MicroRNA-106a在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨微小RNA-106a（miRNA-106a）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况,并进一步分析其与肿瘤的临床病理特征和预后的相关性。方法:收集42例NSCLC肿瘤组织和相对应的正常肺组织,采用RT-PCR方法检测miRNA-106a在组织中的相对表达量,同时在肺癌细胞株和正常支气管上皮细胞中加以验证。进一步分析miRNA-106a的表达与临床病理资料和预后的相关性。结果:肺癌组织中miR-106a表达水平（3.72±1.81）明显高于正常肺组织（1.15±0.52）（P＜0.01）;肺腺癌A549细胞和鳞癌SK-MES-1细胞中miR-106a的表达水平均高于正常人支气管上皮16HBE细胞,差异具有显著统计学意义（P＜0.01）。MiR-106a的表达水平与肺癌的EGFR基因突变、淋巴结转移及临床分期明显相关（P＜0.05）。MiR-106a低表达者生存时间明显高于高表达组（P＜0.01）。结论:MiR-106a在NSCLC肿瘤组织中表达上调,可作为NSCLC预后判断的潜在分子标志物。     

miR-204在胃癌生长中的作用及机制

目的:探讨microRNA-204(miR-204)在胃癌中的表达,研究miR-204在胃癌细胞增殖中的作用和机制。方法:采用RT-PCR方法检测胃癌组织、胃癌细胞中的miR-204相对表达量;分析miR-204的表达与临床病理参数的关系;瞬时转染上调胃癌SGC7901细胞中miR-204的表达量,CCK8检测转染前后细胞增殖能力的变化;Western blot检测转染前后SGC7901细胞中Bcl-2表达的变化。结果:胃癌组织中miR-204相对表达量（1.94±0.78）明显低于正常胃组织（4.01±1.47）（P＜0.01）;同样,人胃癌细胞株中miR-204表达水平明显低于正常胃上皮细胞（P＜0.01）。胃癌组织中miR-204的表达水平与肿瘤的大小、远处转移和TNM分期明显相关（P＜0.05）。CCK8结果显示,miR-204 mimics转染后SCG7901细胞的增殖率较转染前明显下降（P＜0.05）,Western blot结果显示胃癌细胞中Bcl-2的表达水平较转染前明显下调（P＜0.05）。结论:miR-204在胃癌组织中低表达且与其恶性生物学行为相关,上调miR-204可通过下调Bcl-2的表达抑制胃癌细胞的增殖。     

miRNA-340和cyclin D1在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨胃癌组织中miRNA-340（miR-340）和cyclin D1的表达水平,并分析二者与胃癌患者临床病理参数的关系。方法:选取2019年12月至2020年06月期间我院病理科胃癌手术切除组织及对应癌旁正常胃黏膜组织(距离肿瘤边缘≥5 cm)共60例。采用qRT-PCR检测组织中miR-340的表达水平,采用免疫组化染色检测cyclin D1蛋白表达水平,并分析二者与胃癌患者临床病理参数的关系。结果:胃癌组织中miR-340的表达水平（2.38±0.51）明显低于癌旁正常黏膜组织（2.70±0.54）,差异具有统计学意义（P＜0.05）;胃癌组织中cyclin D1蛋白的表达水平（48.33％）明显高于癌旁正常黏膜组织（16.67％）,差异具有统计学意义（P＜0.05）。胃癌组织中miR-340表达与cyclin D1蛋白表达呈负相关（r=-0.367,P＜0.05）。胃癌组织中miR-340的表达与肿瘤直径、肿瘤的分化程度、浸润深度、临床分期有关（P＜0.05）,cyclin D1蛋白的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、临床分期、神经侵犯及淋巴结转移有关（P＜0.05）。结论:胃癌组织中miR-340和cyclin D1蛋白表达异常,且与不良预后相关,二者联合有望成为胃癌诊疗的潜在生物标志物。     

