧菌表型及其分子特征。方法采用常规培养方法对2013 — 2019年北京市昌平区疑似霍乱标本进行检测。 对分离鉴定的O1群小川型霍乱弧菌,用NotⅠ和SfiⅠ两种内切酶进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）、用荧光PCR和普通PCR进行9种毒力基因检测,用微量肉汤稀释法进行21种药物敏感试验。结果2013 — 2019年北京市昌平区共分离到29株O1群小川型霍乱弧菌,其中散发病例中分离到10株,一起聚集性疫情中分离到19株。 29株菌经Not Ⅰ和Sfi Ⅰ双酶切后可分成3种PFGE谱型（CP-01～03）,3种PFGE谱型间的相似系数为78.50%～100.00%,以CP-02为主（27/29,93.10%）。 所有菌株均不携带ctxAB基因,携带toxR和hlyA基因,其他毒力基因ompU、tcpA、tcpI、rtxC、zot和ace的携带率分别为89.66%、82.76%、82.76%、44.83%、6.90%和6.90%。 29株菌药敏结果,除头孢唑啉（0.00%）和链霉素（3.45%）敏感率极低外,对其他19种抗菌素为敏感（82.76%～100.00%）。结论2013 — 2019年北京市昌平区的O1群小川型霍乱弧菌为非产毒株,以PFGE谱型CP-02为主,毒力基因toxR和hlyA携带率高,对多数抗生素敏感,提示在防控工作中应关注此类菌株并制定相应的方针政策,减少疫情的发生。     

2007-2011年江苏省南京市细菌性痢疾病原学监测结果分析

目的 对江苏省南京市2007-2011年细菌性痢疾的血清群(型)分布、耐药谱、毒力基因携带情况及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,为江苏省南京市细菌性痢疾的防控提供依据。 方法 对从江苏省南京市2007-2011年各医院腹泻病患者中分离的75株志贺菌进行血清群(型)、耐药性和毒力基因检测,并进行PFGE分子分型。 结果 75株志贺菌包括宋内志贺菌54株(72.0%),福氏志贺菌21株(28.0%),除2010年福氏X型为优势血清型外,其余年份宋内志贺菌为优势血清群;75株菌普遍对氨苄西林、四环素和磺胺甲恶唑耐药,耐药率在61.1%~95.2%之间;三重及以上耐药菌株占所有测试菌株的88.0%;毒力基因ipaH、sen、set1、ial阳性率分别为100%、46.7%、24.0%、48.0%;福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型(66.7%),宋内志贺菌优势基因模式为Ⅶ型(61.1%)和Ⅳ型(25.9%);宋内志贺菌分为20个PFGE基因型,其中以S7、S8、S10三个带型为主,占宋内志贺菌的 53.7%;相似度>95%,可能来自于同一克隆系;福氏志贺菌分为17种带型,各带型较散在分布。 结论 江苏省南京市志贺菌流行菌群不断变迁,宋内志贺菌有取代福氏志贺菌成为流行菌群的趋势;多重耐药现象严重;福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型、宋内志贺菌为Ⅶ型和Ⅳ型;PFGE型别呈现多元化流行特点。     

2015年北京市昌平区致泻性大肠埃希菌耐药性及脉冲场凝胶电泳分型研究

目的 了解2015年北京市昌平区致泻性大肠埃希菌耐药状况并对其进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型研究。方法 药敏实验按照美国临床实验室标准化协会（CLSI）推荐的K-B纸片法进行24种抗生素的敏感性分析;PFGE实验参照PulseNet PFGE实验方法。结果 药敏结果显示,致泻性大肠埃希菌对头孢比肟、亚胺培南完全敏感;对阿米卡星、妥布霉素、米诺环素耐药率极高,分别为94.6%、97.3%和97.3%。耐药谱分析显示,致泻性大肠埃希菌同时耐受抗生素种类为2～7种。PFGE分析发现,33株致泻性大肠埃希菌具有31种PFGE带型,菌株之间的相似系数为68.0%～100.0%,其中2株ETEC和2株EPEC有一致的PFGE带型。结论 昌平区引起腹泻的致泻性大肠埃希菌耐受抗生素的种类多、多重耐药严重且PFGE带型呈高度多态性。     

