通过受体介导法将核酶特异导入肝细胞以阻断HBV蛋白表达的初步研究

应用半乳糖末端糖蛋白受体（ＡＳＧＰ－Ｒ）介导的内吞作用，将外源基因导入真核细胞，与脂质体介导的转染和细胞表面转铁蛋白受体（Ｔｆ－Ｒ）介导的内吞作用相比，虽然三种方式均能有效介导外源基因的转移，但ＡＳＧＰ－Ｒ法具有肝细胞特异性，而脂质体法和Ｔｆ－Ｒ法不具此特性。将克隆于真核表达载体的针对乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｍＲＮＡＰｒｅＣ／Ｃ区的核酶质粒ｐＣＭＶ－Ｒｉｐｃ特异性导入肝细胞并发挥作用，通过酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测细胞培养液中的乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ），评价核酶在细胞水平对ＨＢＶ抗原表达的阻断作用。结果表明当核酶质粒ｐＣＭＶ－Ｒｉｐｃ与ＨＢＶ抗原表达质粒ｐＵＣ－２ＨＢＶ共转染ＨｅｐＧ２细胞时，核酶对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ表达的抑制率分别为５５．２９％和６８．７３％。     

乙型肝炎病毒抗原诱导T细胞受体Vβ基因亚家族特异性扩增与多样性

目的对乙型肝炎疫苗注射前后及ＨｅｐＧ２２２１５上清ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ感染淋巴细胞，Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖβ基因亚家族表达特征与多样性，为研究识别机制提供依据。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹扫描。结果乙肝疫苗注射后Ｖβ６、１４增高，ＨｅｐＧ２２２１５上清感染后Ｖβ６、１５增高。结论Ｖβｂ为两种抗原共同识别亚家族。Ｖβ１４、１５为各自的特异性识别亚家族     

血清乙型肝炎病毒前S1抗原检测及其与病毒复制的关系

用抗Ｓ和抗前Ｓ１单抗的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测１５０例慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）携带者和健康人血清中的ＨＢＶ前Ｓ１抗原，其结果和ＨＢＶＤＮＡ聚合酶链反应（ＰＣＲ）、乙型肝炎血清标志的检测结果进行比较。结果表明：前Ｓ１抗原在乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）阳性组中的检出率和相对滴度显著高于ＨＢｅＡｇ阴性组（Ｐ＜０．０１）；在ＨＢｅＡｇ阴性组中，抗－ＨＢｅ阴性人群前Ｓ１抗原的检出率和相对滴度也显著高于抗－ＨＢｅ阳性人群（Ｐ＜０．０１）。前Ｓ１抗原和ＨＢＶＤＮＡ检测结果的符合率达８０％，两者检出率的相关系数ｒ＝０．９８２６（Ｐ＜０．０１）。结论：血清前Ｓ１抗原和乙型肝炎病毒的存在关系密切。     

乙型肝炎病毒C基因启动子及前C变异的动态研究

目的明确乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ基因启动子（ＢＣＰ）与前Ｃ变异株在慢性乙型肝炎患者中的动态消长,及与ＨＢｅＡｇ血清学状态的关系。方法对３２例慢性乙型肝炎患者的１０５份系列血清进行错配聚合酶链反应（ＰＣＲ）－限制性片段长度多态性分析,并对其中１５例患者系列血清标本的ＰＣＲ产物进行直接测序。结果ＢＣＰ和Ａ８３变异株感染率均明显增高（６２．５％＞４６．９％;３１．３％＞１２．５％）;ＢＰＣ变异株更多地（１４／１６）表现为优势积累,且先于ＨＢｅＡｇ血清阴转;ＢＣＰ野株／变异株比例变化影响ＨＢｅＡｇ血清学的稳定性。结论两种类型的变异株在炎症活动中均具有选择优势,最终造成ＨＢｅＡｇ（－）的ＨＢＶ感染;可能与ＨＢＶ感染之持续有关。     

用热启动聚合酶链反应检测血清中乙型肝炎病毒DNA技术的建立和应用

建立了热启动聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）的技术。ＰＣＲ所有反应成分被２次加样。先加Ａ液（含ｄＮＴＰｓ、一对引物和ＭｇＣｌ＿２）与一粒石蜡珠。７０℃加热后冷却至室温，使蜡珠先融化后凝固形成蜡盖封住Ａ液，然后在向其上加入Ｂ液（含耐热性ＤＮＡ聚合酶、ＨＢＶＤＮＡ模板和ＫＣｌ）并开始循环扩增。当反应管内第一次变性温度升至６０℃以上时，中隔蜡层融化，蜡上浮形成防蒸发屏障，Ａ、Ｂ两液则由于热分子运动而混匀，从而保证引物与靶基因在较高温度下严格退火以减少错导非特异性扩增和引物聚体形成。提高了ＰＣＲ的特异性和灵敏性，应用这种技术对７６例肝炎血清进行了检测，结果ＨＢＶＤＮＡ检出率为６８％，其中ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为１００％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢｅ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）血清检出率为７０％；ＨＢｓＡｇ（＋）、抗－ＨＢＣ（＋）血清检出率为８９％；抗ＨＢＣ（＋）血清检出率为对％；标记全阴性血清检出率为３３％。     

