电针调节Wnt/β-catenin信号通路抑制大鼠膝骨关节炎软骨退变的研究

目的:基于Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路探讨电针治疗膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)的作用机制。方法:从50只2月龄SPF级雄性SD大鼠中随机抽取10只为假手术组,其余40只采用改良Hulth法复制膝骨关节炎模型,造模4周后随机分为模型组、实验1组、实验2组、实验3组,每组10只。假手术组和模型组不作任何干预,实验1组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预15 min,实验2组取双侧"内膝眼""犊鼻"电针干预30min,实验3组取双侧非经非穴电针干预15min。电针干预每天1次,每周5次,共12周。12周后,取大鼠膝关节软骨组织进行染色,光镜下观察关节软骨组织形态学改变;改良Mankin’s评分评价软骨退变程度;ELISA法检测滑膜组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;Western blot检测关节软骨组织Wnt-4、β-catenin、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloprotein-13,MMP-13)蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P0.01)。与模型组比较,实验1组、实验2组大鼠软骨形态结构较整齐,细胞数量增多,基质染色加深,潮线较完整;Mankin’s评分显著降低(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著降低(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著降低(均P0.01)。与模型组比较,实验3组均未见改善。与实验1组比较,实验3组大鼠软骨形态结构紊乱,细胞数量明显减少,基质失染,潮线不完整;Mankin’s评分显著升高(P0.01);滑膜组织中IL-1β含量显著升高(P0.01);Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平均显著升高(均P0.01)。实验2组与实验1组大鼠软骨形态结构相似,Mankin’s评分、滑膜组织中IL-1β含量及Wnt-4、β-catenin、MMP-13蛋白的相对表达水平比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:电针"内膝眼""犊鼻"可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路,降低MMP-13的表达,减少炎性因子IL-1β的生成,从而抑制软骨基质的降解和软骨细胞的凋亡,改善软骨形态结构。     

补肾通络方调控软骨下骨骨重塑保护关节软骨的机制研究

目的:探讨补肾通络方调控软骨下骨骨重塑保护关节软骨的作用机制。方法:取30只SPF级雌性SD大鼠,采用改良的Hulth模型的方法建立骨关节炎动物模型,分为Sham组、模型组和中药组。术后第4周中药组开始灌服补肾通络方,模型组、Sham组灌服等量的生理盐水,分别于术后8、12、16周取材,采用骨关节炎软骨国际骨关节炎研究学会(OARSI)软骨组织病理学评分系统,以免疫组化方法评估关节软骨中蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量及对软骨下骨进行骨形态计量学分析。结果:术后8、12、16周,模型组病理改变OARSI评分及甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫组化染色灰度值与Sham组比较,差异均有非常显著性意义(P0.01);术后12、16周中药组3项指标与模型组比较,差异均有非常显著性意义(P0.01)。软骨下骨组织形态计量学参数测量结果显示,术后12、16周模型组骨小梁面积百分数(%Tb.Ar)、骨小梁宽度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、每毫米破骨细胞数(Oc.N/mm)、单位骨小梁面积破骨细胞数(Oc.N/mm2)、荧光周长百分率(%L.Pm)、矿化沉积率(MAR)、骨形成率/骨小梁面积(BFR/BV)、骨形成率/周长(BFR/BS)与Sham组、中药组分别比较,差异均有非常显著性意义(P0.01)。结论:软骨下骨在骨关节炎发生发展中起重要作用,补肾通络方可通过调控软骨下骨生物力学性能,防止软骨破裂,延缓或修复软骨病损。     

