真武汤对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察真武汤对慢性心力衰竭（CHF）大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法大鼠随机分为假手术组,模型组,真武汤组,依那普利组。采用腹主动脉缩窄法制作CHF大鼠模型,术后4周开始灌胃给药,连续给药6周。检测血流动力学指标,RT-PCR和Western Blot法检测大鼠心肌组织Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达。结果与模型组相比,真武汤组LVEDP、＋dp/dtmax明显下降,MBP、-dp/dtmax、HR明显上升,Bax表达下降,Bcl-2表达上升。结论真武汤可通过降低Bax在心肌细胞中的表达,调节Bcl-2和Bax平衡来改善CHF大鼠的心功能。     

真武汤对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：研究真武汤对阿霉素诱导慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡因子的影响。方法：将24只斯泼累格·多雷(SD)大鼠分为空白组、模型组、美托洛尔组、真武汤组,每组6只。利用腹腔注射阿霉素建立慢性心力衰竭模型。给药7周后,利用彩超仪检测心功能左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS);利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测心肌组织B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2的浓度改变;蛋白免疫印迹(Western Blotting)法观察心肌组织Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白含量。结果：与空白组比较,模型组LVEF、LVFS降低,差异有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,真武汤组LVEF、LVFS升高(均P<0.01),BAX的浓度和蛋白表达显著降低(均P<0.01),Bcl-2的浓度及蛋白表达显著上升(均P<0.01),MMP-9的蛋白表达降低(P<0.01)。结论：真武汤能有效调控大鼠心肌细胞凋亡因子,进而改善大鼠心功能。     

真武汤通过SIRT1信号通路减轻心力衰竭大鼠心肌细胞线粒体损伤及心肌细胞凋亡

目的:观察真武汤通过Sirt1信号转导通路蛋白抑制心肌细胞凋亡的影响,探讨真武汤治疗心力衰竭的机制。方法:复制心梗后心衰模型,通过检测脑钠肽(BNP)来确定心衰造模成功,将心力衰竭大鼠随机分为治疗组(真武汤低、中、高剂量组)、阳性药物对照组(卡托普利)、模型组,分别给药15 d,同时设空白对照组。通过彩超测量左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)等评价心功能,用酶联免疫法(ELISA)检测心衰大鼠血清中BNP,电镜观察心肌细胞内线粒体形态和数量变化,Westernblotting来检测心肌Bax,Bcl-2,Caspase-3,和Sirt-1的表达。结果:1.与正常组相比,治疗组与模型组的BNP表达均升高;2.与正常组相比,模型组LVEF、LVFS水平明显降低(P0.01);与模型组相比,中、高剂量组LVEF、LVFS水平明显升高(P0.01)。3.电子显微镜可观察到模型组大鼠的心肌细胞线粒体数量下降以及移位,并出现其他形态学改变,主要表现为线粒体数量和大小的变化,治疗后,数量和大小均有提升。4.与正常组比较,各组sirt-1蛋白表达均有不同程度减少,Bax及Caspase-3蛋白表达显著增加,Bcl-2的表达有不同程度的降低;与模型组相比,各治疗组sirt-1的表达均有所升高,其中阳性药物及真武汤中高剂量组的表达较高,各组Bax、Caspase-3的表达均有所下降,阳性药物对照组及真武汤中高剂量组表达最低,各治疗组Bcl-2的表达均升高,阳性药物对照组及中药中高剂量组较显著。结论:真武汤可通过调节心肌细胞中线粒体通路,影响凋亡相关蛋白的表达,抑制心肌细胞的凋亡,从而延缓充血性心衰的发展。SIRT1信号通路在抑制心力衰竭心肌细胞的凋亡中起着关键的作用。     

人参总皂甙对大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的:观察人参总皂甙对由外源性羟自由基诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法:利用第4代心肌细胞,随机分成7组,以10~(-3)mol/L 外源性羟自由基(OH~-)诱导心肌细胞凋亡为模型,分别观察4种不同浓度的人参总皂甙(25、50、100、150 mg/L)对心肌细胞存活率、形态学、心肌细胞凋亡百分率、DNA 琼脂糖凝胶电泳等参数的影响。结果:与凋亡组比较,加用不同浓度的人参总皂甙各组,随着人参总皂甙浓度升高,心肌细胞存活率明显升高,心肌细胞凋亡程度降低,呈剂量依赖性。结论:人参总皂甙能抑制由外源性羟自由基诱导的心肌细胞凋亡。     

