DADS 上调K562 细胞p21WAF1 表达对细胞生长阻抑和凋亡 的实验研究

目的:探讨二烯丙基二硫(DADS)对体外培养的人白血病细胞系K562细胞生长阻抑和凋亡作用及机制。方法:采用MTT分析法检测细胞活性、流式细胞术分析细胞周期及凋亡率、免疫组化检测p21WAF1基因表达。结果:1).DADS在10mg/L～80 mg/L范围内,对K562细胞的抑制作用呈剂量-时间依赖效应;2).不同浓度DADS作用于K562细胞24h后,细胞周期发生了变化:DADS可以将K562细胞阻滞于G2/M期;3).DADS浓度在10mg/L～80mg/L时作用K562细胞24h后,凋亡率逐渐升高,有显著的统计学意义(P<0.05或P<0.01);4).用浓度分别为0mg/L,20mg/L,40mg/L,80mg/L处理K562细胞24h后,p21WAF1蛋白表达上调,有统计学意义(P<0.05或P<0.01),溶媒组和阴性对照组无差别(P>0.05)。结论:DADS有抑制K562细胞增殖和促进K562细胞凋亡的作用。其作用的可能机制与上调细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21WAF1表达,从而诱使k562细胞阻滞于G2/M期有关。     

二烯丙基二硫作用于K562细胞后凋亡相关基因的差异表达

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide DADS)作用于人白血病K562细胞后凋亡相关基因的差异表达,为进一步探讨DADS诱导K562细胞凋亡的分子机制提供基础.方法:采用瑞士-吉姆萨和Hoechst33342染色观察细胞形态学变化.运用基因芯片技术检测40 mg/LDADS作用于K562细胞24h后凋亡相关基因的差异表达,选择其中上调基因GADD45A、下调基因HO-1运用RT-PCR技术进行验证.结果:40mg/L的DADS作用于K562细胞后出现凋亡所具有的典型形态学变化.40 mg/L DADS作用K562细胞24 h后有14个凋亡相关差异表达基因.GADD45A、HO-1基因表达情况与基因芯片结果一致.结论:DADS可能通过多个基因和多条信号转导通路共同作用诱导人白血病细胞K562凋亡.     

沉默UVRAG基因在二烯丙基二硫诱导K562细胞中caspase3的表达

目的:沉默UVRAG基因在DADS诱导K562细胞中观察caspase3的表达。方法:以K562细胞为细胞模型,将构建成功并筛选出最有效干扰抑制UVRAG基因的si RNA序列片段采用lipofectamine TM2000脂质体转染法转染白血病K562细胞,组别为:空白对照组,转染试剂组、阴性对照组,阳性对照组,转染24小时后,利用QT-PCR检测UVRAG m RNA的表达水平以此观察干扰效果,再以40 mg/LDADS处理转染试剂组12小时,采用蛋白印迹(Western Blotting)技术检测凋亡相关基因caspase3的表达。结果:QT-PCR显示:与空白组相比,UVRAG m RNA表达明显减少,表明沉默UVRAG基因成功;Western Blotting显示:DADS处理的干扰成功的K562细胞12小时后,检测到caspase3的蛋白表达水平下降。结论:沉默UVRAG基因能使白血病K562细胞中凋亡相关基因caspase3的蛋白表达水平下降,提示抑制UVRAG表达的同时也可能抑制DADS诱导K562细胞的凋亡。     

紫花牡荆素对胃癌SGC-7901增殖的影响及分子机制

目的:探讨紫花牡荆素(casticin)对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,以及对Bcl-2表达的调节作用.方法:用紫花牡荆素预处理胃癌SGC-7901细胞,MTT法分别检测紫花牡荆素不同浓度(1 g/mL、2g/mL、4g/mL、8g/mL)和不同处理时间(6h、12h、24h、48h)细胞增殖情况;IC50浓度处理胃癌SGC-7901细胞之后,Western blot和RT-PCR检测Bel-2蛋白和mRNA表达水平.结果:5.6g/mL紫花牡荆素处理SG-C-7901细胞12小时后,对细胞增殖抑制作用显著,Westernblot和RT-PCR结果显示Bcl-2表达显著下调.结论:花牡荆素可显著抑制SGC-7901细胞增殖,而这一作用可能与Bel-2表达下调有关.     

