雷帕霉素对高脂血症兔髂动脉损伤术后再狭窄的影响

目的:观察肌肉注射雷帕霉素对髂动脉损伤术后再狭窄形成的影响,为其临床应用提供实验依据;同时,探讨雷帕霉素防止再狭窄的可能机制。方法:采用雄性新西兰白兔,随机分为四组:正常对照组给予普通饲料,单纯损伤组、低剂量雷帕霉素组和高剂量雷帕霉素给予高脂、高胆固醇饮食喂养6周后,行右侧髂动脉内膜损伤术复制成再狭窄模型,术后给予肌肉注射雷帕霉素,4周后观察血清总胆固醇浓度和体重的变化,并用计算机图像分析法观察血管组织形态学的变化。结果:雷帕霉素组与单纯损伤组相比:表示内膜增殖程度的指标如内膜厚度(IT)、内膜厚度/中膜厚度(IT/ MT)、内膜面积(IA)、内膜面积/中膜面积(IA/ MA)和管腔面积(L A)均显著减少(P<0 .0 5 ) ,且随注射剂量的增大,上述指标的改变具有显著性差异(P<0 .0 5 ) ;雷帕霉素组与正常对照组和单纯损伤组相比血清总胆固醇浓度最大且体重下降明显(P<0 .0 5 )。结论:雷帕霉素可防止再狭窄的形成,在一定范围内注射剂量与新生内膜增殖程度有相关性。     

阿托伐他汀对兔动脉粥样硬化中NF-κB/IκB和炎症因子表达的影响

目的探讨高脂饮食诱发兔动脉粥样硬化中核因子-κB(NF-κB)的活化与其抑制因子IκB的表达,以及阿托伐他汀对NF-κB/IκB信号途径、ICAM-1和P选择素的影响。方法24只新西兰♂家兔随机分为正常对照组、高胆固醇组和阿托伐他汀组,应用W estern b lot方法检测动脉中胞核NF-κB p65亚基和胞浆IκBα表达变化;免疫放射法检测血清P选择素水平,免疫组织化学检测血管壁ICAM-1的表达。结果高胆固醇组与对照组比较胞核NF-κB p65和血管壁ICAM-1表达明显增强、血P选择素明显升高(P<0.05),胞浆中IκBα表达明显减弱(P<0.05);阿托伐他汀组与高胆固醇组比较NF-κB p65和血管壁ICAM-1明显表达较弱、血P选择素明显减少(P<0.05),胞浆IκBα的表达增强(P<0.05)。结论NF-κB/IκB信号途径在动脉粥样硬化中起重要作用,阿托伐他汀可以减少P选择素、ICAM-1的表达。     

雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡和自噬的影响

目的研究雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3细胞凋亡和自噬的影响,并探讨可能的分子机制。方法雷帕霉素及顺铂分别单独或联合作用于卵巢癌细胞株SKOV3细胞后,流式细胞仪检测凋亡率,实时荧光定量PCR检测各处理组的mTOR mRNA表达,Western blot检测自噬蛋白Beclin1、LC3和抗凋亡蛋白bcl-2的表达。结果雷帕霉素联合顺铂组凋亡率为(12.520±1.499)%,较其他处理组凋亡率提高(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的mTORmRNA表达为0.339±0.015,较对照组明显降低(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达均增强(P<0.05),抗凋亡蛋白bcl-2明显降低(P<0.05)。结论雷帕霉素通过特异性阻滞mTOR的表达,可以促进顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡,增强卵巢癌SKOV3细胞自噬性死亡。     

雷帕霉素抑制增生内膜中基质细胞衍生因子-1的表达

目的：进一步探讨雷帕霉素抗血管内再狭窄的分子机制。方法：球囊拉伤大鼠颈总动脉建立血管内膜增生的动物模型,口服雷帕霉素（25mg/kg）,4周后处死动物。HE染色观测血管病变,免疫组化检测增生内膜中基质细胞衍生因子-1（SDF-1）的表达,小室迁移系统观察SDF-1对平滑肌细胞迁移的影响。结果：球囊拉伤明显诱导血管内膜增生,增生内膜中有明显的SDF-1的表达,雷帕霉素能显著下调增生内膜中SDF-1的表达,而SDF-1浓度依赖性地诱导平滑肌细胞的迁移。结论：雷帕霉素可能通过下调SDF-1的表达从而抑制血管再狭窄。     

