秀丽隐杆线虫模型在中药活性筛选中的方法学考察

目的 基于秀丽隐杆线虫生物模型,建立快速筛选中药活性的方法.方法 选用亨廷顿舞蹈症疾病模型AM141线虫株作为模型,以骆驼蓬多糖和小檗碱为代表药物,分别在固体及液体培养基中加入中药提取物或单体小分子化合物,以中药提取物溶解度、培养基有无污染、线虫polyQ荧光点数目、线虫形态及生长状态作为考察指标.结果 小檗碱20μM和骆驼蓬多糖10 mg/mL可显著抑制AM141线虫的polyQ聚集症状.液体培养基中的线虫易污染,长势不一,且中药提取物溶解性不好影响观察,所以筛选中药提取物时应使用固体培养基.结论 秀丽隐杆线虫模型用于药物筛选,快捷、方便、简单.     

桑葚多糖T3-3分离及秀丽隐杆线虫抗衰老活性研究

[目的]研究桑葚多糖T2提取工艺优化,并对其抗衰老活性进行分析。[方法]以秀丽隐杆线虫为模型,用寿命、移动力分析、吞咽频率、产卵量和肠脂褐质综合评价不同剂量范围的桑葚多糖(T3-3)抗衰老活性。通过正交和优化实验确定最优提取工艺条件为:提取温度100℃,提取时间2 h,提取次数3次,料液比1∶30,提取率最高达8.48%。[结果]抗衰老活性研究表明,150 mg/L的T3-3能增强秀丽隐杆线虫的抗衰老能力。[结论]该提取工艺1)延长了秀丽隐杆线虫的寿命,秀丽隐杆线虫平均寿命延长了10.38%(P0.05),最大寿命延长了28.57%(P0.05),50%存活率对应天数延长了0.91%。2)秀丽隐杆线虫吞咽频率增加,吞咽频率比对照组高18.78%。3)产卵量无统计学差异。4)减少秀丽隐杆线虫肠脂褐质的产生量,比对照组平均荧光强度低11.14%(P0.05),实验末期,对照组的平均荧光强度增大了12.47%。     

蜜环菌菌索多糖延缓秀丽隐杆线虫衰老机制研究

目的 探讨蜜环菌菌索多糖（AMP）延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。方法 以模式生物秀丽隐杆线虫作为活体模型,测定其在正常培养条件下的生存期与后代平均数量,氧化应激条件下的存活率和热休克蛋白16.2（HSP-16.2）、超氧化物歧化酶-3（SOD-3）的表达。结果 在正常培养条件下,蜜环菌菌索多糖（AMP-1、AMP-2）显著延长秀丽隐杆线虫的生存期,对其生殖力没有损害;在氧化应激条件下,显著提高秀丽隐杆线虫HSP-16.2和SOD-3的表达。结论 提高秀丽隐杆线虫的氧化应激能力可能是AMP延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。     

雪茶多糖的提取分离及组成研究

目的研究雪茶Usnea fuscoruben Mot多糖的提取、纯化和单糖的组成成分。方法雪茶全株经氯仿抽提、热水浸提、乙醇沉淀、乙醇分级沉淀、Sevag法除蛋白质、透析、再乙醇沉淀得粗多糖。经大孔吸附树脂纯化后,冷冻干燥得纯化雪茶多糖。运用气相色谱测定雪茶多糖的单糖组分。结果雪茶原料(多糖含量为6.54%),经过此方法得精制雪茶多糖(多糖含量为86.84%),其单糖组成为鼠李糖、半乳糖。结论该方法适用于雪茶多糖的提取。     

