用PCR法扩增孕妇外周血DNA确定胎儿性别

理论上孕妇外周血中的胎儿细胞可做为新的标本来源,它可以替代羊膜穿刺术和绒毛膜活检所得到的样品。本文作者使用多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测孕妇静脉血中大量母体细胞中所含少量的胎儿细胞。PCR方可扩增外周血里DNA中一个Y-特异性重复序列。胎儿是男性的孕妇外周血DNA中的Y-特异性序列得以扩增,而胎儿是女性的则无扩增现象。作者认为这是首次利用孕妇血液进行分子遗传学分析的报道。     

常山县食品从业人员弓形体感染血清学调查

弓形体病(koxoplasmosis)是一种由弓形体引起的寄生虫病.孕妇感染弓形体后,可经胎盘使胎儿发病或死亡,造成先天性畸形、智力不全或流产等,影响优生优育.该病发生与职业有关,肉类加工工人等人群易感染[1].为此,我们于2001年对394名食品从业人员进行了弓形虫特异性抗体(IgG、IgM)及循环抗原(CAg)检测现将结果报告如下.     

2503名孕妇弓形体血清学检测结果

弓形体病是一种人畜共患的寄生虫病,孕妇感染弓形体不仅可引起流产、早产,增加妊娠合并症,而且可致胎儿各种先天性缺陷和死胎,是人类围产期隐性感染影响新生儿出生缺陷的主要病原体之一[1].孕妇弓形体感染检测对优生优育,提高出生人口素质具有十分重要的意义.本文应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对长兴县2503名孕妇进行弓形体抗原抗体检测,现将检测结果报告如下.     

妊娠期弓形体感染的母婴传播观察

采用聚合酶链技术（ＰＣＲ）分别检测母婴血弓形体ＤＮＡ（Ｔｏｘｏ－ＤＮＡ）及羊水Ｔｏｘｏ－ＤＮＡ。结果：（１）对３０例孕晚期孕妇检测羊水Ｔｏｘｏ－ＤＮＡ与其新生儿血Ｔｏｘｏ－ＤＮＡ，检测结果无显著差异，Ｐ＞００５。。（２）孕中晚期组孕妇感染弓形体后，其胎儿感染率明显高于孕早期组，Ｐ＜００５。说明孕中晚期孕妇感染弓形体后，易于传染给胎儿且感染弓形体的孕妇维持到足月分娩者，出生的胎儿多为无临床症状的先天性弓形体病（隐性先天性弓形体病，实验室诊断为阳性）；由于羊水易于在孕中晚期获取，故检测羊水Ｔｏｘｏ－ＤＮＡ将有利于先天性弓形体病的早期诊断及早期治疗，从而控制先天性弓形体病儿的出生。     

弓形体IgG抗体亲和力指数在胎儿宫内感染中的临床意义

【目的】探讨弓形体（toxoplasma，TOX）IgG抗体亲和力指数，判断弓形体感染孕妇宫内感染的概率。【方法】ELISA法检测中晚期孕妇弓形体特异性抗体IgM和IgG，并对150例TOX—IgM或TOX—IgG阳性孕妇的胎儿或新生儿脐血进行TOX—IgM检测；采用尿素变性试验检测弓形体感染孕妇TOX-IgG抗体亲和力指数（avidityindex，AI）。【结果】孕妇弓形体IgM抗体阳性和IgG抗体阴性58例；弓形体IgM和IgG抗体阳性22例；弓形体IgM抗体阴性和IgG抗体阳性70例。胎儿或新生儿IgM阳性44例。原发性感染宫内感染率高于继发性感染（P〈0．05），活动性感染宫内感染率高于非活动性（P〈0．01），AI≤30％宫内感染率高于AI〉30％（P〈0．01）。【结论]IgG抗体亲和力指数AI≤30％结合IgM阳性有助于提高判断弓形体宫内感染的发生率。     

无损伤性产前诊断性连锁遗传病初探

密度梯度离心富集母血中胎儿细胞,并结合套式PCR检测胎儿SRY基因,对2例有性连锁遗传病家族史的孕妇进行产前胎儿性别鉴定。结果2例孕妇外周血富集后均扩增出254bp特异性片断,所得结果与相应绒毛组织DNA结果吻合,且产前诊断时间在孕早期。提示本方法可对性连锁遗传病进行无损伤性早期产前诊断。     