活化蛋白C通过NF-κB抑制TNF-α介导的炎症反应

目的观察活化蛋白C(APC)是否能够通过核因子-κB(NF-κB)途径抑制TNF-α介导的炎症反应。方法分离培养正常组、TNF-ɑ组、TNF-ɑ+rhAPC组的人脐静脉内皮细胞细胞(HUVECs)。用ELISA法,检测细胞上清液中的细胞内粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)及选择素浓度。用逆转录聚合酶链反应、Western bloting技术检测HUVECs NF-κBmRNA、NF-κB蛋白的表达。结果细胞上清液中ICAM-1、VCAM-1及E选择素浓度,TNF-ɑ组较正常组显著升高(均P<0.05);而TNF-ɑ+rhAPC组较TNF-ɑ组显著降低(均P<0.05)。HUVECs NF-κB mRNA、蛋白表达水平,TNF-ɑ组较正常组均显著升高(均P<0.05);而TNF-ɑ+rhAPC组较TNF-ɑ组均显著降低(均P<0.05)。结论 APC通过抑制黏附分子的产生来调节TNF-α介导的炎症反应,其可能是通过NF-κB途径来实现。     

雷帕霉素联合紫杉醇诱导卵巢癌细胞A2780和SKOV3凋亡及其分子机制

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。本研究观察特异性mTOR抑制剂雷帕霉素联合紫杉醇对卵巢癌细胞A2780和SKOV3的作用及内在的分子机制。方法：A2780和SKOV3细胞经雷帕霉素和紫杉醇处理后，以MTT法检测细胞的增殖情况，金正均法计算q值判断两药的相关作用。以流式细胞仪检测细胞凋亡，逆转录聚合酶链反应检测survivin的表达。结果：雷帕霉素联合紫杉醇可抑制A2780和SKOV3细胞的增殖，且随时间延长抑制作用越显著，[第一段]     

复方丹参滴丸在血管成形术后再狭窄中的作用及其分子机制研究

目的研究复方丹参滴丸（CDDP）在血管成形术（PCI）后再狭窄中的作用及分子机制。方法对24只雄性新西兰大白兔随机平分为A、B、C、D四组,术后分别给予生理盐水、雷帕霉素、低浓度CDDP、高浓度CDDP治疗,观察动脉内膜增生厚度及兔狭窄段动脉增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平。结果 C、D组血管直径狭窄程度、内膜厚度、内膜面积、内膜厚度/中膜厚度比值减少程度均大于A、B组（P〈0.05）;C、D组c-myc蛋白及c-sis基因表达率显著低于A、B组（P〈0.05）。结论 CDDP可有效减少PCI后管腔再狭窄程度,减少内膜增生,改善预后,值得临床广泛推广。     

雷帕霉素和紫杉醇混合药物支架预防支架内再狭窄实验研究

目的探讨雷帕霉素和紫杉醇混合药物支架(RPES)在防治支架内再狭窄(ISR)的作用。方法以裸支架(BMS)、雷帕霉素药物涂层支架(RES,载药量为0.05mg/枚)作为对照组,通过涂层材料聚乳酸乙醇酸(PLGA)改性将疏水性雷帕霉素和亲水性紫杉醇融和制作雷帕霉素和紫杉醇混合药物支架(RPES,载药量为0.05mg/枚,雷帕霉素和紫杉醇均为0.025mg)。支架大小(直径2.0mm、长度15mm)一致。选10只家猪随机植入左冠状动脉前降支或回旋支(支架:动脉比率1.1～1.2:1.0),每只猪植入3枚,于支架植入后4周造影进行冠状动脉定量(QCA)分析和甲基丙烯酸甲酯包埋后切片,嗜伊红染色分析组织内膜增生状态。结果①与BMS组相比较,RES组和RPES组平均血管直径均显著改善(P<0.05),并且二者均无管腔丢失和径向狭窄;RPES组与RES组比较,平均血管直径差异无统计学意义(P>0.05)。②BMS组、RES组和RPES组均可见内膜完全覆盖支架,RES组和RPES组支架段内内膜最大厚度和内膜面积均显著小于BMS组(P<0.05)、血管腔面积显著大于BMS组(P<0.05)。RES组和RPES组比较,支架段内内膜最大厚度、内膜面积和血管腔面积差异均无统计学意义(P>0.05)。结论雷帕霉素和紫杉醇混合药物支架可有效预防再狭窄的发生发展,并且二者可能具有协同作用。     

