IgA肾病患者血清aIgA1对足细胞及系膜细胞增殖的影响

目的观察IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)患者与正常人的血清热聚合IgA1(aggregated IgA1,aIgA1)对足细胞及系膜细胞增殖的影响。方法利用层析法获得IgAN患者与健康人的血清单体IgA1(monom eric IgA1,m IgA1),将m IgA1热聚合为aIgA1,分别刺激小鼠MPC5足细胞及MSC-1097系膜细胞株,利用MTT法检测细胞增殖。结果①不同浓度aIgA1刺激组间足细胞MTT吸光度差异有统计学意义。相比于阴性对照组(SFM),1 mg/m l、2 mg/m l组吸光度分别为0.456(P=0.033)、1.663(P=0.010)。②不同浓度aIgA1刺激组间系膜细胞MTT吸光度差异有统计学意义。相比于阴性对照组(SFM),0.25 mg/m l、0.5 mg/m l、1 mg/m l组吸光度分别为1.667,1.736,1.772(P=0.000),2 mg/m l组吸光度为1.148(P=0.086)。结论足细胞可能会直接对IgA1产生反应;aIgA1可以影响足细胞及系膜细胞增殖,且对两种细胞增殖的影响存在不同。     

IgA肾病患者血清algA1对系膜细胞增殖的影响

目的 观察Iga肾病(IgAN)患者与正常人的血清热聚合IgA1(algA1)对系膜细胞(MC)增殖的影响.方法 收集原发性IgAN患者及健康人的血清标本,利用Jacalin-agarose亲和层析联合Sephacryl S-200 HR分子筛层析法分离获得血清单体IgA1(mlgA1),将mlgA1热聚合为algA1.利用患者及正常人的algA1分别刺激小鼠MSC-1097系膜细胞株,利用MTT法检测algA1对系膜细胞增殖的影响.结果 algA1刺激48h组的吸光度是24h组的1.59倍(P=0.000).不同浓度algA1刺激组问MTT吸光度的差异有统计学意义(P=0.000),相比于阴性对照组(SFM).0.25 mg/mL组、0.5 mg/mL组、1 mg/mL组的吸光度分别为SFM的1.67、1.74、1.77倍(P=0.000);2 mg/mL组的吸光度是SFM的1.15倍(P=0.086).在刺激24h时患者0.25 mg.mL组的algA1就可促进系膜细胞增殖了,其吸光度是SFM的1.34倍(P<0.05),而正常对照组则耍在浓度达到1mg/mL时才引起系膜细胞增殖,其吸光度为SFM的1.33倍(P<0.05).结论 研究结果提示患者及正常人的algA1均可促进系膜细胞增殖,这种增殖表现为时间依赖性及一定的剂量依赖性.在高浓度时algA1促系膜细胞增殖的作用消失了;患者的algA1可能更易与系膜细胞结合,刺激相同时间时患者低浓度algA1既可引起MC增殖.     

IgA肾病患者血清algAl对足细胞及系膜细胞增殖的影响

目的观察IgA肾病（IgA nephropathy,IgAN）患者与正常人的血清热聚合IgA1（aggregated IgA1,aIgA1）对足细胞及系膜细胞增殖的影响。方法利用层析法获得IgAN患者与健康人的血清单体IgA1（monom eric IgA1,m IgA1）,将m IgA1热聚合为aIgA1,分别刺激小鼠MPC5足细胞及MSC-1097系膜细胞株,利用MTT法检测细胞增殖。结果①不同浓度aIgA1刺激组间足细胞MTT吸光度差异有统计学意义。相比于阴性对照组（SFM）,1 mg/m l、2 mg/m l组吸光度分别为0.456（P=0.033）、1.663（P=0.010）。②不同浓度aIgA1刺激组间系膜细胞MTT吸光度差异有统计学意义。相比于阴性对照组（SFM）,0.25 mg/m l、0.5 mg/m l、1 mg/m l组吸光度分别为1.667,1.736,1.772（P=0.000）,2 mg/m l组吸光度为1.148（P=0.086）。结论足细胞可能会直接对IgA1产生反应;aIgA1可以影响足细胞及系膜细胞增殖,且对两种细胞增殖的影响存在不同     

