泼尼松联合阿奇霉素序贯疗法治疗儿童重症肺炎支原体肺炎的疗效及对血清TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白和下游炎性因子水平的影响

目的 探讨泼尼松联合阿奇霉素序贯疗法治疗儿童重症肺炎支原体肺炎的疗效及对血清Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白和下游炎性因子水平的影响。方法 招募2019年1月至2022年6月唐山市妇幼保健院收治的儿童重症肺炎支原体肺炎患者120例,采用随机数字表法将其分为对照组(采用阿奇霉素治疗,60例)和观察组(采用泼尼松联合阿奇霉素治疗,60例)。治疗4周后,比较两组治疗效果、临床肺部感染量表(CIPS)评分、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白以及下游炎性因子的水平。结果 观察组患者的体温恢复时间、咳嗽缓解时间、咳痰缓解时间、喘息缓解时间、肺部啰音消失时间较对照组更快,住院时间更短,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组的体温、白细胞计数、气道分泌物、氧合情况、胸部X射线、痰培养等CIPS项目评分以及总分均较治疗前降低,且观察组评分较对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组TLR4、MyD88、NF-κB、C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)水...     

TLR4/MyD88/NF-κB信号通路与溃疡性结肠炎

溃疡性结肠炎(UC)是一种发病机制尚未完全明确的非特异性炎症性疾病,免疫反应异常是UC发病的主要原因。研究表明,Toll样受体4(TLR4)通过胞内白细胞介素-1受体(IL-1R)同源结构域,并利用IL-1R下游信号传递分子髓样分化因子88(MyD88)、IL-1R相关激酶(IRAK)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF6)等,介导病原体诱导内皮细胞中NF-κB的活化,产生免疫炎性细胞因子,从而导致UC的发生。本文就TLR4/MyD88/NF-κB信号通路与UC的发病作一综述。     

小干扰RNA 沉默Toll样受体4表达对慢性温和应激 ApoE-/-小鼠腹腔巨噬细胞TLR 4/ NF-κB途径基因表达的影响

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默Toll样受体4(TLR4)基因对慢性温和应激ApoE-/-小鼠腹腔巨噬细胞促炎症细胞因子表达的影响.方法 针对小鼠TLR4基因设计2条siRNA和一条无关序列,再据每一序列合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含GFP的载体pRNAT-H1.1/Adeno相连,转染293A细胞,实时荧光PCR筛选有效的一条siRNA,经腺病毒颗粒包装与病毒扩增并感染293A细胞,G418筛选后,挑取单个阳性克隆放大培养,检测病毒滴度.120只雄性ApoE-/-小鼠随机分为三组:(1)慢性温和应激组;(2)慢性温和应激+siRNA组(10 μL/只,尾静脉注射,每5日一次);(3)慢性温和应激+腺病毒空载体组.每组ApoE-/-小鼠40只,实验动物都以高脂、高胆固醇饲料喂养,分别在接受慢性温和应激0、4、12周后3个时间点处死动物,收集小鼠腹腔单核巨噬细胞,以Western Blotting方法检测其TLR4和核因子κB(NF-κB)蛋白表达,ELISA法检测腹腔单核巨噬细胞培养上清液白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α表达.结果 转染siRNA1和siRNA2后的292A细胞中TLR4 mRNA表达水平较空白对照组分别下降56%和67%,逐孔稀释滴度测定法测定的病毒滴度为3.4×1014 TU/L;遭受4、12周慢性温和应激后,ApoE-/-小鼠血浆中皮质醇激素显著升高,但在同一时间点内,各组ApoE-/-小鼠血浆皮质酮激素浓度相比,差异没有统计学意义(P>0.05);与同一时期慢性温和应激组相比,siRNA组腹腔巨噬细胞TLR4和核因子κB蛋白表达水平明显降低 (均P<0.05),其培养细胞上清液中的白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α含量显著减少(P<0.01).结论 siRNA沉默TLR4基因能有效抑制TLR4 /NF-κB-IL-1β 和肿瘤坏死因子α的表达,提示TLR4/ NF-κB途径在慢性温和应激诱导的慢性炎症应答中可能有着重要作用.     