大蒜素抑制胃癌细胞上皮-间质转化作用及其机制

目的研究大蒜素对胃癌细胞上皮-间质转化(EMT)的抑制作用及其机制。方法以含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养人胃癌细胞株HGC-27,分别采用大蒜素(3μg·L^-1)联合白细胞介素6(IL-6,50 ng·mL^-1)、大蒜素(3μg·L^-1)、IL-6(50 ng·mL^-1)处理,另设空白对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组胃癌HGC-27细胞E-cadherin、vimentin及核因子-κB(NF-κB)P65的mRNA表达;Wst-3-2H-四唑单钠盐(CCK-8)实验、细胞划痕实验及细胞侵袭实验检测各组胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果RT-qPCR显示,与空白对照组比较,大蒜素组E-cadherin mRNA表达上调,vimentin及NF-κB mRNA表达下调;IL-6组E-cadherin mRNA表达下调,vimentin及NF-κB P65的mRNA表达上调(均P<0.05)。与IL-6组比较,大蒜素联合IL-6组E-cadherin mRNA表达上调,vimentin与NF-κB mRNA表达下调(均P<0.05)。CCK-8实验结果显示,与空白对照组比较,大蒜素组胃癌HGC-27细胞被明显抑制,IL-6组具有明显增殖优势;与IL-6组比较,大蒜素联合IL-6组细胞被抑制(均P<0.05);划痕实验中,与空白对照组比较,12,24 h大蒜素组胃癌细胞迁移能力明显减弱;与IL-6组比较,大蒜素联合IL-6组划痕愈合百分比缩小(均P<0.05)。细胞侵袭实验中,与空白对照组比较,大蒜素组侵袭数目减少,IL-6组侵袭数目明显增多;大蒜素联合IL-6组细胞侵袭能力较IL-6组明显减弱(均P<0.05)。结论大蒜素能明显抑制胃癌细胞EMT,减弱其增殖、迁移及侵袭能力,该过程可能与调节NF-κB信号通路有关。     

雷帕霉素抑制兔自体移植静脉内膜过度增殖

目的 观察血管周围局部应用雷帕霉素对兔自体移植静脉段内膜过度增殖的抑制作用.方法 大耳白兔15只,采用自身对照设计建模.任取一侧静脉桥为干预组,外涂含0.3 mg雷帕霉素的Pluronic凝胶;另一侧为对照组,外涂空凝胶.4周后测桥静脉内膜厚度、细胞的增殖指数及p27kip1免疫组化阳性细胞数.结果 干预组桥静脉内膜厚度为(63.7±14.0) μm,明显少于对照组的(77.8±14.9) μm(P＜0.05).增殖指数,干预组为29.3±7.2,明显高于对照组的20.1±9.5(P＜0.05).p27kip1免疫组化染色在干预组见有阳性表达细胞,而对照组表达呈阴性.结论 血管周围局部应用雷帕霉素具有抑制兔移植静脉内膜过度增殖的作用;这种作用与p27kip1的上调表达有关.     

麝香保心丸抑制兔腹主动脉支架植入后再狭窄的形成

目的 观察麝香保心丸抑制兔腹主动脉支架植入后支架再狭窄的形成.方法 实验于2005～02/12在郑州大学人民医院心内科实验室进行.取36只健康的新西兰雄性大白兔数字表法随机分为单纯高脂饮食组、对照组和麝香保心丸组3组(n=12).3组均饲以含15 g/L胆固醇的高脂饮食,对照组和麝香保心丸组高脂喂养3 d后行腹主动脉内皮剥脱术.术后第10周该两组的24只兔行腹主动脉二维超声、彩色多普勒、脉冲多普勒观察.一旦超声检查证实腹主动脉形成≥50%狭窄,对照组与麝香保心丸组均开始服用辛伐他汀5 mg/d,阿司匹林片25 mg/d,氯吡格雷12.5 mg/d.麝香保心丸组加服麝香保心丸3次/d,每次2丸,服药至第8天,对照组和麝香保心丸组在腹主动脉≥50%狭窄部位植入支架,行支架植入术35 d后,复查腹主动脉造影.结果 经补充后36只兔均进入结果分析.①高脂饮食联合动脉内膜剥脱较单纯高脂饮食血脂各项升高更明显(P<0.05).②血管造影显示高脂饮食联合动脉内膜剥脱术的所有兔的动脉粥样硬化狭窄均形成,目测狭窄程度在50%～70%[(57.000±7.888)%],狭窄长度8～23 mm.③兔腹主动脉造影检查结果提示再狭窄只数麝香保心丸组与对照组相比明显减少(P<0.05).结论 麝香保心丸可能通过抑制平滑肌细胞的移动减少支架内新生内膜的行成从而具有预防支架植入后再狭窄的作用.     

