沙眼衣原体E型DNA疫苗细胞免疫效应研究

目的 研究构建的沙眼衣原体E型DNA疫苗所产生的细胞免疫效应。方法 以BALB/c小鼠为实验动物,采用肌内接种免疫的方式,将小鼠分为接种空质粒的阴性对照组、DNA疫苗免疫组和接种灭活沙眼衣原体 E型原体的阳性对照组。通过观察小鼠后足垫局部的迟发型超敏反应、沙眼衣原体原体刺激后脾淋巴细胞增殖试验、ELISA检测血清IFN-γ水平、实验动物经生殖道进行同型沙眼衣原体攻击后局部的衣原体培养情况以及局部组织病理学变化来研究所构建疫苗的细胞免疫效果。结果 DNA疫苗组和灭活原体组小鼠的迟发型超敏反应水平高于阴性对照组。空质粒组、DNA疫苗组和灭活原体组的脾淋巴细胞刺激指数分别为1.48 ± 0.15、2.35 ± 0.25、3.81 ± 0.30,后两组与空质粒组比较差异有统计学意义,且灭活原体组增殖更明显。三组的血清IFN-γ水平分别为（309.2 ± 157.9） μg/L、（593.3 ± 342.6） μg/L、（2891.7 ± 1048.8） μg/L;DNA疫苗组和灭活原体组与空质粒组比较,差异有统计学意义,且灭活原体组IFN-γ水平更高。沙眼衣原体E型原体攻击后,空质粒组小鼠生殖道局部能够培养出衣原体,生殖道局部组织有破坏。另两组衣原体培养阴性,生殖道局部组织完好。结论 沙眼衣原体 E型DNA疫苗免疫小鼠后能够诱导产生一定的沙眼衣原体特异性细胞免疫,该疫苗对同型沙眼衣原体的生殖道攻击具有保护作用。     

白介素2基因佐剂对沙眼衣原体E型DNA疫苗的免疫增效作用

目的 探讨小鼠白介素2重组质粒对沙眼衣原体E型DNA疫苗细胞免疫效果的影响。方法 以BALB/c小鼠为实验动物,采用肌内接种免疫的方式,将小鼠分为接种空质粒的阴性对照组、DNA疫苗免疫组、DNA疫苗联合小鼠白介素2重组质粒免疫组和接种灭活沙眼衣原体 E型原体的阳性对照组,观察小鼠后足垫局部的肿胀情况、脾淋巴细胞增殖试验、血清IL-4和IFN-γ水平和同型沙眼衣原体生殖道攻击后局部的衣原体培养情况。结果 4组实验动物的脾淋巴细胞增殖指数分别为1.37 ± 0.21、2.52 ± 0.30、3.64 ± 0.41、3.77 ± 0.34,联合免疫组和阳性对照组比较差异无统计学意义,与另2组比较,差异有统计学意义。4组的血清IL-4分别为（25.37 ± 18.93）、（24.75 ± 8.49）、（21.74 ± 6.43）、（38.49 ± 12.24） pg/ml,灭活原体组高于其他各组;4个组的血清IFN-γ分别为（310.8 ± 160.7） pg/ml、（601.3 ± 357.9） pg/ml、（1923.3 ± 518.1） pg/ml、（2712.5 ± 887.2）pg/ml,联合免疫组和阳性对照组相当,与另两组比较,差异有统计学意义。沙眼衣原体E型原体攻击后,空质粒组小鼠生殖道局部能够培养出衣原体;另3个组衣原体培养阴性。 结论 白介素2基因佐剂能够增强沙眼衣原体E型DNA疫苗的细胞免疫效应,且以Th1型反应为主。     

滋阴清热方联合泼尼松干预狼疮鼠血清自身抗体的研究

目的：探讨滋阴清热方和泼尼松对狼疮鼠血清自身抗体的影响。方法：用生理盐水、纯中药、西药和中西药等不同的干预措施处理狼疮鼠,采用间接ELISA法和间接免疫荧光法分别检测狼疮鼠血清抗核小体抗体浓度、ANA以及抗dsDNA抗体。结果：在降低血清抗核小体抗体浓度方面,西药组优于中药组,中西药组优于对照组,中西药组优于中药组,西药组优于对照组,差异具统计学意义（P〈0.05）;在改善血清抗dsDNA抗体浓度方面,西药组优于中药组,差异具统计学意义（P〈0.05）;在改善血清抗ANA抗体浓度方面,西药组优于中药组,西药组优于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：在治疗系统性红斑狼疮疾病时,激素表现出强有力的抗炎和降低自身抗体的作用,单独运用中药几乎对自身抗体的降低毫无作用,滋阴清热类中药联合激素治疗SLE可能有协同作用,可以减少激素的用量而达到相似的治疗效果。     

