急性冷、热应激对肉鸡肝脏和心脏组织中HSPs表达的影响

将45只28日龄罗斯308肉鸡随机均分为三组进行急性应激处理:热应激组在急性热应激下持续饲养6 h(温度为39℃,湿度为90%);冷应激组在急性冷应激刺激下持续饲养6 h(温度为11℃,湿度为90%);对照组鸡群在正常饲养条件下饲养(温度为26℃,湿度为60%)。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分别对肝脏和心脏组织中的4种热应激蛋白基因(HSP60、HSP70、HSP90、HSP110)的表达量进行对比分析。结果表明:在心脏组织中,HSP60表达量在冷、热应激下均无显著变化(P0.05);HSP90表达在冷应激下显著下降(P0.05);HSP70表达在冷、热应激下均显著上升(P0.05、P0.01);HSP110表达在冷应激下无显著变化,在热应激下极显著上升(P0.01)。在肝脏组织中,HSP60在冷应激下表达量显著下降(P0.05),热应激下表达无显著变化(P0.05);HSP70和HSP110在热应激条件下表达量极显著上升(P0.01);HSP90表达量在冷、热应激下均无显著变化(P0.05)。结果揭示:急性热应激相比于急性冷应激对应激蛋白的表达影响更显著;在急性热应激条件下,心脏和肝脏组织中HSP70和HSP110表达量均极显著上升。     

奶牛热应激对不同泌乳阶段生产性能和血清激素浓度的影响

<正>热应激不仅会导致奶牛生产性能和繁殖性能降低,还能引起一些血液激素及热休克蛋白70(HSP70)浓度的变化。近年来,国内外关于奶牛热应激的机理研究已有大量的文献报道,但关于热应激对不同泌乳阶段奶牛血清激素及HSP70浓度影响的研究报道较少,且研究结果不尽相同。因此,本试验旨在研究热应激对不同泌乳阶段奶牛生产性能、血清激素和HSP70浓度的影响,为进一步揭示奶牛热应激的发生机理及合理制订缓解奶牛热应激的     

黄芩苷对热应激条件下LLC-PK1细胞HSP70表达的影响

为了探讨不同浓度黄芩苷对热应激条件下猪肾小管上皮(LLC-PK1)细胞HSP70表达的影响,筛选出黄芩苷诱导热应激条件下细胞HSP70表达的最佳浓度。将培养的LLC-PK1细胞随机分为7个组,Ⅰ组为37℃常温对照组,Ⅱ组为42℃单纯热应激组,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组和Ⅶ组分别为42℃热应激并用不同浓度黄芩苷(0.01~100μg/m L)处理组,运用实时荧光定量PCR和Western Blot检测HSP70 m RNA及蛋白的表达。结果显示,42℃单纯热应激能显著诱导LLCPK1细胞HSP70的表达;一定浓度范围内的黄芩苷(0.1~10μg/m L)处理的LLC-PK1细胞HSP70表达显著高于42℃单纯热应激;黄芩苷(0.01~100μg/m L)能显著上调热应激条件下LLC-PK1细胞HSP70的表达,且1μg/m L的黄芩苷上调效果最显著。     

犬热应激过程中HSP70和免疫相关细胞因子的变化

为研究热应激造成犬免疫机能损伤的机制及损伤过程中免疫相关细胞因子的变化规律,分别在夏季持续高热天气中每隔7d、分5次采集了拉布拉多犬的血清和外周血单个核细胞(PBMC),检测血清中皮质醇(COR)、热休克蛋白70(HSP70)、白细胞介素2((IL-2)和白细胞介素(IL-10)、Toll样受体2(TLR-2)和Toll样受体4(TLR-4)的含量及PBMC中HSP70、IL-2、IL-10、TLR-2、TLR-4的mRNA的表达,并与春季非应激温度下检测的同类指标进行比较。结果显示,夏季持续高热天气中犬长期处于应激状态,其PBMC中HSP70mRNA表达上调,IL-2、IL-10、TLR-2、TLR-4mRNA表达下调;血清中COR浓度持续高于正常值,HSP70浓度升高,IL-2、TLR-2浓度未发生显著变化,IL-10、TLR-4浓度显著低于正常水平。热应激条件下PBMC中白介素和Toll样受体mRNA表达下调,可能是导致犬的免疫功能抑制、抗感染免疫机能下降的原因。     