通心络对兔外周血管球囊损伤后血栓形成及内膜增生的影响

目的观察中成药通心络对兔腹主动脉及骼动脉球囊损伤后血栓形成及内膜增生的影响。方法新西兰兔36只,随机分为3组通心络组16只,阿司匹林组11只,安慰剂组9只。各组服药剂量通心络0.38g     

Oral rapamycin attenuates inflammation and enhances stability of atherosclerotic plaques in rabbits independent of serum lipid levels

Background and purpose:

Atherosclerotic plaque rupture and thrombosis are the main cause of acute coronary syndrome. The study was aimed to test the hypothesis that oral administration of rapamycin may attenuate inflammation, inhibit progression and enhance stability of atherosclerotic plaques.

Experimental approach:

Thirty New Zealand rabbits were subjected to balloon-induced endothelial injury of the abdominal aorta and were fed a diet of 1% cholesterol for 20 weeks. From week 9 to week 20, the animals were treated with oral rapamycin (0.5 mg·kg⁻¹·day⁻¹; group A), oral simvastatin (5 mg·kg⁻¹·day⁻¹; group B) and no drugs (group C). At the end of week 20, all rabbits were challenged with injection of Chinese Russell''s viper venom and histamine. Serological, ultrasonographic, pathological, immunohistochemical and gene expression studies were performed.

Key results:

Rapamycin significantly increased the thickness of the fibrous caps and decreased plaque vulnerability index in group A rabbits. Serum lipid levels were higher whereas plaque burden was lower in group A than in group B (P < 0.05). The incidence of plaque rupture in group A (0%) and group B (0%) was significantly lower than that in group C (56.0%, P < 0.05).

Conclusions and implications:

Oral administration of rapamycin effectively attenuated inflammation, inhibited progression and enhanced stability of atherosclerotic plaques in rabbits, without altering serum lipid levels. Our findings suggest a novel approach to the treatment of atherosclerosis.     

Neointimal formation after balloon-induced vascular injury in Yucatan minipigs is reduced by oral rapamycin.

Rapamycin, a macrolide antibiotic known to prevent allograft rejection, is a potent inhibitor of cell proliferation. Therefore we studied the effects of orally administered rapamycin in a pig model of balloon injury in an attempt to reduce the cellular proliferation and neointimal formation thought to play a role in restenosis. Twenty Yucatan minipigs, divided into groups of 10 animals each, were subjected to balloon inflation of the carotid arteries. One group received the methylcellulose vehicle for rapamycin, whereas the second group was treated for a total of 31 days with 2.0 mg/kg of rapamycin administered daily by oral gavage. This dose and treatment regimen produced significant (p < 0.05) reductions in neointimal area (59%) and in the maximal thickness of the neointima (59%) when comparisons were made with vehicle-treated animals. These effects were accompanied by a significant increase in the lumen area in animals that received rapamycin (33%). Medial area was decreased by 18% in these animals. Blood samples from rapamycin-treated pigs indicated peak concentrations of 1.87 +/- 0.45 and 1.70 +/- 0.24 ng/ml at 2 and 4 weeks after balloon angioplasty, respectively. Significant increases in blood pressure of 21 mm Hg and decreases in heart rate of 25 beats/min also were observed in rapamycin-treated animals relative to those that received vehicle. These results indicate that the antiproliferative effect of rapamycin can be demonstrated after oral dosing in a pig vascular injury model, suggesting a possible therapeutic utility for rapamycin or its analogs in patients undergoing balloon angioplasty.     

