伊伐布雷定肝脏转运机制的初步研究

目的：探讨伊伐布雷定肝脏转运与OCT1的相关性。方法：将雄性SD大鼠分为对照组与实验组,对照组伊伐布雷定（1 mg·kg^-1）灌胃给药,实验组OCT1抑制剂雷尼替丁（0.8 mg·kg^-1）和伊伐布雷定（1.0 mg·kg^-1）相继灌胃给药,比较2组间伊伐布雷定的药动学参数;采用原代肝细胞,分为对照组：伊伐布雷定（0.2,0.5,1 μmol·L^-1）;实验组：雷尼替丁（0.5,1.0,2.0 μmol·L^-1）+伊伐布雷定（0.2,0.5,1 μmol·L^-1）,探讨雷尼替丁对伊伐布雷定肝脏摄取的影响。结果：合用雷尼替丁后,伊伐布雷定药动学参数C_max、AUC_0-t、AUC_0-∞分别增加了115.41%,128.73%,128.05%,而CLz/F值降低了56.35%,差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。雷尼替丁明显抑制肝细胞对伊伐布雷定的摄取,抑制作用随雷尼替丁的浓度增加而增强。结论：伊伐布雷定肝脏转运很可能与OCT1有关。     

蒙特卡洛模拟评价利奈唑胺静脉治疗中国成人休克患者常见革兰阳性菌感染的标准给药方案

目的：蒙特卡洛模拟评价标准给药方案（600 mg/q12h）的利奈唑胺（LIN）静脉治疗中国成人休克患者常见革兰阳性（G⁺）球菌感染的临床有效性与安全性。方法：搜集LIN静脉给药在中国成人休克患者中的群体药动学参数及其对常见G⁺球菌的最低抑菌浓度值（MIC）和其分布频率,分别以24 h血药浓度-时间曲线下面积与MIC之比（AUC_24h/MIC）和稳态最小血药浓度（C_min^SS）作为研究微生物学疗效和临床安全性的目标指数,模拟10 000例次后得到对应目标（AUC_24h/MIC ≥80,C_min^SS<7 mg·L^-1）的达标概率（PTA）。结果：对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌和屎肠球菌,仅当MIC≤2 mg·L^-1时方可达满意抗菌活性（PTA=100%）,而对肺炎链球菌,均可达满意抗菌活性（PTA=100%）;C_min^SS与协变量血小板计数呈负相关关系,当C_min^SS <7 mg·L^-1时的PTA为6.53%。结论：对于LIN静脉治疗中国成人休克患者金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌和屎肠球菌感染,当MIC≤2 mg·L^-1时,标准给药剂量能获得较好抗菌疗效,而对于肺炎链球菌感染则均可达满意抗菌活性。此类患者标准给药剂量方案下其血小板减少症风险亦较高,必要时应根据临床情况适当减量。     

磷酸川芎嗪乳剂在大鼠体内的药动学及组织分布研究

目的： 通过研究磷酸川芎嗪乳剂在大鼠体内的药动学和组织分布，探究磷酸川芎嗪乳剂的生物利用度和脑靶向性。方法： 大鼠静脉注射50 mg·kg^-1磷酸川芎嗪制剂，给药后，在不同时间采血，最后切除大鼠心脏，肝脏，脾脏，肺，肾，和脑。所有样品均采用液相色谱-质谱/质谱联用法（HPLC/MS/MS）进行检测，用DAS 2.1.1软件使用非房室分析计算药动学参数。结果： 与参比制剂（磷酸川芎嗪注射液）相比，乳剂制剂血浆中的药动学参数无显著差异。在血浆中，乳剂的AUC_0-∞和C_max分别为（4 406.96±977.08）mg·L^-1·min和（52.131±13.61）mg·L^-1。组织分布研究发现磷酸川芎嗪乳剂较参比制剂在脑组织分布更多。结论： 磷酸川芎嗪乳剂在心、肝、脾、肺、肾中有靶向趋势，比参比制剂更易分布在组织中。磷酸川芎嗪乳剂制剂具有脑靶向性。     

