真武汤抗大鼠心肌细胞凋亡机制的体外实验研究

目的:通过真武汤抗大鼠心肌细胞凋亡机制的体外实验研究,阐述真武汤抗心肌细胞凋亡的具体机制。方法:(1)采用MTT法分别观察于3 h、6 h、12 h三个时间点异丙肾上腺素对心肌细胞活性的影响,测定细胞存活率,选择建立体外心肌细胞损伤模型所需异丙肾上腺素的最佳时间及剂量;(2)筛选真武汤含药血清的最佳浓度;(3)实验分为模型对照组[异丙肾上腺素(10~6 mol/L)]、空白对照组、真武汤组(异丙肾上腺素+10%含药血清)、卡托普利组[异丙肾上腺素+卡托普利(10-6mol/L)];(4)AO/EB双重荧光染色和流式细胞仪检测心肌细胞凋亡;(5)Western blotting方法测定培养心肌细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果:(1)异丙肾上腺素对心肌细胞的生长有抑制作用;异丙肾上腺素10μmol/L作用6h后,细胞存活率降低明显。(2)真武汤含药血清浓度的选择:各组心肌细胞与相应干预措施作用48h后,各干预组细胞活性均低于空白组,差异有统计学意义(P0.05);卡托普利组及不同浓度含药血清组细胞活性均高于异丙肾上腺素组(P0.05);20%含药血清组、10%含药血清组与卡托普利组相比细胞存活率相似,差异无统计学意义,但考虑到中药的细胞毒作用及成本,选择10%含药血清组进行后续实验。(3)AO/EB双重荧光染色检测细胞凋亡:与空白组比较,真武汤组及西药组可见明显抑制心肌细胞凋亡。(4)流式细胞仪检测心肌细胞凋亡:模型对照组细胞凋亡率明显升高,与空白对照组比较有显著差异(P0.01);卡托普利组及真武汤组与模型对照组相比细胞凋亡明显降低,有统计学差异(P0.05)。(5)Western Blotting检测结果:真武汤组和卡托普利组与模型对照组相比较,Caspase-3蛋白表达降低(P0.05)。结论:真武汤能降低心肌细胞损伤,抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与调节Caspase-3蛋白表达有关。     

氧化苦参碱对高糖引起的H9C2细胞氧化应激损伤的影响

目的:研究氧化苦参碱对高糖诱导H9C2细胞氧化应激损伤的保护机制。方法:分组培养H9C2心肌细胞并分为空白组,高糖组,氧化苦参碱低、高剂量组(50,100 mg·L^-1),阳性药维生素E组(1×10^-4 mol·L^-1),甘露醇等渗组。通过乳酸脱氢酶外漏法检测细胞损伤,检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量变化,通过荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量和细胞线粒体功能的完整性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞内MDA,ROS含量,Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而SOD活性、线粒体膜电位和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与高糖组比较,氧化苦参碱显著降低乳酸脱氢酶的外泄、显著抑制细胞内ROS的产生(P<0.01),明显降低MDA的含量和Bax蛋白的表达(P<0.05),增加SOD活性、线粒体膜电位和Bcl-2蛋白的表达(P<0.01)。结论:氧化苦参碱通过改善线粒体功能来调节氧化应激从而抑制由高糖引起的H9C2心肌细胞凋亡。     

左归丸通过线粒体途径抗叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡

目的:观察左归丸对叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的保护效应,探讨其作用机制是否与其干预线粒体途径有关。方法:以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,建立叔丁基过氧化氢(t-BHP)成骨细胞MC3T3-E1氧化应激模型,实验分为空白组,t-BHP组,左归丸+t-BHP组,补佳乐+t-BHP组。孵育24,48,72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测左归丸含药血清对t-BHP诱导MC3T3-E1细胞存活的影响;孵育48 h后,采用吖啶橙溴乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡,采用Hoechst 33342染色法观察凋亡细胞核变化,采用罗丹明123荧光染色法观察线粒体膜电位的改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法分析线粒体蛋白家族B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,t-BHP组显著抑制细胞增殖(P0.05,P0.01),细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2蛋白表达明显下调(P0.01);与t-BHP组比较,左归丸加t-BHP组促进暴露于t-BHP诱导的MC3T3-E1氧化损伤细胞的存活(P0.01),48 h者尤佳,逆转细胞凋亡情况,提高细胞线粒体膜电位,上调Bcl-2蛋白表达(P0.05),抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:左归丸含药血清能够抗t-BHP诱导的MC3T3-E1细胞凋亡,其作用机制可能与其干预线粒体途径有关。     

