循环肿瘤DNA与肿瘤精准治疗

目前治疗肿瘤的手段多种多样,已经不完全局限于传统的手术切除及放化疗等,分子靶向治疗药物的普及使"精准医学"正逐步被应用到临床肿瘤领域。随着基因组学及生物大分子技术的日渐成熟,肿瘤精准医学将个体疾病的遗传学信息、诊断、治疗三者结合,使肿瘤的诊治更具有针对性、靶向性和特异性。因此,找到一种可以实时监测肿瘤状态的标志物至关重要。循环肿瘤DNA(circulating tumour DNA,ct DNA)是肿瘤细胞在坏死、凋亡后释放的一种游离DNA,由于其在血液中循环,所以对ct DNA的检测可以及时反映肿瘤状态。目前ct DNA检测已应用于肿瘤的早期诊断、靶向治疗和预后判断等方面,由于高度特异性及灵敏性的新技术不断出现,检测ct DNA可作为一种"液体活检",具有很好的临床应用前景。     

循环肿瘤DNA在胃癌发生发展中的作用

近年来,胃癌的发病率和死亡率居高不下,早期发现、早期诊断、早期治疗是防治胃癌的关键。随着现代医学发展,肿瘤标志物已应用于临床诊断,但由于肿瘤标志物灵敏度和特异度较低,临床应用局限,难以满足"精准医疗"要求。研究表明,循环肿瘤DNA(ct DNA)检测技术是一种快速、高效、相对无创性的新型"液体活检"技术,能够实时监测机体肿瘤状态、转移、复发及预后评估。本文阐述ct DNA与胃癌的关系,介绍目前常用的ct DNA检测技术,探讨ct DNA在胃癌临床诊疗中的应用价值。     

液体活检技术在肺癌治疗中的应用

肺癌为全球肿瘤相关死亡的首要原因,分子靶向治疗药物为其治疗提供了新的选择,然而分子靶向治疗应以必要的基因检测为指导。传统的穿刺或组织活检技术依赖的基因检测,风险大,不宜反复进行。而液体活检以外周血、唾液等为样本,进行循环肿瘤细胞(CTC)、循环肿瘤核苷酸(ct DNA)检测,具有创伤小、可重复性、均化异质性、实时判断疗效等优势,在肺癌的诊断与分期、疗效与预后预测、转移与复发风险评估、肿瘤异质性与耐药性研究等方面具有重要应用前景。本文就近年来液体活检技术在肺癌领域的研究进展进行综述,并就CTC与ct DNA技术的优缺点、互补性以及目前的局限性进行简要讨论。     

临床常见干扰因素对ctDNA EGFR T790M突变检测的影响

目的探讨临床常见干扰因素对血浆循环肿瘤DNA(ctDNA)表皮生长因子受体(EGFR)T790M突变检测的影响。方法收集7例确认T790M为野生型的正常献血者血浆,添加不同浓度T790M突变质粒及单一干扰物(三酰甘油、胆红素或血红蛋白)模拟干扰血浆,提取DNA后,采用超级突变扩增阻滞系统(SuperARMS)进行T790M突变检测,每份样本重复检测3次,记录DNA浓度、DNA纯度、Super-ARMS检测内控Ct值及T790M突变ΔCt值,应用SPSS 22.0软件对检测结果进行统计学分析。结果临界阳性突变样本DNA浓度极易受胆红素(≥85.5μmol/L)及三酰甘油(≥9.25 mmol/L)干扰(P0.05),但其纯度不易受干扰;强阳性突变样本DNA浓度可受低浓度胆红素(85.5μmol/L)及高浓度血红蛋白(2.0 g/L)干扰(P0.05),且纯度受三酰甘油(≥9.25 mmol/L)和血红蛋白(0.5～1.5 g/L)干扰(P0.05)。脂血对Super-ARMS检测T790M突变的影响最显著,临界阳性、强阳性突变样本内控Ct值及T790M突变ΔCt值均可受三酰甘油(≥9.25 mmol/L)干扰(P0.05);此外,强阳性突变样本内控Ct值受较高浓度胆红素(≥256.5μmol/L)干扰,T790M突变ΔCt值可受中等浓度血红蛋白(≥1.0 g/L)干扰(P0.05)。结论不同浓度的血红蛋白、三酰甘油和胆红素对SuperARMS检测ct DNA EGFR T790M突变的各项参数可产生不同程度的影响,在临床实际检测中应尽量避免使用含干扰因素的血浆。     

