miR-141靶向YAP1抑制肝癌细胞HCC-LM3增殖、迁移和侵袭

目的:探究microRNA-141（miR-141）对肝癌细胞HCC-LM3增殖、迁移、侵袭的影响。方法:通过荧光定量PCR（qPCR）检测肝癌细胞系（HepG2、Huh7、HCC-LM3）与肝上皮细胞THLE-3中miR-141的表达量；免疫印迹试验（Western blot）分析Yes相关蛋白1（YAP1）的表达量。采用噻唑蓝（MTT）实验分析过表达miR-141或沉默YAP1对HCC-LM3细胞增殖的影响，Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移能力。采用生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-141的靶基因。功能性实验检测过表达YAP1对miR-141调控的HCC-LM3细胞增殖、迁移、侵袭作用的影响。结果:qPCR和Western blot的结果表明，肝癌细胞系（HepG2、Huh7、HCC-LM3）中miR-141的表达量下调，YAP1的表达量上调；过表达miR-141和沉默YAP1可以抑制HCC-LM3细胞增殖、侵袭、迁移；生物信息学预测YAP1可能是miR-141的靶基因，双荧光素酶报告基因证实YAP1是miR-141的靶基因；过表达YAP1逆转miR-141对HCC-LM3细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:miR-141直接靶向YAP1抑制肝癌HCC-LM3细胞增殖、迁移、侵袭。     

RNA干扰抑制FANCD2基因对多药耐药骨髓瘤细胞株药物敏感性的影响

目的：探讨FA/BRCA（fanconi anemia/BRCA）中siRNA干扰对多药耐药骨髓瘤细胞株的影响.方法：体外培养多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞系,通过相应渐增浓度的马法兰药物处理,选择性获得多药耐药的子代肿瘤细胞株RPMI-8226/R细胞.MTT法检测RPMI-8226和RPMI-8226/R细胞马法兰、ADM、VCR、CTX、Ara-C、VP-16及DDP的敏感性.siRNA干扰抑制FA/BRCA途径FANCD2蛋白表达,观察多发性骨髓瘤多药耐药细胞株对烷化剂药物敏感性的变化.结果：成功构建针对FANCD2基因的siRNA,将其转染多药耐药骨髓瘤细胞株,可以抑制细胞中FANCD2基因表达,转染细胞较转染前细胞FANCD2基因表达降低,对烷化剂的敏感性升高.结论：人多发性骨髓瘤多药耐药细胞株RPMI-8226/R其多药耐药性的产生可能与FA/BRCA途径中FANCD2表达增强有关,可通过抑制FANCD2表达而逆转细胞的耐药性达到增强烷化剂对耐药肿瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.沉默FANCD2表达可以提高多药耐药MM细胞对烷化剂的敏感性,而RNA干扰是一种沉默FANCD2表达的理想方法,因此它可能是一种有潜力的耐药MM辅助治疗新方法.     

miR-139-5p靶向GPR56抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:研究miR-139-5p对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测软骨肉瘤细胞中miR-139-5p、GPR56的mRNA表达;Western blot检测细胞中GPR56的蛋白表达;将miR-139-5p组（转染miR-139-5p mimics）、miR-NC组（转染miR-NC）、si-NC组（转染si-NC）、si-GPR56组（转染si-GPR56）、miR-139-5p+pcDNA3.1组（miR-139-5p mimics和pcDNA3.1共转染）、miR-139-5p+pcDNA3.1-GPR56组（miR-139-5p mimics和pcDNA3.1-GPR56共转染）,均以脂质体法转染至U-2OS细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;Transwell检测各组细胞的迁移、侵袭。结果:与人正常成骨细胞hFOB1.19相比,人骨肉瘤细胞U-2OS中miR-139-5p表达显著降低,GPR56表达显著升高（P＜0.05）。过表达miR-139-5p、敲减GPR56均可明显抑制U-2OS细胞增殖、迁移、侵袭;GPR56是miR-139-5p的靶点。过表达GPR56可逆转miR-139-5p对U-2OS细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:miR-139-5p可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向GPR56有关,将可为骨肉瘤的治疗提供新靶点。     