槲皮素通过调节TGF-β1/Smad抑制增生性瘢痕的形成

目的：探讨槲皮素对人增生性瘢痕成纤维细胞（HSFb）及其介导的TGF-β₁/Smad信号通路中相关蛋白表达的影响。方法：提取人增生性瘢痕成纤维细胞进行原代培养并鉴定;采用CCK-8法检测不同浓度的槲皮素（50~600 μmol·L^-1）处理后的HSFb细胞活力;Western blot检测α-SMA、COL-Ⅲ、TGF-β₁、Smad2、Smad7的蛋白表达,免疫荧光检测α-SMA的表达以及HSF和HSFb中波形蛋白的表达。结果：与模型组相比,槲皮素（250,500 μmol·L^-1）可降低α-SMA蛋白的表达（P<0.05）并显著下调COL-Ⅲ蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）,其中500 μmol·L^-1槲皮素组对HSFb细胞Ⅲ-型胶原分泌的抑制作用最强,并显著降低TGF-β₁和Smad2的蛋白表达;显著上调Smad7蛋白表达并且呈浓度依赖性,差异均具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：槲皮素主要通过抑制COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β₁/Smad通路的活化从而抑制增生性瘢痕的形成。     

不同剂量薯蓣皂苷元的大鼠体内药动学研究

目的： 研究不同剂量薯蓣皂苷元的大鼠体内药物动力学特征,为阿尔茨海默病的临床前研究提供理论依据。方法： 大鼠灌胃低（17.5 mg·kg^-1）、中（35 mg·kg^-1）、高剂量（70 mg·kg^-1）薯蓣皂苷元后,于不同时间眼眶取血,以延龄草苷作为内标,血浆样品经液-液萃取后采用LC-MS/MS进行测定。利用DAS 2.0计算药动学参数。色谱、质谱条件：采用Sun Fire C₁₈（150 mm×2.1 mm,5 μm）为色谱柱,以甲醇-乙腈-10 mmol·L^-1乙酸铵（86∶11∶3）为流动相,流速为0.3 mL·min^-1,柱温40℃。采用电喷雾离子源（ESI源）,以选择反应监测（MRM）方式并在正离子模式下进行检测,用于定量的离子对分别为m/z 415.5→271.5（薯蓣皂苷元）和m/z 577.5→271.5（内标延龄草苷）。结果： 薯蓣皂苷元血药浓度在1~2 000 ng·mL^-1内线性关系良好,方法回收率在81.7%~83.9%之间,定量下限（LLOQ）为1 ng·mL^-1,日内、日间精密度RSD小于10%。药动学结果表明不同剂量薯蓣皂苷元药-时曲线符合二室模型,主要药动学参数为AUC_0-t分别为1 872,3 144,6 625 ng·min·mL^-1;C_max分别为136,276,470 ng·mL^-1;t_1/2分别为5.73,5.31,6.42 h。结论： 薯蓣皂苷元在17.5~70.0 mg·kg^-1范围内其药动学行为呈线性相关,无动力学行为差异。     

性别差异对异补骨脂素在大鼠体内吸收和分布的影响

目的：目的研究异补骨脂素（iopsoralen,IPO）在雌雄大鼠体内药动学和组织分布特征,探讨性别差异对IPO体内吸收和分布的影响。方法：通过单次灌胃给予雌雄大鼠80 mg·kg^-1IPO溶液,采用HPLC法测定不同时间点雌雄大鼠血浆和主要脏器（肝、肾、心、脾、肺）中IPO的含量,应用DAS 2.0计算主要药动学参数、SPSS 19.0进行统计学分析。结果：血浆药动学结果发现,雌雄大鼠血浆中IPO浓度变化趋势基本一致,但雌鼠血浆中AUC显著高于雄鼠。组织分布结果发现,IPO在雌雄大鼠肝肾组织中暴露量高于其他组织,其中IPO在雌鼠肝脏中AUC_0-t为（1 439.08±84.27） mg·h·L^-1,显著高于雄鼠（1 239.55±26.25） mg·h·L^-1（P<0.05）。结论：IPO在雌雄大鼠体内进程存在显著性别差异,主要表现为雌性大鼠血浆和肝组织中暴露量显著高于雄鼠,这可能是IPO易引起雌性大鼠肝损伤的原因。     