秀丽隐杆线虫作为Ras/MAPK信号通路的抗肿瘤药物筛选模型研究

目的采用秀丽隐杆线虫Ras/有丝分裂原蛋白活化酶(MAPK)信号通路上的过度激活系列突变体研究该模式生物作为Ras/MAPK信号通路的抗肿瘤药物筛选模型的可行性及其分子机制。方法采用96孔板将索拉菲尼和依托泊苷作用于L1期秀丽隐杆线虫(每孔80~100条),并设空白对照,每个处理设3个重复。培养秀丽隐杆线虫4~5 d后,于倒置生物显微镜下观察秀丽隐杆线虫野生型和突变体数目。与空白对照比较,野生型比例越高,说明药物效果越好。结果索拉菲尼能够剂量依赖性地逆转let-60/ras(gf)和mek/erk(gf)双突变体多阴门表型,对其下游转录因子lin-1(lf)和lin-31(gf)多阴门突变体几乎没有影响;依托泊苷对信号通路上游因子let-60/ras(gf)及下游转录因子突变体lin-31(gf)均有明显的抑制作用,不依赖细胞信号通路。结论秀丽隐杆线虫模型不但能够筛选靶向Ras/MAPK信号通路的抑制剂,还能评价肿瘤细胞毒药物。     

寒冷胁迫可降低秀丽隐杆线虫的寿命和活动能力：通过介导脂代谢紊乱和应激反应异常

目的 探究秀丽隐杆线虫成虫在低温环境下的脂代谢、应激反应变化。方法 将同步化后的野生型及基因修饰型秀丽隐杆线虫成虫随机分为对照组和实验组,分别在20 ℃适宜条件和4 ℃低温暴露培养,观察其生存率、活动能力,评估非冷冻性极端低温对秀丽隐杆线虫成虫的寿命和活动能力影响;通过油红O染色和脂代谢相关基因表达检测,评价低温状态下秀丽隐杆线虫成虫脂代谢变化;通过线粒体荧光染色,应激相关基因、蛋白,抗氧化相关基因、蛋白的表达水平变化评估低温对秀丽隐杆线虫应激水平的影响。结果 4 ℃低温环境显著降低秀丽隐杆线虫成虫寿命（P<0.0001）和活动能力（P<0.0001）;同时,降低虫体脂质累积（P<0.05）,降低脂肪酸合成和代谢相关基因fat-5,fat-6,fat-7,fasn-1,nhr-49,acs-2,aco-1表达 (P<0.01）;低温增强了热休克蛋白hsp-70,hsp-16.2表达(P<0.05）,但是降低了线虫线粒体数目（P<0.0001）和线粒体未折叠蛋白反应相关蛋白atfs-1的表达(P< 0.05）,降低了抗氧化酶sod-2,sod-3,gpx-1表达（P<0.01）。敲除秀丽隐杆线虫fat-5基因,或nhr-49基因,或同时敲除fat-5和fat-6基因能够加重寒冷导致的活动能力抑制（P<0.05）,并显著降低虫体24 h生存率（P<0.0001）。结论 4 ℃非冷冻性低温使得秀丽隐杆线虫线虫成虫转变为低物质代谢和低能量代谢的状态,出现脂肪代谢水平降低,线粒体数量和质控能力降低,进一步诱发应激相关基因高表达和抗氧化酶含量降低,导致秀丽隐杆线虫活动能力和寿命降低。     

罗汉松叶中总黄酮的提取与纯化富集工艺研究

目的 优选提取罗汉松叶总黄酮的乙醇体积分数及D101型大孔吸附树脂分离纯化罗汉松叶总黄酮的工艺条件.方法 以酪氨酸酶抑制率为指标确定提取罗汉松叶总黄酮的乙醇体积分数;以罗汉松叶总黄酮质量分数为指标,研究D101型大孔吸附树脂分离纯化罗汉松叶总黄酮的工艺条件,包括上样流速、洗脱速率、上样浓度和乙醇洗脱体积.结果 体积分数70%乙醇的罗汉松叶提取物对酪氨酸酶抑制率最高;大孔树脂分离纯化罗汉松叶总黄酮的最佳工艺条件为:上样浓度4.00 mg/mL,上样流速2.0 mL/min,4 BV体积分数80%乙醇以2.0 mL/min速率洗脱,回收率为60.80%.结论 D101型大孔吸附树脂可富集罗汉松叶中的总黄酮,是纯化前的2.85倍,该工艺简单且成本低,可为进一步开发罗汉松叶总黄酮提供依据.     