益气温阳活血利水方对AngⅡ诱导H9c2心肌细胞线粒体凋亡途径的影响

目的观察益气温阳活血利水方含药血清对AngII诱导H9c2心肌细胞线粒体凋亡途径相关Bax、Bcl-2、Caspase-9基因及蛋白的表达变化,探讨益气温阳活血利水方对AngII诱导H9c2心肌细胞凋亡的保护作用的机制。方法AngII诱导H9c2心肌细胞凋亡模型,采用血清药理学方法制备益气温阳活血利水方含药血清并进行干预,使用qRT-PCR、Western Blot、免疫组化方法检测Caspase-9 mRNA和蛋白及Bax、Bcl-2蛋白表达变化。结果益气温阳活血利水方含药血清可提高Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,下调Caspase-9基因及蛋白的表达水平,且含药血清高剂量组改善作用最好。结论益气温阳活血利水方含药血清对AngII诱导H9c2心肌细胞凋亡的保护作用是通过调节线粒体凋亡途径相关Bcl-2、Bax基因蛋白的表达,从而抑制Caspase-9的表达实现的。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用

目的:研究黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的SD大鼠乳鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用,并探讨相关的作用机制。方法:利用酶解法和差速贴壁方法从出生1~3 d的正常SD大鼠的乳鼠心脏中分离得到原代心肌细胞,种于24孔板,体外培养48 h后,设置空白组、模型组、美托洛尔组及黄芪甲苷低、中、高剂量组。预先给予各组对心肌细胞有害的儿茶酚胺类物质异丙肾上腺素(ISO),造成体外原代心肌细胞损伤模型,空白组心肌细胞不加ISO;30 min后予各治疗组相应浓度的美托洛尔(2.336μg·L~(-1))及黄芪甲苷低、中、高剂量(3,10,30μmol·L~(-1))。BCA法检测总蛋白含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测原代心肌细胞的B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关蛋白X(Bax)及Bcl-2相关k蛋白(Bak)的表达,流式细胞学法检测各组细胞的凋亡率,Hochest/PI双染法镜下观察各组细胞细胞核的形态,从而检测细胞的凋亡情况。结果:与空白组比较,各给药组(10~40μmol·L~(-1))原代心肌细胞的活力上调(P0.05);HOCHEST/PI双染结果显示,与模型组比较,美托洛尔组及黄芪甲苷中、高剂量亮蓝色凋亡细胞明显减少;细胞流式结果显示,与模型组比较,美托洛尔组凋亡率下调(P0.01),黄芪甲苷中剂量组凋亡率下调(P0.05),黄芪甲苷高剂量组凋亡率下调(P0.01);Bcl-2灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bcl-2的表达上调(P0.01),黄芪甲苷低剂量组Bcl-2表达上调(P0.05),黄芪甲苷中、高剂量组Bcl-2表达上调(P0.01);Bak灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bak的表达下调(P0.05),黄芪甲苷高剂量组Bak表达下调(P0.05);Bax灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bax的表达下调(P0.01),黄芪甲苷高剂量组Bax表达下调(P0.05)。结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤有抗凋亡作用。     

