黄连解毒汤对快速老化模型小鼠海马蛋白表达的影响

目的：研究黄连解毒汤(HLJDT)对快速老化模型小鼠(senescence accelerated mouse,SAM)的快速老化亚系SAM-prone/8(SAMP8)海马蛋白表达的影响,以期从分子水平较深入地阐明HLJDT治疗阿尔茨海默病（AD）的机制。方法：将12月龄SAM的快速老化亚系SAMP8和抗快速老化亚系SAM-resistance/1(SAMR1)分为SAMR1对照组、SAMP8模型组和HLJDT给药组,应用双向凝胶电泳结合质谱鉴定,观察HLJDT对SAM海马组织蛋白表达的影响。结果：与SAMR1相比,SAMP8海马中有29个蛋白点的表达发生显著变化；给予HLJDT后有38个蛋白点的表达发生显著变化。选取部分HLJDT的作用蛋白点进行质谱分析结合数据库检索,共鉴定出12个蛋白,这些蛋白涉及到能量代谢、转录调控、细胞骨架、氨基酸代谢等功能。其中有4个蛋白是SAMP8与SAMR1海马蛋白比较存在显著差异的蛋白,给予HLJDT后其蛋白表达得到了明显改善。结论：HLJDT通过调节SAMP8脑中与能量代谢、信号转导、细胞骨架及氨基酸代谢等相关蛋白的表达,从多途径对SAMP8的老化起到了改善作用。     

清肝泻火方对Graves病模型小鼠Th17细胞转录因子表达的影响

目的:观察清肝泻火方对Graves病(GD)模型小鼠Th17细胞相关转录因子的影响,从免疫反应角度研究清肝泻火方治疗GD的作用机制,探讨该方治疗GD的新靶点。方法:选取雌性BALB/c小鼠80只,其中60只以表达TSHR-A亚单位的重组腺病毒免疫制备GD小鼠模型,造模成功后按随机数字表法分为模型组、甲巯咪唑组和清肝泻火方组,每组各20只;剩余20只作为对照组。甲巯咪唑组每日灌服甲巯咪唑混悬液12 mg/kg,清肝泻火方组每日灌服清肝泻火方混悬液2 m L,对照组和模型组每日灌服蒸馏水2 m L,各组均连续干预30 d。采用放射免疫法(RIA)检测各组GD模型小鼠血清中游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)水平;酶联免疫吸附法检测各组GD模型小鼠血清中白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-21(IL-21)水平。结果 :甲巯咪唑和清肝泻火方均可降低小鼠血清中FT3、FT4、TSH及IL-17、IL-21的表达水平,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:清肝泻火方能抑制Th17细胞相关转录因子的表达,从而抑制甲状腺自身的免疫炎症反应,促进GD小鼠甲状腺功能的恢复。     

益气养阴方对实验性GD小鼠核转录因子PPAR-γ表达影响的实验研究

目的观察Graves病(GD)小鼠外周血白细胞计数和小鼠核转录因子PPAR-γ表达及益气养阴方对其的影响。方法基因枪造模建立GD小鼠模型,应用中药益气养阴方治疗后,观察小鼠外周血白细胞计数和小鼠核转录因子PPAR-γ表达的变化。结果治疗30 d后,中药组小鼠外周血白细胞计数和小鼠核转录因子PPAR-γ表达与模型组均有显著性差异。在外周血白细胞计数方面,中药益气养阴方高剂量组明显高于中药益气养阴方低剂量组、中剂量组(P<0.01);在降低甲状腺激素水平方面,中药益气养阴方高、中剂量组明显优于中药益气养阴方低剂量组;在小鼠核转录因子PPAR-γ表达方面,模型组小鼠PPAR-γ表达量较少(+),经中药益气养阴方治疗,小鼠PPAR-γ的表达上调。益气养阴高剂量组PPAR-γ表达显著增加(++++);益气养阴中剂量组PPAR-γ表达增加(+++);依次表达下调。结论益气养阴方对Graves病合并白细胞减少有较好的治疗作用,其机理可能与上调PPAR-γ表达有关。     

洗心汤对快速老化模型小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡及相关转录因子表达的影响

探讨洗心汤对快速老化模型(SAMP8)小鼠肠黏膜辅助性T细胞17(T helper 17 cell, Th17)/调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)免疫平衡及相关转录因子表达的影响。50只14周龄的雄性SAMP8小鼠按随机数字表法分为模型组,益生菌组,洗心汤高、中、低剂量组,每组10只。10只14周龄的雄性抗快速老化(SAMR1)小鼠作为对照组。喂养10周后开始连续灌胃10周。Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠肠黏膜SIgA(secretory immunoglobulin A)含量;流式细胞术检测小鼠肠黏膜Th17、Treg含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠结肠组织视黄酸相关孤儿受体γt(retinoic acid related orphan receptor-γt, RORγt)、叉头盒蛋白p3(forkhead box p3,Foxp3)蛋白的表达。结果显示,与对照组相比,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长(P<0...     

