脊髓减压病大鼠神经细胞凋亡及神经生长因子的保护作用

目的探讨脊髓减压病对大鼠脊髓神经细胞凋亡的影响及神经生长因子的保护作用。方法SD大鼠随机分为正常对照组、安全减压组、生理盐水组和神经生长因子治疗组，建立大鼠脊髓减压病模型．于出舱后0，10，30，60，120min经蛛网膜下腔各注入20μl生理盐水或神经生长因子，在6，24，48，72h用TUNEL法标记脊髓神经细胞凋亡，免疫组织化学方法检测TNF-α蛋白表达。结果脊髓减压病大鼠出舱后6h组出现少量脊髓神经细胞凋亡及TNF—α蛋白表达，24h组阳性染色明显增强，48h组达到高峰，神经生长因子治疗后神经细胞凋亡及TNF—α蛋白表达明显减少，与生理盐水组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。TNF—α蛋白表达与神经细胞凋亡存在正相关（P〈0．05）。结论神经细胞凋亡是脊髓减压病大鼠的重要病理变化，TNF—α可能参与了脊髓减压病继发损伤，神经生长因子可以减轻脊髓减压病的神经细胞损伤。     

潜艇脱险中极快速减压后大鼠小胶质细胞与神经元凋亡的变化

目的 研究成年大鼠极快速减压致中枢神经损伤后脑组织内小胶质细胞的变化及其与损伤后神经元凋亡的关系。方法 采用1MPa暴露5．5min、50s快速减压制备SD大鼠中枢减压损伤模型，在减压后6、24、48、72h取材，分别用FITC标记的凝集素B4（IB4）标记小胶质细胞和原位末端TUNEL。法标记凋亡神经元细胞。结果 快速减压后6h组可见少量IB4阳性小胶质细胞；24h组达高峰（P〈0．01）；48h组阳性小胶质细胞数量有所下降，但仍高于6h组（P〈0．01）；72h组阳性小胶质细胞数量明显下降。6h组仅见少量散在TUNEL，阳性细胞；48h组达高峰（P〈0．01）；72组阳性细胞数量有所下降，但仍高于6h组（P〈0．01）。凝集素阳性小胶质细胞分布区域与神经元凋亡分布区域一致，达到高峰的时间前者先于后者，两者的变化趋势相同（r=O．645，P〈0．01）。结论 不安全极快速减压致中枢型减压病的中枢神经损伤中存在神经元凋亡和小胶质细胞的活化，激活的小胶质细胞可能参与了快速减压后的神经元凋亡过程。     

极快速减压后大鼠肺组织磷酯酶A2 mRNA表达的改变

目的 研究极快速减压对大鼠肺组织ⅡA类磷酯酶A2(sPLA2>)mRNA表达的影响.方法 极快速减压处理后0～210 min,间隔30 min,分8个时间点对大鼠肺组织ⅡA类sPLA2> mRNA表达水平进行连续检测,同时进行每个时间点的肺组织病理学特征和肺湿干重比检测.结果 极快速减压处理后30 min,大鼠肺组织ⅡA类sPLA2 mRNA有一个表达高峰;大鼠肺组织病理损伤特征经历了一个由重至轻,再逐渐加重的反复变化过程;肺湿干重比有一个从重到轻的变化过程.结论 大鼠经极快速减压处理出舱后210min内,肺损伤程度经历了一个由重到轻,然后再加重的过程;极快速减压能够导致大鼠肺组织ⅡA类sPLA2 mRNA表达水平由低到高,然后冉降低,其具体机制有待进一步研究.     

依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2/bax表达及细胞凋亡的实验研究

目的观察依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2/bax表达及细胞凋亡率的影响,探讨其对急性脊髓损伤后脊髓组织的保护作用。方法成年SD雄性大鼠60只,随机分成对照组和依达拉奉组,均采用改良Allen’s撞击法,致伤力为50gcf（10g×5cm）损伤T9～10制作动物模型,术后实验组给予依达拉奉3mg/kg,对照组给予等量生理盐水。每组分别于6h、12h、24h、72h、7d5个时间点处死动物取材,每个时间点6只大鼠,对受损脊髓部位进行免疫组织化学检测神经细胞凋亡因子bcl-2和bax基因的表达及用原位末端标记法（TUNEL法）标记神经元凋亡细胞。结果与对照组相比,依达拉奉组bcl-2蛋白表达水平显著提高,bax蛋白表达水平明显下降。对照组检测到较高的细胞凋亡率。依达拉奉组细胞凋亡率较对照组明显下降。结论依达拉奉可能通过清除氧自由基、上调bcl-2和下调bax蛋白表达来抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡,从而保护大鼠神经组织。     