过敏性紫癜性肾炎患儿血清 IgA1 对肾小球系膜细胞增殖及 TNF-α 分泌的影响

目的观察过敏性紫癜性肾炎（HSPN）患儿及健康儿童血清IgA1对小鼠肾小球系膜细胞（MES）增殖及TNF-α分泌的影响。方法采集2013年5～12月于河南中医学院第一附属医院儿科住院的40例HSPN患儿及20名健康儿童血清：通过Jacalin亲和层析联合Superdex-200分子筛层析的方法将血清中单聚体IgA1（mIgA1）纯化、分离,将mIgA1热聚合为聚合IgA1（aIgA1）;采用不同浓度的患儿及健康儿童的aIgA1分别刺激MES细胞株,用MTT法检测24h及48h的细胞增殖情况;收集培养48h的细胞培养基上清,用ELISA法测定TNF-α的水平。结果在HSPN患儿aIgA1刺激结果中,不同浓度aIgA1刺激组间MTT实验吸光度的比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,24hMTT实验结果显示：与阴性对照比较,aIgA1刺激浓度在250、1000μg／mL时,细胞增殖差异均有统计学意义（P〈0．05）,在aIgA1浓度为500和750μg／mL时,细胞增殖差异有高度统计学意义（P〈0．01）;48hMTT实验结果显示：与阴性对照比较．在aIgA1刺激浓度50μg／mL时,细胞增殖差异有统计学意义（P〈0．05）,在100～1000μg／mL时,细胞增殖差异均有高度统计学意义（P〈0．01）。健康儿童在aIgA1刺激浓度在750和1000μg／mL可刺激MES增殖,与阴性对照比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。HSPN患儿aIgA1可刺激MES分泌TNF-α水平升高,与阴性对照比较,差异有高度统计学意义（P〈0．01）,且随aIgA1浓度增加呈上升趋势。结论HSPN患儿aIgA1可刺激MES增殖及分泌TNF-α水平增加,且这一结果具有浓度依赖性及饱和性。     

IgA肾病患者血清IgA1活化细胞外信号调节激酶并诱发肾小球系膜细胞增殖的作用

目的探讨IgA肾病(IgAN)患者血清IgA1对体外培养的正常人肾小球系膜细胞(HMC)细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化及细胞增殖的刺激作用,并比较其与正常人血清IgA1作用力的异同.方法亲和层析提取正常人及患者血清IgA1,加热聚合(aIgA1),原代培养正常人HMC,Western 杂交测定ERK 蛋白磷酸化,DNA荧光标记技术结合流式细胞仪观察HMC细胞周期变化,直接计数检测HMC增殖.结果 (1)患者及正常人aIgA1均呈时间依赖性诱发HMC ERK信号蛋白磷酸化、DNA 合成和细胞增殖,二者作用趋势相似,作用高峰时间分别为孵育15 min、24～36 h和48～72 h;(2)患者aIgA1刺激强度显著高于正常人aIgA1,在作用高峰时间,患者组和正常人组磷酸化ERK/总ERK 的比值分别为49.5%±10.1%和30.7%±4.4%,S-G2-M期细胞数所占的比例分别为(33.0%±0.3%和30.7%±0.7%,HMC计数分别为(57.78±2.45)×104/ml和(50±1.51)×104/ml,差异均有显著意义(P<0.05);(3)阻断ERK通路只能部分抑制患者aIgA1对HMC增殖的诱导作用. 结论 IgAN患者血清IgA1可以诱导正常人HMC ERK信号蛋白磷酸化并刺激细胞增殖,其作用强于正常人血清IgA1.     