针刀干预对KOA兔关节软骨病理学及股四头肌收缩性能的影响

目的:通过观察针刀干预对膝骨关节炎(KOA)兔HE染色及Mankin评分、股四头肌收缩性能的影响,探讨针刀治疗KOA的作用机制。方法:28只清洁级新西兰雄兔,随机分成正常组、模型组、电针组和针刀组。采用改良Videman左后肢伸直位固定制动法复制KOA模型,针刀组、电针组分别采用针刀和电针疗法治疗4周。采用光镜、电生理的方法对软骨形态学情况、股四头肌收缩性能进行检测。结果:造模后,模型组兔膝关节软骨HE染色显示软骨结构紊乱、破坏,Mankin评分较正常组明显升高(P 0. 01),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较正常均显著降低(P 0. 05或P 0. 01)。电针、针刀干预后,电针组兔膝关节软骨HE染色较模型组有所改善,Mankin评分较模型组显著降低(P 0. 01),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较模型组无显著差异(P 0. 05);针刀组兔膝关节软骨HE染色较模型组改善明显,Mankin评分较模型组显著降低(P 0. 01),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较模型组显著升高(P 0. 05或P 0. 01),且与电针组相比Mankin评分显著降低(P 0. 05),股四头肌单收缩幅度和强直收缩幅度较电针组显著升高(P 0. 05)。结论:针刀干预能改善关节软骨退变,促进关节软骨修复,并能提高股四头肌的收缩性能。提高股四头肌的收缩性能是针刀干预KOA的重要机制。     

去卵巢老年大鼠软骨退变与E_2、MMP-13、TNF-α的相关性

目的探讨去卵巢老年大鼠雌激素下降与软骨退变的相关性。方法 24只6月龄雌性SD大鼠按数字表法随机分为对照组、去卵巢组和去卵巢+跑步组各8只。对照组常规饲养,去卵巢组行双侧卵巢切除术,去卵巢+跑步组行双侧卵巢切除术合并疲劳训练。5周后处死,取左侧膝关节石蜡包埋,行HE染色、免疫组化分析、膝关节软骨Mankin评分,右侧膝关节抽取关节液检测TNF-α含量,取血清检测E_2含量。结果 (1)膝关节切片HE染色显示:与对照组比较,去卵巢组与去卵巢+跑步组膝关节软骨均出现缺损,其中去卵巢+跑步组缺损最重;(2)与对照组比较,去卵巢组和去卵巢+跑步组mankin评分、膝关节MMP-13表达、关节液TNF-α浓度均明显提高(P0.01),血清E_2浓度明显降低(P0.01),且以去卵巢+跑步组变化最为显著。结论老年大鼠雌激素的下降与软骨退变具有一定的相关性。     

针刀干预对膝骨关节炎模型兔膝关节软骨应力变化的影响

目的：观察针刀对膝骨关节炎（KOA）兔膝关节软骨退变、膝关节整体应力、关节软骨应力变化以及肿瘤坏死因子-ɑ（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）的影响,探讨其治疗KOA的作用机制。方法：将28只兔随机分为空白组、模型组、电针组、针刀组,每组7只。除空白组均进行6周兔左后肢制动,建立兔KOA模型,电针组、针刀组均干预3周。采用苏木精-伊红（HE）法光镜下观察兔软骨病理改变,并评价软骨退变程度;运用有限元技术模拟KOA模型兔膝关节屈曲60°进行检测,观察膝关节整体应力及关节软骨最大应力变化;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测滑液中TNF-α、IL-1β表达水平。结果：与空白组比较,模型组Mankin评分升高(P<0.05）,膝关节整体应力、关节软骨最大应力显著降低（P<0.01）,TNF-α、IL-1β水平均显著升高（P<0.01）;干预后,与模型组比较,电针组、针刀组Mankin评分均显著降低(P<0.05),膝关节整体应力、关节软骨最大应力均升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β水平均明显降低(P<0.01）;与电针组比较,针刀组Mankin评分降低(P<0.05),膝关节整体应力和关节软骨最大应力较电针组升高（P<0.05）,TNF-α、IL-1β水平较电针组显著降低(P<0.01）。结论：针刀干预能够调节膝关节整体应力及关节软骨的最大应力,进而恢复膝关节应力环境、抑制炎症介质释放,从而改善关节软骨退变,达到治疗KOA的目的。     