消痰散结方对胃癌组织核转录因子活性表达影响的研究

目的：通过建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,观察消痰散结方对胃癌组织核转录因子（NF-κB）活性表达的影响,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法：采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,随机分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,采用EMSA方法检测胃癌组织NF-κB活性的表达。结果：①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异（P〈0.01）;②消痰散结方低、中、高剂量组NF-κB的活性表达与模型组相比逐渐降低,且呈明显的剂量依赖效应。消痰散结方低剂量组NF-κB的活性表达与模型组相比有统计学意义（P〈0.05）,消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κB的活性表达与模型组相比,P〈0.01,有显著统计学意义,但组间相比无统计学意义。结论：①消痰散结方有明显的抑制胃癌细胞生长的作用;②消痰散结方可能通过抑制NF-κB活性而阻断胃癌细胞增殖进程,可有效抑制胃癌发展。     

补肾方、补肾健脾方、益气健脾化痰祛瘀方对快速老化模型小鼠心肌葡萄糖转运体蛋白的影响

目的:观察补肾方、补肾健脾方、益气健脾化痰祛瘀方对快速老化模型小鼠心肌葡萄糖转运体蛋白的影响,探讨中医不同治法心肌保护作用的机制。方法:选用快速老化模型小鼠,分为对照组、模型组、补肾方组、补肾健脾方组、益气健脾化瘀祛痰方组。连续灌胃给药3个月,采用生化分析仪检测血清TC和LDL-C,采用ELISA法检测血清IL-6水平,采用HE染色法观察胸主动脉和心肌组织形态,采用油红O染色法观察胸主动脉脂质面积,采用Masson染色法观察胸主动脉胶原纤维的变化,采用Western blot法检测心肌组织GLUT-1和VCAM-1蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组血清TC、LDL-C和IL-6水平明显升高(P0.05,P0.01),胸主动脉和心肌组织病理形态发生改变,心肌组织GLUT-1蛋白表达降低和VCAM-1蛋白表达显著升高;与模型组比较,给药组血清TC和LDL-C水平降低(P0.01),改善胸主动脉和心肌组织的病理变化,益气健脾化痰祛瘀方组血清IL-6水平降低(P0.05),提高心肌组织GLUT-1蛋白表达和抑制心肌组织VCAM-1蛋白表达。结论:补肾方、补肾健脾方、益气健脾化瘀祛痰方对快速老化模型小鼠具有代谢调节、心肌保护、血管保护三重作用,改善衰老所致的心肌能量代谢障碍、血管损伤,炎症反应,其作用机制可能与其干预心肌葡萄糖转运体蛋白有关,以益气健脾化痰祛瘀方效果较为明显。     

艾灸对快速老化小鼠海马区突触可塑性相关蛋白表达的影响

目的:探究艾灸对快速老化小鼠(SAMP8)海马区突触可塑性相关蛋白表达的影响。方法:将12只6个月龄雄性SAMP8小鼠随机分为模型组和艾灸组。另以6只同月龄雄性正常老化小鼠(SAMR1)作为空白组。空白组、模型组小鼠每天常规抓取并用固定器固定,不予其他处理;艾灸组小鼠釆用相同抓取并固定后,用艾条灸其关元穴。各组小鼠干预时间为20 min/d,6 d/周,共干预6周。6周后取材,用Western-blot法检测各组小鼠海马突触素(SYN)、脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(Trk B)及磷酸化Trk B(p-Trk B)的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠海马内SYN、BDNF、p-Trk B表达显著下降(P 0. 05)。与模型组比较,艾灸组小鼠海马内SYN、BDNF、p-Trk B表达显著上升(P 0. 05)。3组小鼠海马Trk B表达水平差异无统计学意义(P 0. 05)。结论:艾灸干预能够通过影响SAMP8小鼠海马区突触可塑性相关蛋白的表达起到抗衰老的作用,且该作用可能经由BDNF/Trk B通路实现。     

肾炎宁方对IgA肾病模型大鼠肾脏组织核转录因子-κB表达的影响

目的:探讨肾炎宁方治疗IgA 肾病的作用机理.方法:采用口服牛血清白蛋白和葡萄球菌肠毒素B 感染的复合方法,复制大鼠IgA 肾病模型,并给予肾炎宁方治疗,检测大鼠肾组织核转录因子-κB(NF-κB)含量及其mRNA 表达.结果:肾炎宁方可明显抑制IgA 肾病模型大鼠肾组织中NF-κB的分泌及其mRNA 表达.结论:肾炎宁方抑制IgA 肾病模型大鼠肾组织NF-κB的分泌作用可能是其治疗IgA 肾病的作用机理之一.     