全反式维甲酸抑制兔颈动脉内皮损伤后内膜增殖和聚集素表达的研究

目的观察全反式维甲酸(atRA)对兔颈动脉内皮损伤后内膜增生、聚集素表达的影响,探讨atRA抗血管再狭窄的作用及机制。方法新西兰雄性大白兔36只,随机分为6组:治疗组(A、B)、对照组(A、B)、假手术组(A、B),每组6只。治疗组和对照组给予高脂饮食,2周后行颈动脉内膜空气干燥术,假手术组正常饮食,手术但不损伤内膜,治疗组术前3d开始atRA灌胃。分别于术后7、28d处死A、B组动物,取病变血管进行形态学观察,免疫组化检测聚集素、PCNA表达水平。结果对照组术后7d内膜开始增生,28d增生明显,管腔狭窄,有粥样斑块形成。治疗组内膜增生较轻,28d时内膜面积、内膜/中膜面积比、管腔狭窄度均低于对照组(P<0.01),聚集素、PCNA阳性表达低于对照组(P<0.05或<0.01)。结论 atRA抑制动脉内皮损伤后新生内膜增殖及动脉粥样硬化病变形成,抑制聚集素表达是机制之一。     

氯沙坦抑制球囊成形术后兔血管内膜的增殖

目的 :探讨氯沙坦对球囊成形术后兔血管内膜增殖的影响。方法 :将 2 4只新西兰兔随机分为三组 :对照组、模型组及氯沙坦组。后两组持续给予 1.5 %高胆固醇喂养 ,实验初始行腹主动脉内膜剥脱术 ,8周后对狭窄部位行球囊成形术 ,氯沙坦组于球囊成形术前 1周开始口服氯沙坦 10 m g/ (kg· d)。 12周末取腹主动脉行病理形态学观察。结果 :氯沙坦组内膜厚度 (IT)减少 6 5 % ,内膜面积 (IA )减少 34% ,内膜厚度比中膜厚度 (IT/ MT)减少 32 % ,内膜面积比中膜面积 (IA/ MA)减少 2 8% (P<0 .0 1)。结论 :氯沙坦在不影响血脂的情况下明显抑制血管损伤后内膜增殖     

阿托伐他汀减轻兔血管损伤后再狭窄机制的研究

目的观察阿托伐他汀对兔血管损伤后再狭窄的干预作用,探讨其与PKC、MMPs的关系。方法将40只健康日本大耳兔,♂,分为5组,每组8只,模型组及阿托伐他汀高(2 mg.d 1)、中(1 mg.d 1)、低(0.5 mg.d 1)剂量组均行髂动脉二次损伤造模术,假手术组仅结扎股动脉。一月后取靶血管切片HE染色,图像分析仪检测各组内膜面积、中膜面积、管腔面积、内膜增生指数及狭窄指数;免疫组化检测各靶血管MMP-2、MMP-9、PKC表达。结果经髂动脉二次损伤能成功建立血管成形术后再狭窄模型。与模型组相比,随剂量升高,阿托伐他汀各组内膜面积、中膜面积、膜增生指数及狭窄指数显著降低,管腔面积显著增加(P<0.01),与此同时,靶血管MMP-2、MMP-9及PKC表达均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论阿托伐他汀能显著减轻兔血管成形术后再狭窄,其机制可能与通过PKC途径抑制靶血管MMPs表达有关。     

乙烯二噻烯对新西兰兔胆固醇、甘油三酯的影响

目的考察乙烯二噻烯抗家兔实验性高胆固醇及高甘油三酯的影响。方法将30只雄性健康新西兰兔按照生化指标随机分为5组（n=6）,模型对照组及受试物组给予高脂饲料;空白对照组给予基础饲料,受试物组高、低剂量组同时分别灌胃给予30、10me／kg乙烯二噻烯西黄芪胶溶液,阳性对照组给予相同体积的辛伐他汀5mg／kg西黄芪胶溶液,空白组、模型组对照组给予相同体积的20％西黄芪胶溶液。实验结束考察动物的胆固醇、甘油三酯变化情况。结果9周后受试物低剂量组血清总胆固醇（TC）水平组显著低于模型组（P〈0．05）;受试物低、高剂量甘油三酯（TG）水平显著低于模型组（P〈0．01）;低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）水平均显著高于空白对照组（P〈0．001）,低于模型组（P〈0．05）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）水平显著高于模型组（P〈0．05）。结论乙烯二噻烯高、低剂量组均可降低实验动物的胆固醇、甘油三酯。