健脾化瘀解毒方调控PI3K/Akt/HIF-1α 通路干预胃癌前病变大鼠胃黏膜上皮细胞自噬及凋亡

目的探讨健脾化瘀解毒方（JPHY）调控PI3K/Akt/HIF-1α 通路干预胃癌前病变（GPL）大鼠胃黏膜上皮细 胞自噬及凋亡的机制。方法采用200 μg·mL-1 N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）自由饮用+隔日禁食法 造模28 周复制GPL 模型。将SD 大鼠随机均分为空白组、模型组、维酶素组（270 mg·kg-1）、JPHY 高剂量 组（9 g·kg-1）和JPHY 低剂量组（4.5 g·kg-1）,每组18 只。第15 周起,各给药组大鼠每天灌胃给药（10 mL·kg-1） 1 次,连续25 周。分别于第18、28 和39 周,每组随机取6 只大鼠,采用HE 染色法观察大鼠胃黏膜组织病 理学形态变化;Western Blot 法测定胃黏膜组织PI3K、Akt、HIF-1α、Beclin1、Bcl-2、BAX 蛋白的表达。 结果与空白组比较,模型组大鼠胃黏膜组织固有腺变薄,非固有腺锯齿样变,弥漫性细胞空泡样变,固有 腺细胞变为体积小、胞质少、核质比例大、深染的异型增生细胞,呈假复层、跨腺腔灶状分布,有炎性细胞浸 润,表现为以肠上皮化生为主;第18 周,大鼠胃黏膜组织的PI3K、Akt 蛋白表达明显下调（P < 0.05,P < 0.01）,HIF-1α、Beclin1、Bcl-2 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值明显上调（P < 0.05,P < 0.01）;第28 周,PI3K、 Akt、BAX 蛋白表达明显下调（P < 0.05,P < 0.01）,HIF-1α、Beclin1 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值明显上 调（P < 0.01）;第39 周,Akt 蛋白表达明显下调（P < 0.05）,HIF-1α、Beclin1、Bcl-2 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值明显上调（P < 0.05,P < 0.01）,PI3K、BAX 蛋白表达差异无统计学意义（P > 0.05）。与模型组比较, JPHY 高剂量组的胃黏膜改善作用最明显,异型增生细胞数量、分布范围和分布密度有明显减少,固有层厚度 明显增加,腺腔结构趋于正常;第18 周的PI3K、Akt 蛋白表达明显上调（P < 0.01）,HIF-1α、Bcl-2 蛋白表达 及Bcl-2/BAX 比值明显下调（P < 0.05）;第28 周的PI3K、Akt、BAX 蛋白表达明显上调（P < 0.05,P < 0.01）,HIF-1α、Beclin1 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值表达明显下调（P < 0.01）;第39 周Akt 蛋白表达明显上 调（P < 0.01）,HIF-1α、Beclin1 蛋白表达及Bcl-2/BAX 比值明显下调（P < 0.05,P < 0.01）。结论JPHY 对 GPL 不同阶段的黏膜损伤均有明显保护作用,可能与其通过PI3K/Akt/HIF-1α 通路调节肿瘤缺氧微环境以及调 控细胞自噬、凋亡作用有关。     

养阴化瘀解毒方通过PI3K/Akt信号通路调控低氧环境下结肠癌细胞的自噬和凋亡

目的：观察不同氧浓度环境对结肠癌细胞增殖、自噬的影响,并基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路探讨养阴化瘀解毒方在低氧环境下对结肠癌细胞自噬及凋亡的影响。方法：HCT-116细胞分为常氧组、1%低氧组、5%低氧组,通过细胞增殖与毒性检测（MTS）法检测细胞存活率,单丹磺酰尸胺（MDC）染色观察不同氧浓度下细胞自噬荧光表达情况;在5%低氧微环境下用养阴化瘀解毒方干预HCT-116细胞,分为正常组、空白血清组、养阴化瘀解毒方组（养阴化瘀解毒方含药血清5%、15%、25%）;通过MTS法计算各组细胞的抑制率;单丹磺酰尸胺（MDC）染色检测各组自噬细胞率的变化;利用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙锭（PI）流式细胞术检测各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测不同组自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ/Ⅰ)、酵母Atg6同源物（Beclin-1）、泛素结合蛋白（p62）和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP-3)、Bcl-2关联X蛋白（Bax）、活化的胱天蛋...     