“通调针法”电针治疗乳腺增生大鼠作用机制的实验研究

目的:探讨卵巢在"通调针法"电针治疗乳腺增生(MGH)中的作用,为电针治疗MGH的机制研究提供新的思路。方法:雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、电针切卵巢组、电针假手术组,每组12只。采用大鼠后肢内侧肌肉注射苯甲酸雌二醇注射液联合黄体酮注射液的方法复制MGH模型。造模成功后,对电针切卵巢组进行双侧卵巢切除术,电针假手术组采取假手术对照。电针组、电针切卵巢组和电针假手术组均采用"通调针法"电针治疗,甲组穴为双侧"天宗""肝俞""足三里",乙组穴为双侧"屋翳""合谷"和"膻中",甲乙两组穴隔日交替使用,20min/次,每日1次,5次为1个疗程,共4个疗程。治疗结束后,测量大鼠乳头高度;ELISA法检测大鼠血清中雌二醇(E2)、黄体酮(P)含量;免疫荧光双染和Western blot法检测乳腺组织中雌激素受体α(ERα)、孕激素受体(PR)的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠乳头高度显著增高(P0.01),E2、ERα含量增高,P、PR含量下降(P0.01)。与模型组比较,电针组和电针假手术组大鼠乳头高度减小(P0.01),而电针切卵巢组改善不明显(P0.05);电针能够下调电针组和电针假手术组大鼠血清E2及乳腺组织中ERα含量(P0.01)、上调大鼠血清P和乳腺组织PR含量(P0.01),电针切卵巢组血清P含量升高(P0.05),免疫荧光染色法示乳腺组织中ERα降低、PR升高(P0.01),但两受体改善均较电针组差(P0.05)。结论:电针治疗MGH的疗效机制与卵巢功能密切相关。     

电针命门穴对去势骨质疏松模型大鼠肾上腺雌激素受体ERαmRNA表达的影响

目的研究电针命门穴对去卵巢骨质疏松模型(OVX)大鼠肾上腺功能的影响。方法造模成功的雌性SD大鼠18只,随机分为假手术组、模型组、电针组,每组6只。大鼠处死后,用放免法测各组大鼠血清中雌二醇(estradiol,E2)水平,荧光定量PCR(探针法)检测各组大鼠肾上腺ERαmRNA表达。结果模型组与假手术组比较,血清E2水平明显下降,有显著性差异(P0.05),电针组血清E2水平有一定升高,与模型组比较,无统计学意义(P0.05);模型组肾上腺ERαmRNA表达强于假手术组,有统计学意义(P0.05),电针组肾上腺ERαmRNA表达降低,与模型组相比,有显著性差异(P0.05)。结论去卵巢后,大鼠肾上腺可起代偿作用,电针能提高去卵巢骨质疏松大鼠血清雌激素水平,并影响大鼠ERα在肾上腺的表达。     

舒筋活血止痛水外擦拍打对兔膝骨性关节炎软骨组织MMP-1表达的影响

目的:观察舒筋活血止痛水外擦拍打治疗对兔膝骨性关节炎(KOA)软骨组织MMP-1表达的影响。方法:随机将15只新西兰大白兔分为正常组、模型组、拍药组,采用前交叉韧带切断术(ACLT),制作KOA模型。术后6周拍药组进行舒筋活血止痛水外擦拍打干预。干预2周后处死动物,采用HE染色观察软骨形态学改变,并进行改良Mankin评分,免疫组化检测MMP-1的表达情况。结果:模型组改良Mankin评分明显增高,拍药组改良Mankin评分低于模型组,差异有统计学意义(P0.01);模型组MMP-1阳性表达显著增强,拍药组MMP-1阳性表达较模型组降低,差异有统计学意义(P0.01)。结论:舒筋活血止痛水外擦拍打治疗可明显降低兔KOA软骨组织MMP-1的表达,延缓兔KOA的进展。     