乙型肝炎病毒抗原诱导T细胞受体Vβ基因亚家族特 …

目的 对乙型肝炎疫苗注射前后及ＨｅｐＧ２２２１５上清ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ感染淋巴细胞，Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖβ基因亚家族表达特征及多样性，为研究识别机制提供依据。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹扫描，结果 乙肝疫苗注射后Ｖβ６，１４增高，ＨｅｐＧ２２２１５上清感染后Ｖβ６１５增高，结论 Ｖβｂ为两种抗原共同识别亚家族，Ｖβ１４，１５为各自的特异民生识别亚家族。     

套式PCR检测HBV与HCV垂直传播的比较研究

用套式ＰＣＲ法检测了２７例ＨＢｓＡｇ阳性母亲的新生儿脐带血ＨＢＶ ＤＮＡ，阳性３例（１１．１％），同时检测了７例抗－ＨＣＶ阳性母亲的新生儿脐带血ＨＣＶ ＲＮＡ及抗－ＨＣＶ，结果ＨＣＶ ＲＮＡ无１例阳性，抗－ＨＣＶ全部阳性，因此认为婴儿体内抗－ＨＣＶ是一种由母体被动获得的抗体，不能作为ＨＣＶ感染的客观指标。     

血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病原学研究

目的对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎进行病原学研究。方法用ＨＢＶＰＣＲ、ＨＣＶＲＴ－ＰＣＲ和ＨＥＶＲＴ－ＰＣＲ分别检测血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎患者血清，并对其部分阳性产物进行克隆测序。结果８７例非甲～戊型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ均为阴性，９例（１０．３％）为ＨＣＶＲＮＡ阳性，部分经测序证实为ＨＣＶ１ｂ亚型；余７８例为ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阴性。该７８例中，１４例因无血清未作ＨＥＶＲＮＡ检测，余６４例中４９例（７６．６％）为ＨＥＶＲＮＡ阴性，１５例（２３．４％）为ＨＥＶＲＮＡ阳性。经序列分析显示，其中９例为典型的中国ＨＥＶ株基因序列，６例变异较大，与典型的中国株基因序列的同源性仅为８０％左右。４９例ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ和ＨＥＶＲＮＡ均阴性的血清中１６例（３２．６％）ＨＧＶＲＮＡ阳性。由此可见，该８７例中至少有９例为ＨＣＶ感染，１５例为ＨＥＶ感染，１６例为ＨＧＶ感染。结论对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病人应该用ＰＣＲ法进行病原学分型，以明确其诊断     

乙/丙型肝炎病毒双重感染患者前C区终止变异低频率

目的了解乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）双重感染患者前Ｃ区基因变异，及其可能的临床意义。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）与限制片段长度多态性（ＲＦＬＰ）来分析２５例ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阳性（Ａ组）和３１例ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ阳性但抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ均阴性（Ｂ组）的慢性肝病患者前Ｃ区密码２８终止变异（终２８）。结果ＨＢＶ和ＨＣＶ双重感染患者（Ａ组）血清ＨＢＶＤＮＡ第１次ＰＣＲ阳性率（１６％）明显低于单独ＨＢＶ感染组（６５％）（Ｐ＜０．００１）；前Ｃ终２８检出率（２８％）亦明显低于单独ＨＢＶ感染（６８％）（Ｐ＜０．００１）。结论提示双重感染患者ＨＢＶ前Ｃ终止变异低频率可能与ＨＢＶ低水平复制有关     

831名健康青年庚型肝炎病毒和人免疫缺陷病毒感染的调查

目的了解我国健康青年中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）和人免疫缺陷病毒的感染情况。方法采用酶联免疫法（ＥＩＡ）检测６省８３１名健康青年血清中的ＨＧＶ和ＨＩＶ抗体，对抗－ＨＧＶＩｇＧ阳性的血清再用逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ。结果发现抗－ＨＣＶＩｇＧ阳性率为２５３％（２１／８３１），２１例阳性者中ＨＧＶＲＮＡ阳性８例，两者符合率为３８１％；抗－ＨＩＶ均阴性。结论我国健康青年人群中确实存在ＨＧＶ感染。     

