miR-214-5p通过靶向调控PTEN的表达对破骨分化和骨质疏松的影响

 目的 探讨miR-214-5p通过靶向调控PTEN的表达对破骨分化和骨质疏松的影响。方法 选取2019-03至2020-05在空军军医大学唐都医院外科进行脊柱手术的骨质疏松患者20例(骨质疏松组),同时选取非骨质疏松症患者20例为对照组,抽取两组骨髓血。将miR-214-5pmimics(miR-214-5pmimics组)、miR-214-5p空质粒(miR-214-5pvector组)、shZFAS1载体(sh PTEN组)、shZFAS1空载体(sh vector组)转染到骨质疏松患者细胞,对照组细胞不进行任何转染处理。采用RT-qPCR 检测骨髓单个核细胞中的miR-214-5p和PTEN mRNA及 Raw264.7单核巨噬细胞中NFaTc1、MMP9、TRAP、CTSK的mRNA水平;通过TRAP染色检测TRAP染色的阳性率;通过Western blot 检测PTEN、NFATc1、AKT和PI3K蛋白水平。结果 骨质疏松组miR-214-5p水平的表达明显高于对照组(P＜0.001),骨质疏松组PTEN的表达显著低于对照组(P=0.009);miR-214-5pmimics组中TRAP表达阳性率明显高于对照组和miR-214-5p vector组(P＜0.001);sh PTEN组中TRAP表达阳性率明显高于对照组和sh vector组(P＜0.001);miR-214-5p mimics组中的NFaTc1、MMP9、TRAP和CTSK水平显著高于对照组(P<0.001);sh PTEN组中的NFaTc1、MMP9、TRAP和CTSK水平显著高于对照组(P<0.001);与miR-214-5p mimics组相比,miR-214-5pmimics+PTEN组中TRAP表达阳性率显著降低(P＜0.001)。结论 骨质疏松症患者的骨髓单个核细胞中miR-214-5p表达上调,miR-214-5p可以调控PTEN表达,过表达miR-214-5p可能通过靶向PTEN促进破骨细胞分化。     

miR-19a-3p靶向调控CCND1基因介导FrA-1/IL-6/Stat3信号通路对乳腺癌侵袭转移的作用机制

 目的 探究miR-19a-3p靶向CCND1基因介导FrA-1/IL-6/Stat3通路对乳腺癌侵袭转移的作用机制。方法 癌细胞分组转染(空白组、阴性对照组、miR-19a-3p mimic组、siRNA-CCND1组、miR-19a-3p mimic + siRNA-CCND1组)。分别应用qRT-PCR、Western blot、MTT、划痕实验和Transwell侵袭实验检测相关基因mRNA和蛋白表达及细胞生物学行为变化趋势。结果 人乳腺癌组织和细胞中CCND1和Fra-1的表达明显上升,而miR-19a-3p明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组和阴性对照组相比,另外3组的miR-19a-3p、CCND1、FrA-1表达水平均上调(P<0.05),miR-19a-3p mimic+siRNA-CCND1组中上调更为明显(P<0.05)。各组细胞在24 h时无明显差异。48 h和96 h各组细胞增殖能力均提高。空白组与阴性对照组细胞增殖能力相比无明显差异。另外3组的细胞增殖能力均明显增强,差异有统计学意义(P<0.05),但miR-19a-3p mimic+siRNA-CCND1组中细胞增殖变化趋势较弱,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组和阴性对照组相比,另外3组细胞迁移、侵袭能力均减弱,差异有统计学意义(P<0.05),且miR-19a-3p mimic+siRNA-CCND1组迁移、侵袭能力最弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-19a-3p在乳腺癌中呈下降趋势,上调miR-19a-3p可有效抑制CCND1基因表达和FrA-1/IL-6/Stat3通路激活,从而降低乳腺癌细胞侵袭转移。     

乙肝相关肝癌组织中Jagged-1的表达及其临床意义

 目的 观察乙肝相关肝癌组织中Jagged-1蛋白的表达及其临床意义。方法 收集2008-11至2012-06就诊并接受肝切除术治疗肝癌患者的110例乙肝相关肝癌组织及其对应的癌旁组织,通过组织芯片技术检测癌及癌旁标本中Jagged-1蛋白的表达水平,并分析其与临床指标和预后的关系。结果 组织芯片提示乙肝相关肝癌组织Jagged-1蛋白高表达率(44.5%)高于对应癌旁组织(22.3%)(χ²=12.16,P<0.0001)。Jagged-1蛋白的高表达水平与微血管侵润(microvascular invation,MVI)显著相关(P<0.001)。Jagged-1高表达组患者的1、3、5年生存率(87.5%、64.1%、46.5%)均低于低表达组(96.7%、84.5%、66.9%,P=0.0139)。结论 乙肝相关肝癌组织Jagged-1蛋白的高表达水平与肝癌的MVI及不良临床预后有关。     

miR-30a-5p和NUAK1在非小细胞肺癌中的表达及对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