电针治疗膝骨关节炎疗效观察及对软骨磁共振T2图的影响

目的:观察电针治疗膝骨关节炎的疗效,探讨电针促进软骨修复的作用.方法:膝骨关节炎患者30例60膝,按随机数字表随机分配到电针组和理疗组各15例30膝.电针组采用电针治疗,穴取内膝眼、犊鼻、鹤顶、血海等,隔日1次;理疗组采用电脑中频治疗仪治疗,每日1次.两组均治疗4周.采用Lysholm膝关节评分标准(LKSS)对治疗前后膝关节功能进行评分并比较,同时采用GE Signa EXCITE Twin Speed HD 1.5T超导磁共振仪进行治疗前后膝关节MRI检查,观察胫股关节软骨10个亚区T2值的变化.结果:电针组和理疗组都是除支撑一项外,LKSS总评分及各单项评分较治疗前明显改善(P＜0.01,P＜0.05),且电针组治疗后对LKSS总评分和失稳感、肿胀方面的改善要优于理疗组(均P＜0.05),其余各项组间差异无统计学意义(P＞0.05).电针组治疗后胫骨外侧前区(LTa)T2值较治疗前显著下降,差异具有统计学意义(P＜0.05),其余各区治疗前后T2值差异均无统计学意义(P＞0.05);理疗组治疗前后各区T2值无显著变化(P＞0.05).结论:电针能有效改善膝骨关节炎患者的临床症状、体征及膝关节活动功能,疗效优于物理疗法,是较佳的治疗骨关节炎的非手术疗法;电针对软骨磁共振T2值也有一定的影响,提示可能具有促进软骨修复作用.     

胎肾细胞悬液对去卵巢大鼠骨组织形态计量学参数的影响

目的:观察胎肾细胞悬液对去卵巢大鼠骨组织形态计量学参数的影响,探讨胎肾对大鼠去卵巢所致骨质疏松症的作用。方法:48只SD雌性大鼠,随机分为5组,即假手术组、模型组、雌激素组、胎肾活细胞组和胎肾死细胞组。假手术组仅手术切除腹腔少量脂肪,其余各组行去卵巢手术造模。术后12周,假手术组及模型组使用生理盐水干预,雌激素组使用尼尔雌醇混悬液干预,胎肾活细胞组使用胎肾活细胞悬液干预,胎肾死细胞组使用胎肾死细胞悬液干预。各组连续用药干预4周后,取血清行血清雌激素水平检测,取股骨远端1/3做骨病理切片,行骨组织形态计量学观测。结果:与假手术组比较,模型组雌激素水平显著降低,差异有统计学意义(P0.01)。骨小梁排列稀疏、无序,骨小梁间隙显著增大,差异有统计学意义(P0.01)。骨小梁密度、骨小梁厚度、骨小梁面积百分比均显著降低,差异有统计学意义(P0.01)。与模型组比较,雌激素组、胎肾细胞各组的雌激素水平均显著升高,差异有统计学意义(P0.01)。骨小梁排列较紧密、排列较整齐、交织成网,骨小梁间隙显著缩小,差异有统计学意义(P0.01)。骨小梁密度、骨小梁厚度、骨小梁面积百分比均显著增加,差异有统计学意义(P0.01)。与雌激素组比较,胎肾细胞各组雌激素水平差异无统计学意义(P0.05),但胎肾死细胞组骨小梁间隙显著缩小且骨小梁密度显著增加,差异有统计学意义(P0.01)。与胎肾活细胞组比较,胎肾死细胞组骨小梁间隙显著缩小、骨小梁密度显著增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论:胎肾细胞各组对去卵巢大鼠骨量的增加、骨小梁结构及其连接性的改善、血清雌二醇水平的提高有明显作用,说明胎肾有治疗大鼠去卵巢所致骨质疏松症的作用。     

止痛健骨方对膝骨关节炎兔软骨TNF-α的影响及TNF-α与软骨评分的相关性分析

目的:观察止痛健骨方对膝骨关节炎兔软骨TNF-α的影响及TNF-α与软骨评分的相关性。方法:将90只白兔随机分为正常对照组、模型对照组、阳性药物组、止痛健骨方低剂量组、止痛健骨方高剂量组,每组18只,采用木瓜蛋白酶制备兔膝骨关节炎模型,止痛健骨方低剂量组、止痛健骨方高剂量组分别给予止痛健骨方低剂量、高剂量药物灌胃,阳性药物组给予盐酸氨基葡萄糖片灌胃(0.0672 g/kg),正常对照组和模型对照组予生理盐水灌胃。在模型验证、灌胃第4周、第8周,各组随机选择6只白兔,观察软骨Mankin评分,并检测软骨TNF-α表达水平。结果:在模型验证、实验干预第4周、第8周时,模型对照组、阳性药物组、止痛健骨方低剂量组、止痛健骨方高剂量组软骨TNF-α表达、软骨Mankin评分均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。第4周、第8周,阳性药物组、止痛健骨方低剂量组、止痛健骨方高剂量组TNF-α表达均低于模型对照组,差异有统计学意义(P0.05)。Pearson直线相关性分析发现软骨TNF-α表达增加,对应软骨评分也上升,两者呈直线正相关(r=0.903,P=0.000)。结论:止痛健骨方能降低兔KOA模型关节软骨TNF-α表达,降低软骨Mankin评分,且两者成正向直线相关,这可能为其治疗KOA的作用机理。     