长链非编码RNA HOTAIR 在胃癌中的表达及意义

目的:探讨长链非编码RNA HOX 转录反义RNA（HOTAIR）在胃癌组织及胃癌细胞株中的表达及与临床病理关系,并进一步研究其对胃癌细胞增殖的影响。方法:收集2010 年1月至 2012 年 1月我院40例胃癌手术切除标本（包括癌组织及对应的正常胃上皮组织）,qRT-PCR检测40例胃癌中HOTAIR的表达,并分析其与临床病理关系。qRT-PCR检测胃癌细胞株和正常胃上皮细胞株中的HOTAIR的表达差异,利用siRNA抑制HOTAIR表达后,分别用MTT法和流式细胞仪（FCM）检测对细胞增殖和凋亡的影响。结果:胃癌组织中的HOTAIR的表达水平（6.32±2.56）显著高于正常胃上皮组织（4.61±1.81）（P=0.001）。同时,HOTAIR在人胃癌细胞株MKN28、SGC7901、BGC823中的表达水平明显高于正常胃上皮细胞GES-1（P＜0.05）。胃癌肿瘤组织中HOTAIR的表达水平与肿瘤的大小和临床分期显著相关（P＜0.05）。利用siRNA干扰HOTAIR的表达后,SGC7901细胞增殖明显降低,凋亡增加（P＜0.01）。结论:HOTAIR在胃癌中显著高表达,并可促进胃癌细胞增殖,可能成为胃癌的诊断和治疗提供新的分子标记物。     

激活增强子结合蛋白4在胃癌中的表达及其临床意义

目的:探讨激活增强子结合蛋白4（activating enhancer binding protein 4,AP4）在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用RT-PCR和Western blot检测胃癌细胞株BGC823和正常胃上皮细胞中AP4 mRNA和蛋白的表达;应用RT-PCR及免疫组化法检测90例胃癌组织中AP4 mRNA和蛋白的表达;进一步采用Log-rank检验和Cox回归模型对结直肠癌患者的预后因素进行分析,并用Kaplan-Meier计算不同AP4表达情况患者的生存率曲线。结果:与正常胃上皮细胞相比,胃癌细胞株BGC823中AP4 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高（均P＜0.05）;在胃癌组织中,AP4 mRNA的表达水平也明显高于配对的癌旁组织（3.848±0.426 vs 1.411±0.405,P＜0.05）;在蛋白水平,胃癌组织也显著高于配对的癌旁组织,且AP4蛋白表达与胃癌的脉管浸润（P＜0.05）、浸润深度（P＜0.05）及TNM分期（P＜0.05）相关,而与患者的性别、年龄、分化程度、肿瘤位置、淋巴结转移和远处转移无关（均P＞0.05）;Kaplan-Meier 单因素回归分析显示,AP4蛋白是影响胃癌患者预后的重要因素（P＜0.05）,进一步Cox多因素回归分析显示AP4蛋白是胃癌患者的独立预后因素（P＜0.05）。结论:AP4高表达与胃癌的发生、发展、转移及预后关系密切,可能成为协助胃癌诊断和治疗的新的生物标志物。     