circ_0001429 靶向miR-139-5p/TGIF1 分子轴调控膀胱癌T24 细胞恶行生物学行为

目的：探究circ_0001429 通过调控miR-139-5p/ 转录生长因子影响因子1（TGF-interacting factor 1,TGIF1）分子轴对膀胱癌T24 细胞恶性生物学行为的影响。方法：采用qPCR实验检测circ_0001429 在膀胱癌细胞系SW780、T24、5637 和人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1 中的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p、circ_0001429 与TGIF1 之间的靶向调控关系;将T24 细胞分为NC组、sh-circ_0001429 组、miR-139-5p mimics 组、sh-TGIF1 组、pcDNA-circ_0001429+sh-TGIF1 组、miR-139-5p mimics+pcDNA-TGIF1 组以及sh-circ_0001429+miR-139-5p inhibitor 组,Western blotting 检测各组细胞中TGIF1 的表达水平,CCK-8 法、Transwell 实验和流式细胞术分别检测circ_0001429、miR-139-5p 和TGIF1 对T24 细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果：circ_0001429 在3 珠膀胱癌细胞系中呈高表达（均P<0.01）,敲降circ_0001429 可以显著抑制T24 细胞增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡（P<0.05 或P<0.01）;双荧光素酶报告基因验证结果显示,circ_0001429 与miR-139-5p、miR-139-5p 与TGIF1 存在靶向关系;过表达miR-139-5p 显著抑制T24 细胞增殖、侵袭、迁移并促进细胞凋亡（均P<0.01）。回复实验进一步证实circ_0001429 和TGIF1 竞争性结合miR-139-5p 促进T24 细胞增殖、侵袭、迁移且抑制细胞凋亡（均P<0.01）。结论：circ_0001429 与TGIF1 竞争结合miR-139-5p 促进膀胱癌细胞T24 的增殖、侵袭、迁移且抑制细胞凋亡。     

miR-1269a 在食管癌组织中的表达及其对KYSE30 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨miR-1269a 在食管癌组织中的表达及其对KYSE30 细胞恶性生物学行为的影响,并研究其可能的作用机制。方法：选取90 例在河北医科大学第四医院通过手术切除的食管癌组织标本,并收集正常食管永生化上皮细胞和食管癌细胞系,应用qPCR 实验检测癌组织和细胞系miR-1269a 的表达水平。将miR-1269a 的mimics 和inhibitor 分别转染食管癌细胞KYSE30 后,用MTS、Transwell 和克隆形成实验分别检测miR-1269a 对KYSE30 细胞增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力的影响。通过生物信息学软件预测miR-1269a 的靶基因,并通过WB实验和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269a 对靶基因的调控作用。转染SOX6 质粒后,采用MTS、Transwell 和克隆形成实验分别检测SOX6 对KYSE30 细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力的影响,并利用回复实验进一步验证结果。结果：食管癌组织中miR-1269a 的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）;与正常食管上皮细胞相比,食管癌细胞系中miR-1269a 的表达水平显著升高（P<0.05 或P<0.01）。miR-1269a mimics 转染组KYSE30 细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力显著高于mimics NC组（P<0.05 或P<0.01）;inhibitor 转染组KYSE30 细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力显著低于inhibitor NC组（P<0.05 或P<0.01）。miR-1269a 可与SOX6 的3’UTR区相结合,且过表达miR-1269a 后,KYSE30细胞的SOX6 表达水平和荧光素酶报告基因的活性均显著降低（P<0.05）。回复实验表明,高表达miR-1269a 可以促进食管癌细胞增殖、侵袭和迁移（P<0.05 或P<0.01）,同时高表达SOX6 后,miR-1269a 的促进作用出现部分逆转。结论：miR-1269a 在食管癌组织和细胞系中表达上调,能够促进KYSE30 细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成等恶性生物学行为,其机制可能是通过抑制靶基因SOX6 实现的。     

miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌发生发展的分子机制

目的：探讨miR-515-5p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法：选取2020年6月至2020年12月在河北医科大学第四医院手术切除的60例食管癌患者的癌组织标本和20例健康成人的食管上皮组织标本,以及食管癌细胞TE1、Eca109、KYSE30和KYSE170,用 qPCR 法检测食管癌组织和细胞中 miR-515-5p 的表达水平。在Eca109细胞中转染miR-515-5p模拟物以及其阴性对照物、在TE1细胞中转染miR-515-5p抑制剂以及其阴性对照物,qPCR法检测转染效率,用CCK-8法、Transwell实验分别检测转染细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法分析预测miR-515-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证组蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylase 2,HDAC2）为miR-515-5p的靶基因。应用GEPIA和TCGA数据集分析HDAC2在食管癌组织中的表达及其与患者临床特征的关系。结果：miR-515-5p在食管癌组织及细胞中表达降低（均P<0.01）。过表达miR-515-5p抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）,而敲低miR-515-5p 表达则可增强食管癌 TE1 细胞的增殖、侵袭和迁移能力（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因分析证明,HDAC2是miR-515-5p的靶基因。qPCR和WB实验结果显示,miR-515-5p对HDAC2 mRNA和蛋白表达具有负调控作用。挽救实验证实miR-515-5P通过靶向HDAC2抑制食管癌Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-196a调控HOXA5对人胃癌细胞MGC-803侵袭转移的影响及机制研究

目的 检测miR-196a在人胃癌组织及细胞系中的表达,探讨抑制或过表达miR-196a对胃癌细胞侵袭转移能力的影响,以及其可能作用的靶基因。方法 通过实时定量PCR技术检测胃癌组织及细胞系中miR-196a的表达水平,通过转染miR-196a inhibitors或mimics抑制或上调其表达,并通过定量PCR检测转染效率。利用划痕迁移实验、Transwell侵袭实验和MTT实验检测上调或下调miR-196a水平对MGC-803细胞的迁移、侵袭和增殖能力的影响。采用生物信息学及Western blotting方法验证miR-196a对靶基因HOXA5的调控机制。结果 相对于正常胃黏膜组织及细胞,胃癌组织和细胞系中miR-196a的表达水平显著上调（上调约28倍,P＜0.01）,MGC-803细胞中转染miR-196a inhibitors或mimics能显著抑制（下降了53％,P＜0.01）或上调（上调约8倍,P＜0.01）miR-196a表达水平。抑制miR-196a表达能降低MGC-803细胞的迁移、侵袭和增殖能力,而上调其表达则相反。miR-196a能够负性调控HOXA5的表达。结论 胃癌组织及细胞系中miR-196a的表达上调可能通过抑制HOXA5的表达显著提高胃癌细胞的侵袭转移能力,促进胃癌的发生、发展。     

circRNA_001569通过miR-145/HBXIP轴影响乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的：探讨 circRNA_001569 通过 miR-145/HBXIP 轴在乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移中发挥的作用。方法:收集2016年1月至2019年1月期间衡水市人民医院收治的30例乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织。qPCR检测circRNA_001569在乳腺癌组织、癌旁组织以及细胞系中的表达。生物信息学工具预测miR-145的靶基因,RNA免疫沉淀（RNA immunoprecipitation,RIP）和双荧光素酶报告基因实验检测 miR-145 或靶基因之间的相互作用 ;向乳 腺 癌 MDA-MB-231 和 MCF-7细胞中转染si-circRNA_001569、miR-145 mimics或miR-145 inhibitor,建立基因过表达或沉默的细胞模型,qPCR和Western blotting分别检测转染对相关基因和蛋白表达的影响,CCK-8法、Transwell实验检测转染对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中,circRNA_001569 和 HBXIP 均呈高表达、miR-145 呈低表达。RIP 分析和双荧光素酶实验证实了 miR-145 与circRNA_001569和HBXIP之间的靶向关系;circRNA_001569或HBXIP过表达促进MDA-MB-231和MCF-7细胞的增殖、侵袭和迁移（均 P<0.01）,而 miR-145 过表达起相反的作用（均 P<0.01）。结论:circRNA_001569 可能通过下调 miR-145 的表达、上调HBXIP的表达从而促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

circ_0001821靶向miR-203调控皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖、凋 亡、迁移和侵袭