农贸市场中蜚蠊携带单增李斯特菌的调查及菌株特征分析

目的 初步探索农贸市场中蜚蠊李斯特菌的携带情况及农贸市场中食品李斯特菌污染的危险因素。方法 2015年10-12月从北京市某肉类（猪肉、羊肉、鸡肉）和水产品销售市场共采集147份蜚蠊样本进行李斯特菌的分离鉴定,并对分离到的单增李斯特菌进行血清型（serotyping）、脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型以及多位点序列分型（MLST）分析。结果 蜚蠊样本中李斯特菌的分离率为58.06%（78/147）,包括单增李斯特菌、英诺克李斯特菌、威尔李斯特菌,其中,单增李斯特菌的分离率为17.68%（26/147）,以水产品销售区域蜚蠊中分离率最高（18.18%）。血清型分析将26株单增李斯特菌分为4种血清型,分别为1/2c、1/2a、3a和1/2b,优势的血清型为1/b（34.60%）和1/2c（34.60%）;PFGE分析将26株单增李斯特菌分为11种PFGE带型,优势的PT型为PT16（19.23%）和PT30（19.23%）。MLST分析将26株单增李斯特菌分为5种序列型,分别为ST87、ST9、ST121、ST155、ST35,优势的序列型为ST87（34.62%）。结论 农贸市场中蜚蠊能携带李斯特菌且不同食品销售市场中蜚蠊所携带的单增李斯特菌的分子型别不同,可能与不同食品类型携带的单增李斯特菌的型别不同而蜚蠊与食品间有交叉污染有关,因此蜚蠊可能成为农贸市场中传播单增李斯特菌并污染食品的危险因素之一。     

一起多血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒脉冲场凝胶电泳分析

目的 对一起食物中毒检出的3种血清型副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP),采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分析,以明确其传染源。 方法 参照 WS 271-2007等标准,进行副溶血性弧菌分离、生化和血清学鉴定、KP试验、药敏试验、毒力基因检测、PFGE分子分型,利用BioNumerics 软件对PFGE 分型图谱进行聚类分析。 结果 17份样品均检出副溶血性弧菌,血清型可分3个型别,以O3:K6为优势血清型,占70.59%,O2:K3和 O2:K28 两血清型所占比例不一。PFGE分子分型,按100%相似度可分6个基因型别,XC12001型为优势型别,占58.82%, XC12002~XC12006型所占比例不一,聚类分析显示XC12001和XC12002型、XC12004和XC12005型相似度较高。17株副溶血性弧菌药敏结果基本一致,对氨苄西林和阿莫西林耐药率高达100%。10株O3:K6型副溶血性弧菌只携带tdh毒力基因,其余菌株tdh、trh1、trh2毒力基因全部阴性。 结论 此起食物中毒是以O3:K6血清型为主的不同克隆群副溶血性弧菌混合感染所致,PFGE可有效应用于食物中毒溯源分析及分子流行病学研究。     

急性腹泻病患者与健康体检人员肠集聚性大肠埃希菌分子特征及耐药性研究

目的 比较急性腹泻病患者与健康体检人员肠集聚性大肠埃希菌（EAEC）在携带毒力基因、耐药性及分子分型之间的差异。方法 以PCR方法检测EAEC的7种毒力基因,微量肉汤稀释法检测菌株对13种抗菌药物的耐药性,脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子分型分析。结果 来自急性腹泻病患者的分离株中,毒力基因检出率最高为air,体检分离株为sat。48株EAEC对13种抗菌药物中的12种均表现出不同程度的耐药,对亚胺培南完全敏感,急性腹泻病患者分离株耐药性较体检分离株强。PFGE分型共得到43种带型,均呈现高度多态性。结论 不同来源EAEC携带的毒力基因差异不显著,PFGE带型呈高度多态性,来源于腹泻病患者的EAEC耐药性明显高于健康体检人员。     

2011年北京市通州区分离单增李斯特菌的生物学及分子流行病学特征

目的 了解2007-2011年北京市通州地区食品及患者分离的单增李斯特菌的生物学和流行病学特征,为李斯特菌病的预防控制提供参考依据。 方法 对分离的单增李斯特菌进行6个毒力因子(prfA、actA、iap、hly、plcB、inlA)的检测、血清分型和脉冲场凝胶电泳分型。 结果 57株单增李斯特菌的6个毒力因子均为阳性,分为5种血清型,主要血清型为1/2a和1/2c型,PFGE分型分为19种带型,主要带型为GX6A16.CN0004。 结论 通州地区分离的单增李斯特菌全部携带6个主要毒力因子,分子型别呈现多态性。     