MicroRNA-335的表遗传学调控机制及其与胃癌患者临床病理特征的关系

目的:探索miR-335基因启动子区甲基化状态对胃癌组织及细胞系中miR-335表达水平的影响,以及miR-335基因启动子区甲基化状态与胃癌患者临床病理特征以及预后的关系。方法:收集2012年7月1日-2014年7月1日中国医科大学附属第四医院就诊经病理诊断为原发性胃癌并行根治性手术的108例新鲜胃癌组织及配对癌旁组织,1株永生化的胃黏膜上皮细胞系(GES-1)和4株胃癌细胞系(SGC-7901、MKN-45、BGC-823和AGS)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃癌细胞株及108例胃癌患者肿瘤组织中miR-335的表达水平。甲基化特异性PCR(MSP)方法检测胃癌细胞系及胃癌患者肿瘤组织中miR-335的基因启动子区甲基化状态。分析miR-335基因启动子区甲基化状态对胃癌患者临床病理特征的影响。结果:qRT-PCR检测结果显示,miR-335在胃癌细胞株中的表达水平显著低于正常胃黏膜上皮细胞株GES-1［MKN-45,0.154±0.016-fold(P＜0.01);SGC-7901,0.138±0.013-fold(P＜0.01);BGC-823,0.432±0.076-fold(P＜0.01);AGS,0.749±0.072-fold(P=0.01)］。miR-335在108例胃癌组织中的表达水平较癌旁组织存在明显下降,差异显著（P＜0.001）。MSP的实验结果表明,MKN-45、SGC-7901、AGS和BGC-823细胞株均存在基因启动子区异常高甲基化状态。miR-335基因启动子区的高甲基化状态与肿瘤大小(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.046)、淋巴管浸润(P=0.001) 和miR-335 低表达 (P<0.001) 显著相关。结论:miR-335启动子区的高甲基化状态抑制了miR-335在胃癌细胞中的表达,miR-335的基因启动子区异常高甲基化状态与胃癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移以及淋巴管浸润显著相关。     

miR-141-3p在胃癌组织和患者血浆中的表达及其临床意义

目的:检测miR-141-3p在胃癌组织及患者血浆中的表达水平,探讨其表达水平与患者病理特征和预后的关系.方法:收集河北医科大学第四医院普外科2012年5月至2013年1月胃癌根治性手术切除的组织标本及术前外周静脉血标本44例,每例标本采集肿瘤组织(非坏死部分)和配对的癌旁组织.采用实时荧光定量PCR法检测miR-141-3p在胃癌组织、癌旁组织、血浆及健康志愿者血浆(25例)的表达情况,分析miR-141-3p的表达水平与胃癌患者DFS及临床病理特征的关系.结果:miR-141-3p在胃癌组织中的表达明显降低,在血浆中的表达水平明显升高(均P＜0.01).在胃癌组织中miR-141-3p高表达组DFS明显高于低表达组(21.8 vs 10.3个月,P＜0.01),且miR-141-3p在癌组织中的表达水平与患者DFS呈正相关(P＜0.01).在血浆中miR-141-3p的高表达组DFS明显低于低表达组(9.1 vs 21.0个月,P＜0.01),且miR-141-3p血浆中的表达水平与患者DFS呈负相关(P＜0.01).miR-141-3p在胃癌患者血浆中表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移及脉管瘤栓相关(P＜0.01).结论:miR-141-3p在胃癌组织中表达显著降低且与患者预后呈正相关,其在患者血浆中表达显著升高且与患者预后呈负相关,表明miR-141-3p可作为胃癌早诊早治及患者临床预后判定的潜在标志物.     

miR-200c在胃癌中的表达水平与患者临床病理特征的关系

目的:探讨miR-200c在胃癌组织中的表达水平与胃癌患者临床病理特征及无病生存期(diease free survial,DFS)的关系.方法:收集河北医科大学第四医院普外科2012年5月至2013年1月64例胃癌手术切除的标本及相关临床资料,采用实时荧光定量PCR技术检测miR-200c在胃癌组织和配对癌旁非癌组织中的表达.回顾性分析miR-200c表达水平与胃癌患者的临床病理特征及DFS相关性.结果:胃癌组织中miR-200c的表达水平显著低于癌旁非癌组织(3.29vs5.91,P＜0.01).miR-200c的表达水平与肿瘤TNM分期、浸润深度、转移和脉管瘤栓呈显著负相关(均P＜0.01).miR-200c高表达组患者中位DFS明显长于低表达组患者(22.0 vs 13.5个月,P＜0.01),其表达水平与患者DFS呈正相关(P＜0.01).结论:miR-200c在胃癌组织中低表达,其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤浸润深度和脉管瘤栓呈负相关,与DFS呈正相关,在胃癌的发生发展及预后中具有重要作用.     