电对调膝骨关节炎软骨细胞中AQP3表达

摘要：目的：研究电针刺激对膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞中水通道蛋白(aquaporins,AQP)3表达的影响。方法：实验兔36只,采用随机数字表法将其随机均分为对照组、模型组、电针组,每组各12只。模型组、电针组膝关节伸直位石膏固定6周造模。对照组不干预,模型组仅固定于治疗台上但不予电针治疗,电针组予以电针治疗14 d。实验结束后分别对3组关节软骨的肉眼观、光学显微镜下苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色结果按照Mankin评分进行观察计分；400倍光学显微镜视野下观察3组免疫组织化学切片AQP3免疫反应部位并计数阳性细胞。 结果：电针组的关节软骨大体形态Mankin评分(P＜0.01)及HE染色各项Mankin评分(P＜0.05)均优于模型组。3组均检测到AQP3的表达,模型组AQP3表达均明显高于对照组和电针组(P＜0.05)。 结论：电针可以有效缓解膝OA症状,作用机制可能与下调AQP3表达从而调节水的转运,降低软骨细胞外基质降解,减轻关节软骨的破坏有关。     

马钱子总碱对兔膝骨关节炎模型软骨损伤修复作用及机制

目的探讨马钱子总碱对兔膝骨Hulth-Telhag关节炎模型的作用及机制。方法新西兰兔随机分为正常对照组,模型组,假手术组,马钱子总碱高、中、低剂量组,玻璃酸钠组,每组8只。除正常对照组外,其余各组均以Hulth-Telhag方法造模。造模8周后,马钱子总碱高、中、低剂量组分别给予兔每个膝关节腔注射0.3、0.2、0.1mL马钱子总碱注射液,玻璃酸钠组给予兔每个膝关节腔注射0.2mL玻璃酸钠,每周2次,连续用药5周。正常对照组、模型组及假手术组常规饲养,无其他特殊处理。停药1周后光镜观察关节软骨病理改变和Mankin′s评分,血液流变仪检测全血黏度(低切、中切、高切)及血浆黏度,ELISA检测关节液NO、SOD、过氧化脂质(LPO)及尿液吡啶酚(PYD)含量。结果与正常对照组比较,模型组Mankin′s评分、全血黏度、血浆黏度、NO、LPO及PYD升高(P0.05),SOD降低(P0.05)。与模型组比较,马钱子总碱高、中剂量组及玻璃酸钠组Mankin′s评分降低(P0.05);各给药组全血黏度、血浆黏度、NO、LPO及PYD降低(P0.05),SOD升高(P0.05)。马钱子总碱中剂量组较低剂量组中、高切变率全血黏度、SOD升高(P0.05),NO、LPO及PYD降低(P0.05);马钱子总碱高剂量组较中剂量组全血黏度、血浆黏度升高(P0.05),NO、LPO及PYD降低(P0.05),SOD升高(P0.05)。与玻璃酸钠组比较,马钱子总碱低剂量组Mankin′s评分、NO、LPO及PYD升高(P0.05),SOD降低(P0.05);马钱子总碱中剂量组Mankin′s评分、SOD降低(P0.05),NO、LPO及PYD升高(P0.05);马钱子总碱高剂量组Mankin′s评分、全血黏度及血浆黏度升高(P0.05)。结论马钱子总碱对骨关节炎的软骨损伤具有修复作用,其机制主要与通过SOD途径抑制NO介导的软骨细胞凋亡有关,还与改善软骨代谢有关。     