热休克蛋白70生物学功能及在家禽组织中的表达

热休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)是生物细胞在受到热应激等应激源刺激后所产生一类多肽类蛋白质,其中HSP70是HSP家族中最重要、最保守且表达最广泛的蛋白之一,其普遍存在于各种生物体之中。现对HSP70调节细胞凋亡、增强细胞耐热、细胞抗氧化、机体免疫和分子伴侣等生物学功能进行综述,并对其分子调控机制及在家禽组织中的表达水平作了阐述,为进一步探讨HSP70调控家禽的热应激反应及分子机制奠定理论基础。     

亚洲水牛热休克蛋白70的纯化、鉴定及表达动力学

本试验旨在研究亚洲水牛热休克蛋白70(heatshock protein70,HSP70)在淋巴细胞中的诱导、纯化和鉴定,同时还研究了HSP70在不同温度和时间段的诱导和表达动力学,用腺苷二磷酸-琼脂糖柱免疫亲和层析法纯化HSP70,并用鼠抗HSP70单克隆抗体经Western blotting法鉴定纯化的蛋白质,水牛淋巴细胞的HSP70分子质量约为68ku,低于牛脑HSP70的分子质量。用间接抑制酶联免疫吸附试验(ELISA)测定纯化的HSP70,纯化后获得大量HSP70。为测定温度和时间变化对HSP70诱导和表达模式的影响,把水牛淋巴细胞分为3个不同温度处理组,即38℃处理48h,之后继续在45℃条件下处理3h;②42℃条件下处理3h;③45℃条件下处理3h。3组细胞活力分别为68%、63%、51%;HSP70水平分别为58.30±4.37、42.59±9.04、21.95±6.79ng/百万细胞。结果表明,较高强度和较长时间的温度辐照造成水牛淋巴细胞HSP70的较高诱导以维持细胞自动调节,然而,淋巴细胞中HSP70的直接诱导依赖于热辐射的大小(应激水平)和热辐射的时间(应激时间)。     

急性冷应激对阿勒泰羊HSP60、HSP70和HSP90基因mRNA表达的影响

为研究急性冷应激通过影响热休克蛋白含量的变化对阿勒泰羊抗寒性能、生产性能及抗病性能等的影响,试验设置常温组(15℃±2℃)与冷应激组(-25℃±2℃),每组各5只羊,屠宰后分别采集急性冷应激组(冷应激24 h后)和常温组的心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织。采用实时荧光定量PCR技术对HSP60、HSP70和HSP90 mRNA含量变化进行检测,并对HSP60、HSP70和HSP90基因进行同源性分析。结果显示,HSP70和HSP90基因与已有绵羊序列同源性高于99%,而HSP60基因与已有波斯金牛序列同源性高于99%;冷刺激后HSP60基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肾脏中的表达量差异极显著(P0.01);冷刺激后HSP70基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏和肾脏组织中的表达量差异极显著(P0.01);冷刺激后HSP90基因在心脏、肝脏、脾脏和肾脏组织中的表达较常温组均升高,且在肝脏组织中表达量差异显著(P0.05),而在脾脏和肾脏组织中的表达量差异极显著(P0.01)。表明急性冷应激极大程度地刺激了机体的产热机能,通过通路中的产热相关基因的相互调节使其能量代谢发生改变,从而提高细胞生存率,增强机体对环境胁迫的耐受力,能更好地适应环境温度的变化。试验结果为进一步深入研究急性冷应激对阿勒泰羊机体的影响提供一定理论依据。     