无乳链球菌的分子分型及耐药特征分析

目的了解北京一家三级医院临床分离无乳链球菌的血清型、耐药性、毒力基因的特征及多位点序列分型（MLST）特征。方法收集2018年一家医院住院患者分离到的无乳链球菌,通过聚合酶链式反应方法进行分子血清型分型和毒力基因检测,用MLST方法进行分子分型,通过VITEK 2药敏分析仪对菌株耐药性进行分析。结果该院2018年分离到31株无乳链球菌,MLST以序列分型（ST）10为主,占29.03%,其次为ST17、ST19、ST1、ST12、ST24和ST485,另有2株菌为新的ST;血清型分型以Ⅰb 为主,占45.16%,其次为Ⅲ、Ⅴ及Ⅰa型。 31株无乳链球菌中对氨苄西林、奎奴普汀、利奈唑胺和万古霉素全敏感,对四环素耐药率最高（64.52%）,其次为左氧氟沙星（58.06%）和克林霉素（38.71%）。 克林霉素耐药仅发现于Ⅰb 和Ⅴ型。本研究的31株无乳链球菌,hylB、cylE、cfb和lmb毒力基因检测均为阳性;毒力基因bac和fbsA在不同分型中携带率有差异,其中bac及fbsA在Ⅰb型中携带率较高。结论本研究基于MLST分型和血清分型,表明不同型别间耐药性和毒力基因的差异,提示Ⅰb和Ⅴ型的耐药性及Ⅰb型的毒力需要引起关注。     

4株单核细胞增生李斯特菌分子特征分析

摘要：目的?分析4株临床分离单核细胞增生李斯特菌菌株分子特征。方法?收集2018—2019年4株临床分离单核细胞增生李斯特菌菌株，用纸片扩散法检测菌株的药物敏感性；分别用PCR和多重PCR方法进行李斯特菌毒力岛(LIPI-1)、inlA、inlB基因扩增和血清分型；用多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果?4株单核细胞增生李斯特菌分为1/2a-3a和1/2b-3b-7 2种血清型且对青霉素、氨苄西林等10种抗菌药物敏感；所有分离株均携带李斯特菌毒力岛LIPI-1(prfA、actA、plcB、plcA、hly、hly2、mpl)和inlA、inlB基因；PFGE和MLST将4株菌分为4个不同的脉冲场凝胶电泳分型和ST型，包括ST121、ST619、ST621以及1株新型ST1474。结论?4株单核细胞增生李斯特菌ST型菌株均为江苏地区首次检出，菌株的致病力与其携带的毒力基因有关。     

围产期李斯特菌感染6例的临床及分子特征

目的分析围产期李斯特菌感染6例的临床及其分子流行特征,为围产期李斯特菌感染的治疗、预防和控制提供参考依据。方法回顾性分析李斯特菌母婴感染病例的临床信息,对分离的病原菌进行血清学分型、脉冲场凝胶电泳分析、多位点序列分型及毒力基因检测。结果 6例孕妇出现发热、腹痛、胎动异常等症状;2例胎死宫内,4例新生儿出现胃肠炎、血流感染和脑膜炎等感染症状,其中1例新生儿出生2 d后死亡。6株产单核细胞李斯特菌有3种血清型(4b、1/2b和1/2a)、4种ST型(ST1、ST2、ST5和ST91)和5种PT型(pulsotype)。毒力基因(plcB、actA、hly、iap、prfA、inlA)检测均为阳性。结论 6例围产期李斯特菌感染病例症状较为严重,胎儿/新生儿预后差。分离的产单核细胞李斯特菌以血清型4b型和ST2型为主,携带6个毒力基因,致病力强。     

2015-2019年北京市西城区人源性单核细胞增生李斯特菌的分子特征分析

  目的  研究北京市西城区人源性单核细胞增生李斯特菌（Lm）的血清学分型和分子特征。  方法  对2015 — 2019年北京市西城区40株Lm临床分离株进行多重PCR血清学分型、脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）和多位点序列分型（MLST）。  结果  40例病例中,14例患者为妊娠感染相关病例,其中7例为新生儿感染,均治愈,无死亡病例。 非妊娠感染相关病例中3例死亡。 40株Lm共分为3种血清群,其中1/2a,3a为优势血清型。 40株菌株分为26个型别,GX6A16.BJ0003型别为优势带型（9株）。 GX6A16.BJ0003型别自2015 — 2019年连续5年均有检出,并存在2例死亡病例。 GX6A16.BJ0014型别的2例病例均为妊娠感染相关病例。 40株菌株被分为13个序列类型（STs）,最常见的为ST8、ST87、ST5。  结论  2015 — 2019年北京市西城区人源性Lm以1/2a,3a为主要血清群,GX6A16.BJ0003型别和ST8为北京市西城区人源性Lm主要PFGE型别和MLST型别,存在同一克隆的菌株持续流行情况,应提高对高危型别的监测。     