化瘀祛痰方通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬改善动脉粥样硬化家兔肝脏脂质损伤

目的:以PI3K/Akt/mTOR信号通路为切入点探讨化瘀祛痰方调控自噬改善动脉粥样硬化家兔肝脏脂质损伤的分子机制。方法:60只新西兰雄性大耳白家兔随机分为正常组、模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,每组15只。正常组给予普通家兔饲料喂养,其他各组一次性静脉注射牛血清白蛋白(250 mg/kg)后以高脂饲料喂养以建立动脉粥样硬化模型,化瘀祛痰方组给予方药剂量为8 g·kg~(-1)·d~(-1),辛伐他汀组给药量为1.4 mg·kg~(-1)·d~(-1),正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃。4周后,HE染色观察各组家兔肝脏形态变化;全自动生化分析仪检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量变化;WB法检测肝脏PI3K、Akt、p-Akt、mTOR蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组家兔肝脏脂肪变性明显,血清TC、TG、LDL-C水平显著升高(P0.01),HDL-C水平显著降低(P0.01),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平下调(P0.01);与模型组比较,化瘀祛痰方组和辛伐他汀组肝脏脂肪变性呈不同程度恢复,血清中TC、TG、LDL-C水平显著降低(P0.01),HDL-C水平显著升高(P0.01),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平显著上调(P0.05或P0.01)。结论:化瘀祛痰方可通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,调控动脉粥样硬化家兔肝脏自噬稳态,减缓肝脏脂质损伤,进而改善动脉粥样硬化。     

PESV干预K562细胞PI3K/Akt 信号通路凋亡调控的研究

[目的]探讨PESV对K562细胞PI3K/Akt信号蛋白及凋亡调控因子Bcl-2和Bad表达的影响。[方法]将体外培养K562细胞,经PESV处理不同时间后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化,实时荧光定量RT-PCR检测Bcl-2、Bad mRNA水平变化。[结果]与对照组相比,PESV处理后K562细胞凋亡率显著增加,PI3K及p-Akt表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达降低,促凋亡基因Bad mRNA表达增加。[结论]PESV可能通过降低PI3K、Akt信号蛋白表达,调节Bcl-2和Bad表达,抑制K562细胞增殖,促进其凋亡。     

槲皮素对脊髓损伤大鼠神经元自噬及PI3K/Akt通路的影响

目的探讨槲皮素对脊髓损伤大鼠神经元自噬及PI3K/Akt通路的影响。方法 SD大鼠100只随机分成5组:对照组、模型组、米诺环素组(90 mg/kg)、槲皮素低剂量组(50 mg/kg)、槲皮素高剂量组(100 mg/kg)。模型组、米诺环素组和槲皮素低、高剂量组建立脊髓损伤模型。建模成功后,米诺环素组和槲皮素低、高剂量组给予相应药物灌胃,对照组、模型组给予等体积的生理盐水,持续4周。给药结束后,进行脊髓损伤的行为学评分(BBB)、机械痛阈(PWT)、热刺激潜伏期(PWTL)的测定。吖啶橙染色观察大鼠海马神经元自噬水平;RTPCR法及免疫组织化学法测定大鼠海马组织中PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平,酶联免疫吸附法测定大鼠海马组织IL-4、IL-6、TNF-α蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组PWT、PWTL、BBB评分水平、神经元自噬小体水平、PI3K、Akt m RNA和蛋白表达水平明显降低(P 0.05),IL-4、IL-6、TNF-α蛋白表达水平明显升高(P 0.05)。与模型组比较,米诺环素组和槲皮素低、高剂量组PWT、PWTL、BBB评分水平、神经元自噬小体水平、PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平明显升高(P 0.05),IL-4、IL-6、TNF-α蛋白表达水平明显降低(P 0.05)。与米诺环素组比较,槲皮素低剂量组PWT、PWTL、BBB评分水平、神经元自噬小体水平、PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平明显降低(P 0.05),IL-4、IL-6、TNF-α蛋白表达水平明显升高(P 0.05);槲皮素高剂量组PWT、PWTL、BBB评分水平、神经元自噬小体水平、PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平、IL-4、IL-6、TNF-α蛋白表达水平相近(P 0.05)。结论槲皮素能明显增加脊髓损伤大鼠神经元自噬水平进而减轻脊髓神经元损伤程度,其机制可能与槲皮素通过激活PI3K/Akt信号通路诱导的大鼠神经元自噬来减弱脊髓损伤有关。     