原儿茶醛在脑缺血再灌注损伤模型大鼠血浆及脑组织中的药动学特征研究

目的: 探究原儿茶醛在假手术及脑缺血/再灌注(cerebral ischemia reperfusion injury, CIRI)损伤模型大鼠血浆和脑内的药动学特征。方法: 以HPLC法测定原儿茶醛(灌胃:400 mg·kg^-1)在假手术大鼠和大脑中动脉阻塞/再灌注损伤(middle cerebral artery occlusion/reperfusion, MCAO/R)模型大鼠不同时间点(1,5,10,15,30,45,60,75,90,105,120,150,180,240,360,480 min)的血药浓度,明确其在CIRI病理状态下的血浆药动学特征;同法测定平衡相下(11 min)原儿茶醛在假手术大鼠和MCAO/R模型大鼠脑内不同区域的分布含量,明确其脑组织分布特征;并结合微透析取样技术,测定原儿茶醛(静注:100 mg·kg^-1)在假手术大鼠和MCAO/R模型大鼠局部脑区不同时间点(0,15,30,45,60 min)的脑药浓度,明确其在大鼠不同脑区的药动学特征。结果: 灌胃给予原儿茶醛后,假手术大鼠体内11 min达血药浓度峰值,AUC_0-t为(10 028.52±2 119.42) μg·L^-1·h^-1,t_1/2为5.60 h;MCAO/R模型大鼠体内,7.50 min达血药浓度峰值,AUC_0-t下降至(6 924.17±3 627.70) μg·L^-1·h^-1,t_1/2为5.31 h;在平衡相下,假手术大鼠的脑内分布浓度为:皮层＞纹状体＞海马＞小脑;MCAO/R模型大鼠的脑内分布浓度为:皮层＞小脑＞海马＞纹状体,病理状态下各脑区分布浓度均明显提高;静注给予原儿茶醛后,假手术大鼠皮层区的AUC_0-t为(1 295.11±216.57) mg·L^-1·min^-1,T_max为30 min,t_1/2为17.83 min;MCAO/R模型大鼠皮层区的AUC_0-t为(2 498.58±128.30) mg·L^-1·min^-1,T_max为30 min,t_1/2为10.35 min。结论: CIRI的病理状态下,大鼠灌胃给予原儿茶醛吸收速度加快,吸收程度下降;脑内暴露量增多,脑内维持时间变短,平衡相下其在皮层区分布浓度最高,CIRI的病理状态会使其脑内分布浓度增加。     

利伐沙班在缺血性脑卒中合并小腿肌间静脉血栓形成患者中的疗效与安全性影响因素分析

目的：探讨利伐沙班在缺血性脑卒中（IS）合并小腿肌间静脉血栓（CMVT）患者中疗效与安全性的影响因素。方法：将134例IS合并CMVT患者根据利伐沙班剂量分为低剂量（10 mg·d^-1和15 mg·d^-1）组（n=80）和标准剂量（20 mg·d^-1）组（n=54）,收集并比较2组患者临床基线资料。随访记录治疗后的无效事件和出血事件,采用单因素和多因素Logistic回归分析危险因素,并建立风险预测模型。结果：低剂量组患者肌酐清除率（CrCl）<50 mL·min^-1、合用阿司匹林比例显著高于标准剂量组（P<0.05）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）>2.6 mmol·L^-1比例显著低于标准剂量组（P<0.05）。低剂量组患者治疗无效事件发生率明显高于标准剂量组、出血事件发生率明显低于标准剂量组（P<0.05）。多因素分析显示,标准剂量（20 mg·d^-1）是影响无效事件和出血事件的独立危险因素（P<0.05）,美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分、合并冠心病是影响出血事件的独立危险因素（P<0.05）。出血事件联合预测因子Z=-3.642+1.341X_剂量+0.153X_NIHSS+1.334X_{合并冠心病},ROC曲线的AUC值为0.833,表明有良好的预测性能。结论：低剂量利伐沙班（10 mg·d^-1和15 mg·d^-1）可能更适合IS合并CMVT患者,临床应结合剂量、NIHSS评分、合并冠心病3种危险因素综合评估出血风险。     

