消旋聚乳酸/羟基磷灰石/脱钙骨基质材料支架的体外细胞相容性实验研究

目的研究一种新的骨替代材料——消旋聚乳酸／羟基磷灰石／脱钙骨基质(PDLLA/HA／DBM)骨细胞界面形态，评价其生物相容性。方法采用体外细胞培养技术，选用培养的人成骨细胞，通过光镜和扫描电镜等观察，了解细胞在材料中的生长情况和相互关系，并与消旋聚乳酸(PDLLA)及脱钙骨(DBM)相比较。结果随着培养时间的延长，细胞在PDLLA／DBM材料表面的密度增加，未见细胞死亡。细胞以锚状结构牢固地附着于材料表面，并分泌细胞外基质，覆盖并完全包裹材料颗粒。结论PDLLA／HA／DBM与人成骨细胞能早期形成骨性结合界面，具有良好的牛物相容性，可望成为一种新的具有前景的骨替代材料。     

消旋聚乳酸/羟基磷灰石/脱钙骨基质人工骨修复兔桡骨大段骨缺损的实验研究

目的研制理想的,能够修复大段骨缺损的人工骨材料。方法采用乳液共混法将消旋聚乳酸(PDLLA)、羟基磷灰石(HA)、脱钙骨基质(DBM)结合,制成PDLLA/HA/DBM人工骨,并将PDLLA/HA/DBM和PDLLA进行兔桡骨大段骨缺损修复的对比研究。术后2、4、8和12周时摄X片及病理形态学观察及新骨形成定量分析。结果PDLLA/HA/DBM人工骨内新骨形成量明显多于PDLLA及空白对照组(P<0.01),且能够有效修复骨缺损。结论PDLLA/HA/DBM人工骨能促进长骨大段骨缺损的修复,是一种较理想的骨修复材料。     

自组装肽复合脱钙骨基质作为骨髓富集支架材料的实验研究

目的 观察纳米自组装肽RADA16-Ⅰ与脱钙骨基质复合富集材料的表征及性能,为选择性细胞滞留技术(selective cell retention,SCR)提供一种优化的骨髓富集材料.方法 RADA16-Ⅰ在阳离子触发下与脱钙骨基质(demineralized bone matrix ,DBM)构建复合材料.三维视频显...     

RP技术制备PDLLA/TCP人工骨载体与LD-PTH成骨效应相容性的体外实验

目的 :应用快速成形技术 (rapidprototyping ,RP)制备聚消旋乳酸 /磷酸三钙 (PDLLA/TCP)复合人工骨载体 ,探讨其在小剂量甲状旁腺激素 (LD PTH)成骨效应中的细胞生物相容性 ,研发仿生活性人工骨 .方法 :采用RP技术制备PDLLA/TCP(7∶3)复合人工骨载体 ,进行超微结构观察 ;制备PDLLA/TCP材料浸提液以及人骨髓基质细胞 (marrowstromalcells,MSCs)进行分组实验 .A组为常规培养对照组 ;B组为材料浸提液培养组 ;C组为LD PTH间歇用药 +常规培养组 :1 0nmol/LhPTH(1 34)× 6h +常规培养× 4 2h ;D组为LD PTH间歇用药 +浸提液培养组 :1 0nmol/LhPTH(1 34)× 6h +浸提液培养× 4 2h .各组均以 4 8h为 1个作用周期× 8周期 .应用细胞倍增 (NCD)、改良钙 钴法、LuciferYellow(LY)分子探针划痕标记荧光传输技术 (SLDT)及VanKossa钙化结节染色分别检测细胞增殖、活细胞间的间隙连接通讯功能 (GJIC)及体外矿化骨基质形成能力 .结果 :采用RP制备的PDLLA/TCP复合人工骨载体具有规则的空间网状支架结构、相互贯通的孔隙以及材料表面微孔特征 .该材料浸提液对MSCs增殖 (P >0 .0 5 )、LD PTH诱导下GJIC功能及体外矿化骨基质形成能力均无不利影响 .结论 :应用RP技术制备的PDLLA/TCP人工骨载体不仅具有良好的空间超微结构 ,     