急性热应激鹅心和肝和肺及肾脏组织中HSP70 mRNA及蛋白的表达

选取1日龄健康雁鹅60只,随机分为6组,单笼饲养于环控仓内。6周龄时,A组置于(22±1)℃作为对照,B、C、D、E、F组分别施于2、4、6、8 h和10 h(40±1)℃的急性热应激处理,处理后立即剖杀,取心、肝、肺和肾脏组织,实时荧光定量PCR测定HSP70 mRNA表达量,免疫组织化学方法测定HSP70表达量。结果表明:急性热应激处理可显著提高各组织中HSP70 mRNA及HSP70蛋白的表达水平,但不同组织出现显著变化的时间以及随热应激时间延长的变化规律存在差异。心脏组织HSP70 mRNA和蛋白表达量均在热应激2 h后出现显著升高(P0.05),热应激4 h后达到最高值,8 h后降至对照组水平,遵循二次曲线回归模式;肝脏热应激4~10 h间HSP70及其mRNA均显著高于对照组(P0.05),但未表现出显著的线性与二次回归趋势;肺脏HSP70 mRNA表达水平在热应激2~10 h间显著高于对照组(P0.05),HSP70则从热应激4 h起才显著升高,但二者随热应激时间延长均呈显著的线性升高规律;与肺相似,肾脏HSP70及其mRNA表达量随热应激时间的变化趋势也遵循线性回归模式,两者均在热应激4~10 h显著升高(P0.05)。     

急慢性冷应激对热休克蛋白及炎性因子的影响

为了探讨冷应激对雏鸡肝脏中热休克蛋白(HSP)及炎性因子的影响,试验将120只1日龄伊莎公鸡饲喂15 d后随机分成12组进行急慢性冷应激处理。急性冷应激处理分为1个对照组和5个试验组,慢性冷应激处理分为3个对照组和3个试验组。急性冷应激条件下分别饲养0,1,3,6,12,24 h,慢性冷应激条件下分别饲养5,10,20 d,应激处理结束后迅速剖杀伊莎公鸡,取肝脏组织,采用总RNA的提取及反转录、实时荧光定量PCR反应和Western-blot技术检测HSP60、HSP70、HSP90、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及炎性因子PGE合成酶(PGE synthase)、环氧化酶-2(Cox-2)、核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA及蛋白的表达情况。结果表明:RNA的纯度和完整性符合要求。急慢性冷应激均可导致鸡肝脏HSP60、HSP70、HSP90、GRP78 mRNA表达明显上调,HSP70、GRP78蛋白表达与相应mRNA表达趋势一致;同时急慢性冷应激均可导致鸡肝脏炎性相关因子mRNA及蛋白表达明显上调。说明急慢性冷应激可导致肝脏炎性因子及HSP的表达增加。     

葛根素对热应激致牛睾丸支持细胞氧化损伤的保护作用

葛根素(Pue)是从中药野葛或甘葛藤根中提取的黄酮类化合物,有明显的抗氧化功能。Pue是否有对热应激时牛睾丸支持细胞(SCs)保护作用尚不清楚。本研究采用42℃热应激1 h,然后34℃恢复6 h。用CCK-8检测细胞存活率;用Hoechst33258检测细胞凋亡;用分光光度法检测细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的变化,以及Western-Blot检测HSP70蛋白表达。结果显示,热应激后细胞存活率下降,细胞发生凋亡,产生氧化损伤。葛根素和维生素E可以极显著降低热应激时细胞MDA含量,显著增加SOD、CAT和GSH-Px活力。Pue与维生素E组相比无显著性差异。此外,葛根素可显著增加受热应激SCs中HSP70蛋白的表达。上述结果表明,葛根素能减少热应激下SCs的氧化损伤,其机制可能与提高抗氧化酶活性及增加热休克蛋白HSP70的表达有关。     

加减白虎汤对奶牛热应激蛋白的影响

为了研究加减白虎汤对奶牛HSP70的影响,试验以中药白虎汤为基础方进行加减制成散剂给奶牛服用,缓解奶牛热应激,并用流式细胞仪技术测定试验过程中奶牛淋巴细胞中HSP70含量的变化。结果表明:该组方能够提高奶牛HSP70的水平,可有效缓解奶牛热应激。     

小鼠卵巢HSP70诱导表达的免疫荧光组织化学研究

试验采用免疫荧光组织化学法,检验了经历不同温度热应激后,在不同恢复期内小鼠卵巢组织HSP70的诱导表达,确立了HSP70诱导表达模式。结果表明：随着热应激温度的升高,卵巢组织HSP70的表达量增加,表达持续期延长,特别是经历了预应激小鼠的HSP70表达更显著。这说明在一定的热应激条件下。小鼠卵巢组织可发生HSP70的诱导表达,其表达量和表达持续期与热应激强度相关,而且热应激可显著促进HSP70的表达。     