麦冬皂苷B促进细胞铁死亡抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖的机制

目的：研究麦冬皂苷B对A549细胞增殖的影响及其作用机制。方法：细胞计数试剂盒（CCK-8）检测不同浓度麦冬皂苷B处理后A549细胞的存活率;将A549细胞分为对照组和麦冬皂苷B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组干预24 h,分析细胞克隆形成情况;DCFH-DA、C11-BODIPY、FeRhonox-1荧光探针分别检测细胞内活性氧、脂质过氧化水平、Fe²⁺浓度的荧光强度变化;GSH和MDA试剂盒分别检测细胞内GSH和MDA水平;Real-time PCR法和Western blot法分别检测SLC7A11、GPX4、SLC40A1、Transferrin、Nrf2、HO-1的mRNA水平和蛋白表达情况。结果：与对照组比较,A549细胞存活率随麦冬皂苷B药物浓度增大逐渐降低,其IC₅₀为 23.7 μmol·L^-1。麦冬皂苷B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著细胞克隆形成（P<0.05）。与对照组比较,OP B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著增强细胞内脂质过氧化水平的荧光强度和脂质过氧化产物MDA 积累（P<0.05）,且呈剂量依赖性,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著增强细胞内ROS和亚铁离子的荧光强度（P<0.05）,明显降低细胞内GSH含量（P<0.05）。RT-PCR结果显示,与对照组比较,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低GPX4、SLC7A11 mRNA 水平（P<0.05）,只有OP B高（48 μmol·L^-1）剂量组显著降低SLC40A1 的mRNA水平;Western blot结果显示,与对照组比较,OP B低、中、高（12,24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低SLC7A11的蛋白水平（P<0.05）,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低GPX4、SLC7A11的蛋白水平（P<0.05）。与对照组比较,OP B中、高（24,48 μmol·L^-1）剂量组显著降低Nrf2的mRNA水平和Nrf2和HO-1的蛋白水平（P<0.05）,而OP B高（48 μmol·L^-1）剂量组显著降低HO-1的mRNA水平（P<0.05）。结论：麦冬皂苷B能够抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖,其机制可能与抑制Nrf2/HO-1抗氧化通路促进细胞铁死亡有关。     

两种单硝酸异山梨酯缓释片在中国健康人体内的生物等效性研究

目的：研究2种单硝酸异山梨酯缓释片在中国健康人体内的药物动力学特征和生物等效性。方法：采用单次给药、随机、开放、两周期、双交叉的试验设计,健康受试者分别在空腹和餐后条件下口服单硝酸异山梨酯缓释片受试制剂与参比制剂各40 mg,利用高效液相色谱-质谱法测定血浆中药物浓度,计算相关药动学参数并评价其生物等效性。结果：（1）空腹试验中受试制剂与参比制剂的C_max分别为（546.52±102.32）,（521.71±85.80）ng·mL^-1,AUC_0-t分别为（7 398.89±1 298.56）,（7 278.29±1 173.38）ng·h·mL^-1,AUC_0-∞分别为（7 488.82±1 311.38）,（7 372.49±1 172.09）ng·h·mL^-1。（2）餐后试验中受试制剂与参比制剂的C_max分别为（529.41±82.52）,（502.21±65.15）ng·mL^-1,AUC_0-t分别为（7 305.10±1 320.74）,（7 066.12±1 136.99）ng·h·mL^-1,AUC_0-∞分别为（7 393.21±1 317.32）,（7 160.22±1 140.11）ng·h·mL^-1。（3）空腹和餐后试验中受试制剂与参比制剂C_max、AUC_0-t和AUC_0-∞几何均数的90%CI均在80.00%~125.00%范围内,表明2种制剂具有生物等效性。结论：单硝酸异山梨酯缓释片受试制剂与参比制剂在中国健康志愿者中具有生物等效性。     