酶联免疫吸附法检测庚型肝炎病毒抗体

目的 探讨抗庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＩｇＧ与各种病毒感染,丙氨到转氨酶（ＡＬＴ）及ＨＧＶ ＲＮＡ的相关性。方法 用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法检测了３１５例各种肝炎病毒（Ａ￣Ｅ）感染乾和１１７例健康献血员血清的抗－ＨＧＶ ＩｇＧ,并测定其ＡＬＴ,对抗－ＨＧＶ ＩｇＧ阳性的标本用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测ＨＧＶ ＲＮＡ。结果 献血员抗－ＨＧＶ ＩｇＧ的阳性率为３．４２％（４／１１７     

庚型肝炎病毒IgM抗体检测方法的建立及其临床意义

目的建立一种早期、快速诊断庚型肝炎的血清学检测方法。方法以辣根过氧化物酶标记庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）多肽ＮＳ３,ＮＳ５区段抗原,建立了捕获酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,用于检测血清中ＨＧＶＩｇＭ抗体。结果本法不受特异性ＩｇＧ的竞争和类风湿因子的干扰;与其它致肝炎的病毒（ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＥＶ、ＣＭＶ、ＥＢＶ）无交叉反应。检测４６例非甲、乙、丙、戊型肝炎患者血清,抗－ＨＧＶＩｇＭ阳性１４例,阳性率３０．４３％,其中,６例同时为ＨＧＶＲＮＡ阳性,阳性符合率为４２．８６％（６／１４）,检测１２例庚型肝炎病人双份血清,其中,急性期血ＨＧＶＩｇＭ抗体均为阳性。结论该法检测ＨＧＶＩｇＭ抗体特异性强,敏感性高,且简便快速,适用于临床对庚型肝炎新近感染的早期诊断,有推广应用价值。     

广西HCV高危人群庚型肝炎病毒的新基因型核苷酸序列分析

目的 探讨广西HCv高危人群庚型肝炎病毒(HGv)的感染情况及其新基因型的核苷酸序列。方法 静脉药瘾者(IVDAs)85份、肝病患者(PLDs)80份和献血员(BDs)50份血清标本．用PCR法检测庚型肝炎病毒RNA，EIA法检测HBsAg、抗-HCV和抗-HIV；随机选出62份庚型肝炎病毒RNA阳性标本进行核苷酸序列分析，构建种系发生树作基因分型。结果 215份血清中HGv阳性者85份(39.53％)，HBsAg、抗-HGV和抗-HIV的阳性率分别为39.07％、42．79％和0；11份HGV RNA的测序结果证实其有3种基因型，其中5株为新基因型(亚洲型)，51份补测序，其中GBV—C型占3．23％，HGV型占30.65％，亚洲型占64．51％。结论 HGV的3种基因型中存在不同的基因亚型；广西IVDAs、PLDs和BDs中感染庚型肝炎病毒以亚洲型和HGV型为主。     

临床诊断为非甲～戊型肝炎患者的病原学研究

目的探讨临床诊断为非甲-戊型肝炎患者的病原学。方法 采用巢式PCR（nPCR)检测HBV、TTV、B19、和SENV DNA；用逆转录巢式PCR（RT-nPCR)检测HGV和HCV RNA。结果 60例临床诊断为非甲-戊型肝炎患者中，单独HBVDNA阳性30例（阳性率为50.0%)，HBV和TTVDNA阳性10例（16.7%)，HBV和B19DNA阳性6例（10.0%)，HCVRNA、HBV和SENVDNA阳性1例（1.7%)，单独HCVRNA阳性1例（1.7%)，HCVRNA和B19DNA阳性1例（1.7%),HGVRNA无一例阳性，单独B19DNA阳性2例（3.3%)。单独TTVDNA阳性1例（1.7%)，另8例（13.3%)上述病毒核酸均为阴性。HBV合并感染TTV或B19对其血清学生化指标无影响。结论HBV是临床诊断为非甲-戊型肝炎的主要病原，HGV、TTV、B19和SENV与非甲-戊型肝炎无关。     