高压氧对实验性减压病兔脊髓bFGF表达的影响

目的探讨实验性减压病兔脊髓bFGF的改变及高压氧对其影响。方法实验家兔随机分为7组：正常组、减压病3h组、减压病3d组、高压氧3h组、高压氧3d组、常氧高压氮3h组、常氧高压氮3d组。采用快速减压方法制备减压病模型，用免疫组织化学方法检测胸髓及腰髓中bFGF表达。结果（1）快速减压后各组bFGF表达均较正常组增加（P〈0．01），3h组之间无差异（P〉0．05）；（2）减压病3d组较3h组bFGF表达显著增高（P〈0．01），高压氧3d组较3h组显著降低（P〈0．01），常氧高压氮3d组较3h组有所降低（P〈0．05）；（3）高压氧3d组与常氧高压氮3d组均较减压病3d组显著降低（P〈0．01），高压氧3d组较常氧高压氮3d组降低（P〈0．05）。结论减压病脊髓损伤后bFGF表达增加；高压氧和常氧高压氮对减压病脊髓损伤起保护作用，高压氧效果优于常氧高压氮。     

慢性压迫性脊髓损伤后神经前体细胞的增殖情况

目的　通过分析成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤后及减压后巢蛋白表达的变化 ,探讨神经前体细胞的增殖。　方法　选用健康Wistar大鼠 5 0只 ,体重 2 80～ 32 0g。制备慢性压迫性脊髓中度、重度损伤及重度压迫损伤减压后 3,10d模型 ,自距压迫边缘至 5mm段脊髓组织切片。正常成年健康大鼠作为正常对照组。巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白采用免疫组织化学染色 ,计算机图像分析仪定量分析 ,观察神经前体细胞的增殖情况。　结果　成年大鼠慢性压迫性脊髓中、重度损伤及重度压迫损伤减压后 3d ,巢蛋白在白质、灰质及脊髓中央管的室管膜细胞和减压后 10d组白质中均有明显表达 (P <0 .0 5 ) ,以重度压迫组最为显著 (P <0 .0 1)。减压后 10d组灰质与正常对照组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。与正常对照组相比 ,各损伤组脊髓内胶质纤维酸性蛋白表达增强 ;胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数目增多 ,胞体肥大 ,突起增粗、增长。　结论　成年大鼠慢性压迫性脊髓损伤及减压后早期存在神经前体细胞增殖。星形胶质细胞参与神经前体细胞的增殖与迁移 ,对脊髓具有重要的营养修复作用。     

大鼠脊髓损伤后神经型一氧化氮合酶羧基末端PDZ结合配体mRNA的表达

目的 探讨大鼠脊髓损伤后神经型一氧化氮合酶（nNOS）羧基末端PDZ结合配体（carboxy-terminal PDZ ligand of nNOS，CAPON）mRNA的表达变化及其意义。方法采用脊髓横断模型，用实时荧光定量聚合酶链式反应（realtime-PCR）及原位杂交与免疫荧光技术结合的方法检测正常成年大鼠脊髓内以及脊髓损伤后不同时间点损伤段脊髓组织中CAPONmRNA的表达，采用cresylviolet染色计数脊髓组织内存活神经元。结果 CAPON mRNA在对照组大鼠脊髓内呈低水平表达于前角神经元，脊髓损伤后表达于灰质各部分神经元及白质。在损伤早期2h表达开始升高，于8h达到高峰，随后1d有下降趋势，3d时稍有上升，损伤后14d恢复至正常水平。而nNOSmRNA在损伤后2h迅速上调，于8h达高峰，随即下降至正常水平。在此过程中，有神经元凋亡现象的发生。损伤后2h存活神经元的数量即减少，随后稍有增多，但仍少于对照组，3d后存活神经元再度减少，持续至14d。结论 大鼠脊髓损伤后CAPONmRNA表达发生变化，提示CAPON可能通过调节nNOS的活性及亚细胞定位而影响神经元的凋亡，在脊髓损伤病理过程中发挥积极的调节作用。     

异丙酚对大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠急性压迫性脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法 采用改良Allen’s打击法制备急性脊髓压迫性损伤模型。雄性SD大鼠74只，随机分为正常组（n=4）、脊髓损伤后异丙酚干预组（n=35）和生理盐水对照组（n=35），采用免疫组化和Western blot法检测脊髓损伤后不同时间点（1h、3h、8h、1d、3d、7d、14d）脊髓组织中iNOS蛋白的表达。结果 与生理盐水对照组比较，异丙酚干预组大鼠损伤后脊髓组织iNOS表达明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05或0．01）。结论 异丙酚可通过抑制iNOS蛋白表达对大鼠急性脊髓损伤起保护作用。     