IgA肾病患者血清IgA1对足细胞凋亡的影响

【目的】 探讨IgA肾病患者血清IgA1对足细胞凋亡的影响。 【方法】 Jacalin 亲和层析和Sephacryl S-200 分子筛用来纯化蛋白,单体IgA1(mIgA1)热聚合为聚合体IgA1(aIgA1), 同步化的足细胞与患者和健康对照来源的aIgA1共培养,流式细胞仪评价细胞凋亡情况,Real time PCR 检测Bcl-2, Bax, Fas and Fas-L mRNA表达情况。 【结果】 IgAN患者的aIgA1可诱导足细胞的凋亡,其凋亡率显著高于对照组[(30.5 ± 5.4)% vs (20.6 ± 4.5)%, P < 0.05];而健康对照的aIgA1可诱导足细胞的凋亡,凋亡率也显著高于对照[(31.4 ± 5.3)% vs (20.6 ± 4.5)%,P < 0.05];IgAN患者的aIgA1诱导足细胞的凋亡呈现时间和浓度依赖?与对照相比,IgAN患者和健康对照来源的aIgA1诱导足细胞Fas mRNA 升高2.4倍(P < 0.05),而Bcl-2 mRNA和Bax mRNA无显著性变化(P > 0.05)。【结论】 IgA肾病患者血清IgA1可诱导足细胞的凋亡,其可能参与IgAN的进展。     

单纯IgA肾病与IgA肾病合并糖尿病患者循环免疫复合物的功能差异性探索研究

背景　IgA肾病（IgAN）是目前世界范围内最常见的原发性肾小球疾病之一，目前认为其发病是由肾小球系膜区的循环免疫复合物（CIC）沉积引起。同样，中国糖尿病发病率逐年升高，已成为困扰国民健康的重大难题。目的　CIC可以促进IgAN患者系膜细胞增殖和炎性因子的产生，本研究旨在探索单纯IgAN患者与IgAN合并糖尿病患者CIC的功能差异。方法　选取2017年2月-2018年2月在郑州大学第一附属医院就诊并行肾脏活检确诊的28例原发性IgAN患者，其中单纯IgAN 20例（单纯IgAN组）和IgAN合并糖尿病8例（IgAN合并糖尿病组），另选取同期性别及年龄匹配的本院体检科体检健康者7例（正常组）。收集IgAN患者临床资料和病理资料。采集三组受试者10 ml外周血，提取血浆CIC，用相同浓度刺激人肾小球系膜细胞，采用CCK-8试剂盒检测系膜细胞增殖能力，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测细胞培养上清液白介素6（IL-6）和趋化因子配体1（CXCL-1）水平。结果　单纯IgAN组三酰甘油、C3、C4水平低于IgAN合并糖尿病组，牛津分类中存在内皮细胞增生（E1）患者比例高于IgAN合并糖尿病组（P<0.05）。三组系膜细胞增殖能力比较，差异有统计学意义（P<0.001）；其中单纯IgAN组系膜细胞增殖能力均高于正常组和IgAN合并糖尿病组（P<0.05）；IgAN合并糖尿病组和正常组系膜细胞增殖能力比较，差异无统计学意义（P=0.250）。三组IL-6、CXCL-1水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。结论　IgAN合并糖尿病患者的CIC与单纯IgAN患者相比，具有相似的促进肾小球系膜细胞产生炎性因子的能力，但促进肾小球系膜细胞增殖的能力较低，表明单纯IgAN患者和IgAN合并糖尿病患者的CIC成分可能不同。     

