霍奇金淋巴瘤组织中H/RS细胞与其背景细胞的微切割及其IgH基因重排检测

目的从基因水平探讨霍奇金淋巴瘤(HL)组织中H/RS细胞(Hodgkin and Reed-Sternberg cells)是否起源于B细胞、H/RS细胞的克隆性以及与背景淋巴细胞的相互关系。方法对33例经典霍奇金淋巴瘤(cHL)石蜡刮片组织进行IgH基因重排分析,并对其中6例重排阳性的病例经B细胞特异性激活蛋白(BSAP)免疫标记,将标记阳性的H/RS细胞和背景淋巴细胞进行微切割后进一步行IgH基因重排分析。结果16例石蜡刮片组织IgH基因重排阳性。对6例经BSAP标记的cHL成功进行了微切割,其中19管H/RS细胞中,有14管出现重排阳性,细胞数目不同的各管阳性率无显著性差异(P=0.290);12管背景淋巴细胞有2管出现重排阳性,H/RS细胞与背景淋巴细胞的阳性率有显著性差异(P=0.002)。结论支持H/RS细胞来源于B细胞的理论,认为部分背景淋巴细胞可能具有瘤性增生活性,参与H/RS细胞的前体细胞组成。     

B细胞特异性激活蛋白在经典型霍奇金淋巴瘤中的表达及其意义

目的：探讨经典型霍奇金淋巴瘤（cHL)中H／RS细胞和背景淋巴细胞B细胞特异性湃活蛋白（BSAP）的表达及其意义。方法：用免疫组化方法对33例cHL和29例对照病例（9例反应性增生的淋巴结、10例B细胞性淋巴瘤、10例T细胞性淋巴瘤）进行BSAP检测,同时对cHL病例进行CD20、CD15、CD30常规对比检测。结果：cHL中H／RS细胞BSAP的表达率为90．91％,背景B淋巴细胞表达率为100％;对照病例中反应性增生淋巴结的B淋巴细胞和B细胞性淋巴瘤肿瘤细胞的BSAP表达均为100％,T细胞性淋巴瘤的肿瘤细胞不表达BSAP;CD20表达率为30.30%,BSAP和CD20的表达率差异有显著意义（P＝0．000）;CD30表达率为93．94％,CD15表达率为75．75％,两者的表达率差异无显著意义（P＝0．082）。结论：BSAP在H／RS细胞上表达为H／RS细胞来源于B细胞提供了进一步证据,并有助于H／RS细胞的辨别和鉴别。     

弥漫性大B细胞淋巴瘤的病理、免疫组化特征及IgH基因重排的检测

目的 探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)临床和病理组织学特征以及免疫组化特异性抗体及IgH基因重排检测在其诊断和鉴别诊断中的价值。方法 收集30例弥漫性大B细胞淋巴瘤及其临床资料，用免疫组化孓P法标记LCA，CD20，CD79a，CD30及bcl-2抗体和用PCR方法检测15例IgH基因重排。结果 70％(21／30)弥漫性大B细胞淋巴瘤发病年龄在40～70岁，淋巴结内外都可累及。组织病理学：中心母细胞淋巴瘤占83．3％(25／30)，免疫母细胞淋巴瘤占3．3％(1／30)，间变性大细胞淋巴瘤占6．7％(2／30)，及富于T细胞B细胞淋巴瘤占6．7％(2／30)。免疫标记LCA均表现阳性，CD20、CD79a、CD30、bcl-2表达率分别为86．7％(26／30)，93．3％(28／30)，6．7％(2／30)，20％(6／30)。15例DLBCL中IgH基因重排阳性为66．7％(10／15)。结论 弥漫性大B细胞淋巴瘤是一组异质性肿瘤，必须结合其组织病理学形态和特异抗体的免疫组化检测，对一些疑难病例需做IgH基因重排检测以进行诊断和鉴别诊断。     