Evolution of erythromycin resistance in Streptococcus pneumoniae in Italy

OBJECTIVES: To evaluate erythromycin resistance in recent invasive isolates of Streptococcus pneumoniae in Italy, to study the phenotypic and genotypic characteristics of the isolates, and to compare data with those obtained in a previous survey. METHODS: Invasive pneumococcal isolates were obtained from 56 laboratories throughout the country, in 2001-2003. Isolates were serotyped and antimicrobial susceptibilities determined by Sensititre panels and Etest. A new PCR was performed to detect erythromycin resistance genes. Typing methods for selected erythromycin-resistant isolates included PFGE and multilocus sequence typing (MLST). RESULTS: One hundred and fifty-five isolates out of 444 (34.9%) were resistant to erythromycin: 95 isolates (21.4%) carried erm(B), 56 (12.6%) carried mef(A) and three carried both genes. One isolate, carrying neither erm(B) nor mef(A), showed a point mutation in domain V of the 23S rRNA genes. The mef(A)-positive isolates carried subtype mef(A) (47 isolates), subtype mef(E) (nine isolates), and both subtype mef(E) and erm(B) (three isolates). All subtype mef(A) strains, except two, belonged to serotype 14, appeared to be clonally related by PFGE and related to the England14-9 clone by MLST. The two isolates belonging to other serotypes showed different genetic backgrounds. CONCLUSIONS: Erythromycin resistance in S. pneumoniae has increased in the last few years in Italy. erm(B) is still the predominant resistance determinant; however, the increase in erythromycin resistance (34.9% versus 28.8% of the previous years) is mainly due to an increase in the proportion of isolates carrying the efflux pump mef(A), whereas the proportion of isolates carrying erm(B) has not changed.     

四川省自贡市食品和环境携带屎肠球菌的耐药性和多位点序列分型研究

目的 研究四川省自贡市食品和环境样本中屎肠球菌耐药性及携带毒力基因情况,并对分离菌株进行序列分型（ST）。方法 对2013年采集的157份食品和环境样本进行屎肠球菌分离鉴定,全自动微生物鉴定仪检测屎肠球菌对14种常见抗生素的敏感性;使用聚合酶链式反应方法检测屎肠球菌携带毒力基因（hyl,esp）的情况,并应用多位点序列分型（MLST）方法对分离菌株进行序列分型。结果 自贡地区肉制品和冰箱拭子样本屎肠球菌分离率为28.03%（44/157）,其中耐药菌株的比例为86.36%（38/44）。分离菌株对红霉素、四环素和利福平的耐药率分别为65.91%（29/44）、31.82%（14/44）和27.27%（12/44）,对环丙沙星,高浓度链霉素和高浓度庆大霉素以及氯霉素也有一定的耐药率。分离到1株喹奴普丁-达福普丁耐药的菌株。未检测到对青霉素类、糖肽类、脂肽类、喹诺酮类和恶唑烷酮类抗生素耐药的菌株。44株屎肠球菌分为38个ST型别,ST94克隆群为优势克隆群,包括13株菌。分离到1株CC17克隆群的屎肠球菌多重耐药菌株和1株ST957的八重耐药菌株。检测到2株携带esp基因的屎肠球菌。结论 自贡市食品和环境中存在多种ST型别的屎肠球菌,且对多种抗生素耐药。应重视肉制品中耐药屎肠球菌对公众健康的潜在威胁。     

2008－2017年鄂西北地区脑膜炎奈瑟菌药物敏感性及分子分型研究

目的 分析鄂西北地区2008 – 2017年分离到的72株脑膜炎奈瑟菌（Nm）的药物敏感性及分子分型特征。 方法 对Nm菌株进行生化鉴定和血清学分群,并采用荧光聚合酶链式反应进行基因分群,用K-B纸片和E-test检测试纸条进行药敏试验;选取部分菌株进行多位点序列分型（MLST）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）。 结果 血清分群结果为B群14株、C群10株、W群3株、E群1株、不可分群44株。基因分群结果:B群33株、C群10株、W群3株、E群1株,其他及不可分群25株。70株Nm菌株对复方新诺明、萘啶酸、环丙沙星、米诺环素、氯霉素5种抗生素的敏感率分别为7.14%、21.43%、28.57%、98.57%和98.57%,对美罗培南、亚胺培南、阿奇霉素、头孢曲松、头孢噻肟、青霉素和利福平均敏感。17株菌株共有12种序列型别,其中12株菌株不能归入现有克隆群,其他5株属于CC4821（4株）和CC175（1株）。55株菌株分为48种不同的PFGE带型,带型相同的菌株其基因群亦相同。 结论 2008 – 2017年鄂西北地区分离的Nm菌株主要为B群;对复方新诺明、萘啶酸和环丙沙星具有较高的耐药性。MLST分型以CC4821为优势克隆。PFGE分型特征呈多态性,未出现优势带型。