丹参酮ⅡA调控PI3K/Akt/mTOR通路对高脂血症大鼠肝脏自噬的影响

目的:基于PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路探讨丹参酮Ⅱ改善高脂血症大鼠肝脏脂质沉积的作用机制。方法:30只SPF级,健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组。正常组每日给予普通大鼠饲料喂饲;模型组、治疗组予高脂饲料喂饲。造模4周后,治疗组予丹参酮ⅡA磺酸钠10 mg/(kg·d)腹腔注射;正常组、模型组予等体积生理盐水腹腔注射。用药8周后,全自动生化分析仪检测大鼠血脂情况,HE、油红O染色观察肝脏组织形态学变化,Western blot技术检测PI3K、p-Akt、p-mTOR及Beclin1蛋白表达。Real time-PCR技术检测Beclin1 mRNA水平。结果:与正常相比,模型组TG、TC和LDL-C水平升高(P<0.05或P<0.01),HDL-C水平降低(P<0.01);与模型组相比,治疗组TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均无明显改变(P>0.05)。形态学结果显示,与模型组相比,治疗组大鼠肝脏脂肪空泡与脂质沉积减少。Western blot结果显示,与正常组相比,模型组PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白水平上调,Beclin1蛋白表达水平下调(P<0.01);与模型组相比,治疗组pAkt、p-mTOR蛋白表达水平下调,Beclin1蛋白表达水平上调(P<0.01),PI3K蛋白表达水平呈下调趋势。Real time-PCR结果显示:与正常组相比,模型组Beclin1 mRNA水平下调(P<0.01);与模型组相比,治疗组Beclin1mRNA水平上调(P<0.01)。结论:丹参酮ⅡA可能通过调控PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路,增强高脂血症大鼠肝脏自噬水平,减少肝脏脂质沉积。     

基于PI3K/Akt通路探讨健脾化瘀方对大肠癌SW480增殖的影响

目的:探讨健脾化瘀方基于PI3K/Akt通路抑制大肠癌SW480增殖的相关机制。方法:取对数生长期的SW480细胞,噻唑蓝(MTT)检测不同质量浓度健脾化瘀方(0.25,0.5,1,2,4,8 g·L~(-1))对SW480细胞增殖的影响;不同质量浓度健脾化瘀方(1,2,4 g·L~(-1))培养24 h,另设空白组,流式细胞仪检测对SW480细胞凋亡、细胞周期的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测健脾化瘀方对SW480细胞中磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),p27,细胞周期素D1(Cyclin D_1),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达的影响,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测健脾化瘀方对SW480细胞中PI3KⅢ,Akt,p27,Cyclin D_1,Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。结果:健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖有抑制作用,且呈现量效和时效关系。与空白组比较,健脾化瘀方作用于SW480细胞后明显促进细胞凋亡,细胞周期阻滞于G0/G1期,健脾化瘀方明显降低PI3K,Akt,Cyclin D_1,Bcl-2基因及蛋白的表达,明显升高p27,Bax基因及蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖具有抑制作用,其机制可能是通过下调PI3K和Akt的表达,从而影响下游的Cyclin D_1,p27,Bcl-2,,Bax的表达,引起SW480细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡。     