针刺对慢性疲劳综合征大鼠血浆T细胞转录因子/GATA结合蛋白3表达的影响

目的:观察针刺对慢性疲劳综合征(CFS)大鼠血浆T细胞转录因子(T-bet)/GATA结合蛋白3(GATA-3)表达的影响,探索针刺治疗CFS的作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、针刺组、人参皂甙组,每组12只。采用束缚+冷水游泳的复合应激法制备CFS大鼠模型。针刺组针刺"百会""关元""足三里",人参皂甙组予人参皂甙水溶液灌胃,均1次/d,14d后,观察各组行为学变化,采用RTPCR法检测血浆T-bet/GATA-3基因的表达水平。结果:模型组大鼠悬挂不动时间长于空白对照组(P0.05),力竭游泳时间短于空白对照组(P0.05);与模型组比较,人参皂甙灌胃及针刺治疗后大鼠悬挂不动时间均缩短(P0.05),力竭游泳时间均延长(P0.05);且针刺组较人参皂甙组悬挂不动时间更短,力竭游泳时间更长(均P0.05)。模型组大鼠血浆T-bet基因的表达水平高于空白对照组(P0.05),GATA-3基因表达水平低于空白对照组(P0.05);人参皂甙灌胃及针刺治疗均能降低T-bet基因的表达水平(P0.05),升高GATA-3基因的表达水平(P0.05);针刺组较人参皂甙组T-bet表达水平降低更显著(P0.05)。模型组T-bet/GATA-3比值高于空白对照组(P0.05);人参皂甙灌胃及针刺治疗后T-bet/GATA-3比值较模型组均下降(P0.05)。结论:针刺能降低血浆T-bet表达水平,升高GATA-3表达水平,调节升高的T-bet/GATA-3比值,可能是其治疗CFS的机制之一。     

左归丸及左归丸合苓桂术甘汤对快速老化小鼠肠紧密连接蛋白表达的影响

目的:观察左归丸及左归丸合苓桂术甘汤对快速老化模型小鼠肠紧密连接蛋白表达的影响。方法:选用SAMP6小鼠分为对照组、模型组、左归丸组、左归丸合苓桂术甘汤组,给药12周,显微CT扫描股骨、HE染色和电镜观察回肠组织形态和微结构,western blot法检测回肠ZO-1和IL-17蛋白,ELISA法检测血清Ig G和IL-10含量。结果:与对照组比较,模型组骨小梁稀疏,回肠绒毛排列紊乱,回肠ZO-1蛋白下调,IL-17蛋白上调,血清Ig G和IL-10含量降低。与模型组比较,给药组骨小梁较致密,回肠绒毛排列较整齐,上调回肠ZO-1蛋白,下调IL-17蛋白,升高血清Ig G和IL-10含量。结论:左归丸及左归丸合苓桂术甘汤可能通过肠黏膜屏障结构和功能保护调节免疫功能,抑制促炎因子IL-17和促进抑炎因子IL-10分泌,阻止骨结构破坏,从而防治老年性骨质疏松症。     

三七总皂苷对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8炎症因子及小胶质细胞的影响

目的:研究三七总皂苷(PNS)对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)炎症因子及小胶质细胞的影响.方法:采用SAMP8小鼠,将其随机分为模型组、PNS高剂量组(200 mg·kg-1)、PNS低剂量组(100 mg·kg-1)和石杉碱甲组(0.3 mg·kg-1),8只/组,模型组ig给予给药组相同容积的双蒸水.每天ig 1次,连续给药2个月.用ELISA双抗体夹心法法测定PNS对各组SAMP8小鼠血清中的细胞因子白介素(IL)-1β,IL-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)及补体(C1q)表达的影响;HE染色光镜观察小胶质细胞的形态变化.结果:PNS高剂量组的IL-1β(23.14± 12.58) ng·L-1水平低于模型组(47.44 ng·L-1) (P＜0.05);IL-6 PNS高、低剂量组(243.3±133.9),(269.0±75.1)ng·L-1低于模型组(582.5±144.6) ng·L-1(P＜0.05);模型组小鼠血清中补体C1q (280.4 ±49.75) mg·L-1含量均高于阳性组C1q(144.71±21.78) mg·L-1和PNS高剂量组C1q(187.7±65.56) mg·L-1;模型组小鼠海马区的小胶质细胞被激活,吞噬神经细胞;用药组海马区小胶质细胞没有被激活,为静息状态.血清中TNF-α各组间无显著差异.结论:PNS对SAMP8小鼠的免疫炎症反应有一定的抑制作用.     