大孔吸附树脂法同时纯化银杏叶中黄酮苷和萜类内酯

目的探讨大孔吸附树脂同时纯化银杏叶黄酮苷和萜类内酯的工艺条件。方法对D101、X-5、S-8、D4020、HP-20、AB-8 6种大孔吸附树脂进行筛选,然后对最佳上样量、除杂洗脱条件、洗脱剂乙醇体积分数及洗脱剂用量等因素进行了优化。结果 D101型大孔树脂分离纯化效果最佳。优化工艺条件为:上样液生药质量与树脂质量比为1∶1,20%(体积分数)乙醇作为除杂溶剂,洗脱体积为5 BV,60%(体积分数)乙醇作为洗脱液,洗脱体积为4 BV。纯化物中黄酮苷和萜类内酯平均质量分数分别为24.93%和7.36%。结论 D101大孔吸附树脂对银杏叶黄酮苷和萜类内酯的综合吸附性能较好,适用于银杏叶提取物的分离纯化。     

秀丽隐杆线虫中与衰老相关的DAF-2/IGF-1信号通路研究进展

衰老是诸多疾病发生的关键因素之一。目前,生物学界关于衰老遗传学的大部分知识和信息都来自于对秀丽隐杆线虫的研究。秀丽隐杆线虫在抗衰老研究中发挥着先锋和主力的作用。DAF-2/IGF-1信号通路是第一个为人类所认识的衰老基因调控机制。该文综述了秀丽隐杆线虫作为模式生物在DAF-2/IGF-1信号通路研究进程中的引领和推动作用,为抗衰老研究提供可借鉴的科研思路和方法。     

大孔吸附树脂纯化黄芪总皂苷的研究

目的研究黄芪总皂苷的大孔吸附树脂分离纯化工艺,为黄芪总皂苷的工业化生产提供参考。方法采用AB-8大孔吸附树脂对黄芪总皂苷进行吸附纯化,以黄芪总皂苷的收率、质量分数为考察指标综合评价。结果60%乙醇提取树脂吸附后用不同体积分数乙醇洗脱,黄芪总皂苷主要集中在40%～80%乙醇部位。树脂对黄芪总皂苷的动态吸附率为10.78mg/mL树脂;不同浓度NaOH溶液对杂质的洗脱效果不同,以0.1%NaOH溶液洗脱效果较好。结论黄芪提取物上AB-8树脂柱,以水和0.1%NaOH洗脱后以80%乙醇洗脱黄芪总皂苷部位可使黄芪总皂苷的收率和质量分数达到较满意效果。     

骆驼蓬属植物中生物碱类化学成分及其药理活性研究进展

蒺藜科（Zygophyllaceae）骆驼蓬属（Peganum）植物为维吾尔族、蒙古族沿用已久的药材。骆驼蓬属植物的化学成分主要为生物碱类成分,其药理作用比较广泛,具有抗肿瘤、抗阿尔茨海默病、抗糖尿病、抗凝血、镇痛、抗菌、抗原虫等多方面药理作用。为了更好地开发骆驼蓬的药用价值,本文对近年来骆驼蓬植物的化学成分及其药理活性研究进展进行综述。     

骆驼蓬醇提取物对5种植物病原菌作用的初探

骆驼蓬地上部分的醇提物经萃取分为石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水5个极性不同的部分,采用抑制菌丝生长法研究以上5部分对5种常见植物病原菌的抑制作用。结果表明:石油醚部分和正丁醇部分对所测试病原菌呈抑制作用,在供试浓度为相当于原材料0.05g/mL的条件下石油醚部分的抑制率高于其它萃取物相应的抑制率,其中对苹果干腐病菌和番茄早疫病菌的抑制效果显著抑制率分别为48.10%和48.97%;水部分几乎无抑制作用,但有一定的促进作用。     

酸性染料比色法测定骆驼蓬种子总生物碱的含量

以溴酚蓝作为测试用酸性染料,在总生物碱与其形成稳定络合物时间范围内,利用比色法测定了骆驼蓬种子中总生物碱的含量。认为此方法快速简便,准确易行。     

中国骆驼蓬属植物中挥发性成分的分析

中国骆驼蓬属植物中挥发性成分的分析蔡振利，刘志斌，段金廒，周荣汉，赵守训（宁夏药品检验所，银川７５０００４；中国药科大学植物分类学研究室，植物化学教研室，南京２１０００９）关键词骆驼蓬属；蒺藜科；挥发性成分；ＧＣ－ＭＳ分析蒺藜科（Ｚｙｇｏｐｈｙｌｌａ...     