盐酸沙格雷酯对酒石酸美托洛尔大鼠体内药动学的影响

目的:考察盐酸沙格雷酯与酒石酸美托洛尔合用6 d后,酒石酸美托洛尔在大鼠体内药动学变化。方法:将40只大鼠随机分为实验组和对照组,每组20只,实验组灌胃盐酸沙格雷酯(10 mg·kg)每天3次和酒石酸美托洛尔(27 mg·kg^-1)每天一次,连续6 d;对照组灌胃酒石酸美托洛尔(27 mg·kg^-1)每天一次,连续6 d。2组于第7天灌胃给药后5 h内眼内眦取血,血浆样品处理后用UPLC-UV测定并绘制相应的药时曲线,DAS 2.1.1软件拟合药动学参数后,用SPSS 13.1软件对2组药动学参数做统计学分析。结果:实验组和对照组主要药动学参数如下:AUC_0-5h分别为(0.98±0.41) mg·h·L^-1和(0.84±0.40) mg·h·L^-1;AUC_0-∞分别为(1.08±0.42) mg·h·L^-1和(0.91±0.41) mg·h·L^-1;t_1/2分别为(1.40±0.36) h和(1.23±0.36)h;t_max分别为(0.66±0.31)h和(0.51±0.10)h;V分别为(57.02±23.46)L·kg^-1和(58.19±22.61)L·kg^-1 ;CL分别为(28.60±10.89)L·h^-1·kg^-1和(33.94±13.59)L·h^-1·kg^-1;C_max分别为(0.62±0.39)mg·L^-1和(0.71±0.40)mg·L^-1。数据显示2组间无显著性差异(P>0.05)。结论:盐酸沙格雷酯与酒石酸美托洛尔合用6 d前后,酒石酸美托洛尔在大鼠体内的药动学参数无显著性变化。     

正常重力和模拟微重力下大鼠左氧氟沙星的药动学比较

目的:比较在正常重力和模拟微重力环境下大鼠左氧氟沙星的药动学特征。方法:大鼠随机分为正常重力组和模拟微重力组,采用Morey's尾吊模型制备模拟微重力大鼠模型,模拟微重力第8天,正常和模型大鼠分别灌胃20mg·kg^-1盐酸左氧氟沙星,给药后设定时间点于眼眶静脉丛采血,采用高效液相色谱-质谱联用方法测定大鼠血浆左氧氟沙星浓度,采用WinNonlin软件计算左氧氟沙星药动学参数C_max,t_max和AUC_0-24h。结果:正常重力和模拟微重力大鼠左氧氟沙星C_max分别为(3.65±0.20),(4.00±0.69)μg·mL^-1;t_1/2β分别为(4.27±1.09),(5.85±1.32)h;AUC_0-24h分别为(18.53±4.06),(14.14±3.78)μg·h·mL^-1。模拟微重力组AUC_0-24h显著降低,t_1/2β显著延长。结论:与正常重力组比较,灌胃盐酸左氧氟沙星模拟微重力组大鼠的药动学性质发生了变化,模拟微重力环境下灌胃左氧氟沙星的疗效可能降低,研究结果提示微重力环境口服盐酸左氧氟沙星的给药剂量可能需要调整。     