莪连颗粒对胃癌大鼠胃组织自噬及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨莪连颗粒对胃癌大鼠胃组织自噬及磷酯酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（PKB/Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法 SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、莪连颗粒组和胃复春组。除正常组常规饲养外,模型组、莪连颗粒组及胃复春组使用N-甲基-N''-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）综合法诱导构建胃癌大鼠模型,并分别予以生理盐水、莪连颗粒水溶液（3.240 g·kg^-1）及胃复春水溶液（0.390 g·kg^-1）灌胃,连续48周。剖腹取胃,肉眼观察胃大体改变,采用苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠胃组织病理学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠胃组织微管相关蛋白1轻链3β（LC3B）,Beclin1,p62,PI3K,Akt,mTOR mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠胃胀大,胃壁变薄,胃黏膜色泽苍白,皱襞萎缩浅平,走行紊乱,可见结节及赘生物;与模型组比较,莪连颗粒组大鼠胃胀大减轻,胃壁变薄改善,胃黏膜色暗,皱襞减少,走行尚规整,偶见细颗粒状结节。HE染色显示,与正常组比较,模型组大鼠胃组织腺体排列拥挤紊乱,形态多样,细胞形态不一,胞浆嗜碱性,核大深染不规则,可见核分裂像,黏膜肌层浸润破坏;与模型组比较,莪连颗粒组大鼠胃组织腺体排列尚规整,少部分可见轻度异型细胞。与正常组比较,模型组大鼠胃组织LC3B,Beclin1 mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.05）,PI3K,p62,Akt及mTOR mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组比较,莪连颗粒组胃组织LC3B,Beclin1 mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）,PI3K mRNA及p62,Akt,mTOR mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论 莪连颗粒可改善胃癌大鼠胃组织细胞异型性,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进自噬相关。     

党参低聚糖通过抑制PI3K/AKT/HIF-1α通路改善胃癌前病变大鼠胃粘膜损伤

目的:研究党参低聚糖对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃黏膜损伤的改善作用及机制。方法:分析党参低聚糖对缺氧条件下胃黏膜上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞(AGS)增殖活性,及对凋亡相关蛋白(BAX、BCL-2、Caspase-3)和磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/缺氧诱导因子1α信号通路(PI3K/AKT/HIF-1α)的影响。70只大鼠随机分为正常对照组、正常动物给予党参低聚糖0.6 g/kg组、模型对照组、维酶素0.27 g/kg组、党参低聚糖0.15、0.6 g/kg组。采用灌胃N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)和40%乙醇并结合饥饱饮食的方法构建PLGC模型。分析党参低聚糖对PLGC大鼠胃组织病理变化、血清生化指标、凋亡相关蛋白(BAX、BCL-2、Caspase-3)和PI3K/AKT/HIF-1α通路的影响。同时通过LC/MS/MS代谢组学技术研究影响党参低聚糖改善PLGC的潜在生物标志物和代谢通路。结果:细胞实验显示,与空白对照组比较,缺氧对照组GES-1细胞的相对存活率显著降低(P<0.01),BCL-2/BAX比值、PI3K及p-AKT蛋白表达显著下调,Ca...     

麻芍平喘汤通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制气道上皮细胞自噬

目的：探讨麻芍平喘汤（MSPC）通过磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对脂多糖（LPS）诱导的人支气管气道上皮样细胞（16HBE）自噬的影响。方法：选用人支气管上皮细胞16HBE作为研究对象,采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测LPS诱导的16HBE活性影响和麻芍平喘含药血清对16HBE细胞活性影响;以CCK-8法筛选出的适宜条件的LPS诱导16HBE细胞,并测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量鉴定模型成立,制备麻芍平喘汤含药血清作用于LPS诱导的16HBE,将细胞分为正常组、LPS组、LPS+MSPC组、LY294002+LPS组、LY294002+LPS+MSPC组。透射电镜观察细胞的自噬囊泡和超微结构的变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR及微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的蛋白表达水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测5组炎症因子白细胞介素（IL）-5、IL-6、TNF-α、IL-10的表达水平。结果：...     

健脾祛痰方影响TGF-β/PI3K/Akt通路减轻高脂血症大鼠内皮损伤

目的 探讨健脾祛痰方基于TGF-β/PI3K/Akt信号通路对高脂血症大鼠的内皮保护作用。方法 使用60只SPF级雄性大鼠随机分为正常组、模型组、西药(阿托伐他汀)组和健脾化痰低、中、高剂量组。正常组给予基础饲料喂养,其余各组给予高脂饲料喂养,并活动受限,建立高脂血症大鼠模型。健脾祛痰各组给予不同剂量中药,西药组给予阿托伐他汀。12周后,苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE染色)观察肝组织病理变化;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测一氧化氮(Nitric oxide, NO)与内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)水平;Western blot检测转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)和单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(phos...     