 目的 研究miR-30a-5p和靶基因NUAK1在非小细胞肺癌中的表达及对A549细胞增殖、迁移侵袭的影响。方法 收集2016-09至2019-03在保定市第一医院行手术切除治疗的非小细胞肺癌患者癌组织和癌旁组织标本64例,QPCR和Western blot分别检测非小细胞肺癌组织样本和细胞中miR-30a-5p和NUAK1的表达;TargetScan网站预测miR-30a-5p与NUAK1间的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验和Western blot进行验证;MTT和Transwell实验检测miR-30a-5p及联合过表达NUAK1对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果 非小细胞肺癌组织中miR-30a-5p的相对表达量(0.33±0.14)低于癌旁组织(1.00±0.21),差异有统计学意义(t=21.237,P＜0.05);非小细胞肺癌组织中NUAK1 mRNA表达(4.13±1.87)和蛋白表达(3.41±1.62)均高于癌旁组织(1.00±0.17、1.00±0.16),差异有统计学意义(t=13.335、11.844,P＜0.05)。非小细胞肺癌细胞系H460、H1299、A549中miR-30a-5p表达量(0.35±0.03、0.51±0.05、0.28±0.03)低于人正常肺上皮细胞BEAS-2B(1.00±0.11),差异有统计学意义(F=77.100,P＜0.05);H460、H1299、A549细胞中NUAK1 mRNA相对表达量(2.98±0.30、2.39±0.24、3.42±0.36)和蛋白相对表达量(3.06±0.31、2.27±0.23、4.12±0.41)均显著高于BEAS-2B细胞(1.00±0.09、1.00±0.11),差异有统计学意义(F=46.660、63.070,P＜0.05)。结论 miR-30a-5p可通过靶向NUAK1抑制非小细胞肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭,提示miR-30a-5p和NUAK1可能成为一种新的临床诊断和治疗非小细胞肺癌的靶点。     

过表达miR-26b-5p抑制HMGA1参与卵巢癌细胞上皮间质转化的机制

 目的 探究microRNA-26b-5p(miR-26b-5p)介导高迁移率族蛋白组A1(high-mobility group A1,HMGA1)基因参与卵巢癌上皮间质转化的机制。方法 对miR-26b-5p靶基因进行预测。qRT-PCR检测组织中miR-26b-5p和HMGA1的表达量。卵巢癌细胞分组转染后,qRT-PCR和Western Blot检测细胞中相关因子的mRNA和蛋白的表达量;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭,细胞划痕实验检测迁移能力。结果 卵巢癌组织中miR-26b-5p表达降低,HMGA1的表达升高(均P＜0.05)。miR-26b-5p mimic及sh-HMGA1组HMGA1和Vimentin表达降低而E-cadherin表达上调,且细胞侵袭和迁移降低(均P＜0.05);共转染miR-26b-5p inhibitor和sh-HMGA1,sh-HMGA1处理对上皮间质转化及细胞侵袭和迁移的抑制作用被逆转(均P＜0.05)。结论 过表达miR-26b-5p可抑制卵巢癌细胞中HMGA1和Vimentin表达并促进E-cadherin表达,降低细胞侵袭和迁移能力,从而抑制卵巢癌细胞上皮间质转化。     