B细胞淋巴瘤免疫球蛋白重链基因重排的检测

目的 探讨免疫球蛋白重链(IgH)基因重排的检测在B细胞性淋巴瘤(B-NHL)中的诊断价值。方法 用聚合酶链式反应(PCR)方法检测B细胞淋巴瘤30例．淋巴结反应性增生(RH)10例及T细胞淋巴瘤(T-NHL)2例的IgH基因重排。结果 30例B-NHL中，22例(73．3％)出现IgH基因克隆性重排，而RH及T-NHL均未出现IgH基因重排。结论 B细胞淋巴瘤中存在B细胞单克隆增生，支持肿瘤单克隆起源学说；IgH基因克隆性重排检测对鉴别B细胞淋巴瘤和反应性增生以及T细胞和B细胞淋巴瘤有重要意义。     

基因重排检测技术的建立及其在淋巴瘤诊断中的应用

目的:建立基于克隆性分析技术的B和T淋巴细胞产生的抗原受体分子基因重排检测技术,探讨B淋巴细胞免疫球蛋白及T淋巴细胞受体基因重排在恶性淋巴瘤临床诊断中的应用. 方法: 从组织蜡块中切取组织片5～10张,提取基因组DNA,PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示基因重排结果. 结果:20例良性淋巴组织反应性增生病例中, 淋巴细胞IgH及TCR基因重排均为阴性;18例T细胞非何杰金氏淋巴瘤中TCRγ基因重排12例, TCRβ基因重排3例,未见有IgH基因重排;32例B细胞性非何杰金氏淋巴瘤标本中有28例IgH基因重排阳性,有2例TCRγ和IgH基因重排均阳性;3例未确诊的疑难病例均为IgH基因重排;IgH及TCR基因重排检出率在淋巴瘤组与良性组之间,差异有显著意义(P<0.05). 结论:应用PCR法检测B淋巴细胞IgH和T淋巴细胞TCR基因重排可作为淋巴细胞来源的良、恶性病变的一种辅助诊断手段,且适用于石蜡标本以进行回顾性研究.     

B细胞恶性肿瘤患者血浆游离DNA中IgH基因重排检测及临床意义

目的：探讨检测B细胞肿瘤患者血浆DNA 标本IgH基因重排对辅助诊断及判断预后的临床意义。方法：采集83例B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）、B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)及多发性骨髓瘤（MM）患者共110份血浆标本，提取血浆游离DNA，PCR检测IgH基因重排。结果：63例初发B细胞肿瘤患者IgH基因重排检测阳性率为77.8％，而缓解病例的阳性率为27.6％，初发患者检测阳性率显著高于缓解病例（P < 0.01）。结缔组织病、感染性疾病及健康人均呈阴性结果。IgH基因重排检测阳性率与B-NHL和MM的分期、血清β2-微球蛋白（β2-MG）和乳酸脱氢酶（LDH）水平无关（P > 0.05）。追踪检测16例患者显示12例初发检测阳性者治疗缓解后转为阴性，其中3例缓解后6～9月检测血浆IgH基因重排再次转为阳性，随后此3例患者均出现临床复发，检测转阳较临床复发提前1～4月。1例在初诊和完全缓解期间检测均为阳性ALL患者，经异基因干细胞移植后转为阴性；3例检测始终阳性的患者疗效不佳，始终未获缓解。结论：初治B细胞肿瘤患者血浆游离DNA中检测IgH基因重排阳性率高、特异性强、取材简便，有望用于B细胞肿瘤辅助诊断，追踪检测还有助于判断预后。 【关键词】 B细胞，肿瘤； 血浆，DNA； 免疫球蛋白， 重链；基因重排； PCR     