循环肿瘤DNA在弥漫大B细胞淋巴瘤中的临床应用

弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)作为一种侵袭性淋巴瘤,目前尚未有较好的分子标志物检测方法用于评估其疗效及预后。本文通过与传统检测方法相比较,发现循环肿瘤DNA(ct DNA)可以作为一种非侵入性的、能动态反映淋巴瘤信息的特异性生物标志物;DLBCL细胞中的ct DNA可以通过二代测序结合PCR技术获取,从而进行基因标记,淋巴瘤相关基因的靶向测序,淋巴瘤体细胞突变的d PCR及异常甲基化检测;ct DNA与DLBCL的诊断、疗效以及预后息息相关,可以应用于DLBCL的早期检测、中期监测、预后监测等方面,使得ct DNA在DLBCL的使用中具有广阔的应用前景。     

循环肿瘤DNA检测及相关研究进展

组织活检是目前癌症诊断的金标准,也是肿瘤基因分型的一种方法,但由于肿瘤的异质性和疾病的进展,组织活检对肿瘤的进展、预后、治疗和基因分型的监测有一定的局限性,因此需要一种更优化的检测方法。基于血浆循环肿瘤DNA(Circulating Tumor DNA,ctDNA)的液体活检对基因突变的筛查具有高敏感性和特异性,可持续动态观测肿瘤的进展。利用ct DNA的检测能准确检测肿瘤的基因突变,有利于肿瘤的早期发现,还能准确判断肿瘤的进展、预后及协助靶向治疗。     

循环核酸测定在恶性肿瘤诊断中的应用

循环核酸是指存在于血液 (血浆或血清 )中的细胞外游离DNA和RNA。本文对血浆 (血清 )DNA如Ras和 p5 3基因突变、微卫星改变、肿瘤抑癌基因启动子的高甲基化、线粒体DNA突变和肿瘤相关病毒DNA等以及肿瘤相关RNA如酪氨酸酶RNA、端粒酶成分RNA、不同肿瘤相关基因编码的mRNA和病毒RNA等检测在肿瘤诊断和预后中的意义进行了综述 ,并简要展望了循环核酸测定的应用前景。     

循环核酸测定在恶性肿瘤诊断中的应用

循环核酸是指存在于血液(血浆或血清)中的细胞外游离DNA和RNA。本文对血浆(血清)DNA如Ras和p53基因突变、微卫星改变、肿瘤抑癌基因启动子的高甲基化、线粒体DNA突变和肿瘤相关病毒DNA等以及肿瘤相关RNA如酪氨酸酶RNA、端粒酶成分RNA、不同肿瘤相关基因编码的mRNA和病毒RNA等检测在肿瘤诊断和预后中的意义进行了综述，并简要展望了循环核酸测定的应用前景。     

人类癌症特异敏感标志物:循环肿瘤DNA

循环肿瘤DNA (circulating tumor DNA,ctDNA)是由肿瘤细胞释放到血液循环系统中的DNA,它可作为多种癌症的生物学标志物.ctDNA的检测具有操作简便快速、无创、特异性和高敏感性等特征,以下一代测序(next-generation sequencing,NGS)技术为基础的ctDNA分析方法可通过突变状态反映肿瘤基因组信息,在肿瘤的研究领域和临床应用发挥重要的作用,可决策一个全新的癌症治疗方案.ctDNA作为新兴的“液体活检”靶标,其具有广阔的应用前景和推进精准医疗的实施.本文概括了ctDNA在多种癌症(乳腺癌、肺癌和结直肠癌)中的高频率突变基因、ctDNA的最新检测技术和ctDNA在临床诊断、疗效监控及预后判断中的良好效果,以推动NGS技术为基础的ctDNA检测方法在临床医学中的应用.     