真武汤治疗心力衰竭大鼠心肌细胞超微结构的影响

目的:通过电镜观察真武汤对心力衰竭大鼠超微结构影响探讨真武汤治疗心力衰竭疗效。方法:通过结扎大鼠冠状动脉前降支配合力竭式游泳成功复制心力衰竭大鼠模型,将造模成功的50只大鼠随机分成中药组(真武汤高、中、低剂量组)、西药组(卡托普利组)、模型组和空白组,每组10只,每日两次灌胃,持续15 d。用酶联免疫吸附试验法(ELISA)法测定大鼠血清BNP,电镜观察心肌细胞超微结构。结果:真武汤组与西药组均可明显降低心力衰竭大鼠BNP水平,电镜观察显示真武汤组和西药组心肌超微结构均有不同程度改善,且真武汤大剂量组最为显著。结论:真武汤治疗心力衰竭有较好疗效。     

真武汤对心力衰竭模型大鼠心室重构及心肌细胞凋亡、纤维化的影响

目的探讨真武汤治疗心力衰竭的可能作用机制。方法将50只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组及真武汤低、中、高剂量组,每组10只。除假手术组外其余各组采用结扎腹主动脉方法建立心力衰竭模型。真武汤低、中、高剂量组分别给予真武汤6、12、18 g/(kg·d)灌胃,假手术组、模型组分别给予蒸馏水3 ml灌胃,每天1次,连续给药28天。给药后各组大鼠行高频超声心动图检查,测定左心室舒张末期内径(LVIDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短指数(FS)。TUNEL法检测并计算各组大鼠心肌细胞凋亡指数;ELISA法检测各组大鼠心肌组织Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)表达;Real-time PCR检测各组大鼠心肌组织骨膜蛋白、转化生长因子β1(TGF-β1)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)mRNA表达;Western blot法检测各组大鼠心肌组织骨膜蛋白、TGF-β1、GRP78、CHOP蛋白表达。结果与模型组比较,真武汤高、中、低剂量组心脏超声各项指标、心肌纤维化程度均明显改善,心肌凋亡细胞显著减少,ColⅠ、ColⅢ表达,骨膜蛋白、TGF-β1、GRP78、CHOP蛋白及mRNA表达均明显降低,且真武汤高剂量组改善最为明显(P0.05)。结论真武汤可改善心力衰竭大鼠心室重构,减少心肌细胞凋亡和心肌纤维化,可能是其治疗心力衰竭的机制之一。     

附子多糖抗心肌细胞凋亡的Smac/Diablo机制研究

目的:建立体外缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,以模拟在体心肌细胞缺血/再灌注损伤,观察附子多糖(FPS)对H/R后心肌细胞凋亡的影响,并以Smac/Diablo为切入点探讨其作用机制。方法:采用原代培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧模型,随机分为:正常对照组(Control)、缺氧/复氧组(H/R)、附子多糖(0.1、1、10mg/mL)组。MTT法测定细胞的存活率,流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,荧光定量PCR检测BCL-2 mRNA的表达量,Western blot检测胞浆Smac/Diablo蛋白的表达。结果:与对照组比较,H/R组细胞存活率降低,细胞凋亡率显著增加,BCL-2 mRNA的表达量减少,胞浆中Smac/Diablo的表达增加。与H/R组比较,经附子多糖处理24 h后,附子多糖可呈剂量依赖性增加心肌细胞的存活率,抑制细胞凋亡率,促进BCL-2 mRNA的表达,降低胞浆中Smac/Diablo的表达,在10 mg/mL浓度时保护效应达到峰值。结论:FPS可抑制缺氧复氧后心肌细胞凋亡的发生,作用机制可能与其促进BCL-2 mRNA的表达,保护线粒体,抑制Smac/Diablo的释放,从而阻碍细胞凋亡的线粒体信号转导有关。     