参白解毒方通过调控PTEN/PI3K/Akt信号通路抑制结直肠癌细胞增殖

目的 研究参白解毒方基于磷酸酶及张力蛋白同源物（PTEN）/磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路抑制结直肠癌细胞HCT116增殖的作用机制。方法 采用水提醇沉法提取参白解毒方有效部位进行冻干粉制备;体外培养HCT116细胞,用参白解毒方（2、4、8、16 g·L^-1）对HCT116细胞进行处理,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测参白解毒方对HCT116细胞增殖的抑制作用;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测细胞PTEN、PI3K、Akt、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）、c-核蛋白类基因（c-Myc）、生存素（Survivin）和细胞周期蛋白D₁（CyclinD₁）mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测PTEN、磷酸化磷酸酶及张力蛋白同源物（p-PTEN）、PI3K、Akt、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、GSK-3β、磷酸化糖原合成酶激酶-3（p-GSK-3β）、c-Myc、Survivin、CyclinD₁的蛋白表达水平;免疫荧光检测β-连环蛋白（β-catenin）入核情况。结果 与空白组比较,参白解毒方各质量浓度均可以显著抑制HCT116细胞的增殖（P<0.01）,且具有浓度依赖性。与空白组比较,参白解毒方处理细胞后PTEN、GSK-3β mRNA表达水平均上调,PI3K、Akt、c-Myc、Survivin、CyclinD₁ mRNA表达水平均下调（P<0.01）;细胞PTEN、p-PTEN和GSK-3β蛋白表达水平上调,PI3K、Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β、c-Myc、Survivin、CyclinD₁蛋白表达水平均下调（P<0.05,P<0.01）。免疫荧光结果显示参白解毒方可以抑制结直肠癌细胞HCT116中β-catenin的入核。结论 参白解毒方可以抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖,其作用机制可能是通过调节PTEN/PI3K/Akt信号通路。     

益气健脾汤联合二甲双胍激活PI3K/Akt/mTOR通路调控自噬对抗糖尿病肌萎缩

目的 围绕糖尿病模型大鼠比目鱼肌磷脂酰肌醇三激酶（Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate3-kinase,PI3K）/丝氨酸-苏氨酸激酶（Serine-threonineproteinkinase,Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Mammaliantargetofrapamycin,mTOR）信号通路、线粒体生物发生、泛素-蛋白酶体途径（Ubiquitinproteasome system,UPS）和自噬,研究益气健脾汤协同二甲双胍改善糖尿病肌萎缩的机制。方法 随机选择6只雄性SPF级SD大鼠设为正常对照组（Control,C）,其余大鼠采用高脂饮食诱导联合链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）法复制糖尿病大鼠模型,模型复制成功后,随机分为模型对照组（Saline,S）、二甲双胍干预组（Metformin,M）及益气健脾汤联合二甲双胍干预组（Y+M）,每组6只。血糖仪检测大鼠空腹血糖（Fasting plasma glucose,FPG）;大/小鼠抓力仪检测大鼠抓力;麦胚凝集素（Wheat germ agglutinin,WGA）染色及...     

黄芪甲苷通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌细胞自噬和凋亡

目的：探讨黄芪甲苷对鼻咽癌细胞自噬与凋亡的影响及潜在分子机制。方法：在体外实验中,通过单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透射电镜观察黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对鼻咽癌细胞自噬的影响。在体内实验中,建立裸鼠移植瘤模型后采用免疫荧光法(IF)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组别中自噬和凋亡情况的变化及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路关键蛋白的表达变化。结果：与空白组比较,不同浓度AS-Ⅳ(5、10、20μmol·L^-1)作用于5-8F细胞后,各AS-Ⅳ组的自噬荧光强度均明显增强,其中,干预24 h,各AS-Ⅳ组的自噬荧光表达最强,10μmol·L^-1AS-Ⅳ组的荧光表达最明显;与空白组比较,透射电镜下自噬激活剂雷帕霉素(RAPA)诱导5-8F细胞内出现较多自噬体;3-甲基腺嘌呤(3-MA)作为自噬抑制剂,透射电镜下并未观察到5-8F细胞内有自噬体的形成;AS-Ⅳ10μmol·L^-1组细胞内结构和细胞膜完整、清楚,可见自噬体形成;与空白组比较,AS-Ⅳ各组的肿...     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬探讨当归四逆汤对痛风性关节炎大鼠的影响