沙眼衣原体E型重组主外膜蛋白疫苗和DNA疫苗免疫效应的比较

目的比较E型重组主外膜蛋白(rMOMP)疫苗和MOMP DNA疫苗诱导小鼠产生的特异性免疫效应。方法用纯化的rMOMP和DNA疫苗分别通过股四头肌肌注和阴道黏膜涂布的途径免疫BALB/C雌鼠。通过检测小鼠血清IgG抗体水平和阴道冲洗液sIgA抗体水平、脾淋巴细胞增殖、迟发型超敏反应、细胞因子检测、阴道脱落细胞种植等指标进行两组免疫效应的比较。结果rMOMP肌注组小鼠:血清IgG抗体水平OD450值为0.424±0.075,迟发型超敏反应小鼠足垫增厚0.272±0.054mm;DNA肌注组:血清IgG抗体水平OD450值为0.332±0.033,迟发型超敏反应小鼠右足垫增厚0.258±0.041mm。通过肌注途径诱发的保护性免疫应答rMOMP蛋白疫苗好于DNA疫苗(P<0.05)。结论rMOMP蛋白疫苗的免疫应答强于DNA疫苗,通过阴道涂布途径不能诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答。     

Blimp1-BCMA调控浆细胞功能在系统性红斑狼疮发病中的意义

【摘要】 目的 探讨Blimp1在MRL/lpr狼疮鼠中的表达水平,为靶向浆细胞治疗SLE提供思路。方法用EMSA和CHIP证实Blimp1对B细胞成熟抗原（BCMA）的调控作用,并用实时定量PCR检测MRL/lpr狼疮鼠与正常鼠脾脏和淋巴结中Blimp1mRNA的表达差异。结果 Blimp1能与BCMA基因启动子相结合。狼疮鼠组脾脏Blimp1mRNA的相对表达水平高于正常对照组Blimp1mRNA的相对表达水平（Z = 2.609,P < 0.01）,狼疮鼠组淋巴结中Blimp1的相对表达水平也高于正常对照组Blimp1mRNA的相对表达水平（ Z = 3.402,P < 0.01）,差异有统计学意义。结论 BCMA可能是Blimp1的靶基因,Blimp1可直接调控BCMA表达,在维持浆细胞存活及抗体分泌中发挥作用。 【关键词】 红斑狼疮,系统性; Blimp1; B细胞成熟抗原; 浆细胞; 小鼠,近交MRL lpr     

白介素2基因佐剂协同HSV-2多表位复合DNA疫苗诱导小鼠免疫应答

目的 研究白介素2(IL-2)cDNA协同HSV-2多表位复合DNA疫苗免疫对小鼠体液和细胞免疫应答的影响.方法 利用真核表达质粒pcDNA3.1分别构建HSV-2糖蛋白gD、gB、gC和早期表达蛋白ICP27的多表位复合DNA疫苗HV-pcDNA3.1和IL-2的真核表达质粒IL-2-pcDNA3.1.15只C57/BL6小鼠分为3组,分别接受pcDNA3.1空载体注射、HV-pcDNA3.1单独免疫或HV-pcDNA3.1及IL-2-pcDNA3.1联合免疫.共免疫2次,间隔2周.末次免疫3周后.ELISA法检测小鼠血清HSV-2特异性IgG、IL-2和IFN-γ,淋巴细胞特异性增殖反应和乳酸脱氢酶法检测杀伤性T淋巴细胞(CTL)功能.结果 与HV-pcDNA3.1单独免疫组相比.IL-2-pcDNA3.1的协同免疫可以提高小鼠血清中和IFN-γ表达(1956.19±219.60ng/L,P<0.05),增强淋巴细胞特异性增殖反应(促细胞增殖率为2.75%±0.26%,P<0.05)和CTL活性(47.91%±15.09%,P<0.05).小鼠血清HSV-2特异性IL-2水平在协同免疫组为(1421.16±220.98)ng/L,HV-pcDNA3.1单独免疫组为(1246.84±157.02)ng/L.两组间差异无统计学意义.结论 IL-2cDNA的协同免疫可以显著提高HSV-2多表位复合DNA疫苗诱导的细胞免疫应答水平.     