温阳益心中药预处理对缺血大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的观察温阳益心中药预处理和心肌缺血预处理对缺血再灌注48h缺血大鼠心肌Bcl-2、Bax、细胞凋亡率的影响。方法选用雄性Wistar大鼠,随机分为4组,其中3组正常喂食,1组灌胃中药悬液,10d后选各组健康大鼠行冠脉结扎,建立大鼠心肌缺血模型。假手术组:完成全部手术操作,只穿线不结扎冠脉;心肌缺血-再灌注组(IR组):模型建立后,心肌缺血45min后再灌注48h;温阳益心中药预处理缺血-再灌注组(中药组):模型建立后,心肌缺血45min后再灌注48h;预适应处理缺血-再灌注组(IP组):模型建立后,心肌缺血5min,再灌注5min,重复3次,之后心肌缺血45min,再灌注48h。采用免疫组化检测Bcl-2、Bax阳性细胞表达,原位杂交检测Bcl-2、BaxmRNA阳性表达;流式细胞仪测定细胞凋亡率(AP)。结果 IP组和中药组AP较IR组低,Bcl-2阳性表达心肌细胞数与Bcl-2mRNA表达率比IP组高,Bax阳性表达心肌细胞数与BaxmRNA表达率比IR组低(P0.05)。结论 IP与温阳益心中药对IR的心肌保护均具有抑制心肌细胞凋亡的功能,且有等效性。     

天然黄酮类化合物对大鼠心肌细胞抗凋亡作用的微观机制及构效关系研究

 目的 建立黄酮类化合物对大鼠心肌细胞抗凋亡率的定量构效关系模型,探讨其抗凋亡作用的微观机制。方法 采用半经验量子化学计算法MOPAC-AM1计算黄酮类化合物的量化参数,运用最佳变量子集回归及人工神经网络BP算法建立黄酮类化合物抗凋亡率的QSAR模型。结果 最佳二元线性回归模型的交叉验证系数（r 2_CV）为0.707,非交叉验证的相关系数(r)为0.928;相应BP-QSAR模型的r为0.996,估计标准误差(S)为0.013。结论 羟基指数(L)与碳电荷(Q_C)揭示了影响黄酮类化合物抗凋亡率的本质因素;其中,A、C环上羟基对自由基的链传递起主要阻断作用。
     

牛黄对慢阻肺大鼠抗炎、抗凋亡的实验研究

目的探讨体外培育牛黄对COPD的作用机制。方法 50只雄性SD鼠随机分空白对照组(A)、COPD组(B)、牛黄干预组(C)、激素干预组(D)、牛黄+激素干预组(E)。比较大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)、肺组织病理改变及Ⅱ型肺泡细胞的凋亡。结果5组大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)含量除C组和D组尚不能认为有统计学意义外(P0.05),余各组间差异有统计学意义(P0.05);5组大鼠以TUNEL技术检测Ⅱ型肺泡细胞的凋亡,各组多重比较均有统计学意义(P0.05)。结论牛黄可使SAA水平降低,可减轻慢阻肺的炎症反应;牛黄和激素可以减少慢阻肺大鼠肺泡上皮细胞凋亡,两者联合效果明显。     

真武汤抗大鼠肾间质纤维化作用的研究

目的:观察真武汤对肾间质纤维化大鼠的作用,并通过观察真武汤对肾脏Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维的影响,探讨真武汤抗肾间质纤维化的作用机制。方法:采用"单肾切除加腺嘌呤灌胃法"建立大鼠慢性肾衰竭模型。治疗组予真武汤9.8,2.45g.kg-1 ig,对照组予尿毒清溶液ig。给药4周后处死大鼠取血测肌酐(Cr),尿素氮(BUN),钙(Ca2+)、磷(P3+),肾脏切片分别进行HE染色、PASM染色、Masson染色、Sirius Red染色、Mallory染色,光镜下观察大鼠肾组织的病理形态学改变,HE染色进行肾小管间质病变半定量分析,PASM染色、Masson染色、Sirius Red染色进行肾脏组织病理学图像分析。结果:在肾间质纤维化面积、肾小球系膜积分吸光度等方面,真武汤高、低剂量组的作用优于模型组和尿毒清组,P0.05。真武汤高、低剂量组在肾间质中Ⅰ,Ⅲ型胶原分布面积等方面的作用与模型组比,P0.05。结论:真武汤具有抗肾间质纤维化的作用,其作用途径可能与抑制Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维增生有关。     