人类乳腺癌细胞系Bcap-37和MCF-7染色体核型特征和标记染色体的分析

背景肿瘤的细胞遗传学研究表明,肿瘤染色体的改变具有非随机性,一些肿瘤还存在有特异的染色体异常,从而为癌基因的表达提供了细胞遗传学基础.目的对人类乳腺癌细胞系Bcap-37和MCF-7进行染色体G显带分析,研究其核型特征和标记染色体.设计以细胞为观察对象的对照实验.单位北京大学医学部医学遗传学系.材料实验于1991-04/1992-05在北京大学医学部医学遗传学系完成.人类乳腺癌细胞系Bcap-37和MCF-7.方法应用低温同步法与秋水酰胺处理制备染色体标本,对人类乳腺癌细胞系Bcap-37和MCF-7的中期及早中期细胞进行G-显带分析.对每个细胞系计数50～60个分裂相,分析15～16个G-显带核型,包括320条带和500条带左右水平的分裂相.主要观察指标两个乳腺癌细胞系染色体数目以及结构改变.结果Bcap-37细胞染色体众数为63,可识别其结构的标记染色体17条;MCF-7细胞染色体众数为56,可识别其结构的标记染色体13条.结论两个乳腺癌细胞系均有复杂的染色体异常,乳腺癌中染色体结构及数目的异常,它们可能引起肿瘤相关基因DNA序列重排,也可能导致某些染色体DNA丢失,从而在乳腺癌发生发展中起一定作用.     

血浆ctDNA检测在结直肠癌诊疗中的应用

结直肠癌的发病率和死亡率逐年增加。一方面是因为缺乏合适的早期筛查手段,肠镜检查患者依从率并不理想;另一方面是由于治疗方式的局限性,部分患者的病灶无法通过手术根治,化疗、放疗效果存在不确定因素,而分子靶向治疗也有适应人群的限制。通过分子诊断技术检测患者血浆循环肿瘤DNA(ctDNA),可对患者的早期筛查、预后和对化疗药物的反应进行分析,从而指导临床治疗。文章围绕血浆ct DNA检测在结直肠癌诊疗中的应用作一综述。     

人类乳腺癌细胞系Bcap-37和MCF-7染色体核型特征和标记染色体的分析

背景：肿瘤的细胞遗传学研究表明，肿瘤染色体的改变具有非随机性，一些肿瘤还存在有特异的染色体异常，从而为癌基因的表达提供了细胞遗传学基础。目的：对人类乳腺癌细胞系Bcap-37和MCF-7进行染色体G显带分析，研究其核型特征和标记染色体。设计：以细胞为观察叶寸象的对照实验。单位：北京大学医学部医学遗传学系。材料：实验于1991—04／1992—05在北京大学医学部医学遗传学系完成。人类乳腺癌细胞系Bcap-37和MCF-7。方法：应用低温同步法与秋水酰胺处理制备染色体标本．对人类乳腺癌细胞系Bcap-37和MCF-7的中期及早中期细胞进行G-显带分析。对每个细胞系计数50～60个分裂相，分析15～16个G-显带核型．包括320条带和500条带左右水平的分裂相。主要观察指标：两个乳腺癌细胞系染色体数目以及结构改变。结果：Bcap-37细胞染色体众数为63，可识别其结构的标记染色体17条：MCF-7细胞染色体众数为56，可识别其结构的标记染色体13条。结论：两个乳腺癌细胞系均有复杂的染色体异常，乳腺癌中染色体结构及数目的异常，它们可能引起肿瘤相关基因DNA序列重排，也可能导致某些染色体DNA丢失，从而在乳腺癌发生发展中起一定作用。     

中国汉族人与美国高加索人乳腺癌患者线粒体基因细胞突变的比较

目的:探讨不同种族乳腺癌患者线粒体DNA体细胞性突变的差异。方法:利用时相温度梯度凝胶电泳方法对2000/2003所保存的肿瘤样本中,随机抽取的54例中国汉族人和19例美国高加索人乳腺癌患者乳腺组织和距肿瘤边缘5cm以上的正常乳腺组织进行前瞻性突变分析研究。采用32对重叠引物扩增了来自所有患者的肿瘤组织和配对正常组织的线粒体全长基因,对肿瘤和正常组织中不同的电泳条带类型的DNA片段进行测序以辩明其突变类型。结果:747%(14/19)高加索人乳腺癌具有体细胞性线粒体基因突变,汉族人中乳腺癌体细胞性突变的发生率仅37%(24/54),但后者未记录于MitoMap数据库的新突变数明显多于前者。两组均以D环区突变密度最高,汉族人rRNA区突变密度高于高加索人,而D环区则较之为低(χ2=9.27,P=0.026)。结论:中国汉族人与美国高加索人乳腺癌患者线粒体基因体细胞性突变频率、各基因区域的突变分布和突变密度具有一定的差异。在中国汉族人群乳腺癌患者出现较多的未记录于MitoMap数据库的新突变,显示出汉族人具有与高加索人不同的线粒体基因体细胞性突变特征。本研究为肿瘤预防性干预提供理论依据。     