华南地区HGV的流行状况和同源性分析

目的了解华南地区庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的流行状况及ＨＧＶ不同株和不同基因区的同源性。方法采用逆转录聚合酶链反应技术（ＲＴ－ＰＣＲ）检测来自广东、香港、云南的不同人群血清标本共１９９１份。对其中２０份的５端非编码区（５ＵＴＲ）２３８ｂｐ和３份非结构蛋白５区（ＮＳ５）６２１ｂｐ进行了序列测定和同源性分析。结果一般人群ＨＧＶＲＮＡ阳性率为（０．７３～１．３４）％,献血员（２．５２～２．９０）％,静脉吸毒者１７．８６％,血液透析患者１４．１３％,接受骨髓移植者４１．６７％,在非甲～戊型肝炎病人为２５．３０％,肝细胞癌１４．４８％,乙型肝炎７．２２％,丙型肝炎（８．３３～１６．１３）％。不同株５ＵＴＲ同源性介乎（９０．４０～１００）％;不同株ＮＳ５区核苷酸同源性（９３．３０～９４．００）％,氨基酸为（９７～９９．２）％。结论接受骨髓移植、血液透析、静脉吸毒者,乙型、丙型、非甲～戊型肝炎病人及肝细胞癌患者是ＨＧＶ的高感染人群。不同ＨＧＶ株存在一定的地区性差异;同一地区不同人群的ＨＧＶ株变异不明显;序列中存在高度保守区及较大变异区     

吸毒人群丙型和乙型肝炎病毒感染的血清流行病学研究

目的　调查广州市吸毒人群丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） 和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ） 的感染状况。方法　在广州市两所戒毒所４８３ 名男性吸毒人员中，用酶标记免疫（ＥＬＩＳＡ） 法，调查ＨＢＶ、ＨＣＶ感染情况，并以正常人群作对照组观察。结果　广州市吸毒人群中，ＨＣＶ、ＨＢＶ的感染率及这两种病毒的混合感染率，分别为６７－４９％ 、９０－４８ ％ 、６２－７３％ ，明显高于正常人群对照组的３－７５％ 、５５－６３ ％ 、３－７５％ 。结论　静脉吸毒是ＨＢＶ、ＨＣＶ感染的主要危险因素。广州市吸毒人群当中，存在着极高的丙型肝炎病毒和乙型肝炎病毒感染率     

Hepatitis B and D virus infection among drug abusers in Taiwan

Approximately 15 to 20% of the general population in Taiwan are chronic hepatitis B surface antigen (HBsAg) carriers. However, the incidence of hepatitis D virus (HDV) infection is low (5-8%) in patients with HBsAg-positive chronic liver diseases in this area. To evaluate the prevalence of hepatitis B virus (HBV) and HDV infection among drug abusers in Taiwan, serum samples were collected from 152 drug abusers at the Taipei Municipal Anti-Narcotic Institute and test for HBV and HDV markers. Of these, 24 (15.8%) were HBsAg positive, and only 15 (9.9%) were seronegative for all HBV markers. Of the 115 intravenous drug abusers, serum antibody to hepatitis D antigen (anti-HD) was positive in 78.9% of 19 persons who were HBsAg positive, and in 7.5% of 80 persons who were positive for antibody to HBsAg (anti-HBs). Anti-HD was not detected in the sera from all 37 nonintravenous drug abusers regardless of the status of their HBV markers. Also, none of 63 asymptomatic HBsAg carrier pregnant women or 23 patients with acute type B viral hepatitis had measurable anti-HD in their sera. Thus, the high frequency of HDV detected among Chinese HBsAg carrier intravenous drug abusers in Taiwan is similar to that reported in Western countries.     

High prevalence of HBV and HCV infection among intravenous drug users in Korea

Although intravenous drug users are a well-known route of hepatitis C virus (HCV) and hepatitis B virus (HBV) transmission, there is no data on the prevalence of HBV and HCV infection among intravenous drug users in Korea. In order to describe the prevalence of HBV and HCV infection, and to determine HCV genotypes in the population, serum samples were collected from 107 intravenous drug users during 2005-2006. Fifty-seven percent (n = 61) were HCV RNA positive and 51% (n = 55) were HBV DNA positive. Co-infection of HBV and HCV were found in 23% (n = 25). HCV genotypes 1b, 2a/2c, 2, 2b, and 3a were found in 38% (n = 23), 44% (n = 27), 8% (n = 5), 2% (n = 1), and 3% (n = 2), respectively. Moreover, mixed infections of genotypes 1b and 2a/2c were found in 5% (n = 3). When the number of patients with HCV genotype 1b compared with that of patients with genotype 2a/2c, HBV DNA titer was not significantly different by independent t-test (t = -0.881, P = 0.392 > 0.05) between the two patient groups. These results suggest that the prevalence of HBV and HCV infection among intravenous drug users is high showing over 50% in Korea and a strategic prevention program should be performed in this group to prevent further infection into local community.