B细胞淋巴瘤中18号染色体上微卫星位点与bcl-2/IgH基因重排的相关性

目的探讨B细胞淋巴瘤中18号染色体上微卫星位点D18S64、D18S61与bcl-2/IgH基因重排的相关性。方法采用巢式PCR方法对37例B细胞非霍奇金淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排主要断裂点（MBR）进行检测,PCR-SSCP方法检测bcl-2基因内部、基因周围微卫星位点D18S64、D18S61的MSI和LOH情况。采用DNA抽提试剂盒提取石蜡包埋组织基因组DNA、全血基因组DNA-PCR扩增-变性聚丙烯酰烯酰胺凝胶垂直电泳-银染法-全自动凝胶成像系统对样本进行MSI和LOH分析。结果 37例B细胞非霍奇金淋巴瘤中,bcl-2/IgH基因重排阳性率为24.3%（9/37）。各位点MSI、LOH频率分别介于16.2%-18.9%和16.2%-21.6%。D18S61位点MSI阳性组的bcl-2基因重排阳性率均高于MSI阴性组（P〈0.05）,而D18S64位点则与之相反（P〉0.05）;D18S61位点LOH阳性组的bcl-2基因重排阳性率明显高于LOH阴性组（P〈0.05）,D18S64位点与之相反（P〉0.05）。结论 bcl-2/IgH基因重排与微卫星位点D18S61的MSI/LOH有显著相关性,表明D18S61可能是bcl-2基因周围区域与bcl-2基因关系较为密切的微卫星位点。     

IgH不同区域基因重排引物的分析及在石蜡淋巴瘤诊断中的应用

目的 通过生物信息学方法分析并优化免疫球蛋白重链(IgH)不同框架(FR)区域基因重排的引物,探索其对石蜡包埋的淋巴瘤组织基因重排检测中的应用.方法 通过Clustal W 软件比较44条有效的lgH可变区和6条J区的基因片段,选取3对(IgH FR1、FR2、FR3区各一对,分别为P1c,P2A,P31)IgH基因重排引物作为B细胞基因重排引物.另选一对TCRγ引物作为T细胞基因重排引物.通过PCR扩增,检测经形态学及免疫组织化学确诊的101例(80例B细胞淋巴瘤、14例T细胞淋巴瘤和7例淋巴结反应性增生组织)石蜡包埋组织标本的基因重排状况.以DG75、Jurkat淋巴瘤细胞系DNA作为B和T细胞淋巴瘤基因重排的阳性对照,以反应性增生组织DNA作为阴性对照.结果 IgHFR1、FR2和FR3区域引物对80例B细胞淋巴瘤的阳性检出率分别为37.5%(30/80)、52.5%(42/80)和70.0%(56/80),在14例T细胞淋巴瘤中均为7.1%,三者的检出率两两之间差异有显著性;IgH FR3区和lgH FR2区引物的组合可将其检出率提高到83.9%.以上引物在7例反应性淋巴结中均未检出阳性.结论 IgH不同区域引物比较.FR3区引物检出率明显高于FR1区和FR2区.FR3区和FR2区引物联合检测可明显提高石蜡组织中B细胞淋巴瘤基因重排的检出率.     

Hodgkin和Reed—Stenberg细胞的发生

Hodgkin和Reed—Steinberg，（H/RS）细胞是霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’s lymphoma，HL）的标志性细胞。这种大细胞常多核，具有奇特的形态和不同于体内任何正常细胞的异常免疫表型．尽管H／RS细胞在HL中非常少见，但是HL中的克隆性肿瘤细胞，在HL病例中H／RS细胞绝大部分起源于生发中心凋亡前B细胞（残废B细胞），极少数采自T细胞。特别是从免疫球蛋白V基因重排的体细胞突变类型上推测H／RS细胞来自生发中心的凋亡前B细胞，但H／RS已经丧失了B细胞标记特征。虽然HL的发病机制尚未明了，但现已经明确了多个信号通路的异常活化是H／RS细胞逃避凋亡得以生存的关键因素。     