疱疹病毒II型糖蛋白D多聚核苷酸疫苗的初步免疫评价

将疱疹病毒II型(HSV-2)糖蛋白D(gD)多聚核苷酸疫苗肌注免疫豚鼠,初步评价其在体内所诱发的体液免疫和细胞免疫反应水平。将12只豚鼠分为3组,各组分别于舌肌注射pcDNA-gD多核苷酸疫苗、pcDNA3质粒及生理盐水,每周1次,共3次。ELISA检测豚鼠血清中gD抗体的水平;MTT法评价脾T淋巴细胞增殖反应。pcDNA-gD免疫组全部豚鼠均诱发抗HSV-2抗体(0.283±0.075);pcDNA3质粒组(0.062±0.015)和生理盐水组(0.057±0.016)的抗HSV-2抗体为阴性。pcDNA-gD免疫组豚鼠脾淋巴细胞增殖反应(2.08±0.18)程度明显高于对照组(P<0.01)。提示疱疹病毒II型糖蛋白D多聚核苷酸疫苗可在豚鼠体内诱发体液免疫和细胞免疫反应。     

来氟米特对BXSB狼疮鼠免疫状况的影响

目的：观察来氟米特对BXSB小鼠免疫状况的影响。方法：48只3月龄的雄性BXSB小鼠分为4组,治疗前后测定24h尿蛋白;治疗后检测血清抗dsDNA抗体以及肾脏免疫复合物。结果：治疗后,来氟米特组的尿蛋白、抗dsDNA抗体明显低于地塞米松和生理盐水组（P〈0.01）,也低于环磷酰胺组,但其组间差异无统计学意义（P〉0.05）;来氟米特组的肾脏免疫复合物低于其他治疗组（P〈0.05或P〈0.01）。与生理盐水组相比,来氟米特组小鼠的生存期明显延长（χ^2=4.56,P〈0.05）。结论：来氟米特可显著改善BXSB小鼠的免疫状况,能延缓BXSB狼疮鼠的疾病进程。     

疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D多聚核苷酸疫苗的初步免疫评价

将疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)糖蛋白D(gD)多聚核苷酸疫苗肌注免疫豚鼠,初步评价其在体内所诱发的体液免疫和细胞免疫反应水平.将12只豚鼠分为3组,各组分别于舌肌注射pcDNA-gD多核苷酸疫苗、pcDNA3质粒及生理盐水,每周1次,共3次.ELISA检测豚鼠血清中gD抗体的水平;MTT法评价脾T淋巴细胞增殖反应.pcDNA-gD免疫组全部豚鼠均诱发抗HSV-2抗体(0.283±0.075);pcDNA3质粒组(0.062±0.015)和生理盐水组(0.057±0.016)的抗HSV-2抗体为阴性.pcDNA-gD免疫组豚鼠脾淋巴细胞增殖反应(2.08±0.1 8)程度明显高于对照组(P＜0,01).提示疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D多聚核苷酸疫苗可在豚鼠体内诱发体液免疫和细胞免疫反应.     