骆驼蓬不同药用部位中生物碱含量的月积累动态研究

目的：研究新疆产骆驼蓬不同部位生物碱的月积累动态,确定骆驼蓬的最佳药用部位和采收时期。方法：用RP-HPLC法测定不同月份的骆驼蓬不同药用部位中骆驼蓬碱和去氢骆驼蓬碱的含量。结果：新疆骆驼蓬不同药用部位生物碱月积累动态基本一致,总生物碱的月积累量以7月份最高。不同部位的生物碱含量高低顺序为种子〉根〉种壳〉茎（P〈0.01）。种子中总生物碱含量分别是根、种壳和茎中生物碱含量的3.7、32.8和73.2倍。结论：骆驼蓬的最佳药用部位为种子,最佳采收期为7月份。     

茯苓多糖提取工艺研究

目的:优选茯苓水溶性粗多糖的水提醇沉工艺。方法:以茯苓水溶性多糖提取率为参察指标,以水为溶剂,选取粉碎力度、料液比、提取时间、提取次数、醇沉浓度、浓缩倍数、醇沉时间为影响因素,进行单因素考察,在综合单因素实验的基础上,采用L9(34)正交试验对水提和醇沉工艺进行优化设计,采用硫酸-蒽酮法测定多糖的含量。结果:茯苓水溶性多糖最佳的水提醇沉工艺为:过60目筛、料液比为1∶10,提取时间为100 min,提取1次,提取液浓缩至原体积的1/12,醇沉浓度为80%,静置12 h,过滤,滤饼用体积分数80%乙醇洗涤,60°C减压干燥。结论:此工艺成本低、操作简便、重现性好,可用于茯苓药材及饮片粗多糖的提取。     

骆驼蓬抗癌化学成分的分离鉴定和药理实验研究(附21例病人疗效观察)

在临床应用骆驼蓬制剂治疗消化道肿瘤等获得了一定效果的基础上,笔者从该植物种子内分离出两种生物硷单体。通过进行熔点、薄层、紫外、红外、核磁共振、质谱等方法测定,确认了其化学结构,即骆驼蓬硷(Harmaline)和去氢骆驼蓬硷(Harmine)。分别将这两种生物硷进行抗肿瘤试验,结果表明对小鼠肝癌、S—180、L_2等瘤株均有肯定的抑制作用。在体外用于处理人体宫颈癌(Hela)细胞,能明显地影响其生长。我们曾观察21例接受骆驼蓬总硷制剂(以上述两种生物硷为主要成分)治疗的恶性肿瘤病人,其有效率为85.7％。     

广西莪术及其茎叶多糖的体外纤溶活性研究

目的考察广西莪术及其茎叶多糖的体外纤溶活性。方法用分步沉淀法,分离广西莪术及其茎叶的多糖,然后用纤维蛋白琼脂平板法考察不同醇沉多糖的纤溶活性。结果广西莪术只有10%醇浓度沉淀多糖的体外纤溶效果稳定。广西莪术茎叶10%~30%的醇浓度沉淀多糖体外纤溶作用稳定,40%~60%的醇浓度沉淀多糖在高、中浓度时作用稳定,在低浓度时作用不稳定;在有纤溶活性的分步沉淀多糖中,除了10%和30%的醇浓度沉淀多糖具有浓度依赖性之外（P〈0.05）,其余纤溶活性多糖均无浓度依赖性。结论广西莪术及其茎叶的多糖成分具有体外纤溶活性。     

七叶莲不同醇沉工艺评价

目的考察不同醇沉方式对七叶莲醇沉产物品质的影响。方法七叶莲水提液分别采用50%,60%,70%,80%4个浓度按计算量一次醇沉、分次醇沉、分级醇沉、多次醇沉4种不同工艺制备醇沉产物,采用聚类分析的方法对不同醇沉产物的品质进行综合评价。结果 16种样品以浓度为依据聚类,在各自浓度下醇沉工艺不同聚合距离不同。结论醇沉浓度对醇沉效果影响较大,醇沉工艺对醇沉效果有一定的影响。