参麦注射液对乳鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨参麦注射液对心肌细胞凋亡通路的影响。方法:原代培养心肌细胞,AngⅡ诱导凋亡。MTT法检测线粒体活性,流式细胞仪检测凋亡率及线粒体膜电位,免疫组化染色检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:参麦注射液明显降低细胞凋亡率,增高线粒体活性和膜电位,升高Bcl-2蛋白表达,降低Bax、Caspase-3蛋白表达。结论:参麦注射液可抑制心肌细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡通路密切相关。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASIV)对异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)诱导的H9C2心肌细胞凋亡的抑制作用及机制。方法:H9C2心肌细胞传代后随机分为正常对照组、异丙肾上腺素(10μmol/L)组、普萘洛尔(2μmol/L)组和黄芪甲苷(25、50、100μmol/L)组,采用流式细胞术检测H9C2心肌细胞凋亡率;运用JC-1荧光探针检测各组细胞线粒体膜电位的变化;采用Western Blot分别测定线粒体和胞浆中细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C)的蛋白表达。结果:与正常对照组相比,异丙肾上腺素组的凋亡率显著增加,线粒体膜电位降低,细胞色素C外流,线粒体细胞色素C表达减少而胞浆中表达增多。与模型组相比,黄芪甲苷(50、100μmol/L)组能明显降低凋亡率,提高线粒体膜电位及减少细胞色素C外流,且呈一定剂量依赖性。结论:黄芪甲苷可通过线粒体凋亡途径抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡。     

鹿茸蛋白对缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨鹿茸蛋白对缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法将SD大鼠心肌细胞适应性培养后分为对照组,模型组,鹿茸蛋白低剂量组(0.25 mg/mL)、中剂量组(0.5 mg/mL)、高剂量组(1 mg/mL)和鹿茸蛋白高剂量+LY294002[PI3K抑制剂(10μmol/L)]组并置于相应培养基培养36 h,模型组和用药组进行缺氧处理。采用AnnexinⅤ-fluorescein Isothiocyanate (FITC)/Propidum Iodide(PI)检测心肌细胞的凋亡情况;应用JC-1荧光探针检测心肌细胞线粒体膜电位改变情况;Western Blot检测Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax和cleaved-Caspase3蛋白表达。结果与对照组比较,模型组心肌细胞凋亡加重,正常细胞减少,晚期凋亡细胞增加,心肌细胞线粒体膜电位降低,心肌细胞Bax和cleaved-Caspase3蛋白的表达增加,p-Akt和Bcl-2蛋白表达下降(P0.05,P0.01)。与模型组比较,用药组晚期凋亡细胞数量下降(P0.01),各用药组之间比较,差异无统计学意义(P0.05);用药组心肌细胞线粒体膜电位升高(P0.01);鹿茸蛋白高剂量组细胞Bax和cleaved-Caspase3表达下降,p-Akt和Bcl-2的表达增加(P0.01),鹿茸蛋白高剂量+LY294002组各蛋白表达无明显变化(P0.05)。结论鹿茸蛋白可能通过调控PI3K/Akt信号通路下游凋亡相关蛋白减轻缺血缺氧对心肌细胞造成的损伤,维持细胞线粒体膜电位稳定性,减少细胞凋亡。     

心肌片对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的:观测心肌片对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及可能机制。方法:H9c2细胞随机分为对照组、模型组、心肌片低中高剂量组,预给药24h后,建立心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)模型。检测细胞存活率,LDH释放水平,蛋白印迹法检测心肌细胞凋亡相关基因Bax,Bcl-2,Caspase-3,Cyt-C蛋白的表达以及AMPK磷酸化水平。结果:与模型组比较,心肌片提高细胞存活率,减少LDH水平,稳定线粒体膜电位,减少Bax,Caspase-3以及Cyt-C蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达,提高Bcl-2/Bax的比值(P0.05)。进一步研究发现,这些保护作用被AMPK抑制剂Compound C取消。结论:心肌片能减轻心肌缺血再灌注损伤,抑制心肌细胞凋亡,其机制可能通过激活AMPK信号通路实现的。     