胃癌中microRNA-381的表达及与临床病理参数和预后的关系

目的:探讨microRNA-381（miR-381）的表达及与胃癌患者临床病理参数和预后的关系。方法:通过定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌组织及癌旁组织中miR-381的表达水平。应用卡方检验分析miR-381表达与临床病理参数的关系。采用Kaplan-Meier曲线进行总生存率分析,并进行对数秩检验;通过Cox回归模型对miR-381的预后价值进行评估。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-381的表达下调（P＜0.05）,并且其低表达与TNM Ⅲ-Ⅳ期（P=0.013）及淋巴结转移（P=0.004）显著相关。 另外,我们发现胃癌患者中低miR-381表达水平的总体生存率低于其高表达水平的患者（P＜0.05）。多因素分析表明,miR-381和组织学类型是胃癌患者的独立预后因素（P=0.008,P=0.025)。结论:miR-381与胃癌发生发展密切相关,可能是一个新的胃癌治疗的候选靶点。     

miRNA-451在膀胱癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨miRNA-451在膀胱癌组织及膀胱癌细胞株中的表达水平及其与膀胱癌临床病理特征的关系.方法 采用RT-qPCR检测miRNA-451在30例膀胱癌、18例癌旁组织、15例正常膀胱组织及3个不同转移潜能的膀胱癌细胞株中的表达水平,分析其表达与膀胱癌临床病理特征的关系.结果 miRNA-451在癌组织及癌旁组织中的表达水平明显低于正常组织,且其表达水平和膀胱癌临床分期及病理分级相关,P＜0.01.miRNA-451在低度转移潜能的癌细胞株中的表达水平高于具有高转移潜能的细胞株,P＜0.01.结论 miRNA-451在癌组织及高转移潜能细胞株中呈低表达,且其表达水平与膀胱癌临床病理特征及癌细胞转移潜能密切相关,可能是膀胱癌潜在的调控基因.     

miRNA-145在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨miRNA-145在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征、预后之间的关系。方法:应用实时定量RT-PCR（qRT-PCR）检测miRNA-145在63例胃癌组织和40例对照组织中的表达,并将miRNA-145的含量分为高表达组和低表达组,分析其与胃癌临床病理特征、预后的关系。结果:miRNA-145在胃癌组织中的表达低于对照组,具有显著性差异（P<0.000 1）。miRNA-145的表达与患者的性别、年龄以及肿瘤的大小无关（P>0.05)。与分化程度、TNM分期、远处转移及术后3年生存率有关（P<0.05）。结论:miRNA-145的表达与胃癌的发生、发展及预后有关,miRNA-145有望成为胃癌新的肿瘤标志物之一。     

贲门癌miRNA-145的表达

目的:探讨贲门癌中miRNA-145的表达特征。方法:采用Microarray流体芯片技术及荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）技术检测贲门癌癌组织及癌旁组织中miRNA-145表达,分析二者差异。结果:贲门癌癌组织中miRNA-145表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）。伴淋巴结转移组贲门癌癌组织的miRNA-145表达水平低于无淋巴结转移组（P＜0.05）。结论:miRNA-145可能与贲门癌的发生和转移相关。     

PKM2蛋白在胃癌组织中的表达及其预后价值

目的 探讨M2型丙酮酸激酶（PKM2）在人胃癌组织中的表达,并分析其与胃癌临床病理特征的关系及预后价值。方法 构建含202例胃癌组织及其对应癌旁组织的组织芯片,采用免疫组化法检测胃癌组织中PKM2蛋白的表达,分析其阳性表达与临床病理参数和预后间的关系。结果PKM2在胃癌组织中的阳性表达率为62.4％（126／202）,高于癌旁组织的14.4％（29／202）,差异有统计学意义（P＜0.05）;胃癌组织中PKM2的阳性表达率与年龄、性别、肿瘤最大直径及分化程度均无关（P＞0.05）,与T分期、N分期及TNM分期有关,差异有统计学意义（P＜0.05）。PKM2表达阳性者的中位总生存期为42.9个月,短于阴性表达者的78.4个月（χ2=23.119, P＜0.001）,且PKM2阳性表达情况是影响胃癌预后的独立因素之一。结论PKM2蛋白在胃癌的发生和发展过程中起了重要作用,是评估胃癌患者预后的重要因素。     