香菇多糖对小鼠T细胞比例及活化的影响

目的:研究香菇多糖对DTH小鼠T淋巴细胞比例及活化的影响。方法:用800mg/kg的香菇多糖给小鼠灌胃7天,给药后第3天用5%二硝基氟苯(DNFB)致敏,第4天用90mg/kg环磷酰胺造成免疫抑制,第7天用1%DNFB激发引起迟发型超敏反应(DTH),第8天取耳片及颈部淋巴结(CLN)细胞,称重法检测耳片肿胀度,流式细胞术检测CLN中CD3+、B220+细胞比例及T细胞中CD25+、CD69+表达。结果:香菇灌胃组耳片肿胀度和CLN中CD3+、B220+及CD3+CD25+、CD3+CD69+比例细胞均比模型组有所上升。结论:香菇多糖对免疫抑制小鼠的T细胞功能有改善作用。     

白花前胡甲素对Ang II诱导的核转录因子c-Jun蛋白表达的影响

目的:探讨白花前胡甲素(Pd-Ia)对Ang II诱导的核转录因子c-Jun蛋白表达水平的影响。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞;免疫细胞化学检测核转录因子c-Jun蛋白表达情况。结果:AngII(10-6mol/L)刺激心肌细胞2h后,细胞核内c-Jun蛋白表达显著增强,为对照组的2.8倍(P<0.01);白花前胡甲素对此有显著抑制作用(P<0.05)。结论:白花前胡甲素能够拮抗AngII诱导心肌细胞c-Jun蛋白表达上调。     

白花前胡甲素对Ang Ⅱ诱导的核转录因子c-Jun蛋白表达的影响

目的：探讨白花前胡甲素（Pd-Ia）对Ang Ⅱ诱导的核转录因子c-Jun蛋白表达水平的影响。方法：体外原代培养乳鼠心肌细胞;免疫细胞化学检测核转录因子c-Jun蛋白表达情况。结果：AngⅡ（10-6mol/L）刺激心肌细胞2h后,细胞核内c-Jun蛋白表达显著增强,为对照组的2.8倍（P〈0.01）;白花前胡甲素对此有显著抑制作用（P〈0.05）。结论：白花前胡甲素能够拮抗AngⅡ诱导心肌细胞c-Jun蛋白表达上调。     

三焦针法对快速老化模型小鼠海马神经元细胞骨架重组相关蛋白的影响

目的观察三焦针法对快速老化模型小鼠（SAMP8）海马神经元细胞骨架重组相关蛋白的影响，探讨针刺治疗阿尔茨海默氏病（AD）的可能细胞生物学机制。方法以7月龄SAMP8为AD动物模型，随机分为对照组、针刺组和非穴组，每组各20只。针刺组给予三焦针法（取穴：膻中、中脘、气海、血海、足三里），非穴组以双侧胁肋下非经非穴点针刺处理，1次/日，连续6日，第7日休息，连续干预4周。采用Morris水迷宫隐蔽平台试验检测小鼠逃避潜伏期，采用空间探索实验检测小鼠原平台象限停留时间。提取小鼠海马组织脂筏，采用液质联用蛋白质组学方法检测各组小鼠海马脂筏蛋白，分析其中募集的细胞骨架相关蛋白的差异表达；采用免疫荧光共定位法检测各组β-tubulin及Cdc42表达；采用Western Blot法检测各组β-tubulin、β-actin、neurofibrillary蛋白表达。结果三组小鼠5天逃避潜伏期逐渐缩短（F=8.61， P=0.0048）。针刺组逃避潜伏期与对照组和非穴组均有显著差异（P<0.01）。与对照组和非穴组比较，针刺组第3天开始逃避潜伏期时间差异有统计学意义（P<0.01）。针刺组原平台象限停留时间［（19.14±4.32）s］明显高于对照组［（11.38±3.35）s］和非穴组［（13.51±2.46）s］，差异有统计学意义（P<0.01）。与对照组比较，针刺组与非穴组海马脂筏募集的蛋白在种类和数量上存在差异。针刺组脂筏募集的细胞骨架相关蛋白和小 G 蛋白明显多于非穴组，且表现出同步增多的特点；免疫荧光共定位提示，针刺组β-tubulin与Cdc42在细胞核周以及轴突部位高度富集；与对照组比较，针刺对3种细胞骨架蛋白表达量的影响未显示统计学意义。结论三焦针法可调节海马神经元细胞骨架重组，这可能是其治疗AD的重要细胞生物学机制之一。     