热休克蛋白70在热应激鸡原代心肌细胞中的表达与定位

为研究热应激后鸡原代心肌细胞中热休克蛋白70(HSP70)的表达量及其定位的变化,试验将体外培养的鸡原代心肌细胞分为6组,其中1组作为对照(未进行热应激处理),其余5组于42℃热应激处理0.5,1,2,4,8 h,Western-blot检测HSP70在6组鸡原代心肌细胞中的相对表达量,间接免疫荧光法测定热应激处理1 h后HSP70在鸡原代心肌细胞中的定位。结果表明:热应激后HSP70在鸡原代心肌细胞中的表达量呈先上升后下降趋势;与对照相比,热应激8 h后鸡原代心肌细胞的HSP70表达量显著降低(P0.05);HSP70在对照与热应激1小时时的心肌细胞中均有表达,且在细胞浆与细胞核中均有分布,但主要分布于细胞浆中。说明热应激对HSP70在鸡原代细胞中的表达产生影响,但对其在细胞中的分布无明显影响。     

HSP70在急性热应激蛋鸭脾脏表达变化的研究

采用半定量RT-PCR与Western-blotting方法检测相同温度、不同时间(3、5、7h)热应激处理鸭脾脏组织中HSP70基因的表达水平,以研究热应激对HSP70基因表达的影响。结果表明:与对照组相比,热应激组蛋鸭脾脏HSP70 mRNA转录水平在热应激进行到3h时呈现下降趋势,但是差异不显著;而进行到5h时则出现显著(P0.05)的回升;热应激组蛋鸭脾脏HSP70蛋白表达水平在热应激进行到5h时出现显著下降(P0.05),表明急性热应激对蛋鸭脾脏组织HSP70基因表达具有重要影响。     

热应激绍兴鸭不同组织HSP70基因mRNA表达研究

研究蛋鸭热应激条件下不同组织中热休克蛋白70(HSP70)基因mRNA表达规律,为揭示蛋鸭热应激反应机理提供参考。60只绍兴蛋鸭25℃饲养20d,其中30只进行40℃热应激处理1h,采取荧光定量PCR方法分别测定不同组织中HSP70mRNA的表达水平。试验组与对照组相比,肝脏、脾脏和胰腺组织HSP70mRNA表达差异不显著,其他6种组织HSP70基因表达量均有不同程度的增加,试验组心脏、腿肌、垂体、下丘脑、胸肌、肾脏中HSP70基因表达量分别高于对照组3.6倍、2.8倍、2.7倍、2.4倍、2.2倍和1.57倍。     

HSP70家族的分类及基因结构与功能

热应激蛋白 (HSPs)作为分子伴侣在应激状态下占有重要地位 ,其中热应激蛋白70 (HSP70 )家族由于在应激反应中的敏感性 ,以及在临床实践中的各种作用而成为研究的热点。HSP70家族成员众多 ,它们在进化上高度保守 ,种属间同源性高 ,并且在正常细胞内和应激状态下均有表达。当进入应激状态时 ,机体通过对HSP70mRNA的优先翻译和增强其稳定性等调控机制的变化以适应需要。HSP70家族的功能表现在多方面 ,作为分子伴侣 ,HSP70家族在应激状态下帮助需要折叠的蛋白质正确折叠 ,加快正常蛋白质合成的恢复 ;在细胞保护方面 ,HSP70表达的增加可以缓解细胞所受伤害 ,增强机体对应激的抵抗力 ;同时 ,HSP70在抗细胞凋亡、抗氧化和免疫反应中也起着重要作用     

动物冷应激反应中多种基因调控机制的研究

冷应激可引起动物生产性能下降,诱发多种疾病,甚至造成死亡。研究动物冷应激发生机制,探索科学的应激监测方法,对提高应激预防水平,保障畜牧业发展有重要意义。动物应激可涉及多种基因表达的改变。作者简要综述了包括抗冻蛋白(AFP)基因、热休克蛋白(HSP70)基因、即刻早期基因(c-fos)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)基因在动物冷应激反应中的表达调控机制。     