SRY和maspin基因对胎儿游离DNA的检测效率

目的:探讨应用非性别依赖的表观遗传学标记代替SRY基因检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的可行性。方法:分别以SRY基因和不同甲基化状态的maspin基因序列为标记对孕妇和非妊娠女性血浆中的游离DNA进行PCR和甲基化PCR检测,并对结果进行统计学分析。结果:孕男胎孕妇血浆DNA标本中SRY基因的检出率为93.9%。u-maspin(maspin基因的非甲基化序列)仅在妊娠组中被检测出,检出率88.3%。两检出率间的差异不具有统计学意义。m-maspin(maspin基因的甲基化序列)在妊娠组和非妊娠组中的检出率无差异。结论:u-maspin基因可作为非性别依赖的胎儿DNA特异性标志物,相对于以SRY基因作为标志物有助于扩大非创伤性产前诊断的临床应用范围。     

母体血浆胎儿游离DNA Rh D基因型产前诊断检测

目的 运用荧光定量PCR(quantitative realtime PCR, Q-PCR)技术检测Rh D阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性产前诊断胎儿Rh D基因型。方法 通过微量 DNA 抽提技术,并利用琼脂糖凝胶电泳法富集孕妇血浆游离胎儿 DNA(Cell-free fetal DNA,cff DNA),用Q-PCR技术检测 43例Rh D阴性孕妇血浆cff DNA,测定不同孕期的孕妇全血和血浆中管家基因(β-actin)的含量,比较不同孕期孕妇全血和血浆DNA 含量的变化;并用男性性别决定基因(sex-determining region Y gene,SYR)确定胎儿 DNA 的存在,以未有妊娠史的健康女性和健康男性作为阴性和阳性基因对照;同时对孕男胎的Rh D阴性孕妇血浆cff DNA进行Rh D 基因外显子 7、10 和内含子 4 的特异性扩增,与孕妇产后采集的新生儿脐血Rh D 定型结果对比分析。 结果 (1)孕妇早、中期孕组血浆DNA含量差异无统计学意义(P＞0.05),早、晚期和中、晚期孕组血浆 DNA差异有统计学意义(P＜0.05)。(2)43例Rh D阴性孕妇中26例经产后证实为男胎,母血浆中检测到SYR基因特异性扩增的 25 例,灵敏度为96.15%,特异度为94.44%,准确率为97.67%。(3)26例孕男胎孕妇血浆中胎儿 DNA 的Rh D基因型检测发现,有19例胎儿Rh D血型阳性,5例胎儿Rh D血型阴性,即24例胎儿 DNA 的Rh D基因型与表型相符,准确率为97.6%。 结论 运用Q-PCR技术检测Rh D阴性孕妇血浆中cff DNA进行无创性产前诊断胎儿Rh D基因型,是一种敏感性高、特异性好的无创性产前诊断方法,可用于临床诊断和预防新生儿Rh D溶血病。     

应用表观遗传学标记检测孕妇血浆中的胎儿游离DNA

[目的]探讨应用非性别依赖的表观遗传学标记检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的可行性. [方法]随机选择60例孕妇作妊娠组,15例未生育非妊娠女性作对照组1,15例已生育非妊娠女性作对照组2.以甲基化特异性PCR扩增各待检对象血浆DNA中不同甲基化状态的maspin基因,并对结果进行统计学分析.[结果]m-maspin(maspin基因的甲基化序列)在妊娠组和两对照组中均被检测出,其检测阳性率在各组间无差异.u-maspin(maspin基因的非甲基化序列)在妊娠组中有53例被检测出,检出率88.3%,而在两对照组中均未被检测出,其检测阳性率在妊娠组和两对照组间的差异均具有统计学意义. [结论]u-maspin基因可作为非性别依赖的胎儿DNA特异性标志物应用于非侵入性产前诊断.     