二烯丙基二硫诱导人白血病K562 细胞凋亡及其对Bax、Bag-1 表达的影响

目的:探讨二烯丙基二硫(Diallyl disulfide)诱导白血病K562细胞凋亡的作用及其机制。方法:采用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色法观察细胞凋亡形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯度带;RT-PCR法检测BAG-1、BAX基因的mRNA表达变化。结果:DADS可诱导K562细胞凋亡。其对K562细胞的凋亡效用与药物浓度、有明显依赖关系;DNA琼脂糖凝胶电泳示:40mg/LDADS作用K562细胞48小时后能够产生明显的梯形电泳图谱(DNA ladder):DADS作用48h后,BAX mRNA表达水平较对照组上调;BAG-1 mRNA较对照组下调(差异具有统计学意义,P<0.05)。结论:DADS能够诱导K562细胞凋亡,其凋亡机制可能与上调BAX,下调BAG-1有关。     

siRNA分析nm23-H1基因与人慢性髓性白血病的关系

设计并筛选靶向nm23-H1基因的siRNAs序列,探讨nm23-H1基因与人慢性髓性白血病之间的关系。依据siRNA设计原则,设计3条siRNA序列。将不同靶点的siRNA用lipofectamine2000转染人慢性髓性白血病细胞株K562。转染后24h RTPCR检测nm23-H1mRNA水平变化;转染后48h免疫细胞化学法检测nm23-H1蛋白表达。MTT法检测转染后24h、48h和72h有效siRNA对K562细胞生长的影响。3条siRNA中,siNM526能有效地抑制K562细胞nm23-H1基因表达,转染siNM526的K56细胞生长受到抑制。说明下调nm23-H1基因的表达有抑制K562细胞增殖的作用,即降低了K562细胞的恶性程度。nm23-H基因有可能成为白血病治疗潜在的分子靶点。     

二烯丙基二硫通过激活Caspase3和释放Cyt-c诱导Raji细胞凋亡

二烯丙基二硫（diallyl disulfide,DADS）作为天然植物大蒜中的提取物,能抑制多种肿瘤细胞生长,但其抑瘤的分子机制还不十分清楚。在该研究中,作者采用CCK-8（cell counting kit）技术检测发现,DADS能有效地抑制人淋巴瘤Raji细胞增殖,形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测证实DADS呈时间和浓度依赖性诱导Raji细胞凋亡, DADS处理细胞24 h后, MCL1和Bcl-2蛋白表达下降,而Bax 和Bak蛋白表达水平无变化,Bid和Caspase3被激活,线粒体中Cyt-c释放增多,用Caspase 抑制剂Z-VAD-FMK能部分阻断DADS诱导人淋巴瘤Raji细胞凋亡, 提示DADS诱导的Raji细胞凋亡作用通过Bcl-2/MCL1-线粒体-caspase3通路介导。     

DADS对人小细胞肺癌NCI-H446 细胞系增殖抑制的研究*

摘要目的：研究二烯丙基二硫（diallyl disulfide，DADS）对人小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖的抑制作用，并探讨其作用机制。方 法：体外培养NCI-H446 细胞，采用MTT、细胞计数实验方法检测DADS 抑制NCI-H446 细胞增殖；通过HE 染色和AO-EB 荧光 染色方法，观察DADS 处理后NCI-H446 细胞的形态学改变。结果：MTT 结果显示：DADS作用于NCI-H446 细胞48 h后，代谢 MTT 的能力明显降低，显示出较强的细胞毒性反应，IC50值介于20～40 滋g/ml之间。细胞计数结果表明：DADS 作用于NCI-H446 细胞后，随DADS 浓度增加NCI-H446 细胞倍增时间延长。HE染色显示：NCI-H446 细胞经DADS处理24 h后，与对照组相比，细 胞体积变小，胞浆丰富,细胞核变小，染色变淡。AO-EB 荧光染色显示：NCI-H446 细胞经DADS处理24 h后，与对照组相比，细胞 皱缩、呈圆形，胞质黄色或橘红色，细胞核或细胞质内可见致密浓染的黄绿色或橘红色荧光，并可见橘红色碎片且随DADS 浓度 增加，随DADS浓度增加细胞密度逐渐减少。结论：DADS 能抑制体外培养的NCI-H446 细胞增殖，作用效果与药物浓度及作用 时间相关。     