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路,探讨当归四逆汤对痛风性关节炎（GA）大鼠自噬水平的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg^-1）和当归四逆汤低、中、高剂量组（6.54、13.08、26.16 g·kg^-1）,每组10只,并分别给予相应药物灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续7 d。于第5天给药1 h后向各组（正常组除外）大鼠右侧踝关节注射尿酸钠混悬液（50 g·L^-1）建立GA模型,正常组注射等体积的无菌生理盐水。观察大鼠踝关节肿胀情况;测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β水平;观察踝关节病理形态变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测滑膜PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）、自噬效应蛋白（Beclin-1）、泛素结合蛋白（p62）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt、mTOR、LC3、Beclin-1、p62 mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀指数显著升高（P<0.01）,血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高（P<0.01）,踝关节滑膜组织可见明显炎性细胞浸润和纤维组织增生,滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达显著升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达降低（P<0.01）。与模型组比较,当归四逆汤中、高剂量组大鼠关节肿胀明显减轻（P<0.05）;血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达量显著明显降低（P<0.05）;踝关节滑膜组织未见明显炎性细胞浸润,纤维组织增生减轻;滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达量均明显降低（P<0.05）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达量亦明显降低（P<0.05）,而LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达量均明显上升（P<0.05）。结论 当归四逆汤可以抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,提高大鼠滑膜组织自噬水平,改善痛风性关节炎,并且以高剂量效果最佳。     

基于PI3K/mTOR通路益气化瘀解毒方对人肝癌细胞SMCC-7721自噬流的影响

目的观察益气化瘀解毒方对人肝癌细胞SMCC-7721自噬流的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法实验分为空白对照组、重楼皂苷Ⅰ组、益气化瘀解毒方组、雷帕霉素组及索拉非尼组,各给药组给予相应药物。体外实验观察人肝癌细胞SMCC-7721自噬流发生情况并检测细胞微管相关蛋白1轻链3(LC-3Ⅱ)、类胰岛素样生长因子2的m RNA结合蛋白质(p62)及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)的表达。结果重楼皂苷Ⅰ、益气化瘀解毒方及索拉非尼均能阻断人肝癌细胞SMCC-7721自噬流,导致细胞内自噬小体的蓄积,上调LC-3Ⅱ、p62的表达,同时可下调PI3K、m TOR蛋白的表达。结论益气化瘀解毒方可改变人肝癌细胞SMCC-7721形态;重楼皂苷Ⅰ、益气化瘀解毒方及索拉非尼均能阻断人肝癌细胞SMCC-7721自噬流,增加自噬体数量,其机制可能与抑制PI3K/mTOR信号通路有关。     

化瘀解毒方提取物抑制作用胃癌细胞增殖和黏附及对PI3K/Akt通路影响的实验研究

目的:研究化瘀解毒方提取物抗胃癌细胞增殖和黏附方面的作用及机制。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)分析化瘀解毒方提取物稳定性,化瘀解毒方提取物作用于人胃癌SGC-7901细胞株,利用MTT分析细胞增殖抑制实验,检测红细胞毒性实验,MTT快速测定法测定活性峰与Matrigel的黏附作用的影响。Western blot法检测人胃癌SGC-7901细胞中PI3K,PDK1和Akt总蛋白及其磷酸化水平的影响。结果:化瘀解毒方提取物可浓度依赖性抑制体外人胃癌SGC-7901细胞增殖、黏附,免疫印迹结果显示,化瘀解毒方提取物抑制Akt蛋白磷酸化,然而对于上游蛋白PDK1和PI3K的磷酸化无作用。结论:化瘀解毒方提取物抑制其增殖和黏附,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt通路有关。