骨髓基质干细胞在兔DBM上增殖作用的研究

目的 分析骨髓机制干细胞在兔DBM上增殖作用.方法 2014年3月—2015年7月,以3只大白兔为研究对象,根据Urist方法 制备出DBM(同种脱钙骨基质),测定光密度(OD)值,绘制增殖曲线,分析复合培养后最佳修复软骨移植时机.结果 SEM观察呈现高密度空隙网架结构,平均孔隙率为(60.19±6.1)%;平均孔径大小为(119.42±6.46)μm;兔DBM材料BMSCs体外复合培养后可见大量骨髓基质干细胞粘附,MTT法检测复合培养6d骨髓基质干细胞增殖达到稳定状态.结论 兔脱钙骨基质具有三维网状结构和良好的细胞相容性是一种较好的软骨组织工程支架材料,最适合移植.     

兔骨髓基质细胞与聚DL-乳酸/羟基磷灰石生物相容性的实验研究

目的检测聚DL-乳酸/羟基磷灰石（PDLLA/HA）复合材料的特性,探讨骨髓基质细胞（BMSCs）与PDLLA/HA的生物相容性,为筛选骨组织工程的支架材料提供依据.方法将BMSCs与PDLLA/HA复合体外培养,通过形态学的观察、细胞增殖率及ALP活性的测定,观察PDLLA/HA对培养细胞的影响.结果复合培养时BMSCs能在PDLLA/HA上贴附、繁殖,其生长及功能不受影响.结论 PDLLA/HA具有良好的细胞相容性,能作为骨组织工程种子细胞的支架材料.     

Study on biocompatibility of PDLLA／HA／DBM with co-cultured human osteoblasts in vitro

Objective: To evaluate the osteocompatibility of D, L-polylactic/hydroxyapatite/decalcifying bone matrix (PDIZA/HA/DBM), and compare with PDLLA and DBM. Methods: Human primary osteoblasts isolated from the femoral head of patients were inoculated onto PDLLA/HA/DBM, PLA and DBM respectively. The proliferation rate and collagen I expression were detected. The interface between biomaterial and osteoblasts was investigated with phase contrast microscopy and electron scanning microscopy. Results: Best proliferation rate was observed with the PDLLA/HA/DBM and followed by DBM and PLA, suggesting that PDLLA/HA/DBM satisfying most requirements for the cultivation of human osteoblasts. Scanning electron microscopy showed the morphology of osteoblasts was correlated with the proliferation data. The cells, well spread and flattened, were attached closely on the surface of biomaterial with an arched structure and had normal morphology. The extracellular collagenous matrixs covered the surface of bio-material and packed the granules of biomaterial. Conclusion: PDLLA/HA/DBM can form osteointerface early and have a good biocompability.     

脱钙骨基质的制备及与软骨细胞体外复合的实验研究

目的：探寻良好的软骨组织工程支架材料。方法：制备兔脱钙骨基质（decalcified bone matrix,DBM）,采用液体置换法检测经脱钙2、3、4 d支架材料的孔隙率。扫描电镜观察DBM的超微结构,以及软骨细胞与DBM体外复合培养3 d的黏附情况。结果：脱钙3 d的DBM多孔结构及空隙适合软骨细胞的黏附和增殖。软骨细胞和DBM体外培养3 d黏附良好。结论：DBM是良好的软骨组织工程支架材料。     

羊脱钙骨基质作为骨组织工程支架材料的性能评估

目的 制备山羊脱钙骨基质(decalcified bone matrix,DBM),研究其物理和生物力学特性,为其作为理想的组织工程骨支架材料提供理论依据.方法 制备山羊完全脱钙骨基质,观察其色泽、质地、孔隙度等物理性状,并用扫描电镜观察其孔隙度,测量其孔径;通过测定吸水率评估其亲水性;用生物力学测定仪测定其不同压缩比率下的瞬时形变恢复率、最大形变恢复率及最大极限压缩强度.结果 标准化制备DBM呈乳白色,密度均匀,表面布有较多的微孔,扫描电镜观察其孔径范围为350～450(409.2±39.7)μm,吸水后膨胀,最大值吸水率达(419.0±44.4)%;生物力学测定显示,DBM位移是压缩强度的函数,DBM压缩20%和30%时其最大极限强度分别为(1.43±0.35)N和(1.62±0.51)N,瞬时形变恢复率分别为100%和(91.0±8.2)%.结论 完全脱钙骨基质孔径大,亲水性强,形变恢复好,利于细胞的黏附生长,是理想的组织工程支架材料.     