DADS对人小细胞肺癌NCI-H446细胞系增殖抑制的研究

目的：研究二烯丙基二硫（diallyldisulfide,DADS）对人小细胞肺癌NCI．H446细胞增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。方法：体外培养NCI-H446细胞,采用MTT、细胞计数实验方法检测DADS抑制NCI—H446细胞增殖;通过HE染色和AO—EB荧光染色方法,观察DADS处理后NCI—H446细胞的形态学改变。结果：MTT结果显示：DADS作用于NCI—H446细胞48h后,代谢MTT的能力明显降低,显示出较强的细胞毒性反应,IC50值介于20-40μg／ml之间。细胞计数结果表明：DADS作用于NCI—H446细胞后,随DADS浓度增加NCI—H446细胞倍增时间延长。HE染色显示：NCI—H446细胞经DADS处理24h后,与对照组相比,细胞体积变小,胞浆丰富,细胞核变小,染色变淡。AO-EB荧光染色显示：NCI-H446细胞经DADS处理24h后,与对照组相比,细胞皱缩、呈圆形,胞质黄色或橘红色,细胞核或细胞质内可见致密浓染的黄绿色或橘红色荧光,并可见橘红色碎片且随DADS浓度增加,随DADS浓度增加细胞密度逐渐减少。结论：DADS能抑制体外培养的NCI—H446细胞增殖,作用效果与药物浓度及作用时间相关。     

青蒿琥酯抑制白血病耐药细胞株K562/ADM转铁蛋白受体表达

目的:观察青蒿琥酯对于白血病多药耐药细胞细胞株K562/ADM转铁蛋白受体表达的影响。方法:将K562/ADM(耐阿霉素)细胞分别经浓度为12.5、25、50μg/m L的青蒿琥酯处理48 h,同时25μg/m L实验组在12 h、24 h、36 h分别收集足量细胞。采用流式细胞术检测青蒿琥酯对细胞转铁蛋白受体(Tf R)密度的调控作用,Western blot检测青蒿琥酯对细胞Tf R蛋白表达的调控作用。CCK-8法分析青蒿琥酯对K562/ADM细胞生长增殖的影响。结果:K562/ADM细胞Tf R密度和Tf R蛋白表达水平分别经12.5、25、50μg/m L青蒿琥酯处理后均下降,呈浓度依赖性。25μg/m L青蒿琥酯处理K562/ADM细胞不同时间段后转铁蛋白受体蛋白表达水平随着Art作用时间延长而逐渐降低,表明呈时间依赖性。K562/ADM细胞经青蒿琥酯处理后其耐药性减弱:与对照组相比,12.5、25、50μg/m L实验组细胞耐药逆转倍数分别为1.38、2.12和2.95倍,从而抑制K562/ADM细胞增殖。IC50值为19.7μmol/L。结论:青蒿琥酯能降低细胞Tf R密度和下调Tf R蛋白的表达,逆转K562/ADM细胞的耐药性,从而起到抗肿瘤作用。     

六种藓类植物茎的比较解剖学研究

通过对6种藓类植物,即褶叶青藓(Brachythecium salebrosum(Web.et Mohr.)B.S.G.)、湿地匐灯藓(Plagiomnium acutum(Lindb.)Kop.)、侧枝匐灯藓(Plagiomnium maximoviczii(Lindb.)Kop.)、大凤尾藓(Fissidensnobilis Griff.)、大羽藓(Thuidium cymbifolium(Doz.et Molk.)B.S.G.)和大灰藓(Hypnum plumaeforme Wils.)嫩茎和老茎的石蜡切片和显微观察发现,同一藓类植株的嫩茎和老茎,茎结构稳定,不同种藓类植物茎横切面具有不同特征.植物体茎横切面形状、表层细胞的层数、细胞大小和细胞壁厚薄、皮层细胞大小和形状、中轴的有无以及比例等特征可以作为藓类植物的分科分类依据之一.