弓形虫感染192例治疗效果分析

弓形虫病又称弓形体病,是一种人畜共患的寄生病,分布范围广对人类危害大.孕妇在孕期感染弓形体病毒可引起胎儿及婴幼儿发育异常.为减少残疾儿的出生,我站自2000年对全市育龄妇女3 965例在孕前进行弓形体与病毒感染的检测.现对其中弓形虫病毒阳性患者192例进行治疗,并跟踪观察及优生指导.现将检测及治疗结果报告如下.     

PCR技术检测孕妇血浆中胎儿DNA相关检测条件的探讨

目的:探讨检测孕妇血浆中胎儿DNA的稳定、灵敏、可靠的方法。方法:应用套式PCR和常规PCR技术,用SRY基因序列作为研究孕妇血浆中胎儿DNA的基因标志。套式PCR检测结果与常规PCR检测结果进行比较分析。结果:套式PCR检测结果优于常规PCR。最早检测出孕妇血浆中胎儿DNA的时间是7-1周。整个孕期均能检测到胎儿游离DNA。检测敏感度为1μg(100000个细胞)女性DNA背景中检测到1个男性DNA。结论:套式PCR技术是检测孕妇血浆中胎儿DNA的稳定、灵敏、可靠的方法。     

母儿间单纯疱疹病毒感染的研究

目的 研究母儿间单纯疱疹病毒(HSV)感染及其垂直传播状况。方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)筛查455例孕妇HSV特异性抗体(IgM、2型和1型IgG)，并用多聚酶链反应(PCR)检测抗体阳性孕妇的胎儿组织及其附属物中HSV2型DNA的表达。结果 孕期HSV1型和2型感染率分别为85．27％、47．69％。异常组HSV2型IgG抗体的检出率明显高于对照组。HSV宫内感染率为4．24％。羊水、胎盘及胎儿组织中均可检出HSV2型DNA。结论 妊娠期HSV感染较常见，其中HSV2型感染与流(早)产、畸形等异常孕产史关系密切。ELISA法结合PCR技术是诊断HSV宫内感染的一种行之有效的方法。     

孕妇血浆中游离胎儿DNA的SRY、DXS8377检测

目的:建立一种孕早期、简便且无创伤性的胎儿性别的产前诊断方法。方法:应用降落PCR和二次PCR扩增技术,联合检测妊娠14～20周的正常孕妇血浆中游离胎儿DNA的SRY基因和DXS8377位点。结果:24例孕妇血浆中游离DNA检测SRY基因和DXS8377位点,明确判断性别22例,不能明确判断性别2例。结论:采用降落PCR和二次PCR扩增技术,联合检测孕妇血浆中游离胎儿DNA,可提高孕早期胎儿性别判断准确率。     

无创胎儿血型产前诊断在ABO溶血病早期诊断中的意义

目的探讨胎儿血型产前诊断在早期诊断ABO-新生儿溶血病(HDN)中的价值,为早期发现ABO-HDN提供依据。方法回顾性分析2013—2014年在湖州市妇幼保健院产前检查的3 777名O型血孕妇血清Ig G抗A抗B效价检测情况及妊娠结局,利用孕妇外周血中的胎儿DNA检测胎儿ABO血型,并评价其在早期诊断ABO-HDN中的应用价值。结果 3 777名O型血孕妇血清Ig G抗A抗B效价检测结果显示,ABO-HDN高风险孕妇1 175人,占31.10%,低风险孕妇2 602人,占68.90%。对其中769名高风险孕妇进行妊娠结局新生儿情况随访,胎儿血型与孕妇抗A或抗B相对应的641人,占83.36%;不相对应的128人,占16.64%。对其中新生儿血型与抗体检测相对应的高风险孕妇ABO-HDN发病率分析结果显示,抗体效价越高,ABO-HDN发生率越高(χ2趋势=23.752,P0.01)。从血清Ig G抗A抗B效价≥1∶256的孕妇中随机选择30人,提取孕妇外周血血浆中胎儿游离DNA,利用聚合酶链反应-序列特异性引物分型检测胎儿ABO血型基因型,与胎儿出生后血型一致率为100%。结论孕妇血清Ig G抗A抗B效价检测结果在ABO-HDN产前预防中存在干扰因素,仅凭其效价高低进行ABO-HDN的早期诊断和治疗具有一定的局限性;胎儿血型产前诊断技术作为辅助诊疗手段早期诊断ABO-HDN时可有效提高诊疗水平。     