异基因造血干细胞移植治疗BXSB狼疮鼠

目的 探索异基因外周血造血干细胞移植治疗重型系统性红斑狼疮(SLE)的有效性、安全性。方法 用小鼠粒细胞集落刺激因子动员、采集供者C57BL/6的正常造血干细胞,输入经用环磷酰胺(CTX)、马利兰预处理的BXSB狼疮鼠体内,用血细胞分析仪和流式细胞仪动态观察移植后BXSB狼疮鼠的造血和免疫重建,尿蛋白试剂、ELISA法、免疫荧光法检测移植后的BXSB鼠尿蛋白、抗双链DNA抗体、肾病理改变和观察与移植相关的并发症、死亡率,并用微卫星PCR法检测移植后BXSB狼疮鼠的植活情况。结果 移植后60dDNA指纹图分析BXSB狼疮鼠转为供者的DNA指纹图,移植后白细胞下降至最低值是(0.2±0.1)×10⁹/L,白细胞从最低值上升至1.0×10⁹/L的时间是移植后(47.5±12.8)d,移植后第8周CD3^-CD5⁺和CD3⁺CD5⁺尚未恢复,移植后40d95.5%BXSB狼疮鼠尿蛋白减少,90.9%肾荧光减少,与传统的治疗方法比较差异有显著性,54.5%抗双链DNA抗体转阴,明显高于传统治疗组,但差异无显著性。与移植相关的出血、体重减轻、肺部感染及死亡率与传统的治疗方法比较差异均无显著性。结论 Allo-HSCT是一种有效的较彻底的治疗重型SLE的方法,其在降低BXSB狼疮鼠尿蛋白,使抗双链DNA抗体转阴及改善肾病理改变方面明显优于传统的治疗方法,但与移植相关的并发症、死亡率较高,有一定的治疗风险。     

T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3对黑素瘤TRP-2180-188肽疫苗刺激小鼠淋巴细胞的影响

目的 探讨体外T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3（TIM-3）对与小鼠黑素瘤B16F10细胞共培养的酪氨酸相关蛋白-2（TRP-2180-188）抗原肽刺激小鼠淋巴细胞的影响。 方法 构建TIM-3重组质粒pFUSE-TIM-3-mIgG2Aae1-Fc2,分别转染重组质粒及空质粒pFUSE-mIgG2Aae1-Fc2至人上皮293T细胞,继续培养48 h,制备含TIM-3、免疫球蛋白（Ig-tail）的上清液。TRP-2180-188肽疫苗免疫C57BL/6小鼠,分离小鼠脾淋巴细胞,用TRP-2180-188抗原肽和白细胞介素（IL）-2刺激培养5 d,以未刺激细胞作为对照组。构建B16F10细胞与上述TRP-2180-188抗原肽刺激淋巴细胞共培养体系,分为空白对照组（加293T细胞培养48 h上清液）、TIM-3组（加含TIM-3上清液）、阴性对照组（加含Ig-tail上清液）。CCK-8法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测共培养体系中干扰素（IFN）-γ和肿瘤坏死因子（TNF）-α浓度,流式细胞仪检测共培养体系中CD8+T淋巴细胞。 结果 酶切和测序鉴定证实目的基因正确插入真核表达载体中,检测到转染重组质粒pFUSE-TIM-3-mIgG2Aae1-Fc2的293T细胞上清液中有TIM-3表达,转染空质粒pFUSE-mIgG2Aae1-Fc2的293T细胞上清液中有Ig-tail的表达。CCK-8法检测显示24 h时空白对照组、阴性对照组、TIM-3组淋巴细胞增殖活力分别为（100.00 ± 10.42）%、（108.70 ± 9.90）%、（78.06 ± 6.37）%,48 h时分别为（100.00 ± 6.24）%、（168.00 ± 2.98）%、（42.93 ± 5.93）%;24 h、48 h时TIM-3组淋巴细胞活力低于空白对照组和阴性对照组（均P ＜ 0.05）。TIM-3组48 h相比24 h淋巴细胞增殖倍数低于空白对照组和阴性对照组（均P ＜ 0.05）。24 h时,空白对照组、阴性对照组、TIM-3组IFN-γ浓度分别为（216.44 ± 7.85）、（223.67 ± 7.79）、（192.96 ± 5.05） ng/L,48 h时分别为（230.06 ± 4.23）、（167.24 ± 3.33）、（54.95 ± 0.57） ng/L。24 h、48 h时,TIM-3组IFN-γ浓度低于空白对照组和阴性对照组（均P ＜ 0.05）。24 h、48 h时,TIM-3组TNF-α浓度低于空白对照组和阴性对照组（均P ＜ 0.05）。24 h时空白对照组、阴性对照组、TIM-3组CD8+T淋巴细胞中位数分别为0.421%、2.22%、3.30%,48 h时分别为0.577%、0.691%、4.06%。24 h、48 h时TIM-3组CD8+T淋巴细胞中位数高于空白对照组和阴性对对照组。 结论 TIM-3在体外能够抑制B16F10细胞与TRP-2180-188抗原肽刺激淋巴细胞共培养体系中淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ、TNF-α,提高CD8+T淋巴细胞。     