微小核糖核酸- 29b通过靶向髓样细胞白血病- 1影响脑缺血/再灌注损伤时神经细胞凋亡

【摘要】 目的 确定微小核糖核酸（microRNA,miRNA,miR）在脑缺血/再灌注（I/R）损伤中对神经细胞凋亡的影响,并探讨其潜在机制。方法 培养小鼠成神经细胞瘤（N2a）细胞,构建氧糖剥夺（OGD）/复氧（R）模型,模拟体外脑I/R状态。N2a细胞随机分为空白对照组（control）、OGD/R组（OGD/R）、OGD/R＋转染miR-29b模拟物组（mimics）、OGD/R＋转染miR-29b抑制剂组（inhibitor）、OGD/R＋转染miR-29b模拟物阴性对照组（mimics NC）、OGD/R＋转染miR-29b抑制剂阴性对照组（inhibitor NC）。实时定量聚合酶链反应（PCR）检测各组miR-29表达变化。细胞计数试剂盒（CCK）-8和流式细胞术分别检测miR-29b和miR-29b抑制剂对N2a细胞活力和凋亡的影响。免疫印迹法检测抗凋亡蛋白髓样细胞白血病（MCL）-1、B淋巴细胞瘤（BCL）-2及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（caspase）-3表达。双荧光素酶分析验证miR-29b与MCL-1间相互作用。结果 与control组相比,OGD/R组miR-29b表达明显升高。与OGD/R组相比,mimics组N2a细胞凋亡增加,存活率降低,MCL-1、BCL-2表达下调,caspase-3表达上调,而这种效应在inhibitor组受到逆转。双荧光素酶分析显示miR-29b可通过与MCL-1的3’非翻译区（UTR）端结合下调MCL-1表达。结论 miR-29b在脑I/R损伤过程中通过靶向MCL-1促进神经细胞凋亡。这为缺血性脑卒中治疗提供了一潜在的新靶点。     

FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2在乳腺癌中的表达及临床意义

 目的 探讨叉头框转录因子M1(FOXM1)、Polo样激酶1(PLK1)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化法检测FoxM1、PLK1、HIF-1α及EZH2蛋白在803例乳腺浸润性导管癌和癌旁乳腺组织中的表达情况及其与乳腺癌组织临床病理特征间的关系。结果 FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达率分别为59.78%、27.90%、43.96%和60.40%,显著高于其在癌旁乳腺组织中的表达(29.89%、0%、3.86%、20.92%),差异具有统计学意义(P<0.05)。FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2的表达与乳腺癌的组织学分级、淋巴结转移及临床分期相关,与患者年龄、是否绝经及肿瘤大小无关(P>0.05)。PLK1、HIF-1α和EZH2蛋白的表达均与ER呈负相关关系,FOXM1和EZH2蛋白的表达与HER-2呈正相关关系(P<0.01)。FOXM1、PLK1、HIF-1α和EZH2蛋白的表达均具有正相关关系(P<0.01)。结论 FOXM1、PLK1、HIF-1α及EZH2可能协同参与了乳腺癌的发生、发展,并可能成为乳腺癌预后评估的重要指标。     

视黄醛脱氢酶1在胆囊癌中的表达及其临床意义

 目的 观察视黄醛脱氢酶1(retinal dehydrogenase 1,ALDH1A1 )在胆囊癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测59例胆囊癌组织标本,7例癌旁组织标本及6例慢性胆囊炎组织标本中ALDH1A1表达情况。结果 ALDH1A1在6例慢性胆囊炎和7例癌旁组织中全部阳性表达,在59例胆囊癌组织中,ALDH1A1表达率为62.7%(37/59),慢性胆囊炎、癌旁组织与胆囊癌组织中ALDH1A1表达差异有统计学意义(P<0.05)。ALDH1A1与疾病进展和组织分化呈负相关,表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论 胆囊癌组织中ALDH1A1蛋白的表达与疾病进展和组织分化呈负相关。     

支气管哮喘患者血清miR-155、HP及MPO水平与肺功能的关系

 目的 探讨支气管哮喘患者血清miR-155、HP及MPO水平与肺功能的关系。方法 选择2017-11至2019-09医院呼吸内科收治的支气管哮喘患者62例,其中39例处于发作期作为发作组,23例处于缓解期作为缓解组,另选择同期健康体检者12例作为健康组,对各组受试人员血清微小RNA-155 ( miR-155)、羟脯氨酸(HP)及髓过氧化物酶(MPO)水平与肺功能进行检测并对比分析。结果 发作组和缓解组HP、MPO、miR-155表达水平均明显高于健康组(均P<0.01),发作组HP(mg/L)、MPO(U/L)、miR-155表达水平明显高于缓解组(1.97±0.98 vs 1.49±0.73、757.28±111.63 vs 579.06±101.74、2.89±0.93 vs 2.02±0.83,均P<0.01);发作组和缓解组FVC、FEV₁、FEV₁/FVC、MMEF_75/25、PEF指标均明显低于健康组(均P<0.01),发作组FVC(L)、FEV₁(L)、FEV₁/FVC(%)、MMEF_75/25(L/s)、PEF(L/min)指标明显低于缓解组(2.63±0.92 vs 3.12±0.76、1.45±0.31 vs 1.87±0.30、59.26±14.25 vs 73.73±10.04、0.41±0.09 vs 0.73±0.08、138.95±15.06 vs 402.69±10.85,均P<0.01);FVC、FEV₁、FEV₁/FVC、MMEF_75/25、PEF与HP、MPO、miR-155均呈负相关性(P<0.05)。结论 支气管哮喘患者血清miR-155、HP及MPO水平均与肺功能有明显的负相关性。     