中国汉族人与美国高加索人乳腺癌患者线粒体基因细胞突变的比较

要目的:探讨不同种族乳腺癌患线粒体DNA体细胞性突变的差异.方法:利用时相温度梯度凝胶电泳方法对2000/2003所保存的肿瘤样本中,随机抽取的54例中国汉族人和19例美国高加索人乳腺癌患乳腺组织和距肿瘤边缘5 cm以上的正常乳腺组织进行前瞻性突变分析研究.采用32对重叠引物扩增了来自所有患的肿瘤组织和配对正常组织的线粒体全长基因,对肿瘤和正常组织中不同的电泳条带类型的DNA片段进行测序以辩明其突变类型.结果:747%(14/19)高加索人乳腺癌具有体细胞性线粒体基因突变,汉族人中乳腺癌体细胞性突变的发生率仅37%(24/54),但后未记录于MitoMap数据库的新突变数明显多于前.两组均以D环区突变密度最高,汉族人rRNA区突变密度高于高加索人,而D环区则较之为低(x^2=9.27,P=0.026).结论:中国汉族人与美国高加索人乳腺癌患线粒体基因体细胞性突变频率、各基因区域的突变分布和突变密度具有一定的差异.在中国汉族人群乳腺癌患出现较多的未记录于MitoMap数据库的新突变,显示出汉族人具有与高加索人不同的线粒体基因体细胞性突变特征.本研究为肿瘤预防性干预提供理论依据.     

乳腺癌患者血浆循环DNA含量分析及心理干预的效果观察

目的研究血浆循环DNA含量在乳腺癌分子亚型中表达特点及其与雌激素受体的关系,探讨心理干预对改善围手术期乳腺癌患者心理状况及提高自我效能的作用。方法收集1452例乳腺癌标本制作组织芯片,检测ER、PR、HER2、CK5／6、EGFR的表达,按照Nielsen标准进行分子分型。检测血浆循环DNA含量。根据血浆循环DNA含量水平不同,选取HER2过表达型,裸表达型乳腺癌患者80例,随机分为常规护理组和心理支持组各40例,并分别在入院后、手术后使用汉密尔顿焦虑量表（HAMA）、汉密尔顿抑郁量表（HAMD）、一般自我效能感量表（GSES）对患者进行评估,比较心理干预前后2组患者的心理状况,进行t检验和x^2检验。结果血浆循环DNA含量在基底样型乳腺癌、HER2过表达型和裸表达型中的表达率显著低于ER阳性乳腺癌腺腔A型和腺腔B型。常规护理组干预前后HAMA、HAMD、GSES评分无显著改变;心理支持组干预后HAMA、HAMD和GSES评分较自身干预前及干预后常规护理组均有显著改善。结论血浆循环DNA含量在基底样型乳腺癌和其他ER阴性乳腺癌亚型中的表达上调,根据血浆循环DNA含量进行心理行为干预可改善围手术期乳腺癌患者焦虑、抑郁心理,提高患者自我效能。     

液体活检在乳腺癌新辅助治疗中的临床意义

肿瘤患者液体活检的重要检测指标包括循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA,前者即从肿瘤原发灶和转移灶脱落后通过血管或淋巴管进入血液循环的细胞,后者即由凋亡或坏死的肿瘤细胞释放到血管中的游离DNA。对于接受新辅助治疗的乳腺癌患者,动态监测循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA有助于早期识别肿瘤患者对不同治疗的反应,指导后续治疗以改善预后。该文综述了在接受新辅助治疗的乳腺癌患者中检测循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA的相关研究进展及临床意义,旨在为循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA在乳腺癌新辅助治疗中的更合理应用提供参考。     

235例急性髓系白血病患者血浆游离DNAFLT3-ITD的检测及临床意义

本研究检测急性髓系白血病（AML）患者外周血血浆游离DNAFLT3内部串联重复序列（internal tandem duplication,ITD）并探讨其临床意义。提取235例AML患者血浆游离DNA并以PCR扩增看家基因globin作为判定标准,通过PCR方法检测FLT3－ITD,并与骨髓或外周血白血病细胞DNA检测结果进行比较。结果表明：235例AML患者中,190例患者血浆游离DNA扩增出globin基因。188倒初诊、复发或难治患者中,血浆游离DNA发生FL33—1TD突变35例（19％,35／188）,与病人白血病细胞DNA检测结果完全一致。47例临床缓解患者中,有2例血浆游离DNA扩增出globin基因并检出FLT3－ITD突变,而其细胞来源DNA均为阴性。2例患者均早期复发。与FLT3－野生型（wt）相比,FLT3－ITD突变患者白细胞计数、CD7、CD56表达等明显升高,CR率降低。结论：AML患者血浆中可以检测出白血病细胞特异性的血浆游离DNA,与直接检测白血病细胞结果一致。对骨髓缓解期病人残留白血病（MRD）的检测,血浆游离DNA具有更高的敏感性。FLT3－ITD的检测对AML患者的预后及疗效判断有重要意义。     