西红花酸对阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤的影响

目的观察西红花酸对阿霉素诱导的大鼠心肌细胞损伤的影响,从线粒体角度探讨其作用机制。方法培养H9c2大鼠心肌细胞,阿霉素诱导建立心肌细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组(阿霉素10μmol/L)、西红花酸高剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸20μmol/L)、西红花酸低剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸10μmol/L),给药6 h后CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达,免疫荧光检测Caspase-8蛋白表达。结果与正常组比较,模型组H9c2细胞存活率降低(P0.01),细胞内ROS水平升高(P0.001),线粒体膜电位降低(P0.001),细胞凋亡率升高(P0.001),cleaved Caspase-3蛋白表达升高,cleavedCaspase-3/proCaspase-3比值升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.001),Caspase-8蛋白表达明显升高(P0.001);与模型组比较,西红花酸高、低剂量组H9c2细胞存活率显著升高(P0.01,P0.05),ROS水平显著降低(P0.001),线粒体膜电位升高(P0.001),细胞凋亡率降低(P0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达降低,cleaved Caspase-3/pro Caspase-3比值降低(P0.001,P0.05),Caspase-8蛋白表达显著降低(P0.001),西红花酸高剂量组Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax比值显著升高(P0.01)。结论西红花酸可保护阿霉素致心肌细胞损伤,其机制可能与保护线粒体、抑制细胞凋亡相关。     

人参皂苷素Rb1预处理对异丙肾上腺素诱导大鼠急性心肌缺血心肌凋亡相关蛋白表达的影响

目的:研究人参皂苷素Rb1对异丙肾上腺素(ISO)致大鼠急性心肌缺血心肌细胞凋亡相关蛋白表达作用的影响。方法:采用异丙肾上腺素皮下多点给药注射建立大鼠急性心肌缺血模型,将大鼠随机分为5组,即空白组、模型组、葛根素对照组、人参皂苷素高、低剂量用药组(20.0、10.0 mg·kg-1),MOOR散斑观察心肌表面血流情况;HE法观察心肌病理情况;免疫组化法及WB法检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果:人参皂苷素Rb1各剂量组与模型组比较,心肌组织损伤的病理学变化明显减轻,人参皂苷素Rb1各剂量组提高大鼠急性心肌缺血Bcl-2蛋白表达量(P<0.05)、降低大鼠心肌缺血的Bax蛋白表达量(P<0.05)。结论:人参皂苷素Rb1对缺血心肌的保护效应可能与其抑制缺血心肌细胞凋亡有关。     

冠心平对急性缺血犬心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:研究冠心平对冠脉结扎导致心肌缺血犬心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法:36头Beagle犬,分成假手术组,心肌缺血模型组,心可舒组,小、中及大剂量冠心平组。前两组分别给予空白胶囊,其他各组每日两次口服相应剂量的药物,连续给药10天,10天后进行冠状动脉结扎实验。结扎180min后取心肌切片保存,检测心肌细胞凋亡指数(AI),并用免疫组化法检测心肌组织Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:与模型组相比,心可舒组及冠心平小、中、大剂量组的心肌凋亡指数水平均有所下降,Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达减少,与模型组比较均具有统计学意义(P0.01)。结论:冠心平具有减轻缺血心肌细胞凋亡,提高Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,增加Bcl-2/Bax比值的作用。提示冠心平对缺血犬具有抑制心肌细胞凋亡,减轻细胞凋亡对缺血心肌的损伤的作用。     

茯苓杏仁甘草汤合橘枳姜汤对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨茯苓杏仁甘草汤合橘枳姜汤对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠50只,随机分为正常对照组、急性心肌缺血模型组、中药低剂量组、中药高剂量组及欣康组,每组10只。采用异丙肾上腺素腹腔注射制备大鼠急性心肌缺血模型。分别采用DNA-末端标记法及免疫组化法观察心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞凋亡数量、Bax及Bcl-2蛋白表达明显增多(P0.01);与模型组比较,各药物组细胞凋亡数量及Bax蛋白表达均明显减少(P0.05),Bcl-2蛋白表达明显增多(P0.05);其中中药高剂量组抑制细胞凋亡作用明显,与中药低剂量组及欣康组差异具有统计学意义(P0.05),中药低剂量组与欣康组差异无统计学意义(P0.05)。结论:茯苓杏仁甘草汤合橘枳姜汤能通过上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白的表达,降低细胞凋亡率,达到抑制心肌细胞凋亡的目,从而起到抗心肌缺血的作用。     