四逆汤预防性给药抗心肌细胞凋亡的作用机制探讨

目的：探讨四逆汤预防性给药24 h后能否抑制心肌缺血再灌注（MI/R）后心肌细胞凋亡的发生及其可能涉及的线粒体机制。方法： SD大鼠分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组、四逆汤预处理组。缺血再灌注组采用经典大鼠冠脉结扎，缺血1 h，再灌1 h。四逆汤预处理组给予四逆汤灌胃(5 g·kg^-1·d^-1)连续3 d，末次灌药24 h后心肌缺血1 h，再灌1 h。流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率，进行细胞色素C及抗凋亡蛋白bcl-xl的Western blotting分析并检测caspase-3的活性。结果：四逆汤预处理24 h后可以减少MI/R后心肌细胞凋亡率，减少细胞色素C自线粒体的释放，上调bcl-xl蛋白的表达，抑制caspase-3的活化。结论：四逆汤预防性给药24 h后可以减少MI/R造成的细胞凋亡，其机制可能与抑制细胞凋亡的线粒体信号转导通路有关。     

丹参酮ⅡA抗过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡作用及机制研究

目的:观察丹参酮ⅡA对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:采用差数贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞,以200μmol/L过氧化氢作用2h模拟心肌细胞氧化应激模型,分别以丹参酮ⅡA高、中、低剂量在造模前干预24h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞内游离钙及心肌细胞线粒体膜电位的变化,检测心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结果:模型组心肌细胞经200μmol/L过氧化氢作用2h后,凋亡率显著增高。与模型组比较,丹参酮ⅡA可呈浓度依赖性显著降低细胞凋亡率。过氧化氢可导致心肌细胞内游离钙显著增加,线粒体膜电位、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著降低。丹参酮ⅡA可呈浓度依赖性显著降低细胞内游离钙浓度,增加线粒体膜电位、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结论:丹参酮ⅡA可以抑制过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡,这可能与其增强细胞Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,降低细胞内钙超载有关。     

酸枣仁皂苷A抗过氧化氢诱导心肌细胞凋亡的作用及机制研究

目的:观察酸枣仁皂苷A对过氧化氢诱导心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:采用差速贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞,以500μmol/L过氧化氢作用4h建立心肌细胞氧化损伤模型,以酸枣仁皂苷A(20mg/L)在造模前干预24h。四唑盐(MTT)比色法检测心肌细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Caspase活性定量检测caspase-3及caspase-9的活性。结果:模型组经500μmol/L过氧化氢作用4h后,细胞活力显著下降,凋亡率显著增高。与模型组比较,酸枣仁皂苷A提高细胞活力及显著降低细胞凋亡率。模型组的caspase-3及caspase-9活性显著升高。与模型组比较,酸枣仁皂苷A组的caspase-3及caspase-9活性显著下降。结论:酸枣仁皂苷A可抑制过氧化氢诱导心肌细胞损伤,这可能与其抑制线粒体信号通路中caspase-3及caspase-9的活性有关。     

二参汤对急性心肌缺血模型大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的:通过观察二参汤对心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨二参汤治疗心肌缺血的机制.方法:将健康Wistar大鼠用随机数字表法分为5组,二参汤高、中、低剂量组(100 g/kg、50 g/kg、20 g/kg),空白对照组和模型对照组,每组10只,建立冠心病大鼠模型,观察二参汤对冠心病模型心肌病理损伤的修复作用,采用流式细胞术观察心肌细胞凋亡水平,采用免疫组化方法观察BCL-2、BAX蛋白的表达.结果:与模型对照组相比,二参汤组大鼠心肌排列较整齐,肌纤维轻度肿胀,心肌间质水肿,无脂质沉着;二参汤组心肌细胞凋亡率明显低于模型组(P＜0.05);二参汤可抑制心肌细胞BAX蛋白表达,上调BCL-2表达.结论:二参汤可拮抗心肌细胞凋亡,通过调节BCL-2/BAX之间的平衡,调整细胞凋亡基因平衡,抑制过度凋亡,保护心肌细胞,达到治疗冠心病作用.     

开心胶囊Ⅰ号对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡调控作用的实验研究

目的从细胞凋亡角度进行动物实验研究,探讨开心胶囊Ⅰ号在临床上防治无症状心衰、轻度心衰的治疗作用机制,为揭示防治心力衰竭提供依据.方法用结扎左冠状动脉主干致大鼠心肌梗塞后作为心衰模型,随后分为假手术对照组、心衰空白对照组、开心胶囊大剂量组、开心胶囊小剂量组、开博通等5组,用不同实验条件处理8周后,分别测定梗塞周围心肌细胞的凋亡指数和bcL-2、P53蛋白的表达.结果心衰空白对照组凋亡指数较假手术对照组增加(P＜0.05);开心胶囊Ⅰ号大剂量组较心衰空白对照组减少(P＜0.05).心肌细胞bcL-2蛋白表达结果表明,心衰空白对照组表达较假手术组增加(P＜0.001);开心胶囊Ⅰ号大剂量组较心衰空白对照组增多(P＜0.05).各组P53蛋白表达未能显示阳性结果.     