液体活检技术在非小细胞肺癌患者EGFR-TKI继发耐药中的应用

作为非小细胞肺癌治疗史上的里程碑,表皮生长因子受体(EGFR)-酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的出现显著延长了非小细胞肺癌患者的生存期,改善了患者的生存质量。亚洲的非小细胞肺癌患者EGFR基因的突变频率远高于白种人,将更加受益于EGFR-TKI药物。然而,分子靶向药物面临的一个重要问题就是耐药。这些最初受益于EGFR-TKI药物的患者,其肿瘤最终都将再次发生进展,并且这种状况往往发生在开始用药后1年左右。由于EGFR-TKI的继发耐药,目前已相继出现了3代EGFR-TKI药物。在众多耐药机制中最受关注的耐药突变就是EGFR T790M和C797S点突变。为了达到更好的治疗效果,必须对使用EGFR-TKI药物的患者进行继发耐药动态监测。组织活检是癌症诊断的金标准,然而组织活检由于存在操作风险较高、组织样本获得困难、无法实时检测及肿瘤异质性等问题,无法对非小细胞肺癌患者进行动态监测。液体活检是一种方便、快捷、具有较高可靠性、新兴的非侵入性检测方法,其通过检测血液中循环肿瘤细胞(CTC)、循环肿瘤DNA(ct DNA)及肿瘤释放出的外泌体,对肿瘤进行早期诊断、筛查、疗效和预后评估以及耐药监测等。文章综述了EGFR-TKI药物及液体活检技术的发展现状,并对液体活检技术在非小细胞肺癌患者EGFR-TKI继发耐药中的应用进行简评和展望。     

乳腺癌患者血浆循环DNA含量分析及心理干预的效果观察

目的 研究血浆循环DNA含量在乳腺癌分子亚型中表达特点及其与雌激素受体的关系,探讨心理干预对改善围手术期乳腺癌患者心理状况及提高自我效能的作用.方法 收集1452例乳腺癌标本制作组织芯片,检测ER、PR、HER2、CK5/6、EGFR的表达,按照Nielsen标准进行分子分型.检测血浆循环DNA含量.根据血浆循环DNA含量水平不同,选取HER2过表达型,裸表达型乳腺癌患者80例,随机分为常规护理组和心理支持组各40例,并分别在入院后、手术后使用汉密尔顿焦虑量表(HAMA)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、一般自我效能感量表(GSES)对患者进行评估,比较心理干预前后2组患者的心理状况,进行t检验和x2检验.结果 血浆循环DNA含量在基底样型乳腺癌、HER2过表达型和裸表达型中的表达率显著低于ER阳性乳腺癌腺腔A型和腺腔B型.常规护理组干预前后HAMA、HAMD、GSES评分无显著改变;心理支持组干预后HAMA、HAMD和GSES评分较自身干预前及干预后常规护理组均有显著改善.结论 血浆循环DNA含量在基底样型乳腺癌和其他ER阴性乳腺癌亚型中的表达上调,根据血浆循环DNA含量进行心理行为干预可改善围手术期乳腺癌患者焦虑、抑郁心理,提高患者自我效能.     

DNA甲基化在乳腺癌中的研究进展

随着DNA甲基化在乳腺癌中的分子机制逐渐被发现,得到临床的广泛认识和重视。DNA启动子高度甲基化会引起基因沉默,进而表达失调,并以此调控乳腺癌的发生、发展,并且DNA甲基化检测能作为乳腺癌临床诊断及预后的生物标志物,为乳腺癌的治疗提供新的靶标,因此,DNA甲基化在乳腺癌中有重要价值和广阔的应用前景。本文综述DNA甲基化在乳腺癌发生、发展中的分子机制及在早期筛查、预后和靶点治疗等方面的研究进展,并对未来的研究提出建议和展望。