降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞凋亡的影响

目的:研究降糖消渴颗粒含药血清对胰岛瘤细胞INS-1凋亡的影响并对其作用机制进行初步探讨。方法:应用中药血清药理学方法制备降糖消渴颗粒含药血清及空白血清,以大鼠胰岛瘤细胞INS-1为研究对象,观察降糖消渴颗粒含药血清对INS-1细胞形态的影响,并用流式细胞术检测含药血清对细胞凋亡率的影响,用Western blot的方法检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平,初步探讨其抗凋亡机制。结果:与空白血清组比较,降糖消渴颗粒含药血清可保护INS-1细胞形态,并降低细胞凋亡率,同时降糖消渴颗粒含药血清减少了Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达,提高了Bcl-2/Bax蛋白的比值。结论:降糖消渴颗粒含药血清可抑制胰岛瘤细胞的INS-1凋亡,其机制可能与以线粒体为核心的凋亡途径有关。     

和营安心方对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察和营安心方对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法以皮下大量注射异丙肾上腺素（ISO）的方法制备慢性心衰大鼠模型,随机分为模型对照组,卡托普利组,参麦注射液组,和营安心大、中、小剂量组。另设正常对照组,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组化方法检测心肌细胞Bax,Bcl-2蛋白表达,计算Bcl-2／Bax比值。结果模型对照组TUNEL法心肌细胞凋亡严重,棕褐色细胞核明显增多,免疫组化图像分析Bax表达明显升高,Bcl-2,Bcl-2／Bax比值明显下降。与模型对照组比较,和营安心方组心肌细胞凋亡数量明显减少,Bax蛋白表达明显下降,Bcl-2,Bcl-2／Bax比值明显升高。结论和营安心方有减抑慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡的作用。     

天麻钩藤饮含药血清对MPP~+诱导PC12细胞损伤保护作用的研究

目的:观察天麻钩藤饮含药血清对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机制。方法:将48只大鼠随机分为空白组、美多巴组、天麻钩藤饮2.85、5.7、11.4、22.8g/kg剂量组,天麻钩藤饮按照相应剂量灌胃,空白组灌胃等体积生理盐水,美多巴片(0.05g/kg)溶于生理盐水灌胃。采血制备含药和空白血清,常规培养PC12细胞,空白组和模型组给予空白血清,其他5组给予10%含药血清,孵育30min后,再加500μmol/L MPP+共孵育48h后收集细胞,采用MTT法检测细胞存活率,LDH释放检测细胞毒性,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平,分光光度法检测Caspase-3及Caspase-9活性。结果:模型组较空白组细胞活力明显降低,LDH释放率增加,诱导细胞发生凋亡,同时Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平增加,而Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3及Caspase-9活性明显增加。与模型组比较,10%的天麻钩藤饮5.7、11.4、22.8g/kg含药血清组细胞活力显著增加,LDH释放率减少,凋亡细胞量减少,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平降低,而Bcl-2蛋白表达升高,Caspase-3及Caspase-9活性降低;而10%的天麻钩藤饮2.85g/kg含药血清组无明显变化。结论:天麻钩藤饮含药血清对MPP+诱导的PC12细胞的凋亡具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能密切相关。     