MiR-29a及其靶向基因在宫颈癌中的表达和临床意义

目的 探讨microRNA-29a(miR-29a)及其靶向DNA甲基转移酶3A（DNA-methyltransferase 3 A,DNMT3A）基因、DNMT3B基因在宫颈鳞癌和癌旁组织以及在宫颈癌细胞系Hela和人正常宫颈细胞株ECT-1中的表达差异;探讨Hela细胞株过表达miR29a后DNMT3A、DNMT3B的表达差异,为宫颈癌靶向治疗提供基础。方法 选取青海大学附属医院2015年6月—2017年6月收治的20例宫颈鳞癌患者的癌组织及癌旁组织;培养宫颈癌细胞系Hela和人正常宫颈细胞株ECT-1,qRT-PCR法检测组织和细胞中miR-29a的表达,分析miR-29a的表达差异。Western Blot法检测癌组织及癌旁组织中DNMT3A、DNMT3B的表达水平,并分析其差异。采用分子生物学方法,转染Hela细胞株过表达miR29a,测定DNMT3A、DNMT3B表达水平,并分析其差异。qRT-PCR法、Western Blot法和ELISA法检测细胞中DNMT3A、DNMT3B的表达水平,并分析其差异。结果 MiR-29a在宫颈鳞癌组织中的表达量明显低于癌旁组织;miR-29a在人宫颈癌细胞系Hela中表达量明显低于人正常宫颈细胞株ECT-1。宫颈鳞癌组织中DNMT3A、DNMT3B的表达明显高于癌旁组织。Hela细胞过表达miR29a后,DNMT3A、DNMT3B的表达均明显下降。结论 MiR-29a可能是宫颈癌的抑癌基因,它可能通过降低DNMT3A、DNMT3B的表达水平来达到抑癌作用,有望成为宫颈癌靶向治疗的潜在靶点。     

miR-7-5p/FGFR4轴与胆囊癌患者预后的关系

目的 探究miR-7-5p/FGFR4轴与胆囊癌(gall bladder cancer,GBC)患者预后的关系.方法 选取武警特色医学中心2016-06至2018-06住院手术的GBC患者47例,收集胆囊癌组织(GBC组)及癌旁组织(PCLT组),选择同期良性胆囊疾病患者43例,收集良性胆囊组织(NC组),用RT-q...     

p53调控信号转导子和转录激活子3对肺癌细胞增殖及凋亡的影响

 目的 探讨p53调控信号转导子和转录激活子3(STAT3)对肺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 细胞分组为空白对照组、阴性对照组、p53 小干扰RNA(siRNA)组、p53 siRNA+STAT3 siRNA组,采用western blot法检测组织中p53和STAT3蛋白表达水平;采用Transwell法检测转染后体外迁移能力和侵袭能力;采用流式细胞术膜联蛋白Ⅴ/碘化丙啶(AV-PI)双染法检测转染后凋亡情况。结果 肺癌组织中p53表达水平明显下调,而STAT3表达阳性率增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。转染p53的siRNA能显著上调肺癌细胞中STAT3的表达水平;p53 siRNA组和p53 siRNA+STAT3 siRNA组A549细胞凋亡率(17.91%±0.67%,22.51%±0.56%)、细胞的迁移速度[(55.16±6.50)μm/h,(63.30±5.98)μm/h]、穿膜细胞数(58.23±7.12,68.23±7.14),与空白对照组和阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 p53在肺癌中呈现低表达,p53能负向调控STAT3的表达,从而抑制其增殖和凋亡能力。     