女性闭经后萎缩性尿道炎患者血清FSH、LH、PRL检验的临床意义分析

目的:分析并探讨女性闭经后萎缩性尿道炎患者血清卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)检验指标的意义。方法:选取2012年1月至2016年1月我院收治的女性闭经后萎缩性尿道炎患者80例为观察组,选取同期体检健康女性80例为对照组,检测两组FSH、LH、PRL水平。结果:观察组FSH水平为(11.73±6.31)mU/mL,LH水平为(12.31±7.34)mU/mL,PRL水平为(38.13±12.14)ng/mL。对照组FSH水平为(6.57±2.45)mU/mL,LH水平为(4.49±3.12)mU/mL,PRL水平为(15.24±5.35)ng/mL。观察组FSH、LH以及PRL水平明显高于对照组(P0.05)。观察组雌二醇(E_2)水平为(41.24±16.53)pg/mL,孕酮(P)水平为(0.51±0.34)pg/mL,睾酮(T)水平为(0.33±0.14)ng/mL。对照组E_2水平为(51.42±9.43)pg/mL,P水平为(0.52±0.32)pg/mL,T水平为(0.34±0.15)ng/mL。观察组E_2水平明显低于对照组(P0.05),两组P、T检测无显著差异(P0.05)。结论:女性闭经后萎缩性尿道炎患者血清FSH、LH、PRL明显升高,临床上可作为闭经后萎缩性尿道炎诊断进行参考,提前做好防治措施。     

跨膜型血型A抗原模拟肽疫苗在黑素瘤细胞B16中表达及细胞毒效应检测

目的　建立稳定表达跨膜型血型A抗原模拟肽疫苗的恶性黑素瘤细胞株B16,并检测体外细胞毒活性。方法 采用脂质体转染法将前期构建的模拟肽疫苗稳定转染B16细胞进行表达,RT-PCR 及Western印迹法检测模拟肽/Fas融合基因及巨噬细胞炎症蛋白3β（Mip3β）的 mRNA及蛋白表达。细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测疫苗介导的补体依赖性细胞毒效应（CDC）及抗体依赖的细胞介导细胞毒效应（ADCC）。结果 RT-PCR 在预期位置检测到特异性条带。Western印迹表明,表达产物具有特异的结合抗血型A抗体活性。析因分析提示不同分组之间CDC效应总体差异有统计学意义（F = 244.522,P < 0.01）,ADCC效应总体差异也有统计学意义（F = 71.593,P < 0.01）。组间比较示M-pIRES组CDC效应与空质粒pIRES组无统计学差异,两组均明显低于P/F-M-pIRES组和P/F-pIRES组;P/F-M-pIRES组、P/F-pIRES组ADCC效应明显强于M-pIRES组与pIRES组,P/F-M-pIRES组ADCC效应明显强于P/F-pIRES组（F = 15.42,P < 0.05）。结论　跨膜型血型A抗原模拟肽疫苗可在B16细胞膜稳定表达,且可通过介导CDC和ADCC发挥对黑素瘤细胞B16的杀伤作用。     

Notch1基因对裸鼠皮肤鳞状细胞癌移植瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨Notch1基因在人皮肤鳞状细胞癌SCL-1细胞裸鼠移植瘤中的作用。方法 于裸鼠腋下接种0.2 ml 1 × 108/ml的SCL-1细胞悬液,建立人皮肤鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型,将其分为三组：未处理组（接种PBS悬浮的未转染细胞）,空载体转染组（接种空载体转染的细胞）和Notch1转染组（接种Notch1转染的细胞）。连续2周观察转染荷瘤裸鼠的生长情况,采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）研究肿瘤组织中的细胞凋亡,利用RT-PCR和Western印迹研究肿瘤组织中Notch1、bcl-2和bax mRNA和蛋白的表达。结果 Notch1转染组中肿瘤的生长明显受到抑制,其肿瘤的重量为（0.574 ± 0.219） g,显著低于未处理组（2.642 ± 0.404） g和空载体转染组（2.606 ± 0.512） g（F = 26.642,P 值均 < 0.01）。TUNEL结果表明,Notch1转染组每500个细胞中凋亡的细胞数为87 ± 9,明显高于未处理组（8 ± 2）和空载体转染组（10 ± 3）中细胞凋亡的数目（P < 0.05）;此外,RT-PCR和Western印迹结果表明Notch1转染组中裸鼠肿瘤组织Notch1和bax mRNA和蛋白表达均显著上升,而bcl-2的表达显著下调,三组间比较差异具有统计学意义（P值均 ＜ 0.05）。结论 Notch1基因能抑制人皮肤鳞状细胞癌细胞SCL-1裸鼠皮下移植瘤的生长,诱导SCL-1细胞凋亡,后者可能与bax表达的上升和bcl-2表达的下调相关。     