补肾健骨汤对PMOP大鼠骨密度及血清E_2、IL-6、BGP的影响

目的:观察补肾健骨汤对绝经后骨质疏松(PMOP)模型大鼠股骨颈骨密度及血清雌二醇(E_2)、白介素-6(IL-6)、骨钙素(BGP)影响。方法:选择4月龄SPF级未经交配健康的雌性大鼠,取12只为正常组(A组);采用去卵巢骨质疏松造模法,将造模成功的大鼠随机分为模型组(B组)、补肾健骨汤组(C组)及雷洛昔芬组(D组)各12只,假手术组(E组)12只大鼠只切开皮肤肌肉,取等同体积的脂肪组织,不去卵巢;灌胃8周后完成大鼠骨密度检测,处死取标本检测。结果:(1)骨密度:干预12周后,模型组大鼠骨密度低于假手术组(P0.05);补肾健骨汤组及雷洛昔芬组骨密度高于模型组(P0.05)。(2)BGP:模型组大鼠组低于假手术组(P0.05),补肾健骨汤组及雷洛昔芬组血清BGP均高于模型组(P0.05)。(3)雌激素:模型组雌激素水平显著低于正常组、假手术组(P0.05);补肾健骨汤组、雷洛昔芬组雌激素水平均高于模型组,差异有统计学意义(P0.05);雷洛昔芬组骨与补肾健骨汤组之间差异无统计学意义(P0.05)。(4)IL-6:模型组IL-6水平明显高于正常组、假手术组,差异有统计学意义(P0.05);补肾健骨汤组、雷洛昔芬组IL-6水平均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05);雷洛昔芬组骨与补肾健骨汤组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论:补肾健骨汤能改善去卵巢大鼠骨密度,升高雌激素及骨钙素水平,促进骨生成,并降低IL-6水平,提示这可能是补肾健骨汤防治绝经后骨质疏松症的机理之一。     

健骨片对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢、骨微结构及骨强度的影响

目的:研究健骨片对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢、骨质微结构及骨强度的作用。方法:将50只雌性SD大鼠随机分为假手术组(n=10),模型组(n=10),戊酸雌二醇片组(n=10),健骨片低剂量组(n=9),健骨片高剂量组(n=9)。除假手术组外,其余各组行卵巢切除建立大鼠骨质疏松模型,术后各组分别灌服相应药物或蒸馏水,给药剂量分别为戊酸雌二醇片组(0.1 mg·kg~(-1)·d~(-1)),健骨片低剂量组(0.35 g·kg~(-1)·d~(-1)),健骨片高剂量组(1.05 g·kg~(-1)·d~(-1)),连续12周。每周测定大鼠体重,给药结束后酶联免疫吸附测定(ELISA)测定大鼠血清骨钙素(OC)。测定血清碱性磷酸酶(ALP),抗酒石酸酸性磷酸酶(Str ACP),钙(Ca),磷(P)。Micro-CT扫描重建股骨微结构,检测骨矿含量(BMC),组织骨矿含量(TMC),骨密度(BMD),组织矿物质密度(TMD),骨体积分数(BV/TV),骨小梁数量(Tb N),骨小梁分离度(Tb Sp),骨小梁厚度(Tb Th)。三点弯曲法测定股骨刚度及最大载荷。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清OC,ALP显著升高,血清Ca,P明显降低(P0.05,P0.01);股骨远心端及中点骨小梁稀疏,缺失严重,BMC,TMC,BMD,TMD,BV/TV明显降低(P0.05,P0.01);股骨最大载荷显著降低(P0.05)。与模型组比较,健骨片低、高剂量组均明显降低血清OC及ALP,升高血清Ca,高剂量组明显升高血清P(P0.05,P0.01);骨参数分析显示,低、高剂量明显升高股骨BMC,TMC,BMD,BV/TV(P0.05,P0.01),高剂量组明显降低Tb Sp(P0.05);低、高剂量组均明显增加股骨刚度及最大载荷(P0.05,P0.01)。结论:健骨片可影响去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢,从而改善骨微结构,增加骨强度。     