不同化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌的临床疗效及肿瘤标志物与疗效的相关性

 目的 探讨不同化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)的临床疗效及肿瘤标志物与疗效的相关性。方法 选取2015-01至2017-06北京大学首钢医院收治的96例晚期NSCLC患者为研究对象,随机分为吉西他滨+顺铂组(GP组)和培美曲赛+顺铂组(AP组),每组48例,GP组给予吉西他滨+顺铂化疗,AP组给予培美曲赛+顺铂化疗。比较两组患者化疗疗效及肿瘤标志物的变化情况。结果 两组患者化疗后,AP组ORR(29.17%)和DCR(81.25%)均显著高于GP组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。化疗后,GP组与AP组的癌胚抗原水平分别为54.6±7.9、23.5±5.9,CA125分别为87.8±7.2、50.4±8.3。治疗前两组CEA和CA125水平相比差异无有统计学意义,治疗后两组CEA和CA125水平均较治疗前显著下降(P<0.05),治疗后AP组各指标下降程度大于GP组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 给予晚期NSCLC患者AP方案化疗能显著提高临床疗效,且明显降低患者肿瘤标志物的水平,值得推广。     

靶向LETMD1的miR-494对宫颈癌发病的作用

 目的 探讨靶向作用于LETMD1的miR-494对宫颈癌发病的作用。方法 选取2017-09至2018-03诊断为原发性宫颈癌、接受根治性子宫切除及盆腔淋巴结清扫术30例的病理标本,另选取同期因妇科良性疾病行全子宫切除30例的正常宫颈组织病理标本。检测癌组织及正常组织中 miR-494和 LETMD1的表达。结果 miR-494在宫颈癌组织中含量明显降低,与LETMD1表达呈明显负相关,且miR-494与肿瘤患者FIGO分期明显相关(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实miR-494直接作用于LETMD1 mRNA的3′UTR。集落形成试验证实miR-494通过靶向作用LETMD1抑制宫颈癌细胞的增殖。结论 宫颈癌患者miR-494与FIGO分期明显相关,miR-494可通过靶向作用于LETMD1 抑制宫颈癌细胞的增殖。     

Ⅰ期非小细胞肺癌两种切除术式效果比较

 目的 比较胸腔镜亚肺叶切除术与肺叶切除术治疗Ⅰ期非小细胞肺癌的效果。方法 入选Ⅰ期非小细胞肺癌患者210例,随机分为肺叶切除术组和亚肺叶切除术组,每组105例。随访至术后18个月。比较两组的患者特征、肿瘤特点、手术相关指标及预后。结果 两组之间,患者年龄、性别、肺癌病理分型、分期、直径和部位均无统计学差异。亚肺叶切除术组住院时间明显短于肺叶切除术组,且出血量也明显少于肺叶切除术组(P<0.05)。两组之间,全因死亡率、肺癌死亡率、复发率、局部复发率、远处复发率、心脏并发症等方面比较,均没有统计学差异。亚肺叶切除术组肺部并发症发生率明显低于肺叶切除术组(P<0.05)。结论 相对于肺叶切除术,亚肺叶切除术缩短了住院时间,减少了术中出血,减少了肺部并发症。
     

老年胆总管结石患者开腹术后降钙素原T淋巴细胞亚群的变化及临床意义

 目的 探讨开腹手术对老年总管结石患者术后T淋巴细胞亚群的影响及降钙素原的变化。方法 将老年组与中青年组患者按胆总管结石分类分别行胆管切开取石、T管引流术或胆管空肠吻合术。于术前1 d和术后1、3、7 d分别测定外周血血常规、降钙素原、T淋巴细胞及其亚群的数量等指标,进行分析。结果 老年组降钙素原比中青年组各组均明显增加(P＜0.05),老年组组内第1、3 、7 天比术前均明显增加(P＜0.05),中青年组组内第1 、3 天比术前均明显增加(P＜0.05);老年组比中青年组CD3⁺细胞各组间明显减少(P＜0.05),老年组组内第3天比术前明显减少(P＜0.05);老年组比中青年组CD8+细胞组间术前及术后第7 天明显减少(P＜0.05);老年组与中青年组CD4⁺细胞组间术前、术后第1 、7 天明显减少(P＜0.05),老年组组内第3 天与术前明显减少(P＜0.05);中青年组组内术后第7天与术前明显减少(P＜0.05);老年组与中青年组CD4⁺/CD8⁺细胞各组间均明显减少(P＜0.05),老年组组内第3天与术前明显减少(P＜0.05)。结论 老年患者降钙素原比中青年增加,老年患者T淋巴细胞亚群数量减少,开腹手术对老年与中青年胆管结石患者免疫功能影响存在差异。