多普勒超声在多囊卵巢综合征中的影像学特征及诊断价值

目的:探讨多普勒超声在多囊卵巢综合征中的影像学特征及诊断价值。方法:选取2014年8月至2015年8月我院接诊的疑为多囊卵巢综合征患者60例作为本次研究对象。并选择我院同期接诊的60例健康志愿者进行对照。所有患者均进行多普勒超声。观察两组对象卵巢面积和髓质面积、血清激素水平、激素水平、血流情况比较。结果:检查后,研究组卵巢体积、卵巢面积、髓质面积(10.16±0.82)cm3、(4.41±0.56)cm~2、(1.38±0.06)cm~2均大于健康组(6.23±0.76)cm~3(3.42±0.39)cm~2、(0.50±0.16)cm~2,差异具有统计学意义(P0.05);LH(15.46±2.03)IU/L大于健康组(6.58±2.18)IU/L,T(2.86±0.78)nmol/L大于健康组(1.41±0.57)nmol/L差异具有统计学意义(P0.05);PSV(30.12±5.13)大于健康组(21.06±4.29)cm/s,EDV(14.27±3.52)cm/s小于健康组(6.82±2.09)cm/s,RI(5.07±0.12)小于健康组(6.89±0.18)差异具有统计学意义(P0.05)。结论:多普勒超声能够准确分析多囊卵巢综合征中的影像学特征,具有较高的诊断价值。可以对病情进行正确的诊断,值得在临床上应用推广。     

米非司酮对子宫内膜异位症型痛经患者前列腺素及孕激素的影响

目的:探讨米非司酮对子宫内膜异位症型痛经患者前列腺素及孕激素的影响。方法:选择2013年1月至2016年1月我院接诊的100例子宫内膜异位症痛经患者,通过随机数表法分为观察组和对照组,各50例。对照组给予达那唑治疗,观察组在对照组基础上加用米非司酮片,比较两组患者治疗效果。结果:治疗后,观察组前列腺素F_(1α)(PGF_(1α))、血栓素B_2(TXB_2)均低于对照组[(37.98±3.12)pg/mL vs.(48.76±4.02)pg/mL,(134.23±27.54)pg/mL vs.(156.78±26.41)pg/mL](P0.05);卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)优于对照组[(4.07±1.32)U/L vs.(7.45±1.74)U/L,(9.34±1.11)U/L vs.(13.87±1.25)U/L,(784.31±40.91)pmol/L vs.(573.56±35.42)pmol/L](P0.05);痛经VAS评分明显低于对照组[(2.51±0.35)分vs.(4.78±0.33)分](P0.05);观察组总有效率明显比对照组高[98.00%(48/50)vs.78.00%(39/50)](P0.05)。结论:在子宫内膜异位症痛经患者使用米非司酮效果显著,可有效改善前列腺素及孕激素水平,缓解痛经症状,值得应用推广。     