脉冲电磁场对去卵巢大鼠骨质疏松的影响

目的:探讨脉冲电磁场(PEMFs)对去卵巢大鼠骨质疏松的影响。方法:将30只SD雌性大鼠随机分为假手术组、去卵巢组、PEMFs组,去卵巢组和PEMFs组大鼠行双侧卵巢切除术,术后PEMFs组给予脉冲电磁场治疗,干预12周后进行大鼠外周血液样本生化指标、骨密度及PCR分析。结果:干预12周后,PEMFs组大鼠血清TRACP 5b水平较去卵巢组显著降低(P0.01);PEMFs组骨密度相比去卵巢组显著增高(P0.05);OPG mRNA表达显著增加(P0.01),RANKL mRNA表达显著降低(P0.05)。结论:脉冲电磁场可能通过对RANKL/RANK/OPG信号系统的调节,抑制骨吸收,对治疗去卵巢大鼠骨质疏松有良好疗效。     

基于组蛋白去乙酰化酶2介导的成骨细胞分化通路探讨电针治疗骨质疏松症的效应机制

目的:观察电针对骨质疏松大鼠股骨组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)、组蛋白H3、骨形成相关基因及蛋白表达的影响,探讨电针改善骨质疏松症的机制。方法:将雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和阳性药物(E2)组,每组10只。采用去势法建立骨质疏松大鼠模型。电针组电针双侧"肾俞""脾俞"穴,10 min/d;E2组予20μg/mL 17β-雌二醇(E2)皮下注射,100μg/kg。均每周一、三、五治疗,共治疗8周。采用显微计算机断层扫描成像法检测大鼠股骨组织微观结构变化;蛋白质免疫印迹法检测大鼠股骨HDAC2、组蛋白H3和成骨细胞转录因子(Runx2)蛋白表达;比色法及酶联免疫吸附法检测大鼠血清中碱性磷酸酶(ALP)和E2含量;实时荧光定量PCR法检测大鼠股骨Runx2 mRNA表达;免疫荧光双标法检测大鼠股骨中乙酰化组蛋白H3/Runx2及Runx2/ALP蛋白的共表达。结果:与假手术组比较,模型组股骨松质骨密度(TBMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)均显著降低(P0.01),骨小梁分离度(Tb. Sp)、骨小梁模式因子(Tb.Pf)、结构模型指数(SMI)均显著升高(P0.01)。与模型组比较,电针组大鼠股骨TBMD、BV/TV和Tb. N显著升高(P0.01,P0.05),Tb. Pf和SMI显著下降(P0.05,P0.01);E2组大鼠股骨TBMD、BV/TV和Tb. N显著升高(P0.01), Tb. Sp、Tb. Pf和SMI均显著下降(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠股骨中HDAC2、组蛋白H3表达水平显著升高(P0.01), Runx2蛋白和mRNA表达水平显著降低(P0.01),血清E2和ALP含量显著降低(P0.01),股骨中乙酰化组蛋白H3、Runx2、ALP的荧光强度显著降低(P0.01)。与模型组比较,电针组HDAC2、组蛋白H3表达水平显著降低(P0.01),Runx2蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.05,P0.01),血清ALP含量显著升高(P0.05),乙酰化组蛋白H3、Runx2、ALP荧光强度显著升高(P0.01);E2组Runx2蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.01),血清E2和ALP含量显著升高(P0.01,P0.05),Runx2和ALP荧光强度显著升高(P0.01)。与E2组比较,电针组HDAC2和组蛋白H3蛋白表达水平显著降低(P0.01),Runx2 mRNA表达水平显著下降(P0.05),乙酰化组蛋白H3荧光强度显著升高、Runx2荧光强度显著降低(P0.05)。结论:电针治疗骨质疏松可上调体内骨形成相关基因的表达,下调对骨形成通路有抑制作用蛋白的表达,使骨密度升高、骨体积和骨小梁数量增加,并促进骨小梁由杆状向板状变化,其机制可能与组蛋白乙酰化修饰有关。     