熊果酸对大鼠肾小球系膜细胞凋亡及TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的： 观察熊果酸（ursolic acid,UA）对活化的大鼠肾小球系膜细胞（mesangial cells,MCs）凋亡与TGF-β₁/smads信号通路的影响,探讨UA抗肾纤维化的作用机制。方法： 原代培养并分离、纯化大鼠肾小球系膜细胞,转化生长因子β₁（TGF-β₁）刺激活化后,熊果酸按低剂量（2.5 μmol·L^-1）、中剂量（5 μmol·L^-1）、高剂量（10 μmol·L^-1）进行干预。Cell counting kit-8（CCK-8）及流式细胞仪分别检测系膜细胞活力及凋亡率,免疫印迹法测定系膜细胞TGF-β₁受体（TβRI、TβRII）、磷酸化蛋白P-smad信号分子表达的变化。结果： 5 μg·L^-1 TGF-β₁明显激活系膜细胞增殖,上调TGF-β₁受体表达及Smad2的磷酸化,抑制系膜细胞凋亡。低、中、高剂量熊果酸均能抑制系膜细胞增殖,促进凋亡,并下调系膜细胞TGF-β₁受体表达,抑制Smad2的磷酸化。结论： 熊果酸可通过影响TGF-β₁/Smads信号通路,诱导系膜细胞凋亡,拮抗细胞增殖,这可能是熊果酸抗肾脏纤维化的部分细胞学机制。     

基于CCR5受体的中药化合物抑制剂的虚拟筛选及活性评价

目的： 以C-C趋化因子受体5（C-C chemokine receptor type 5,CCR5）为靶点,利用计算机辅助药物设计技术中的虚拟筛选技术、体外抗病毒活性实验、细胞毒性测试以及分子动力学实验筛选出低毒性、高抗艾滋病病毒（HIV）活性的中药化合物抑制剂,并探究其内在结合机制。方法： 接受者操作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）评估Ledock、AutoDock Vina对接软件对于CCR5结构灵敏性,选择适合CCR5抑制剂筛选的对接软件,运用多级筛选的策略对中药系统药理数据库和分析平台（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP）中的中药化合物进行筛选。利用荧光素酶报告基因的表达检测中药化合物的抗HIV活性,细胞毒性实验测试中药化合物对MAGI-CCR5、L02细胞毒性,分子动力学实验验证中药化合物与CCR5的结合作用。结果： ROC曲线确定了分子对接软件（Ledock,AUC=0.899）,虚拟筛选得到8种潜在拮抗CCR5的中药天然小分子;抗HIV活性实验及细胞毒性测试获得2个低毒性、高抗HIV活性中药化合物MT[IC₅₀,（21.79±4.12）μmol·L^-1;CC_50MAGI-CCR5,（170.20±7.75）μmol·L^-1;CC_50L02,（108.04±11.64）μmol·L^-1]及FY[IC₅₀,（6.69±1.40）μmol·L^-1;CC_50MAGI-CCR5,（97.82±10.57）μmol·L^-1;CC_50L02,（114.70±10.40）μmol·L^-1]。分子动力学实验表明,MT-CCR5、FY-CCR5体系均方根偏差（root mean square deviation,RMSD）值均较小,平均分别为2.77 Å、2.18 Å,表明两化合物可与CCR5紧密结合,两者与CCR5结合的主要作用力包括氢键（结合氢键平均个数分别为5.19和4.65个）、范德华力（MT_{ΔE vdw}=－232.04±3.45 kJ·mol^-1,FY_{ΔE vdw}=－193.66±0.56 kJ·mol^-1）及非极性相互作用（MT_{ΔE vdw±ΔG nonpolar}=－255.73±4.03 kJ·mol^-1,FY_{ΔE vdw±ΔG nonpolar}=－222.39±0.60 kJ·mol^-1）。结论： 中药化合物MT和FY可与CCR5结合从而具有一定的抗HIV活性,可作为先导抗病毒中药化合物进行下一步结构改造。