两性霉素B对人THP-1细胞产生肿瘤坏死因子α、白细胞介素8及p38MAPK活化的影响

目的 探讨两性霉素B对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞系分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素8(IL-8)以及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活化的影响.方法 将THP-1细胞分为空白对照组、两性霉素B组(分别加入2、4、8mg/L两性霉素B处理);阳性对照组(用100 μg/L β葡聚糖或者100 mg/L脂多糖处理).实时荧光定量PCR分析不同刺激物和THP-1细胞作用一定时间后TNF-α、IL-8 mRNA表达水平.酶联免疫吸附试验检测8 mg/L两性霉素B刺激THP-1细胞24 h后上清液中TNF-α分泌量.Western印迹检测8 mg/L两性霉素B作用THP-1细胞后p38MAPK和磷酸化p38MAPK的水平.结果 2、4、8 mg/L两性霉素B刺激6h,TNF-α mRNA水平分别为7.55±1.17、19.47±2.91、57.22±0.65,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.01、0.001、0.001).IL-8mRNA水平分别为2.98±0.04、5.22±1.35、11.82±1.66,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.01、0.001、0.001).8 mg/L两性霉素B刺激THP-1细胞1、3、6h后TNF-αmRNA水平分别为8.61±0.30、10.75±0.08、56.98±2.43,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.05、0.01、0.001).IL-8 mRNA水平分别为2.63±0.28、5.35±0.98、11.73±1.18,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.05、0.01、0.001).8mg/L两性霉素B刺激THP-1细胞24 h上清液中TNF-α蛋白水平为(4039.06±223.87) ng/L,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜ 0.001).结论 两性霉素B体外可促进人THP-1细胞p38MAPK蛋白磷酸化及TNF-α和IL-8分泌,具有免疫调节作用.     

靶向生存素的小干扰RNA抑制人黑素瘤M14细胞系生长的研究

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）对人黑素瘤M14细胞系生存素基因表达的抑制作用及对细胞凋亡、增殖和侵袭的影响。方法 构建靶向生存素的siRNA表达质粒,用脂质体法转染M14人黑素瘤细胞。RT-PCR检测M14细胞生存素mRNA的表达,Western印迹检测生存素蛋白的表达,流式细胞仪检测AnexinV标记的凋亡细胞,噻唑蓝（MTT）法分析细胞增殖,Transwell法分析侵袭能力。结果 与M14细胞和转染空载体的M14细胞比较,转染siRNA的表达质粒可以明显抑制生存素基因在转录和翻译上的表达。M14组和空载体组几乎无凋亡细胞,siRNA表达质粒组的凋亡率明显增加（χ2 ＝ 31.55,P < 0.01）。细胞增殖抑制率（63.6% ± 1.6%）也明显增加,同时Transwell细胞侵袭实验显示,siRNA表达质粒转染组抑制作用显著。结论 靶向生存素的siRNA表达质粒可以特异性抑制生存素的表达,显著抑制肿瘤细胞增殖和侵袭并诱导细胞凋亡。     

卡介菌多糖核酸对二硝基氯苯诱导的Nc/Nga小鼠特应性皮炎样皮损的影响

目的 观察卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）对二硝基氯苯（DNCB）诱导的Nc/Nga小鼠特应性皮炎样皮损的影响。方法 15只Nc/Nga小鼠随机分成3组,每组5只。第1周开始,对照组在小鼠足垫及除毛之后的腹部外涂丙酮并腹腔注射生理氯化钠溶液100 μl,模型组外涂丙酮配置的5% DNCB并腹腔注射生理氯化钠溶液100 μl,治疗组外涂丙酮配置的5% DNCB并腹腔注射100 mg/L的BCG/PSN 100 μl,三组均为隔日给药1次,共7周。第2周开始,用丙酮配置的0.1% DNCB涂抹在小鼠双侧耳部和颈部皮肤,每周1次,共6周。通过小鼠耳朵厚度、组织病理学、免疫学指标评价皮炎损伤程度,观察BCG-PSN对小鼠的治疗作用。结果 外用DNCB可以引起Nc/Nga小鼠湿疹样皮炎的产生,模型组小鼠出现皮肤干燥、红斑、水肿、脱毛和糜烂,组织病理学显示表皮和真皮增厚、过度角化和炎症细胞浸润,小鼠血清IgE（174.72 ± 12.64 μg/L）和IL-4（91.49 ± 6.32 ng/L）增高,与对照组IgE（17.32 ± 3.56 μg/L）和IL-4（83.95 ± 6.63 ng/L）相比,P值均 ＜ 0.05;而治疗组小鼠血浆IL-12（122.10 ± 4.64 ng/L）和IFN-γ（73.89 ± 2.39 ng/L）增加,IgE（84.27 ± 9.35 μg/L）下降,与模型组IL-12（20.14 ± 6.15 ng/L）、IFN-γ（51.53 ± 3.45 ng/L）和IgE相比,差异均有统计学意义。结论 BCG-PSN可能通过促进IL-12和 IFN-γ分泌,抑制IgE合成,发挥治疗Nc/Nga小鼠特应性皮炎样皮损的作用。