外消旋聚丙交酯与人胚半月板细胞构建复合物的研究

目的: 研究外消旋聚丙交酯(PDLLA)作为半月板组织工程支架材料应用的可行性.方法: 采用胶原酶阶段消化法获取人胚半月板纤维软骨细胞,碱性成纤维细胞生长因子(Bfgf)作用于第3代细胞,并用MTT比色法得出最佳效应浓度,扩增后的细胞种植于多聚赖氨酸修饰前、后的PDLLA上,在光镜、荧光显微镜、扫描电镜下观察PDLLA的亲水性、细胞吸附性和细胞增殖情况.结果: Bfgf扩增人胚半月板细胞的最佳效应浓度为50 μg/L(P＜0.05);PDLLA亲水性及细胞吸附性欠佳,予多聚赖氨酸修饰后明显改善,细胞在PDLLA上生长良好,3周时已有大量细胞生长.结论: 50 μg/L 的Bfgf可用于体外大量扩增人胚半月板细胞;PDLLA经多聚赖氨酸修饰后可表现出良好的亲水性、细胞吸附性和体外生物相容性,可作为半月板组织工程细胞培养支架材料用.     

姜黄素通过P53/P21/PCNA/eIF4E信号通路抑制A549细胞增殖

目的研究姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法不同浓度姜黄素处理A549细胞后,分别用平板克隆形成实验、MTT法检测A549细胞的克隆形成数和增殖。20μmol/L姜黄素处理A549细胞24、48、72 h后,FCM检测细胞周期;RT-PCR、Western blot检测P53、P21、PCNA及eIF4E mRNA和蛋白的表达水平。结果 20μmol/L姜黄素可引起A549细胞S期阻滞,抑制细胞增殖,减少细胞的克隆形成数。20μmol/L姜黄素作用A54924 h后P53、P21 mRNA和蛋白表达上调,48 h或72 h后变得尤明显。此外,20μmol/L姜黄素处理A549细胞48 h后可引起PCNA、eIF4E mRNA和蛋白表达水平下调,72 h后尤明显。结论姜黄素可抑制A549的克隆形成数和细胞增殖,其机制可能与姜黄素促进P53和P21基因表达,抑制PCNA和eIF4E基因表达有关。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD_8~+CD_(25)~+T细胞亚群改变的初步研究

目的:检测SLE患者与正常人外周血CD8+CD25+T细胞亚群的数量、比例变化,研究其与疾病活动性、临床病理改变的相关性,探讨CD8+CD25+T细胞亚群在系统性红斑狼疮疾病发生、发展中的意义。方法:分离外周血单个核细胞,利用三色流式细胞术分别检测CD3+T细胞中CD8+CD25+、CD8+CD25-、CD8-CD25+和CD8-CD25-亚群的比例,并计算其细胞数量。结果:SLE患者外周血T细胞中CD8+CD25+亚群较正常人显著减少,并导致CD25-/CD25+比值异常增高;并且CD8+CD25+亚群的百分率的降低和CD25-/CD25+比值的增高与肾损相关。结论:CD8+CD25+亚群的减少可能在SLE的发生上较CD8-CD25+细胞亚群减少具有更重要的病理意义。     