祛风解痉方对哮喘模型小鼠γδT淋巴细胞表达的影响

目的:探讨祛风解痉方对哮喘模型小鼠γδT淋巴细胞表达的影响.方法:以卵清蛋白滴鼻的方法建立哮喘Balb/c小鼠模型.动物分组:将30只小鼠随机分为正常组、模型组、醋酸泼尼松片组(0.27 mg/d)及3个祛风解痉方组(0.59、1.18、2.36 g/d),分别进行干预,给药14 d,1次/d.结果:与哮喘模型组比较,...     

补肾填精方对小鼠脾辐射损伤的修复机制

目的:观察补肾填精方对γ射线所致辐射损伤小鼠模型的作用,并通过观察其对DNA损伤修复ATM/ATR通路的影响,探讨该方抗辐射的作用机制。方法:将雌雄各半的balb/c小鼠,分成正常组、病理组和补肾组。采用γ射线损伤小鼠模型,在造模后取脾脏运用real-time RT-PCR方法检测该通路关键基因ATM和ATR基因的表达,并应用免疫组化方法检测ATM和ATR蛋白表达,结合图像分析技术进行分析。结果:补肾组ATR基因表达与病理组相比,有显著差异(P<0.05),而ATM基因表达在各组中的差异不明显;免疫组化结果与RT-PCR结果一致。结论:补肾填精方可促进ATR基因和蛋白的表达增强。     

绞股蓝正丁醇提取物对快速老化小鼠Aβ蛋白的影响

目的探讨壮药绞股蓝Gynostemma pentaphyllum正丁醇提取物对快速老化SAMP8小鼠淀粉样蛋白(Aβ蛋白)的影响。方法 50只快速老化SAMP8小鼠随机分为模型组、石杉碱甲组[0.15 mg/(kg·d)]和绞股蓝正丁醇提取物高、中、低剂量组[500、250、125 mg/(kg·d)],10只正常老化SAMR1小鼠为正常对照组。灌胃给药8周后,取小鼠血清和脑匀浆,以ELISA法检测其Aβ蛋白的水平,RT-PCR和免疫组织化学法检测App基因和APP蛋白的表达。结果与模型组比较,绞股蓝正丁醇提取物给药组小鼠脑组织中的APP基因表达和蛋白表达明显下调,血清和脑组织中的Aβ蛋白水平显著降低。结论绞股蓝正丁醇提取物可通过抑制APP蛋白的生成,使Aβ蛋白的表达减少,从而起到防治阿尔茨海默症(AD)的作用。     

补肾填精方对Lewis肺癌细胞增值及凋亡的影响

目的研究补肾填精方含药血清对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法通过建立不同浓度的补肾填精方(NS对照组、补肾方中药低、中、高剂量组)含药血清,分别以含对照大鼠血清及低、中、高补肾填精方含药血清的RPMI1640培养Lewis肺癌细胞; CCK8检测T细胞增值能力;流式细胞仪检测药物干预后细胞周期。结果与对照组比较,不同浓度的含药血清显著降低肺癌细胞密度,浓度越高,抑制越明显;补肾填精方显著降低Lewis肺癌细胞活力的作用;诱导细胞周期阻滞到G2/M期。结论补肾填精方含药血清抑制肺癌细胞增值和诱导细胞凋亡。     

益气养阴活血化淤方对实验性病毒性扩张型心肌病小鼠细胞凋亡因子Fas／FasL蛋白表达的影响

目的通过观察小鼠心肌细胞凋亡因子Fas／FasL蛋白表达的水平,探讨益气养阴、活血化淤方的作用机制及Fas／FasL系统在细胞凋亡中的重要作用。方法210只Balb／c小鼠,随机分为4组。空白对照组30只;模型组、中药高剂量组、中药低剂量组各60只,采用多次接种柯萨奇B3m病毒的方式,建立重复感染的早期病毒性扩张型心肌病动物模型,中药高剂量组、中药低剂量组用益气养阴、活血化淤方治疗,于治疗4周后观测小鼠心肌病理形态学改变,免疫组化方法检测Fas／FasL蛋白表达。结果模型组心肌组织中Fas／FasL蛋白的阳性表达较空白组增多（P〈0．05）,中药高剂量组和中药低剂量组较模型组显著降低（P〈0．05）。结论益气养阴,活血化淤方能够下调扩张型心肌病小鼠Fas／FasL蛋白表达,对心肌细胞起到保护作用。