PCR检测非霍奇金淋巴瘤IgH和TCRβ基因重排

目的 探讨PCR方法检测IgH和TCRβ基因重排在非霍奇金淋巴瘤(NHL)诊断中的临床意义。方法 用PCR方法检测40例非霍奇金淋巴瘤和5例慢性淋巴结炎的基因重排情况。结果 20例B细胞NHL中检测出19例IgH基因重排，20例T细胞NHL中检测出17例TCRβ基因重排。结论 PCR方法检测NHL中IgH和TCRβ基因重排具有敏感、特异的优点，在非霍奇金淋巴瘤的诊断中具有重要价值。     

淋巴细胞性白血病／淋巴瘤bcl—2基因重排的研究

目的：探讨ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排的临床意义。方法：应用多聚酶链反应技术检测９种恶性淋巴瘤细胞系和不同类型淋巴系统恶性肿瘤临床标本中ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排情况。结果：２种细胞系,１例慢性淋巴细胞白血病及６例非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）有ｂｃｌ－２／ＩｇＨ基因重排,其中,３６．４％滤泡型ＮＨＬ及１８．２％弥漫性ＮＨＬ有重排。ｂｃｌ－２基因断裂点绝大多数（８／９）位于主要断裂区（ＭＢＲ）。结论：ｂｃ     

非霍奇金淋巴瘤IgH基因重排分析及其意义

目的 探讨免疫球蛋白重链(IgH)基因重排的检测在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的诊断价值.方法 用半巢式和混合聚合酶链式反应(PCR)方法,联合使用IgH FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mixtures(VH1、VH2、VH3)检测44例B-NHL患者、1例未分型淋巴瘤、15例T-NHL患者和5例淋巴结反应性增生患者IgH基因克隆性重排情况.结果 ①采用FR3A引物,44例B-NHL有37例出现克隆性IgH基因重排,检测率为84%(37/44);采用FR2A引物,有27例出现克隆性IgH基因重排,检测率为61% (27/44);采用FR1家族特异性引物Mixtures(VH1、VH2、VH3)与J区(JHb、JHc)引物,有34、33例出现克隆性IgH基因重排,检测率为77%、75% (34/44、33/44);结合FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mixtures(VH1、VH2、VH3),总检测率为95%(42/44).②15例T-NHL有4例出现克隆性IgH基因重排,而5例LRH未出现克隆性IgH基因重排.③1例免疫组化未分型的NHL经PCR检测后明确了分型,为B细胞性淋巴瘤.结论 联合采用多对引物可提高检测阳性率;IgH基因克隆性重排检测对鉴别B细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生以及T细胞淋巴瘤有重要意义.     

A study of Hodgkin/Reed-Sternberg cells using single cell polymerase chain reaction

Objective To investigate the characteristics of Hodgkin/Reed- Sternberg (H/R-S) cells found in patients with various types of Hodgkin’s disease (HD). Methods H/R- S cells were micropicked from frozen sections of tissues affected by HD. The DNA from these cells was amplified by polymerase chain reaction (PCR) using immunoglobulin heavy chain gene FRⅢa/JH primers and light chain gene family- specific primers. Results A total of 52/135 (35. 8%) isolated cells showed the specific products in the reactions. IgH and V(κ4) rearrangements were repeatedly found in many cells from a lymphocyte predominance type sample; repeated V(κ4) and individual IgH/V(κ2,4) rearrangements and individual IgH, V(λ 3) / V(κ4) rearrangements were found in two different cases of the nodular sclerosis type; repeated IgH/ V(λ3) and individual V(λ2,4) rearrangements, repeated V(κ2,4) rearrangements, repeated V(κ4) and individual IgH/ V(κ3) rearrangements, repeated IgH and individual V(κ3) / V(λ4) rearrangements were detected in 3 cases of the mixed cellularity type. Repeated and individual IgH rearrangements were found in other 2 cases. Conclusion The H/R- S cells isolated from the lymphocyte predominance subtypes of HD have IgH and V(λ4) gene rearrangements. This suggests that the lymphocyte predominance type is a proliferation of neoplastic B cells. The cells isolated from the mixed cellularity and nodular sclerosis types derive from B lineage cells at various stages of differentiation because of the presence of their IgH, κ and/or λ gene rearrangements. To our knowledge, this is the first time that the λ gene rearrangement was detected in H/R- S cells.     