高压氧对快速减压致中枢神经损伤诱发神经元凋亡的效用

目的研究成年大鼠快速减压致中枢神经系统（CNS）损伤后神经组织细胞凋亡的变化及高压氧（HBO）暴露的效用。方法SD大鼠40只，按随机数字法分为10组，每组4只，即正常对照组、安全减压组、快速减压4个组（1．0MPa暴露5．5min后快速（50S）减至常压后6，24，48，72h组）、HBO4个组（快速减压后5h给予0．25MPa HBO暴露60min）。大鼠均分别于快速减压后6，24，48和72h同期取大脑，用原位末端TUNEL法标记凋亡细胞，光学显微镜下观察形态学改变和高倍镜计数阳性细胞计算凋亡指数。结果正常对照组和安全减压组未标记出TUNEL阳性细胞；快速减压致伤动物6h组CNS组织内仅见少量散在阳性细胞；24h组凋亡指数较6h组增加（P〈0．01）；48和72h组明显增加，达到高峰（P〈0．01）；TUNEL阳性凋亡细胞主要为神经元细胞。HBO暴露组24h组神经元凋亡指数明显较快速减压组相同时间组降低（P〈0．05），48h和72h组降低更加显著（P〈0．01）。结论神经元凋亡是快速减压致CNS损伤中神经元丧失的重要形式之一：HBO暴露能够减少损伤后期的神经元凋亡，对保存神经元、改善预后起到重要作用。     

低温预处理对大鼠脊髓内牵拉后脊髓神经细胞凋亡及神经功能的影响

目的 探讨局部低温预处理对大鼠脊髓内牵拉型脊髓损伤病理形态学改变、神经细胞凋亡和神经功能的影响。方法 将80只4个月龄SD大鼠随机分为低温预处理组（A组）和对照组（B组），建立大鼠脊髓内牵拉型脊髓损伤模型，于损伤后2，4，8，24，48，72h和7d评估脊髓损伤后大鼠运动功能，用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，原位末端标记（TUNEL）法标记凋亡细胞。结果 HE染色镜检显示A组脊髓组织病理学改变明显轻于B组。A、B两组运动功能评分和神经细胞凋亡指数比较，差异有统计学意义（P〈0．05或0．01）。结论 低温预处理可明显减轻大鼠脊髓内牵拉型脊髓损伤早期病理形态学损伤，抑制细胞凋亡，有助于神经功能的恢复。     

快速减压对家兔脊髓组织学的影响

目的探讨快速减压对家兔脊髓组织学和超微结构的影响。方法将18只实验兔随机分为对照组、减压病3h组和减压病3d组。5min内用压缩空气加压至0．6MPa，停留60min，然后于3～5min内减至常压。以上3组分别于进舱前、出舱后3h和3d，取脊髓进行光镜和透射电镜检查。结果（1）光镜显示脊髓灰白质散在出血灶，软脊膜及脊髓白质毛细血管内可见气泡；（2）电镜下显示脊髓白质毛细血管周围水肿，神经纤维变性、胶质细胞坏死。结论脊髓软脊膜及白质毛细血管内气泡，灰白质出血、水肿，神经纤维变性和胶质细胞坏死是减压病脊髓损伤发病的病理学基础。     