红车轴草对去卵巢大鼠脂质代谢的影响

目的:研究红车轴草对去卵巢大鼠脂质代谢的影响。方法:将50只成年健康雌性SD大鼠随机分为模型组,假手术组,红车轴草提取物低、中、高剂量组(给药剂量分别为30、50、70mg/kg),每组10只,除假手术组外,其他组SD大鼠均手术摘取双侧卵巢制备去卵巢大鼠模型,手术4周后,给药治疗12周,模型组与假手术组大鼠给予等量生理盐水。取大鼠血清,采用全自动生化分析仪进行血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平的测定,采用ELISA法测定血清氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)、载脂蛋白A (apo-AI)、载脂蛋白B(apo-B)、丙二醛(MDA)及超氧化歧化酶(SOD)水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠TG、OX-LDL与MDA水平显著升高,HDL-C、apo-AI与SOD水平显著降低,差异具有统计学意义(P0.05),而TC、LDL-C、apo-B水平虽有上升趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。与模型组比较,红车轴草提取物低、中、高剂量组均可显著降低大鼠TG、OX-LDL与MDA水平(P0.01),升高HDL-C、apo-AI与SOD水平(P0.01或P0.05)。结论:红车轴草对去卵巢大鼠脂质代谢紊乱有一定的改善作用,且三种不同剂量提取物效果无显著差异。     

电针预处理对早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢保护作用的实验研究

目的:探讨电针"中髎""天枢"预处理对早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢的保护作用和可能机制。方法:将动情周期规律的32只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、捆绑组,每组8只。模型组、电针组和捆绑组采用去氧乙烯基环己烯(VCD)按160 mg/kg体质量连续腹腔注射15 d造模。电针组自造模之日起于"中髎""天枢"穴进行电针预处理,前2周每日1次、5次/周,后2周隔日1次、3次/周。每次20 min,共4周。捆绑组只捆绑固定,时间、频次和总次数同电针组。空白组、模型组不干预。模型组造模成功后处死大鼠,检测各组大鼠性腺湿重和性腺指数;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清性激素抗苗勒激素(AMH)、抑制素B(inhibin B)水平,采用放射免疫分析法检测促卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)水平,并观察卵巢组织形态和卵泡数量,采用蛋白印迹法检测卵巢组织B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白基因(Bax)蛋白表达。结果:与空白组相比,模型组大鼠左、右侧卵巢湿重和卵巢指数均降低,子宫湿重和子宫指数均降低(P0.05,P0.01);血清AMH和inhibin B均降低(均P0.01),血清FSH、LH、T升高(均P0.01),E2、P降低(均P0.01);卵巢组织中原始卵泡、初级卵泡相应降低(均P0.01),闭锁卵泡增多(P0.01);Bax蛋白表达明显升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.01)。与模型组相比,电针组大鼠左、右侧卵巢湿重和卵巢指数均升高,子宫湿重升高(P0.05,P0.01);血清AMH和inhibin B均升高,血清FSH、LH降低,E2、P升高(P0.05,P0.01);卵巢原始卵泡、初级卵泡相应升高,闭锁卵泡减少(P0.05,P0.01);卵巢组织Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P0.05,P0.01)。捆绑组和模型组各指标间比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:4周的电针"中髎""天枢"预处理对早发性卵巢功能不全模型大鼠的卵巢有一定的保护作用,该保护作用可能是通过上调卵巢颗粒细胞抑制凋亡因子Bcl-2蛋白的表达、下调促凋亡因子Bax蛋白的表达来发挥作用的。     

壮骨止痛方对去卵巢骨质疏松大鼠血清瘦素及长形受体的影响

目的:观察壮骨止痛方对去卵巢大鼠血清瘦素(leptin)及长形受体(OB-Rb)的影响,探讨其抗骨质疏松机制。方法:72只SD大鼠按体质量随机抽出假手术组12只,造模组60只,造模组采用双侧去卵巢法造模,假手术组只切除卵巢周围相应质量的脂肪。造模成功后,造模组大鼠按体质量随机分为模型组、壮骨止痛方高剂量组(13.2 g/kg)、中剂量组(6.6 g/kg)、低剂量组(3.3 g/kg)和戊酸雌二醇组,每组12只。术后第5天开始药物干预,模型组和假手术组给予相应体积的纯净水,持续13周。给药结束后,检测大鼠骨密度(BMD)和血清瘦素及其长形受体含量。结果:模型组大鼠血清OB-Rb含量及BMD均显著低于假手术组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。壮骨止痛方高、中、剂量组大鼠瘦素长形受体含量及BMD均显著高于模型组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:壮骨止痛方具有促进去卵巢骨质疏松大鼠瘦素受体表达,增强瘦素的作用,这可能是其抗骨质疏松的作用机制之一。