不同年龄阶段人脱细胞真皮的制备及细胞渗透性研究

目的 制备不同年龄阶段的人脱细胞真皮（ADM）,并进行体外细胞渗透性研究,为改良ADM支架提供新的思路.方法 利用氢氧化钠（NaOH）消蚀＋冻融法制备ADM,对比青年人与老年人皮肤制备的ADM孔隙率和细胞毒性,在两种真皮的网状层接种人包皮成纤维细胞（FB）,于接种后3、6、9d通过HE染色比较不同年龄阶段ADM的细胞渗透性.结果 成功获得ADM,两组ADM细胞毒性低,老年组ADM孔隙率较青年组更理想,老年组ADM更多见到细胞形成复层并长入基质内部.结论 NaOH消蚀＋冻融法制备的ADM性状优良,其中老年人ADM的细胞渗透性较青年人更为理想,是一种良好的组织工程皮肤支架.     

一种新型无细胞真皮基质生物相容性的实验研究

检测一种新型的无细胞真皮基质(acellular dermal matrix ADM)的生物相容性。方法：用高渗盐-NaOH消蚀法除去皮肤中的所有细胞，利用体外细胞培养法和皮下植入试验检测其生物相容性。结果：表皮全层和真皮中所有细胞成分都被消除，胶原纤维稍松散，结构正常；ADM无细胞毒性，培养的NIH3T3细胞能在其上贴附、增殖；且ADM能诱导宿主的细胞浸入生长，并可以血管化。结论：经高渗盐-NaOH消蚀法制备的ADM有良好的生物相容性。     

ADM调控细胞生长的生物学性质及修复皮肤缺损的实验研究

目的:探讨高渗盐-NaOH消蚀法制备脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)调控成纤维细胞(fibroblast,FB)生长的生物学性质并进行皮肤缺损修复的动物实验.方法:用高渗盐-NaOH消蚀法制备得到人ADM,将人FB与ADM体外复合培养,免疫组化和透射电镜鉴定细胞生长和增殖情况;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测FB Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达.同样方法制备大鼠ADM,观察其结构;制备SD大鼠全厚皮肤缺损的模型,将ADM移植到创面进行修复.术后2周、4周、6周对修复创面进行大体形态学和组织学观察.结果:人FB可以在ADM上贴附、生长和增殖;与培养板上的人FB相比,ADM内FB Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRNA的表达降低.鼠ADM三维结构完整,排列整齐;移植后6周,皮肤表面光滑韧性好;表皮,真皮交界处乳头状结构出现,表皮细胞分化良好,约7～8层细胞,真皮内胶原纤维排列整齐.结论:ADM具有良好的调控细胞生长的生物学特性,修复皮肤创伤效果好.     

组织工程微粒真皮的构建及其动物实验研究

目的：将人成纤维细胞和York猪脱细胞真皮基质（ADM）微粒复合构建的？组织工程微粒真皮应用于SD大鼠损伤模型，观察其修复组织创伤能力。方法：用PKH26标记的人成纤维细胞，与猪ADM微粒复合构建微粒真皮，将其注射到SD大鼠皮下，用荧光显微镜和HE观察ADM微粒真皮对皮下组织的修复；将54只SD大鼠随机分成3组，分别移植自体全厚皮肤、ADM微粒和ADM微粒皮真皮。大体、荧光显微镜和HE观察伤口愈合情况、计算创面愈合时间和收缩率。结果：皮下注射ADM微粒真皮2周时可见单核细胞、成纤维细胞和血管长入，以后单核细胞减少，荧光观察可见红色荧光，8周时注射的微粒真皮基本被自身组织改建利用、体积稳定，胶原粗大整齐；ADM微粒真皮移植能够使创面愈合时间、创面收缩率与自体全厚皮肤移植相比无统计学意义（P〉0．05），与ADM微粒移植相比差异显著（P〈0．01）。结论：皮下注射ADM微粒真皮可参与皮下组织改建，修补皮下组织缺损；ADM微粒真皮可促进SD大鼠损伤模型的愈合和瘢痕挛缩。     