乙醇治疗急性脊髓型减压病的实验研究

目的 观察乙醇治疗大白兔急性脊髓型减压病的疗效.方法 将58只新西兰大白兔分为乙醇组25只、生理盐水组20只和不采取任何治疗措施的对照组13只.将乙醇组15只、生理盐水组8只、对照组8只兔分别放入动物舱内,在15 min内用压缩空气加压至0.6 MPa,停留60 min,然后用5min匀速减压至常压出舱,制成急性脊髓型减压病模型.乙醇组出舱后30 min用25％乙醇溶液(3ml/ks),由耳缘静脉缓慢注射入血管;生理盐水组注射(3 ml/kg)生理盐水;对照组不作任何处理.所有兔均在造模前和出舱3d后行Tarlov法评估后肢运动、做MRI及测量脊髓诱发电位,随后处死,解剖,观察腹腔脏器并取胸腰段脊髓行HE染色和光镜检.结果 (1)Tarlov评分:乙醇组(4.31±0.63)分,生理盐水组( 1.25±0.50)分(与乙醇组比较,P＜0.01);对照组(1.20±0.83)分(与乙醇组比较,P＜0.01).(2)MRI检查:乙醇组胸腰脊髓轻度肿胀,生理盐水组和对照组胸腰段脊髓肿胀,正常形态消失,并可见散在局灶性和弥漫性T2W高信号影.(3)SCEP检测:乙醇组的脊髓诱发电位N21潜伏期和波幅无明显变化,生理盐水组和对照组的脊髓诱发电位N21潜伏期较进舱前明显延长,差异有统计学意义(P＜0.01),波幅明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).(4)HE染色后,乙醇组光镜下仅见脊髓内少量散在出血及炎症细胞浸润;生理盐水组和对照组解剖可见尿潴留、肠胀气,光镜下可见脊髓弥漫出血、淤血、大量空泡及炎症细胞浸润.结论 乙醇有可能成为治疗急性脊髓型减压病的一种应急方法.     

急性脊髓型减压病的MRI诊断

目的 描述急性脊髓型减压病的MRI表现,提高对该病的认识水平.方法 对5例有明确潜水作业史,且违反减压规定、快速出水后短时内出现完全或不完全性脊髓损害症状,以感觉障碍和大小便失禁为主要临床表现,经临床综合确诊为急性脊髓型减压病的患者的MRI表现进行回顾性分析.结果 5例均见脊髓空泡征及T2 WI弥漫性略高信号,在T1 WI上呈等信号3例,略高信号和略低信号各1例.3例见猫头鹰眼征,2例见多发腔隙性病灶,T2 WI脊髓内条状低信号及T1 WI马尾略高信号各1例.结论 急性脊髓型减压病的MRI表现具有一定特点,结合潜水并违规减压史和临床表现容易作出准确诊断.     

高压氧对大鼠急性脊髓损伤炎症因子表达的影响

目的 观察大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后早期高压氧(HBO)治疗对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)mRNA表达的影响.方法 将36只SD大鼠随机分为2组:SCI组(18只)和HBO组(18只).2组均采用改良的Allen打击法建造大鼠脊髓损伤模型.模型建造成功后,HBO组于损伤2 h后开始行HBO治疗,1次/d.2组分别于损伤后6、12、24、72、120、168 h各取3只大鼠,取损伤部位脊髓组织采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定其中TNF-α、IL-10 mRNA表达的变化.结果 SCI组大鼠脊髓组织中TNF-α mRNA表达逐渐升高,在伤后12h表达明显上调,至24h达高峰,高表达持续至损伤后72 h;HBO组大鼠脊髓组织中TNF-α mRNA表达变化趋势与SCI组一致,但升高幅度降低(P＜0.05);SCI组大鼠IL-10 mRNA表达在损伤后12 h开始升高,并随时间的推移逐渐升高,至168 h达高峰;HBO组表达变化趋势较一致,IL-10 mRNA升高幅度更明显(P＜0.05).结论 HBO能够减少前炎性细胞因子的释放,增加抗炎性细胞因子的表达,从而减少脊髓组织的继发损伤,保护受损的神经细胞,达到促进恢复的作用.

Abstract：

Objective To investigate the effects of early HBO therapy on the expressions of pro inflammatory cytokine mRNA including tumor necrosis factor-α (TNF-α ) and interleukin-10 (IL-10) following spinal cord injury (SCI) in rats. Methods Forty SD rats were randomly divided into 3 groups:the sham operation group (n=4) , the SCI group (n = 18) , and the hyperbaric oxygen group (n = 18). Spinal cord injury model was developed by using the modified Allen impact. Then, the SCI group and the HBO group received HBO therapy 2 hours after injury, once a day. And 3 rats were randomly selected at 6, 12, 24, 72, 120 and 168 h following injury to take samples of injured spinal cord tissue and measure dynamic changes in the expressions of TNF-α, IL-10 mRNA by semi-quantitative RT-PCR method. Results Faint expression of the cytokine mRNA could be noticed in the sham group. The expression of TNF-α mRNA in the injured spinal cord tissue in the SCI group elevated gradually, increased obviously at 12 h after injury and reached peak at 24 h, and its high expression maintained till 72 h after injury. The tendency in the expression of TNF-α mRNA in the HBO group was identical to that of the SCI group, however, the amplitude in the increase of TNF-α mRNA decreased (P＜0. 05). The expression of IL-10 mRNA in the SCI group began to increase at 12 h after injury and increased gradually over time and reached peak at 168 h. The expressions of both TNF-α and IL-10 mRNA were more consistent in the HBO group, with more obvious increase in the expressions of IL-10 mRNA. Conclusions HBO could reduce the release of pro-inflammatory cytokines and increase the expression of anti-inflammatory cytokines,resulting in reduction of secondary spinal cord injury,protection of the damaged nerve cells and promotion of recovery.     