模拟缺血/再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞的凋亡

目的模拟缺血/再灌注诱导人离体的胃黏膜上皮细胞损伤模型,观察再灌注不同时间点胃黏膜上皮细胞凋亡情况并分析其规律。方法采用人胃黏膜上皮细胞株进行体外培养并传代,细胞以缺氧（5%CO2、1%O2、94%N2）＋无糖KR液模拟缺血、缺氧,复氧、复糖模拟再灌注诱导胃黏膜上皮细胞凋亡,用流式细胞仪、Ho-echst33258染色法观察正常对照组及模拟损伤组于模拟缺血1 h,再灌注3、6、12 h细胞凋亡的情况及变化规律。结果①胃黏膜上皮细胞12～24 h贴壁,24 h后有少量上皮样细胞从周边爬出,48 h后细胞呈指数样生长,72 h后细胞已基本能达到融合。②模拟胃缺血/再灌注后细胞凋亡率于缺血1 h、再灌注6 h时出现高峰,且与正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）。经Hoechst33258染色,荧光显微镜下观察可见细胞于缺血1 h、再灌注6h时产生典型的凋亡形态学变化如核浓染、核碎裂、边集等。结论成功模拟了缺血/再灌注诱导人离体的胃黏膜上皮细胞损伤模型;该损伤模型可引起胃黏膜上皮细胞的凋亡,且在缺血1 h、再灌注6 h时为高峰。     

基于噻吩并吡嗪类的-(D-A1)m-(D-A2)n-型三元无规共聚物的合成及光电性能

选用苯并二噻吩（BDT）类衍生物作为给体单元D,并选用噻吩并吡咯二酮（TPD）类衍生物（A₁）和噻吩并吡嗪（TP）类衍生物（A₂）作为共同的受体单元,通过Stille偶联聚合制备了-（D-A₁）_m-（D-A₂）_n-型三元无规共聚物,并同时合成了基于BDT和TP的二元共聚物。采用核磁共振氢谱（¹H-NMR）、凝胶液相色谱（GPC）和热重（TG）表征聚合物的结构与性能;采用紫外-可见光谱和循环伏安法测试聚合物的光电性能,研究了以这类聚合物为给体材料制备的太阳能器件的光伏性能。结果表明：三元无规共聚物具有较高的相对分子量和热稳定性,在太阳光范围具有强而宽的吸收,同时具有相对较低的最高电子占用轨道HOMO和最低电子占用轨道LUMO能级。基于三元无规共聚物P2的器件,其光电转换效率可达到1.22%,优于相应的二元共聚物P1的1.15%。     

最优化细胞因子诱导杀伤细胞/自然杀伤细胞 少因子培养体系的探索

 【目的】 尝试使用IL-2、IL-7和IL-12的单因子、双因子和三因子组合进行杀伤细胞/自然杀伤细胞(CIK/NK)细胞扩增培养,探讨最优化CIK/NK细胞少因子培养体系的建立.【方法】 采用Ficoll-Hypaque法分离脐血单个核细胞并分成6组,每组分别加入IL-2(80 ng/mL)、 IL-7(40 ng/mL)及IL-12(40 ng/mL)的单因子、双因子和三因子组合(IL-7组;IL-12 组;IL-7+IL-12组;IL-2 + IL-7组;IL-2 + IL-12组;IL-2 + IL-7 + IL-12组),每组6个重复孔,共培养21 d收获细胞。在细胞培养开始和第21天,实验各组取细胞悬液进行流式细胞仪检测CD3+ CD56 + CIK细胞及CD3- CD56+ NK细胞比例。【结果】 单因子培养体系的IL-12组在CIK细胞扩增比例上是各组中最高的(22.96 ± 1.41)%,双因子体系的IL-2 + IL-12组的CIK细胞扩增比例也达到(18.58 ± 0.68)%;上述两组的CIK细胞扩增比例已经达到或基本达到使用传统多因子扩增方法所获得的比例&;#65377;IL-12组的NK细胞扩增比例为(30.23 ± 1.18)%,IL-2 + IL-7组的NK细胞扩增比例也达(29.52 ± 0.89)%。 【结论】 使用IL-12、IL-2 + IL-12或IL-2 + IL-7组合的少因子培养体系进行CIK/NK细胞的培养扩增是可行的。     

P21/waf1/cip1在U937细胞分化过程中的表达

目的:探讨P21/waf1/cip1在U937细胞分化中表达情况.方法:用佛波脂(PMA)诱导U937细胞向单核-巨噬细胞分化,经流式细胞术测定细胞P21/waf1/cip1基因表达及细胞周期的变化.用倒置显微镜观察细胞分化的形态学变化.结果:U937细胞向单核-巨噬细胞分化过程中细胞由分散和悬浮转变为粘附和贴壁,呈现了P21/waf1/cip1高度表达,同时细胞周期停滞于G1和G2/M期,无细胞凋亡. 结论:P21/waf1/cip1在U937细胞分化过程中有高表达,并伴随细胞周期变化.     