改良脱细胞异种真皮的制备与动物埋藏实验

目的:研制一种新型异种人工真皮。方法:应用鼠尾胶原和异种(猪)脱细胞真皮复合制备成新型复合真皮,将复合真皮与交联型脱细胞真皮分别埋藏于Balb/C小白鼠皮下,观察新型材料的组织相容性及促胶原代谢能力。结果:所有试验小鼠在早期均有毛发脱失现象,交联型真皮组持续时间长并伴有肉芽组织形成。4周后,新型复合真皮显示组织结构致密有序,降解时间更长;组织相容性及促自体胶原代谢能力均较交联型真皮更为优越。结论:新型材料具有更好的组织相容性和更强的促胶原代谢能力,是良好的皮肤组织工程支架材料。     

脱细胞真皮基质与组织修复再生研究进展

支架材料复合干细胞的皮肤组织工程产品是严重皮肤损伤较理想的治疗材料。脱细胞后的真皮保留了真皮原有的胶原纤维和基本结构,能够为种子细胞提供适宜的生长增殖环境,是一种较理想的真皮替代物。理想的脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix, ADM)无细胞毒性和免疫原性,并具有良好的生物相容性,能够促进种子细胞增殖分化形成有生物功能的皮肤组织。现就其作用机制、制备与表征以及研究进展等方面作一综述。     

国外美容医学最新研究与进展(二)——有关创伤修复的研究资料

有关创伤修复的研究资料:①真皮乳头层和真皮网状层中的成纤维细胞的差异能影响皮肤伤口愈合的质量;②局部应用冷冻的具有活性的羊膜微粒通过改善局部环境能促进糖尿病鼠的伤口愈合。     

一种脱细胞真皮基质制备方法的研究

目的:研究脱细胞真皮基质(acel lular dermal matrix,ADM)的一种新的制备方法.方法:取大鼠背部皮肤制成厚度0.8m的脱毛皮片,置入1mol/L NaCl溶液中24h,揭去表皮层,再浸入0.5%Triton X-100溶液中室温震荡48h,得到ADM.取标本行组织学观察,并行异体移植实验.结果:NaCl-Triton法制作的ADM,细胞成分脱除彻底,胶原纤维排列规则,没有明显的免疫原性,生物相容性好.结论:采用NaCl-Triton法制备ADM,价廉而有效,利于推广应用.     

人工真皮替代物的构建及其生物相容性评价

目的　构建人工真皮替代物并评价其生物相容性。方法　取自健康小白猪的异种皮肤先用 0 .5 %安多福浸泡消毒后 ,在无菌操作下 ,取厚度为 0 .3～ 0 .4mm ,经胰蛋白酶消化、冷冻干燥及戊二醛等处理后检测其理化性能和生物学相容性。结果　去细胞真皮底物具有良好的弹性、强度和组织学结构 ;人包皮成纤维细胞均能在 5～ 10min内很好地粘附 ,且生长良好 ,说明人工真皮对细胞生长无毒性 ;人工真皮在大鼠体内的免疫排斥反应轻微 ,组织相容性好。结论　本实验所构建的人工真皮具有良好的理化性能 ,生物相容性好 ,免疫排斥反应小 ,且成本低、来源广 ,是构建组织工程皮肤理想的真皮材料。     

脱细胞羊膜的制备及其生物相容性研究

目的制备脱细胞人羊膜(HAAM),检测其细胞相容性和组织相容性,探讨其作为组织工程支架材料的可行性. 方法新鲜人羊膜经漂洗后戊二醛交联,0.5%SDS震摇24小时,胰蛋白酶消化4小时,充分漂洗,冷冻干燥,分装,环氧乙烷消毒备用.倒置相差显微镜和扫描电镜观察表面结构,测量孔径,并作HE、Mallory染色.体外培养人成纤维细胞并复合于HAAM,倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附、生长,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定HAAM浸提液对培养的人成纤维细胞的细胞毒性.将HAAM植入SD大鼠背部皮下,观察其组织相容性. 结果 HAAM的一面为网状结构,孔径为10～80 nm,另一面为致密纤维结构.HE、Mallory染色表明材料无细胞残留,均为胶原组成.成纤维细胞能在HAAM上黏附、增殖.MTT示材料细胞毒性为0或1级,动物埋置实验无异常反应. 结论应用去垢剂-酶消化法处理新鲜人羊膜,能有效去除组织中的细胞和可溶性成分,可进一步降低其免疫原性,保留基质及网状结构,有良好的细胞相容性和组织相容性,可作为组织缺损的修复材料及组织工程的膜支架材料.