黄连解毒汤含药血清对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤的影响

目的探讨黄连解毒汤含药血清对Aβ_(25-35)诱导的HT22细胞损伤的影响。方法 HT22细胞随机分为空白组、模型组、多奈哌齐组(0.9 mg/kg)及黄连解毒汤低、高剂量组(2.7、8.1 g/kg),空白组、模型组加入空白血清,给药组加入含药血清1 h后,加入Aβ_(25-35)(40μmol/L)。24 h后,MTT法检测HT22细胞活性,比色法检测SOD、GSH-Px活性及MDA水平,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cyt C、Caspase-3蛋白表达。结果与模型组比较,黄连解毒汤组HT22细胞活性、Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),MDA水平及Cyt C、Caspase-3蛋白表达显著降低(P0.05,P0.01),并呈剂量依赖性,其中高剂量组SOD、GSH-Px活性也显著升高(P0.01)。结论黄连解毒汤含药血清可减轻Aβ_(25-35)诱导HT22细胞毒性作用,降低细胞凋亡,其作用机制可能与减少氧化应激和线粒体凋亡途径有关。     

白藜芦醇对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法利用ISO建立乳鼠心肌细胞凋亡模型,分为正常对照组(无血清DMEM培养液)、模型组(无血清DMEM培养液加入ISO 1μmol/L作用48 h),白藜芦醇干预组(分别向培养基中加入ISO 1μmol/L和Res 50μmol/L作用48 h)和白藜芦醇对照组(向无血清DMEM培养液中加入Res 50μmol/L)。Hochest33258染色检测细胞凋亡率;电镜观察心肌细胞超微结构;检测培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量;Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果模型组心肌细胞数量减少,细胞核形态不规则,可见凋亡小体,细胞凋亡率增加。白藜芦醇干预组和白藜芦醇对照组细胞膜完整,核膜清晰,核内染色质浓缩,细胞损伤程度减轻。与正常对照组比较,模型组心肌细胞凋亡率和LDH漏出量均增加,Bcl-2蛋白水平下调,Bax蛋白水平上调,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);与模型组比较,白藜芦醇干预组和白藜芦醇对照组心肌细胞凋亡率和LDH漏出量均降低,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 Res明显减轻ISO诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与逆转凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435和MCF-7细胞增殖的影响

研究西黄丸含药血清对人乳腺癌细胞MDA-MB-435和MCF-7细胞增殖以及Bcl-2,Bax,TP53 mRNA及蛋白表达的影响,以期探讨西黄丸抗乳腺癌的作用特点和机制。大鼠灌胃给药制备西黄丸含药血清,实验设置大鼠空白血清组(Control)和西黄丸含药血清组(XH),以含药血清干预人乳腺癌细胞株MDA-MB-435和MCF-7,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测Bcl-2,Bax,TP53 mRNA的表达,免疫荧光法检测Bax蛋白的表达。结果显示,西黄丸大鼠含药血清可抑制MDA-MB-435细胞增殖(P0.05),西黄丸大鼠含药血清可以提高MDA-MB-435细胞中TP53和Bax mRNA以及Bax蛋白的表达(P0.05),降低Bcl-2/Bax的比值(P0.05)。同时西黄丸含药血清可以上调MCF-7细胞中Bax mRNA,并降低Bcl-2/Bax的比值(P0.05),而西黄丸含药血清干预MCF-7细胞后TP53 mRNA和Bax蛋白表达无显著性差异。结果表明,西黄丸含药血清可诱导雌激素受体阴性乳腺癌细胞凋亡,机制有可能是通过上调TP53 mRNA表达,从而诱导凋亡蛋白Bax表达,促进Bax向线粒体转移,最终发挥诱导细胞凋亡作用。     

真武汤对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察真武汤对慢性心力衰竭（CHF）大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法大鼠随机分为假手术组,模型组,真武汤组,依那普利组。采用腹主动脉缩窄法制作CHF大鼠模型,术后4周开始灌胃给药,连续给药6周。检测血流动力学指标,RT-PCR和Western Blot法检测大鼠心肌组织Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达。结果与模型组相比,真武汤组LVEDP、＋dp/dtmax明显下降,MBP、-dp/dtmax、HR明显上升,Bax表达下降,Bcl-2表达上升。结论真武汤可通过降低Bax在心肌细胞中的表达,调节Bcl-2和Bax平衡来改善CHF大鼠的心功能。