羊脂油对淫羊藿炮制品提取物中宝藿苷I在大鼠体内药动学特征的影响

目的 研究炮制辅料羊脂油对淫羊藿炮制品提取物中主要活性成分宝藿苷I在大鼠体内药动学特征的影响。方法 大鼠分别ig给予相同剂量（15 g/kg）的淫羊藿生品提取液、加热品提取液、羊脂油炙品提取液,HPLC-ESI-MS法测定大鼠宝藿苷I血药浓度,经DAS 2.0程序处理数据,比较宝藿苷I药动学参数。结果 3种淫羊藿炮制品提取物在血液中的达峰浓度（C_max）、药时曲线下面积（AUC）等药动学参数大小为油炙品＞加热品＞生品,均具有统计学差异。结论 羊脂油能促进淫羊藿提取物中宝藿苷I的口服吸收,提高其生物利用度。     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞免疫抑制及其在疫苗免疫保护中作用的研究进展

调节性T细胞(Treg)通过高表达CD25分子在免疫应答过程中发挥免疫抑制功能,其功能是通过下调自身免疫应答诱导自身免疫耐受和自身免疫性疾病的发生。正常情况下Treg与辅助性T细胞17互相拮抗,保持机体平衡。在感染性疾病和自身免疫性疾病中,通过增加Treg可减缓病情。通过去除Treg联合疫苗免疫的策略,有助于提高抗感染和抗肿瘤的疗效。因此,在疫苗免疫保护中,对Treg免疫抑制功能的研究能够为研制新型疫苗奠定理论基础。     

Compound48／80对ApoE^-／-小鼠主动脉粥样病变的影响

目的 以APOE^-／-小鼠为研究对象，复制AS模型，以MCs促活剂Cbmpound48／80作为处理因素，研究Compound48／80对ApoE^-／-小鼠AS模型斑块的影响。方法 20只8周龄ApoE^-／-小鼠随机分为空白对照组与Compound48／80组（腹腔注射Compound48／80溶液0．15mg/kg，每周两次）普通饲料饲养24周后行安乐死，摘眼球取血，分离血清，采用酶法测定血清脂质含量，苏丹Ⅳ大体染色，小鼠原位灌流固定，取胸主动脉置10％中性缓冲福尔马林中固定，石蜡包埋，连续切片，HE染色。结果Compound48／80组与对照组之间的各项血脂含量无明显差异；苏丹Ⅳ大体染色结果显示：两组胸、腹主动脉均有斑块形成，但Compound48／80组小鼠胸主动脉AS病变更加严重；HE染色结果显示：对照组和Compound48／80组胸主动脉斑块面积分别为0．5±0．15mm^2和1．06±0．18mm^2．P〈0．05；对照组和Compound48／80组胸主动脉最大狭窄程度分别为14±4％和34±10％，P〈0．05。结论 （1）Compound48／80对ApoE^-／-小鼠血脂含量无明显影响；（2）Compound48／80促进ApoE^-／-小鼠的胸、腹主动脉AS斑块的形成。     

大黄素对人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖的影响

目的 观察大黄素对人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖的影响。方法 采用MTT法测定MNK-45细胞和MGC8-03细胞增殖抑制率;采用AO/EB双染观察细胞形态学变化;采用流式细胞仪测定细胞周期。结果 大黄素（5～80 μg/mL）对MNK-45和MGC8-03细胞增殖均具有显著抑制作用。P＜0.01或0.05）,且药物剂量越大,作用时间越长,其抑制作用越强（P＜0.01）;大黄素作用于两种细胞后荧光显微镜下观察均显示细胞凋亡特征;大黄素使MNK-45和MGC8-03细胞增殖被阻滞于G₀/G₁期。结论 大黄素能抑制人胃癌MNK-45和MGC8-03细胞增殖,诱导其凋亡,影响其细胞周期时相的分布。