一步及半巢式PCR检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH重排的比较

目的：建立一种简便有效的方法,来检测Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）石蜡包埋组织的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排。方法：以ＩｇＨ的第三互补决定簇区（ＩｇＨ－ＣＤＲ３）为标志,用消化煮沸法和酚－氯仿法提取３６例Ｂ－ＮＨＬ及１０例扁桃体炎的石蜡包埋组织的基因组ＤＮＡ,比较两进行一步及半巢式聚合酶链反应（ＳｎＰＣＲ）,聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染后检测克隆性ＩｇＨ重排的结果。结果：Ｂ－ＮＨＬ组,３４例经酚－氯仿法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ－ＣＤＲ３重排的阳性率分别为２６．５％和７６．５％（Ｐ〈０．０５）;２７例经消化煮沸法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７．４％和６６．７％（Ｐ〈０．０５）;２５例同时用上述２种方法提取ＤＮＡ,ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７６％和６８％（Ｐ〉０．０５）。对     

弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排与GCB分子亚型的相关性

目的: 探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)bcl-2/IgH基因重排与分子亚型生发中心样(GCB)的相关性.方法:采用自行设计的半巢式PCR对60例DLBCL的bcl-2/IgH基因重排进行了检测,并对阳性产物进行克隆、测序.同时采用免疫组化SP法在组织微阵列上同步观测CD20,CD10,Bcl-6,黑色素瘤相关抗原(突变体)1 (MUM1)的表达,进行GCB和非生发中心样(non-GCB)分子分类.结果: 经常规法扩增bcl-2/IgH,有6/60例DLBCL bcl-2/IgH阳性;在6例阳性样本中,采用本组设计的半巢式PCR扩增,经克隆及测序证实5例bcl-2/IgH基因重排阳性,1例为人类第19号染色体BAC 331191基因的片段.60例DLBCL CD20表达全部阳性;CD10,Bcl-6, MUM1的阳性表达率分别为43.3%,46.7%,61.7%;GCB 32(53.3%)例,non-GCB 28(46.7%)例.bcl-2/IgH基因重排阳性的病例均属GCB分子亚型, 且与CD10表达有显著性相关(P=0.012),而与Bcl-6及MUM1表达无相关性.结论:使用本组设计的半巢式PCR可提高bcl-2/IgH基因重排检测的准确性.bcl-2/IgH基因重排的检测可协助确定部分GCB分子亚型的DLBCL.     

眼附属器淋巴组织增生性病变基因重排分析

目的探讨眼附属器淋巴组织增生性病变的免疫球蛋白重链(IgH)基因重排特点及应用价值。方法收集22例眼附属器淋巴组织增生性病变,其中淋巴瘤8例,非典型淋巴组织增生病变6例,反应性增生的淋巴组织8例。运用标准试剂盒提取DNA,采用半巢氏PCR技术、2对引物进行IgH基因重排检测,同时运用免疫组化2步法标记抗体(LCA,CD3 CD20,CD79a,CD45RA,CD45RO,Bcl-2等)。结果 6例非典型淋巴组织增生性病变中IgH基因单克隆重排4例阳性(67%),8例淋巴瘤中IgH基因单克隆重排8例阳性(100%),反应性增生的淋巴组织基因重排阴性。所有12例病例均经免疫组织化学染色,全部为非霍奇金B细胞淋巴瘤,其中黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤(MALT)B细胞淋巴瘤8例,弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)2例,滤泡性淋巴瘤(FL)1例,淋巴浆细胞淋巴瘤(LPL)1例。结论基因重排检测是眼附属器疑难淋巴组织增生性病变和淋巴瘤鉴别诊断的有效方法,可以有效地提高诊断的准确率。