目的：探讨circ_0001821通过靶向miR-203调控皮肤鳞状细胞癌（cutaneous squamous cell carcinoma,CSCC）A431细胞 增殖、凋亡、迁移及侵袭的分子机制。方法：选取2018年2月至2019年8月海南医学院第二附属医院收治的39例CSCC患者的癌 及配对癌旁组织,以及人CSCC细胞系A431,用qPCR法检测CSCC癌和癌旁组织中circ_0001821的表达水平。利用脂质体转染技 术,分别将si-circ_0001821、si-NC、miR-203 mimic、miR-NC、si-circ_0001821与anti-miR-NC、si-circ_0001821与anti-miR-203转染至 A431细胞,用qPCR法检测转染细胞中circ_0001821和miR-203的表达水平,MTT法、流式细胞术和Transwell实验分别检测A431 细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭能力,WB法检测细胞中增殖、凋亡、迁移及侵袭相关蛋白的表达水平。通过Circinteractome数据库 预测circ_0001821与miR-203存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0001821与miR-203的靶向关系。结果：CSCC组 织中circ_0001821的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）。转染 si-circ_0001821 可显著降低细胞中circ_0001821的表达水平（P<0.01）,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,提高细胞凋亡率（P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实,circ_0001821可 靶向结合miR-203。转染miR-203 mimic可显著降低A431细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,提高细胞凋亡率（P<0.01）。共转染si-circ_0001821与anti-miR-203 可明显逆转下调circ_0001821 表达对 A431 细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论： circ_0001821通过靶向miR-203调控CSCC细胞A431的增殖、迁移、侵袭能力及细胞凋亡。     

沉默 c-maf 基因对多发性骨髓瘤细胞系 RPMI8226增殖和侵袭力的影响

  目的   探讨c-maf基因对多发性骨髓瘤细胞增殖、侵袭力的影响。   方法   脂质体法用c-maf siRNA转染多发性骨髓瘤 细胞系RPMI8226,RT-PCR技术检测c-maf基因的表达,MTT实验和Transwell小室分别检测多发性骨髓瘤细胞增殖活性和侵袭 力的改变,流式细胞术检测细胞周期,Western blots检测相关蛋白的表达情况,并检测Caspase的活性。   结果   c-maf siRNA有效地 转染入细胞并抑制了c-maf基因的表达。转染c-maf siRNA细胞的增殖活性及体外侵袭力均显著下降（P＜0.05）,细胞周期阻滞在 G₂/M 期,survivin、MMP-2、MMP-9、ARK5、cyclin B1 蛋白水平明显低于对照组（P＜0.05）,Caspase-3/7 蛋白活性高于对照组（P＜ 0.05）。   结论   c-maf siRNA可明显抑制多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖活性及侵袭力。c-maf基因可做为多发性骨髓瘤基因治疗的靶基因。       

卵巢透明细胞癌临床治疗效果研究

背景与目的:卵巢透明细胞癌相比于其他卵巢上皮性癌,其预后较差,本文对本院卵巢透明细胞癌患者生存率作分析比较,探讨CAP[表柔比星(E-ADM)、顺铂(DDP)加环磷酰胺(CTX)]方案加用丝裂霉素(MMC)后的治疗效果。方法:对本院于1999年1月1日至2002年12月31日接受治疗的卵巢透明细胞癌共33例(A组),同时随机取37例卵巢其他上皮性癌的患者作对照(B组)。Ⅰ期患者行全子宫 双附件 大网膜切除 阑尾切除 淋巴结分期术),2例患者需要生育的卵巢癌患者行患侧附件切除 对侧卵巢活检 大网膜切除 阑尾切除术术。Ⅱ期以上的患者行肿瘤减灭术(tumor reductive surgery,TRS)尽可能使残余灶<1cm,2组患者均在术后化疗均采用CAP方案(静脉应用),但A组患者CAP方案中加用了丝裂霉素。A组患者与仅用CAP方案的透明细胞癌患者(C组)Ⅰ/Ⅱ期15例及Ⅲ/Ⅳ期9例相比较。结果:术前A组与B组Ⅰ/Ⅱ血清CA125差异有显著性,卵巢透明细胞癌血清CA125水平值较低,Ⅲ/Ⅳ期血清CA125差异无显著性。在3次及6次化疗后与化疗前Ⅰ/Ⅱ期A组及B组血清CA125差异有显著性,而Ⅲ/Ⅳ期血清CA125下降水平差异无显著性。A组卵巢透明细胞癌患者中有11例有子宫内膜异位症(33.33%),有7例患者出现深静脉血栓(21.21%),有深静脉血栓的患者与生存率无直接关系(P=0.26)。Ⅰ/Ⅱ期患者的平均生存时间分别为:A组38.3±2.4个月,B组38.3±2.7个月,Ⅰ/Ⅱ期患者A组与B组用Log Rank检验相比较4年生存率差异无显著性(P=0.471),Ⅲ/Ⅳ期患者的平均生存时间分别为:A组20±3个月,B组34±4个月,Ⅲ/Ⅳ期患者A组与B组相比较用Log Rank检验4年生存率差异有显著性(P<0.05)。C组患者Ⅰ/Ⅱ期15例,平均生存时间为:30±3个月,与A组用MMC的透明细胞癌患者Ⅰ/Ⅱ期23例比较生存率差异有显著性(P<0.05)。C组患者Ⅲ/Ⅳ期9例,均死亡。平均生存时间为18±3个月。与A组用MMC的透明细胞癌患者Ⅲ/Ⅳ期10例比较生存率差异无显著性(P=0.430)。结论:卵巢透明细胞癌术前及化疗后血清CA125水平值较低,用CAP加丝裂霉素的规则化疗治疗透明细胞癌对Ⅰ/Ⅱ期患者有一定的治疗效果,对Ⅲ/Ⅳ期患者治疗效果不佳。卵巢透明细胞癌疾病的复发率及死亡率仍然较高。     