黄芪甲苷减轻5-氟尿嘧啶诱导大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的 本研究评估黄芪甲苷对5-氟尿嘧啶诱导大鼠心肌损伤心肌结构及功能的保护作用,同时探索黄芪甲苷对心肌细胞凋亡的影响.方法 选取8周龄雄性SD大鼠,分为对照组、模型组、黄芪甲苷干预组.以5-氟尿嘧啶注射液,隔日1次,腹腔注射7次建立心脏毒性模型组;干预组给与黄芪甲苷稀释液,灌胃,连续2周进行干预.检测血清心肌酶CK-M...     

血必净注射液对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡保护作用的机制研究

目的观察血必净注射液对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨其相关机制。方法 60只SD大鼠随机分为空白对照组20只,模型组20只,血必净组20组。血必净注射液(4 m L/kg)预先给药,连续3 d;模型组及空白对照组予生理盐水(4 mL/kg),连续3 d。采用大肠杆菌内毒素注射法复制脓毒症大鼠模型。分别于造模后12、24 h观察脓毒症大鼠心肌形态学改变;硫代巴比妥酸显色法检测心肌组织丙二醛(MDA)含量;黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)测定超氧化物歧化酶(SOD)活力;检测心肌细胞Caspase-3活性检测。结果空白对照组心内、外膜完整。与空白对照组比较,模型组心肌组织显示出无序的心内膜结构,广泛的炎症细胞浸润。血必净组心肌组织损伤程度有所降低,但仍有心肌结构轻微混乱,可见炎症细胞浸润、毛细血管扩张,出血,细胞坏死和纤维化,24 h时上述改变稍减轻。12 h时各组心肌组织MDA含量无显著差异(P0.05);与空白对照组比较,24 h时模型组心肌组织的MDA含量明显升高;与模型组比较,24 h时血必净组MDA下降明显(P 0.01)。12 h时,与空白对照组比较,模型组心肌组织SOD含量下降明显(P 0.05),与模型组比较,血必净组心肌组织SOD含量升高明显(P 0.01)。与空白对照组比较,24 h时模型组心肌组织的MDA含量明显升高;与模型组比较,24 h时血必净组SOD下降明显(P 0.05)。12 h时,与空白对照组比较,模型组的Caspase-3活性明显升高(P 0.01),与模型组比较,血必净组心肌组织Caspase-3活性下降明显(P 0.01)。与空白对照组比较,模型组的Caspase-3活性明显升高(P 0.01);与模型组比较,24 h时血必净组Caspase-3下降明显(P 0.01)。结论预先给予血必净注射液对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡具有保护作用,这可能与血必净注射液能够降低心肌细胞氧化损伤、减少心肌细胞凋亡有关。     

真武汤对慢性肾衰竭大鼠肾功能影响的实验研究

目的:观察真武汤对实验性慢性肾衰竭大鼠肾功能的影响。方法:采用“单肾切除加腺嘌呤灌胃法”建立大鼠慢性肾衰竭模型。予真武汤灌胃治疗。每周测体重2、4h尿量和24h尿蛋白,给药4周后处死取血测SCr、BUN、血钙、血磷、红细胞计数、血红蛋白含量。结果:真武汤在24h尿蛋白量、SCr、BUN、血磷、血钙、血红蛋白方面的作用与模型组对比有改善。结论:真武汤对单侧肾切除后腺嘌呤性慢性衰竭大鼠的肾功能具有一定的改善作用。     

脾虚大鼠心肌细胞超微结构动态变化的实验研究

用过劳及饮食失节法塑造大鼠的脾虚模型，动态观察其心肌细胞超微结构，结果提示脾虚大鼠心肌细胞线粒体的变化是一个由轻到重的渐进过程，与空肠线粒体的病变程度密切相关，随营养物质吸收障碍加重而渐趋加重，是脾虚证心功能逐渐降低的形态学基础和形成机理