老年鼻咽癌癌组织中Kruppel样因子5及Kruppel样因子9表达与患者复发的相关性

目的 探讨老年鼻咽癌癌组织中Kruppel样因子5(KLF5)、Kruppel样因子9(KLF9)表达与患者复发间的关系。方法 回顾性分析2016年5月至2018年5月湖南省脑科医院收治的263例老年鼻咽癌患者的临床资料,患者治疗后均行5年院外随访,观察患者是否出现复发。通过Western blotting技术检测老年鼻咽癌患者癌组织中KLF5、KLF9相对蛋白表达量,比较复发患者与非复发患者的基础资料信息[性别、年龄、国际抗癌联盟(UICC)分期、病理类型、疗程延长时间、放疗剂量、是否放疗联合化疗、是否鼻腔受侵、是否口咽受侵、是否颅底骨质受侵、是否颅内受损、是否颅神经损伤]及KLF5、KLF9差异。通过多因素logistic逐步回归分析老年鼻咽癌患者复发的危险因素。采用SPSS 22.0软件进行数据分析。根据数据类型,组间比较分别采用t检验及χ²检验。结果 263例老年鼻咽癌患者治疗结束后行5年院外随访,复发患者共27例(10.27%)。与非复发组患者相比,复发组患者UICC分期Ⅲ～Ⅳ期、未行放疗联合化疗、颅底骨质受侵、颅神经损伤占比较高,差异有统计学意义(均P＜0.05)。与非复发组患者相比,复发组患者KLF5、KLF9相对蛋白表达量下降,差异有统计学意义(P＜0.05)。对KLF5、KLF9进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,其对老年鼻咽癌患者复发有较好的预测价值,且联合预测价值更高,曲线下面积分别为0.800、0.790、0.894,且均有P＜0.05。多因素logistic回归分析显示,UICC分期Ⅲ～Ⅳ期(OR=3.420,95%CI 1.715~6.820)、未行放疗联合化疗(OR=1.434,95%CI 1.106~1.859)、颅底骨质受侵(OR=2.790,95%CI 1.337~5.822)、颅神经损伤(OR=1.249,95%CI 1.026~1.520)、KLF5＜2.495(OR=4.453,95%CI 1.469~13.498)、KLF9＜0.305(OR=2.719,95%CI 1.604~4.609)是老年鼻咽癌患者复发的危险因素。结论 老年鼻咽癌患者癌组织内KLF5、KLF9表达下降,且KLF5、KLF9表达为患者复发的影响因素。     

抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子单克隆抗体在冠状动脉硬化患者肺炎衣原体感染诊断中的初步应用

目的 制备抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白的单克隆抗体,检测冠状动脉硬化患者的外周血单核细胞和冠状动脉瘤斑块中肺炎衣原体特异性抗原.方法 以肺炎衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白免疫小鼠,与SP2/0细胞融合后,采用间接ELISA和Western blot筛选阳性杂交瘤细胞,经亚克隆建株;小鼠体内诱生腹水法制备单克隆抗体,用硫酸铵沉淀法对腹水中的单克隆抗体进行纯化,测定其亚类和效价;检测肺炎衣原体标准株以鉴定其特异性.建立间接ELISA方法检测冠状动脉硬化患者外周血单核细胞和冠状动脉瘤斑块标本中的肺炎衣原体抗原.结果 获得4株稳定分泌抗蛋白酶样活性因子重组蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为3F8、7B9、8C4和11B5,其效价分别为1∶28000、1∶16000、1∶38000和1∶12000;经亚类鉴定,3F8和7B9杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体为IgG2b,其它2株均为IgG1.以制备的单克隆抗体建立间接ELISA检测肺炎衣原体抗原,与经典PCR方法的检测结果比较,检出率具有较高的一致性.结论 成功获得了抗肺炎衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白的特异性单克隆抗体,能特异地识别天然肺炎衣原体蛋白酶样活性因子抗原,有望应用于冠状动脉硬化患者肺炎衣原体感染的抗原诊断.     