大鼠脊神经根撕脱后脊髓中Semaphorin3A水平的变化

目的研究脊伸经根撕脱后Semaphorin3A在脊髓中表达的变化方法建立大鼠脊神经根撕脱模型；半定带逆转录-聚合酶链反应法检测Semaphorin3A（Sema3A）的表达，原位杂交与荧光免疫组化双染法行组织定位检测。结果脊神经根撕脱后，Senva3A在脊髓中表达减少，伤后3d降至最低点，下降70％（P〈0．05），至28d仍保持低水平（P〈0．05）；Sema3A在脊髓神经元细胞中表达，而不在胶质细胞中表达。结论脊神经根性撕脱后，Sema3A在脊髓运动神经元中表达的下调是与创伤相关的适应性反应之一，提示Sema3A的表达可能受远端神经或肌肉细胞成分的逆行性信号调控。     

急性脊髓损伤后脊髓组织内皮素-1mRNA表达的实验研究

探讨内皮素－１在急性脊髓损伤中的表达及其作用机制。方法应用３ｇ负荷压迫大鼠胸段脊髓（Ｔ８－９）５ｍｉｎ,造成大鼠胸段脊髓急性中度损伤;借助原位杂交组织化学方法,定位,定量研究大鼠急性脊髓损伤后早期ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达的时间和空间分布特征。结果脊髓压迫伤后３０ｍｉｎＥＴ－１ｍＲＮＡ表达明显增多,４ｈ达最高峰,一直持续至７２ｈ恢复至正常水平。ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达阳性细胞主要是神经细胞,高表达区在脊髓前     

Bcl-xL基因转染对脊髓损伤细胞凋亡的影响

目的观察脂质体介导的Bcl—xL基因体内转染对大鼠脊髓损伤后伤区脊髓细胞凋亡和神经功能恢复的影响。方法制备大鼠胸段脊髓T8.9压迫损伤模型。38只大鼠分成三组：(1)损伤 pSFFV．Bcl—xL转染组(实验组，15只)；(2)损伤 pSFFV．GFP转染组(对照组，15只)；(3)假损伤组(8只)。将阳离子脂质体质粒混合后直接注入大鼠损伤脊髓，伤后3d和7d利用半定量逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)和免疫组化检测Bcl—xL基因体内表达；原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡；采用开放场地试验BBB评分和斜板试验，评价神经功能。结果脊髓损伤后3d和7d损伤局部Bcl—xL mRNA和蛋白较对照组和假损伤组表达明显增多；TUNEL结果显示，实验组损伤节段细胞凋亡数比对照组明显减少，神经功能改善。结论脂质体介导Bcl—xL体内转基因治疗可有效转染脊髓的神经细胞；外源性Bcl—xL在损伤脊髓的过度表达可减少脊髓不完全性损伤后凋亡引起的神经元死亡和增强神经细胞成活，促进神经功能恢复。     

肌基膜管移植修复脊髓缺损的实验研究

目的：应用自体肌基膜管（muscle basal lamin,MBL)移植结合神经生长因子（nerve growth factor,NGF)修复脊髓缺损。方法：18只雌性家犬脊髓横断后分为三组。A组：MBL移植结合注射NGF组,7只犬;B：单纯MBL移植组,7只犬;C组：对照组,切除脊髓0．5cm,3只犬。6个月后用免疫组化法对神经轴突进行特异染色,并用图像分析方法对脊髓横断处的远近端横截面进行神经纤维数比较,结果：A、B两组移植物中神经纤维计数比较,差异有非常显著性意义（P＜0．01）;各组远端神经纤维数比较,差异有非常显著性意义（P＜0．01）;近端神经纤维数比较,A组与B组差异有显著性意义（P＜0．05）,A组与C组差异有非常显著性意义（P＜0．01）,而B组与C组差异无显著性意义（P＞0．05）。光镜下观察到MBL移植物中有神经纤维通过。电镜证实横断远端存在新生神经纤维。结论：MBL作为一种生物管道,可作为神经轴突再生的通路;NGF具有促进神经轴突生长的作用。MBL移植结合NGF修复脊髓横断性损伤,神经轴突能越过移植区到达远端。