胰腺实性-假乳头状肿瘤研究进展

胰腺实性-假乳头状肿瘤(solidpseudopapillarytumor,SPT)是一种胰腺少见的肿瘤,主要发生在年轻女性,13~15岁的年龄段发病率最高,临床症状不明显,部分患者症状为腹痛、呕吐、腹胀和消化不良等,超声和CT上一般可见到有囊性和实性部分组成的异质性的包块,缺乏其他特征性的结构。大体为囊壁厚薄不一内含血性液体的囊肿,其中可有破棉絮状的坏死组织,组织学特点是细胞形态单一,有纤细的假乳头结构,实性区域有蜕变坏死。SPT的超微结构研究显示,细胞内有直径50~2640nm的膜包围的颗粒;免疫组化Vimentin、α1-AT、α1-ACT阳性而腺癌的标记为阴性;DNA分析发现有染色体丢失和移位。较成熟的诊断方式是影像学和病理学,实验室检查对诊断帮助不大。最佳治疗措施是手术切除,但应注意随访,因为该肿瘤有恶性潜能和复发倾向。     

Possibility of predicting the results of the surgical treatment of cancer of the thoracic portion of the esophagus

Within a 18-year period in the clinic 273 patients were subjected to radical surgery for cancer of the thoracic esophagus. 206 patients were discharged from the clinic. The survival rate for 5 years and longer was noted in 58 patients. The data and results of the treatment depending on a sum of clinical signs were treated mathematically. It is noted that the patients' survival is influenced by such factors as sex, the stage of the disease, the morphological structure of tumor, the character of course, tumor size and spread, the type of surgical intervention. An advanced course, changes in blood presence of metastases do not seem to be the reason for cancellation of the operation.     

Mandible preservation in the treatment of cancer of the floor of the mouth

A segmental anterior mandibulectomy causes severe functional disability and cosmetic problems. Many methods of reconstruction have been used but none of these procedures provides the ideal solution. There has been increasing interest in the possibility of preserving a portion of the anterior mandibular arch and still carrying out an adequate surgical excision to control the primary tumor. Over a 15-year period, 251 patients with cancer of the floor of mouth were seen and treated at Roswell Park Memorial Institute. Of this group, 34 patients underwent a marginal mandibular resection as part of their curative surgical treatment. The complication rate was acceptable and the 5-year determinate survival rate was 84%. The local control rate was excellent with only one patient developing an intraoral recurrence which was successfully treated with radiation. It is felt that these data support the theory that conservative mandibular surgery can be carried out in selected cases without jeopardizing the concept of a good cancer operation.     

Cardiac tolerance of the combination paclitaxel-anthracyclines in the context of the management of cancer of the breast

Within the past decades there has been major interest in associating the paclitaxel into the management of breast cancer patients with a strong improvement of clinical results. Moreover, doxorubicin is historically one of the major chemotherapeutic agents in breast cancer treatment. So, investigations of the combination of the paclitaxel with doxorubicin have logically taken place in the strategy of breast cancer management. Also, this association became a standard of care neoadjuvantly in locally advanced breast cancer. The aim of this review of literature consists to make a special focus on cardiac toxicity occurring after doxorubicin and paclitaxel association and to give adequate directions for the next future in this promising combination.