三七注射液通过介导TLR4/MyD88/NF-κB通路保护尿毒症大鼠肾功能的作用机制

目的 探讨三七注射液对尿毒症大鼠肾功能的影响及其作用机制。方法 60只大鼠采用5/6肾切除法复制尿毒症模型,取建模成功的50只大鼠随机分为模型组、三七注射液(低、中、高)剂量组、阳性对照组各10只;假手术组只做相同处理但不切除肾脏。三七注射液低、中、高剂量组分别腹腔注射三七注射液[1、2、3 g/(kg·d)],阳性对照组腹腔注射盐酸贝那普利[5 mg/(kg·d)],假手术组和模型组给予生理盐水,1次/d,连续21 d。检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β及中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子(KIM)-1、血降钙素原(PCT)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织形态;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹检测Toll样受体(TLR)4、髓样分化因子(MyD)88、核转录因子(NF)-κB mRNA及蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组肾小球间质化、炎症浸润明显;血清Scr、BUN、TNF-α、IL-6、IL-1β、NGAL、K...     

TLR4/MyD88在实验性自身免疫性肝炎小鼠中的表达和意义

目的研究Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)在实验性自身免疫性肝炎(experimental autoimmune hepatitis,EAH)小鼠中的表达情况,探讨TLR4/MyD88在自身免疫性肝炎发病中的作用。方法以同种系小鼠肝组织制备的肝抗原S-100与弗氏完全佐剂等体积混合,腹腔注射免疫C57BL/6小鼠建立EAH模型,并设立正常对照组。在EAH组小鼠免疫后28d取肝组织,行石蜡包埋,病理HE染色及Masson胶原染色,免疫荧光检查血清中自身抗体,采用实时荧光定量PCR方法检测各组小鼠肝脾组织TLR4、MyD88mRNA相对表达水平,免疫组化检测肝组织中TLR4蛋白水平表达情况。结果与正常组小鼠相比,EAH小鼠肝脏中TLR4、MyD88mRNA明显升高,脾脏中TLR4、MyD88mRNA表达水平下降,肝脏中TLR4蛋白表达增加。结论 TLR4和MyD88在自身免疫性肝炎小鼠肝脏中表达水平升高,可以通过TLR4/MyD88依赖型信号途径发挥作用,并可能促进肝纤维化,在自身免疫性肝炎发生发展过程中发挥重要作用。     

老年心脏病血清内源性洋地黄样因子测定与临床意义

本文用放射免疫方法测定82例老年心脏病患者血清内源性洋地黄样因子(EDF)浓度,结果发现:老年冠心病患者血清EDF浓度明显高于正常(P<0.05);老年慢性肺心病患者血清EDF浓度明显低于正常(P<0.05);老年高血压病患者血清EDF浓度略低于正常,但无显著性差异(P>0.05);合并室性早搏患者血清EDF浓度明显升高(P<0.05);而合并快速房颤患者血清EDF浓度明显降低(P<0.05);血清EDF浓度与心力衰竭严重度呈明显负相关(r=-0.2806,P<0.01);心力衰竭纠正后,血清EDF浓度明显升高(P<0.01)。对老年心脏病患者血清EDF浓度变化的机制与意义进行了讨论。     

TRAF6shRNA对LPS/TLR4信号传导通路的体外干预作用

目的:体外研究shRNA(short hairpin RNA)沉默基因TRAF6的表达对RAW264.7细胞增殖的影响,初步探讨TRAF6-shRNA对LPS/TLR4胞内信号转导的影响.方法:构建靶向抑制小鼠TRAF6的shRNA的真核表达载体,转染RAW264.7细胞后培养48h,予以终浓度为100 ng/mL的L...     

210例老年冠心病患者血清内源性洋地黄样因子的变化

２１０例老年冠心病患者血清内源性洋地黄样因子的变化吴荣肖洒朱钦霞张泽灵一、对象和方法１．对象：（１）冠心病（ＣＨＤ）组：２１０例，为１９９１年１月至１９９６年１０月住院或门诊患者，男１３５例，女７５例；年龄６０～８２岁，平均６６．７±５．２岁。符合１...     

大鼠轮状病毒样因子

大鼠轮状病毒样因子(RVLA)是Vonderfecht等在1984年研究一次大鼠乳鼠流行性腹泻时首次发现并报道的。大鼠RVLA与典型轮状病毒(RV)形态相似,也是由11个片段的双股RNA组成。但由于和典型RV无血清学交叉反应以及在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中RNA电泳型亦异而称为RVLA,又称副轮状病毒、新轮状病毒或大鼠无共同抗原性轮状病毒(ADRV)。大鼠RVLA和猪、兔、羊、牛、鸟、貂以及人的副轮状病毒一样,没有RV属特异的     