产妇—新生儿弓形体感染的血清流行病学监测

孕妇感染弓形体、多呈亚临床不显性感染和潜伏感染。但可传播给胎儿和新生儿,导致严重后果。我们对187名孕妇及新生儿用ELISA酶联免疫吸附测定法检测了血清弓形体IgG、IgM抗体,以了解本地区孕妇感染弓形体的情况及感染后对胎儿的传播情况。1 检测对象 为卫辉市(1996年2月～1997年9月)在我院妇产科分娩的187名产妇及新生儿。孕妇年龄为22～30岁,为一胎自然分娩     

脆性x综合征的产前基因筛查与诊断

目的 对脆性X综合征进行产前基因筛查与诊断.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对32例孕妇及其胎儿的脆性X基因(CGG)n重复序列进行检测,同时采用PCR扩增牙幼基因对胎儿性别进行鉴定.结果 在32例孕妇及其胎儿中,检出1例孕妇为前突变携带者,1例男性胎儿为脆性X综合征患者.结论 采用PCR扩增脆性X基因(CGG)n重复序列,结合扩增牙幼基因进行性别鉴定,可对脆性X综合征进行产前筛查与诊断.     

利用套式PCR技术检测母血中胎儿SRY基因的研究

为了解利用母血循环中胎儿单拷贝基因的灵敏度并初步探索其临床应用价值,本研究根据人类SRY基因保守顺序设计了内、外两对引物,在明确该检测灵敏度的基础上,对15例孕妇血中胎儿SRY基因进行了扩增,结果表明这一检测程序的灵敏度达到1/2×10~7(男性DNA/女性DNA)15例母血胎儿细胞SRY基因的检出率与胎儿实际性别的符合率为93.3％。本实验采取的套式PCR技术大大提高了检测的特异性和灵敏度。由此提示合适的引物设计并采用套式PCR技术可提高检测的特异性及灵敏度。     

孕妇弓形体感染情况调查

我们对本辖区孕妇弓形体感染情况进行了详细调查，旨在预防胎儿感染及畸形的发生。１资料与方法１．１资料来源资料来自门诊建卡孕妇１８０３例。常规进行弓形体检测，并详细询问病史、既往史以及动物接触史、食肉习惯等。１．２方法取孕妇手指静脉血、离血清备用。采用免...     

间接血凝试验检测孕晚期弓形体感染对胎婴儿的影响

弓形体病是全球性人畜共患疾病 ,中国人感染率为1.0 0 %～ 2 5 .0 0 % ,孕产妇的感染率为 3.44 %。孕妇感染弓形体后可通过胎盘导致胎儿宫内感染 ,致流产、畸形、死胎早产及胎儿宫内生长迟缓 ,并增加妊娠并发症。我院应用间接血凝试验 (IHA)检测孕晚期弓形体感染对胎婴儿的影响     

中国人3种常见缺失型α-地中海贫血快速检测及产前诊断

目的 建立一种准确快速并能同时检测中国人3种常见缺失型α－地中海贫血（简称α－地贫）的聚合酶链式反应（PCR）技术并应用于前前α－地贫的人群筛查和高危胎儿的产前诊断中。方法 采用跨越断裂点PCR（gap-PCR)方案设计3组PCR引物，并对PCR反应条件进行优化以扩增代表这3种α－地贫存在的特异性DNA片段。应用血液学分析法对孕妇及其配偶各6135例进行α－地贫表型的初筛，gap-PCR地用于α－地贫表型阳性病例的确诊和32例α－地贫高风险胎儿的产前诊断。结果 一次PCR同时成功地检出3种α－地贫的纯合子，杂合子或双重杂合子；孕妇及其配偶中共筛出541例携有--^SEA 变基因，及其HbBart's和HbB现的高风险胎儿17例和15例，并对其中的31例进行了产前诊断，5例HbBart's水肿胎儿和4例HbH病胎儿被终止妊娠。结论 该法简便快速，准确可靠，重复性好，适合于人群筛查时检出α－地贫携带者和高风险重症α－地贫胎儿的产前诊断。