白藜芦醇对热应激诱导的山羊小肠上皮细胞炎性反应调节作用的研究

本试验旨在探究白藜芦醇对热应激(HS)诱导的山羊小肠上皮细胞炎性因子转录的影响。采用生长良好的第4代山羊小肠上皮细胞(GIE细胞),分为空白对照组(37℃)、热应激组(42℃)、42℃热应激加白藜芦醇组(5、15、30μmol·L~(-1));加药预处理6 h后进行热应激处理6 h。通过CCK-8法检测白藜芦醇细胞毒性;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白藜芦醇对热应激诱导的细胞因子分泌的影响;采用生化法检测白藜芦醇对热应激诱导的GIE细胞抗氧化性能的影响;利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测白藜芦醇对热应激诱导的GIE细胞HSP70、IL-1β、TNF-α、IL-8和NF-κB基因转录的影响。结果显示:不同浓度(5、15、30μmol·L~(-1))的白藜芦醇可不同程度地提高热应激诱导的GIE细胞GSH-Px、SOD及T-AOC活性,极显著降低脂质过氧化物MDA含量(P0.01);不同浓度(5、15、30μmol·L~(-1))的白藜芦醇能不同程度地抑制热应激诱导的GIE细胞IL-1β、IL-2、IFN-γ和TNF-α的分泌,并极显著降低炎性模型细胞IL-1β、TNF-α、IL-8、HSP70和NF-κB的基因转录水平(P0.01)。结果提示,白藜芦醇可调节热应激诱导GIE细胞炎性模型中HSP70基因表达和炎症因子的产生及表达,促进抗氧化酶活力,具有显著的抗炎活性,其抑炎作用可能与抑制NF-κB信号通路相关。     

冷应激对东北野猪成纤维细胞HSP90 mRNA转录水平的影响

为了揭示热休克蛋白90基因(Heat shock protein 90,HSP90)在细胞冷应激反应过程中的时空表达特性.以东北野猪成纤维细胞为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术分析了4、15、25和32℃不同强度冷应激条件下细胞内HSP90 mRNA转录变化规律.结果表明,在低温处理过程中,HSP90 mRNA转录量在各温度均未见显著增加(P＞0.05)；在冷应激的复温培养过程中,HSP90 mRNA转录量在4和15℃处理4h后复温培养8h内显著增加(P＜0.05),峰值出现在6h,在25和32℃处理4h后复温培养8h内均未见显著增加；细胞在4和15℃处理2、4、6和8h后,复温培养4h,HSP90 mRNA转录量随处理温度的降低和时间的延长而增加,在25和32℃处理2、4、6和8h后,复温培养未能显著诱导HSP90 mRNA的转录.结果提示,冷应激诱导东北野猪成纤维细胞内HSP90 mRNA转录量的增加,不是发生在低温处理的应激阶段,而是发生在复温后的细胞应激阶段,温和冷应激(25～32℃)未能诱导复温后HSP90 mRNA转录量的显著增加,强度冷应激(4～15℃)诱导复温后HSP90 mR-NA转录量的显著增加,且与冷应激的强度和时间成正比.     

温和冷应激及复温对牦牛卵巢颗粒细胞的影响

细胞冷应激反应是一个复杂的过程,它包括低温本身的应激阶段和复温后的应激阶段。本研究以牦牛卵巢颗粒细胞为研究对象,利用实时荧光定量PCR、Western blot技术,分析温和冷处理1、5d及复温1、2、4、8及24h条件下,细胞内CIRBP、HSP70及P53变化规律。结果显示,细胞在25℃培养5d,然后通过复温至37℃,会影响细胞生理状态以及诱导细胞应激反应。CIRBP的表达量在25℃温和冷处理第1天开始上升,并且在复温后24h左右恢复到正常水平。HSP70的表达量在37℃复温培养后逐步上升,复温8h出现峰值,随后下降。P53mRNA表达水平在复温培养4h出现峰值,随后下降,并且其在CIRBP及HSP70mRNA高表达时,均有明显的下降。结果表明,低温会诱导细胞CIRBP mRNA和蛋白表达水平的上升;HSP70能够被冷应激后的复温诱导;CIRBP和HSP70都具有抗应激损害和细胞凋亡的作用。这些数据将为亚低温和复温在各种研究和治疗领域的应用提供参考。