BLZF1在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨碱性亮氨酸拉链核因子1（BLZF1）蛋白在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征和预后的关系。方法 采用组织芯片和免疫组织化学技术检测156例胃癌及对应癌旁组织中BLZF1蛋白的表达情况,分析其表达与临床病理特征及总生存期（OS）的关系。结果 胃癌组织中BLZF1的阳性表达率为52.56％（82／156）,低于癌旁组织的95.51％（149／156）,差异有统计学意义（P＜0.05）。BLZF1蛋白表达与T分期、TNM分期及分化程度均有关（P＜0.05）,而与年龄、性别、肿瘤大小及N分期均无关（P＞0.05）。BLZF1阳性表达者的中位OS为42.5个月,长于阴性表达者的29.0个月,差异有统计学意义（P＜0.05）。Cox多因素分析显示,T分期、肿瘤大小、TNM分期及BLZF1表达均为影响胃癌预后的独立因素。结论 BLZF1在胃癌中表达下调,且与部分临床病理特征有关,推测其表达缺失在一定程度上反映了胃癌的不良预后。     

CPNE7通过上皮间质转化影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨CPNE7在胃癌组织和细胞中的表达及影响胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:基于生物信息学数据库GEPIA 从转录水平分析CPNE7在胃癌及癌旁正常组织中的表达差异。qRT-PCR法检测CPNE7在3种胃癌细胞系(AGS、MKN-45、HGC-27)和胃黏膜正常上皮细胞(GES-1)中的表达,选择表达量相对较高的AGS细胞作为后续实验细胞。通过慢病毒转染AGS细胞敲减CPNE7的表达,根据不同处理分为RNAi-vector组、RNAi-1组、RNAi-2组、RNAi-3组,qRT-PCR、Western blot验证细胞转染效率,选择敲减效率最有效的RNAi-1(实验组)和RNAi-vector(对照组)进行后续实验。采用CCK-8法检测细胞活力,EdU和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax、Bcl-2)及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的表达水平。结果:CPNE7在胃癌组织中的表达明显高于正常组织(P＜0.05)。与正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)相比较,CPNE7在胃癌细胞中明显高表达(P＜0.05),在AGS胃癌细胞中CPNE7相对表达量最高（P＜0.001)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭（P＜0.05)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可上调细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase7、Caspase9、Bax的表达,下调Bcl-2的表达（P＜0.05)。与RNAi-vector组相比较,敲减CPNE7可增加上皮标志物蛋白(E-cadherin)的表达水平(P＜0.01),降低间质标志物蛋白(N-cadherin、Vimentin)的表达水平（P＜0.01)。结论:CPNE7在胃癌组织和细胞中表达上调,敲减CPNE7可通过影响EMT进程抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭,其可能成为胃癌的潜在分子标志物。     

Caspase-8在胃腺癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的:探讨胃腺癌组织中Caspase-8的表达及其与患者临床病理特征、预后的关系,并进一步研究Caspase-8表达对胃癌细胞增殖的影响。方法:采用qPCR法及免疫组化法检测胃腺癌组织中Caspase-8 mRNA和蛋白的表达,并在胃腺癌细胞株中进行进一步研究。结果:胃腺癌组织中Caspase-8 mRNA和蛋白的表达均低于癌旁胃黏膜组织,Caspase-8蛋白的表达与患者的年龄、性别、脉管癌栓、淋巴结转移和浸润深度无关（P＞0.05）,而与肿瘤分化程度、临床分期有关（P＜0.05）;生存分析显示Caspase-8蛋白低表达患者生存时间短,预后不良;进一步细胞研究结果表明,抑制Caspase-8的表达可以促进胃癌细胞的增殖。结论:Caspase-8在胃腺癌中表达下调,与胃腺癌细胞的增殖相关,对预后判断可能有一定参考价值。