TLR4/NF-κB与急性冠脉综合征的相关性及通心络的干预作用

目的检测不同类型冠心病患者炎性因子的变化及通心络的稳定斑块作用。方法选择冠心病患者66例,正常对照组24例,比较各组间Toll样受体(TLR)4、核因子(NF)-κB及肿瘤坏死因子(TNF)-α变化。将急性冠状动脉综合征(ACS)患者分为常规治疗组和通心络治疗组,治疗4 w后再次检测上述指标。结果 ACS患者TLR4、NF-κB、TNF-α的表达较稳定性心绞痛组和正常对照组显著增高(P0.01)。治疗后两组TLR4、NF-κB和TNF-α水平均降低(P0.05)。且通心络治疗组TLR4、NF-κB和TNF-α水平降低更显著(P0.05)。结论通心络可减轻动脉的炎症反应,干预动脉粥样斑块的进展,有望成为新的稳定斑块药物。     

转录因子KLF2和KLF4调控人血管内皮细胞血管稳态相关基因表达的特征

[目的] Krüppel样因子(KLF)2和4是与血管稳态密切相关的两个核心转录因子,具有抗炎、抗钙化、抗血栓等多重保护效应。本研究旨在在内皮细胞中阐明并验证KLF2和KLF4共同调控的血管稳态相关基因谱。[方法]使用腺病毒(Ad-KLF2或Ad-KLF4)及对照病毒(Ad-NC)处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24 h后提取RNA并进行转录组测序分析。过表达KLF2和KLF4的测序结果与已报道的KLF2/KLF4双基因敲除鼠测序结果进行叠加。筛选出的差异表达基因通过实时荧光定量PCR在Ad-KLF2或Ad-KLF4处理的HUVEC以及在阿托伐他汀或白藜芦醇处理的HUVEC中进行验证。[结果]转录组学叠加发现,KLF2和KLF4上调的差异基因有256个,KEGG通路富集分析显示这些差异基因主要富集于肥厚型心肌病、扩张型心肌病、ECM-受体交互以及黏着斑、致心律失常性右心室心肌病等;KLF2和KLF4下调的差异基因有145个,KEGG通路富集分析显示这些差异基因主要富集于癌症中的microRNA、糖胺聚糖生物合成-硫酸软骨素/硫酸皮聚糖、矿物质吸收、p53信号通路以及氨基酸生物合成等。...     

胃腺癌中Kruppel样因子4、5和增殖细胞核抗原表达

目的应用免疫组化方法检测胃腺癌术后组织中Kruppel样因子(KLF)4、5和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达特征。方法 51例经病理医师确诊的胃腺癌术后组织作为观察组,40例距肿物边缘5 cm的非肿瘤性胃黏膜组织作为对照组。两组KLF4、KLF5和PCNA蛋白表达应用免疫组化检测。结果两组KLF4、KLF5和PCNA表达差别有显著性。观察组中KLF4、KLF5和PCNA的阳性率均与浸润深度相关,KLF4的阳性率与脉管内瘤栓相关,KLF5的阳性率与肿瘤的最大径、脉管瘤栓相关,PCNA的阳性率与肿瘤的最大径相关。线性相关分析显示观察组中KLF5和PCNA具有正相关性,其他指标间未见明显相关性。结论胃腺癌术后组织中KLF4、KLF5和PCNA异常表达,三者异常表达对肿瘤性的进展过程起一定的作用。KLF5可能对细胞增殖有影响。     

成人和儿童过敏性紫癜肺炎支原体/衣原体感染率分析

目的：探讨儿童和成人过敏性紫癜（HSP）临床肺炎支原体/衣原体感染率差异。方法：对我院2002年1月～2007年7月共147例过敏性紫癜患者的上呼吸道感染病史、临床表现及血清肺炎支原体/衣原体IgG、IgM检测结果进行回顾性分析。比较儿童组和成人组HSP患者在病（诱）因方面的差异。结果：①儿童组HSP患者近期上呼吸道感染病史较成人组多;②进一步血清肺炎支原体/衣原体IgG、IgM检测结果表明儿童组肺炎支原体/衣原体IgG、IgM感染率明显高于成人组。结论：儿童和成人HSP在发病诱因上所不同。上呼吸道感染,尤其肺炎支原体/衣原体感染是儿童HSP的多见诱因,对儿童组HSP发病有重要影响。