肾小球内IgA沉积量对IgA肾病患者系膜病变的影响研究

目的探讨肾小球内IgA沉积量与IgA肾病（IgAN）系膜病变的关系。方法将70例原发性IgAN患者根据系膜细胞增生情况分为无系膜细胞增生（M0）组和有系膜细胞增生（M1）组各35例,两组患者的肾活检组织切片行免疫组织化学IgA染色,采用图像分析软件定量分析肾小球内IgA沉积物面积（Area）、平均光密度（Densitymean）、累计光密度（IOD）和IgA沉积面积占肾小球面积比值（PerArea）,并比较两组患者的临床参数。结果两组患者性别、年龄、血肌酐、估算的肾小球滤过率、血尿酸、血IgA、血C3、血C4水平及低eGFR、高尿酸血症、高血IgA、低血C3、低血C4、伴有肾小球内皮细胞增生和节段性硬化的发生率比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。与M0组相比,M1组患者24h尿蛋白定量较高而血白蛋白水平较低,低白蛋白血症和伴有肾小管间质病变的发生率较高（均P＜0.05）。M1组患者IgA沉积物Area、Densitymean、PerArea和IOD均高于M0组（均P＜0.05）。结论IgAN患者系膜病变的严重程度可能受肾小球内IgA沉积量的影响。     

昆仙胶囊对IgA肾病大鼠的肾保护作用及系膜细胞增殖的影响

目的本实验通过建立IgA肾病大鼠模型及大鼠肾小球系膜细胞体外实验,进行药物干预,探讨昆仙胶囊的肾保护作用和对系膜细胞增殖的影响。方法 48只雌性SD大鼠随机均分为正常组、IgAN模型组、缬沙坦组、昆仙胶囊组,每组12只,造模第5周开始灌胃给药,分别于第10周、16周每组每次随机挑选6只大鼠,检测24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮,观察大鼠肾脏IgA免疫荧光和病理学改变。同时,选择IgA1刺激大鼠系膜细胞,将系膜细胞分为正常组、模型组、缬沙坦高低剂量组和昆仙胶囊高中低剂量组,CCK8检测药物干预后细胞增殖及抑制情况。结果第10周、16周昆仙胶囊组IgAN大鼠24 h尿蛋白定量、肾功能指标较模型组有显著性差异(P0.05),与缬沙坦组比较无明显统计学差异(P0.05)。同时肾组织病理均提示昆仙胶囊组病变程度较模型组轻。细胞实验提示经IgA1刺激后可引起系膜细胞增殖,药物干预后昆仙胶囊能够明显抑制IgA1诱导的大鼠系膜细胞增殖。结论本实验说明昆仙胶囊能减少IgAN大鼠尿蛋白,延缓肾功能进展,减缓肾组织病理改变,其机制可能是通过抑制系膜细胞增殖而达到的。     

补体C3系膜区沉积强度与IgA肾病病理分型的相关性

目的 探讨补体C3系膜区强度与IgA肾病（IgAN）病理分型的相关性。方法 回顾性收集空军军医大学西京医院2016年1月1日～2019年12月31日行肾活检穿刺诊断为IgAN患者1094例,参照纳入及排除标准,最终入选975例。依据免疫荧光下补体C3在系膜区沉积强度,分为C3阴性组（n=213）和C3阳性组（n=762）。分析肾活检诊断为IgAN患者补体C3系膜区沉积强度与IgA肾病Lee氏分级和牛津分型的相关性,并评估补体C3系膜区沉积强度与临床病理的相关性。结果 C3阴性组较C3阳性组血肌酐水平低,eGFR高和血补体C3水平高,差异有统计学意义（P＜0.05）。C3阴性患者在Lee氏I级的比例最高（50.5%）,之后逐渐递减,Lee氏IV-V级的比例最低（9.8%）,而在Lee氏V级的比例升高（20.5%）,呈现为“杓型”曲线。C3阴性组患者病理组织改变M1、E1、S1、T1-2和C1-2的比例显著少于C3阳性组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 补体C3阴性的发生率与IgA肾病Lee氏分级呈现为“杓型”曲线;补体C3阴性IgAN患者病理改变较轻或病变慢性化,活动性病变少见。     

测定血清IgA1半乳糖水平对诊断IgA肾病的价值

目的：了解IgA肾病患者血清IgA1半乳糖水平,探索其对于诊断IgA肾病的临床价值.方法：2007年5月至2008年2月在中山大学附属第一医院确诊为IgA肾病的29例患者纳入IgA肾病组,根据临床表现分成孤立性血尿组（n=14）,非孤立性血尿组（n=15）,按照Lee病理分级分成3组,分别为,Ⅰ级＋Ⅱ级组（n=9）,Ⅲ级组（n=9）,Ⅳ级＋Ⅴ级组（n=11）.同期本院门诊健康体检者18例纳入正常对照组.同期本院儿科非IgA肾病及过敏性紫癜肾炎的其他肾脏病患者18例纳入疾病对照组.3组受试者年龄、性别构成比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.用蚕豆凝集素（vicia villosa lectin,VVL）亲和ELISA法测定IgA1与VVL的结合力,间接反映IgA1半乳糖水平,分析血清IgA1半乳糖水平对于诊断IgA肾病的临床价值.结果：IgA肾病组血清IgA1与VVL结合力 [（0.34±0.1）U]高于正常对照组[（0.27±0.06）U]及疾病对照组[（0.28±0.07）U],差异有显著性（P＜0.05）.IgA肾病非孤立性血尿组血清IgA1与VVL结合力[（0.36±0.12）U]高于孤立性血尿组[（0.32±0.08）U]（P＜0.05）.IgA肾病不同病理分级组血清IgA1与VVL结合力比较有差异,其中Ⅰ级＋Ⅱ级组最高[（0.39±0.12）U]（P＜0.05）.以正常对照组血清IgA1与VVL结合力的±2s为诊断IgA肾病的临界值,诊断灵敏度为24.1%,特异度为100%,阳性预告值为100%,阴性预告值为45%;以±s为诊断IgA肾病的临界值,灵敏度为44.8%,特异度72.2%,阳性预告值为72.2%,阴性预告值为44.8%.结论：IgA肾病患者血清IgA1半乳糖水平低.检测血清IgA1半乳糖水平对于诊断IgA肾病具有一定临床价值,仍需扩大样本量进一步证实.     

中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白与IgA肾病早期诊断及病理分级的关系

目的探讨IgA肾病患者血清及尿液中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)与IgA肾病早期诊断及病理分级的关系。方法选择IgA肾病患者89例,根据Lee氏分级LeeⅠ～Ⅱ级42例(A组),LeeⅢ～Ⅴ级47例(B组);对照组33例。应用ELISA法检测3组受检者的血清及尿液中的NGAL水平并比较不同病理分级患者在系膜增殖、新月体、肾小球硬化方面的差异,分析血清及尿液的NGAL水平与系膜增殖评分的相关关系。结果 IgA肾病患者血清及尿液的NGAL水平均较对照组升高(P<0.05);Lee氏Ⅰ～Ⅱ级患者的系膜增殖程度、肾小球硬化程度、新月体数目与Lee氏Ⅲ～Ⅴ级患者比较差异均有统计学意义(P<0.05);血清及尿液的NGAL水平均与系膜增殖积分呈正相关(血清NGAL:r=0.543,P=0.016;尿液NGAL:r=0.761,P=0.007)。结论 NGAL可能在IgA肾病的病理生理学方面起重要作用,尿液NGAL可能成为判断IgA肾病患者早期肾损伤及预后的有效指标。     

IgA肾病小鼠肾脏系膜细胞凋亡及其调控基因Bax和Bcl-2表达的变化及益肾汤对其的影响

目的探讨InA肾病（IgAN）小鼠肾脏系膜细胞凋亡及其调控基因Bax和Bcl-2表达的特点及中药益肾汤对其的影响。方法用“口服牛血清白蛋白加葡萄球菌肠毒索B尾静脉注射”法复制小鼠IgA肾病模型。实验动物分为正常组、模型组、益肾汤低浓度组及益肾汤高浓度组。HE染色光镜下观察肾小球系膜细胞增殖；原位末端标记法检测小鼠系膜细胞凋亡；免疫组化SABC法观察系膜区Bax和Bcl-2的表达。结果模型组小鼠肾脏系膜细胞凋亡显著弱于正常组（P〈0．05）；正常组与模型组之间Bax表达差异无显著性（P〉0．05），而模型组小鼠Bcl-2的表达则明显强于正常组（P〈0．05）；益肾汤低浓度及高浓度组之间肾小球系膜细胞凋亡率差异无显著性（P〉0．05）；益肾汤低浓度及高浓度组与模型组比较，Bax表达均增强（P〈0．05）、而Bcl-2表达则均减弱（P〈O．05）。结论IgAN小鼠存在明显的系膜细胞凋亡不足；益肾汤可通过调控系膜区Bax和Bcl-2的表达、诱导IgAN肾脏系膜细胞凋亡，进而抑制系膜增殖。     

局灶节段性肾小球硬化病损在IgA肾病中的意义

目的 探讨局灶节段性肾小球硬化病变（sFSGS）在IgA肾病（IgAN）中的临床意义。方法 对182例IgAN-sFSGS患者的临床与病理资料进行相关性分析。结果 lgAN-sFSFS中以无症状尿检异常最常见（占50．55％）,其次是高血压伴／不伴慢性肾功能衰竭和大量蛋白尿／肾病综合征。随着sFSGS病变的加重,尿蛋白量、血肌酐、尿素氮、尿酸也相应增高。病理分析照示sFSGS与炎细胞浸润、间质纤维化、小管萎缩和血管病变有相关性（r1=0．377,r2=0．169,r3=0．412,r4=0．331;P〈0．05）。结论 sFSGS是IgAN判断预后的重要指标。     

IgA肾病早期肾脏局部RAS的活化与调节

目的观察IgA肾病早期肾脏局部肾素血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)的活化状态和调节,及其与转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)的关系,为临床选择适宜用药时机提供实验依据。方法选取肾穿确诊的原发性IgA肾病、且无影响RAS因素的患儿共38例。按肾小球系膜增生程度分组,选择远离瘤体的正常肾组织为正常对照组。采用免疫组化法检测血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1 recep-tor,AT1R)、TGF-β1,原位杂交法检测AT1RmRNA,均为石蜡切片。用计算机图像处理系统进行免疫组化和原位杂交结果分析。结果正常对照组AngⅡ、AT1R、AT1RmRNA和TGF-β1表达微弱。IgA肾病患者各因子表达明显增多,早期组的表达水平即明显高于正常对照组。各因子间存在复杂的相关性。结论IgA肾病早期AngⅡ已经活化,推测在IgA肾病早期应用RAS阻滞剂可能有利于遏制疾病的发展。     

微小病变肾病合并系膜区IgA沉积的临床和病理分析

目的 分析微小病变肾病(MCD)合并IgA系膜区沉积(MCD-IgA)病例的疾病性质.方法 回顾性分析21例MCD和IgA肾病(IgAN)且临床和病理资料完整的病例.结果 ①MCD-IgA组患者的临床特点同MCD非常接近,除血尿明显多于MCD组以外(P＜0.05),其他指标如血压、肾功能、低蛋白血症和对糖皮质激素的治疗反应等均类似于MCD.MCD-IgA同IgA肾病中临床表现为肾病综合征(IgAN-NS)的患者相比,血浆白蛋白[21.2±5.6)g/L、(27.2±2.8)g/L],血肌酐[(81.5±16.2)μmol/L、(105.2±25.9)μmol/L],24h尿蛋白定量[(8.9±3.7)g/24h、(5.8±1.6)g/24h]等临床指标均有显著性差异(P＜0.05).②MCD-IgA光镜下多表现为肾小球基本正常,而IgAN-NS组光镜下均表现为重度系膜增殖性肾小球肾炎和肾小球局灶节段硬化.③有血尿组(9例)和无血尿组(12例)MCD-IgA病例的临床特征非常相似,但免疫荧光检查无血尿组更多表现为IgA沉积( ),以IgA的孤立沉积为主,而有血尿组IgA沉积常伴有C3、IgG、IgM的沉积.结论 MCD-IgA中无血尿的病例可能是MCD合并了IgA非特异性的沉积,而有血尿的病例则可能是先后或同时合并了MCD和轻度系膜增生性IgA肾病.