p53介导蜕膜化受损致复发性流产的研究进展

复发性流产(RSA)病因复杂,约50%的RSA患者病因不明,其中由于蜕膜化受损所致的胚胎反复丢失成为学者关注的焦点。p53通过参与多种信号通路介导蜕膜化受损从而引发RSA。其中p53/p21信号通路过度激活可干扰细胞周期调控因子的表达,使细胞周期进入停滞状态,蜕膜多倍体化障碍,转而促进细胞凋亡,影响胚胎着床。而在雌二醇(E_2)/p53-白血病抑制因子(LIF)-信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路中,p53在雌激素的协同作用下促进植入期子宫内膜腺体分泌LIF,并激活JAK/STAT信号通路,为胚胎着床创造有利条件。研究表明,参与调控p53信号通路的长链非编码RNA(lnc RNA)功能异常及p53通路基因多态性均可影响p53的活性,从而影响蜕膜化及妊娠结局。现就近年来国内外p53蛋白家族及其通路参与蜕膜化的相关研究进行综述。     

白血病抑制因子与妊娠的关系

白血病抑制因子(LIF)是一种多生物学功能的细胞因子,在体内外发挥重要作用。LIF通过位于子宫内膜、蜕膜、胎盘上的受体参与子宫内膜蜕膜化和胎盘功能的调节,在胚胎着床和妊娠维持中发挥作用。进一步研究表明,LIF表达受卵巢激素的严格调控。对LIF及人LIF受体(LIFR)表达时相和激素调控的研究将为LIF的临床应用提供理论基础。     

子宫内膜容受性与白血病抑制因子的相关性

子宫内膜容受性在胚胎植入中起关键作用,约2/3的胚胎植入失败是由于子宫内膜容受性不佳。白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）是子宫内膜容受性的重要生物学标志物之一,其在种植窗子宫内膜腺上皮高表达,参与调控胚胎植入过程中子宫上皮细胞的信号转导,将子宫内膜从非接受状态转化为接受状态。LIF表达异常可使子宫内膜容受性受损,与不孕症的发生密切相关,且其表达具有类固醇激素依赖性,并受多种细胞因子和生长因子调控。综述LIF在子宫内膜容受性的建立、胚胎植入、子宫内膜蜕膜化过程中的表达、相关信号转导通路及影响因素的研究进展,以期为子宫内膜容受性的诊治提供新的思路。     

丝裂原活化蛋白激酶信号通路与胚胎着床

胚胎着床是在诸多因素作用下，细胞内信号通路被激活，调控特定基因的表达，使胚胎滋养层和子宫内膜同步变化，从而使得发育正常的胚泡顺利植入子宫内膜的精密而复杂的过程。丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路是真核细胞凋节增殖、分化、凋亡及细胞间功能同步化的基本信号通路。最近几年研究发现，MAPK通路住早期胚胎发育、子宫内膜蜕膜化、胚泡黏附、滋养层细胞增殖以及侵入子宫内膜过程中都起着重要作用。     

HOXA10及其下游基因Emx2、整合素β3与子宫内膜容受性

同源框基因HOXA10是多基因家族的转录调节基因之一,在决定子宫内膜容受性方面起主导作用,主要参与胚胎着床控制及内膜蜕膜化.研究发现,该机制可能与内皮素A型受体、锌指转录因子9、γ-氨基丁酸pi受体、3-磷酸甘油酸酯脱氢酶、钙蛋白酶5、香烟烟雾提取物、p300/CBP相关因子、色氨酸2和3-双加氧酶调控有关.整合素β3及Emx2是HOXA 10调控的下游基因,在月经周期分泌期,HOXA10上调,抑制子宫内膜细胞Emx2表达,而激活整合素β3表达,在胚胎着床及基质细胞蜕膜化过程中发挥重要作用.HOXA10调控紊乱可导致不孕.     

丝裂原活化蛋白激酶信号通路与胚胎着床

胚胎着床是在诸多因素作用下,细胞内信号通路被激活,调控特定基因的表达,使胚胎滋养层和子宫内膜同步变化,从而使得发育正常的胚泡顺利植入子宫内膜的精密而复杂的过程.丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路是真核细胞调节增殖、分化、凋亡及细胞间功能同步化的基本信号通路.最近几年研究发现,MAPK通路在早期胚胎发育、子宫内膜蜕膜化、胚泡黏附、滋养层细胞增殖以及侵入子宫内膜过程中都起着重要作用.     

p53基因与DNA损伤信号调节的研究进展

肿瘤抑制基因p53是目前研究最为广泛和系统的抑癌基因之一.自从该基因在1979年被首次报道以来,人们对p53的结构和功能展开了广泛的研究.研究发现在环境致癌剂诱发人类恶性肿瘤的过程中,p53基因发挥着关键作用.p53基因参与了DNA损伤修复、细胞周期调控、细胞凋亡及抑制血管生成等过程.p53介导的信号转导通路非常复杂,其参与调控的基因已超过160种,这些基因形成网络从而协调调节细胞的生命活动.以下针对p53与环境诱癌剂、p53基因网络和p53与DNA损伤修复的关系等内容的研究进展作一综述.     

HOXA10及其下游基Emx2、整合素β3与子宫内膜容受性

同源框基因HOXA10是多基因家族的转录调节基因之一,在决定子宫内膜容受性方面起主导作用,主要参与胚胎着床控制及内膜蜕膜化。研究发现,该机制可能与内皮素A型受体、锌指转录因子9、,γ-氨基丁酸pi受体、3-磷酸甘油酸酯脱氢酶、钙蛋白酶5、香烟烟雾提取物、p300／CBP相关因子、色氨酸2和3-双加氧酶调控有关。整合素β3及Emx2是HOXA10调控的下游基因,在月经周期分泌期,HOXA10上调,抑制子宫内膜细胞Emx2表达,而激活整合素β3表达,在胚胎着床及基质细胞蜕膜化过程中发挥重要作用。HOXA10调控紊乱可导致不孕。     

白血病抑制因子与生殖

白血病抑制因子（LIF）是一种多功能多生物学活性细胞因子。LIF存在于子宫内膜、妊娠期蜕膜和胎盘上。LIF受子宫内膜雌、孕激素及其他一些因子的严格调控，LIF表达峰值与着床窗时间一致，是着床的关键因子。其能促进体外培养胚胎的胚泡发育与孵化，但LIF对妊娠的维持作用观点还不尽相同，一些研究表明，LIF对妊娠的维持有重要作用，也有的研究表明，LIF不是妊娠维持所必需的。不孕妇女LIF水平较正常妇女要低，因此认为LIF与不孕关系密切。     

STAT3在正常早孕妇女与反复自然流产患者绒毛和蜕膜中的表达

目的:通过对反复自然流产(RSA)患者和正常早孕妇女绒毛、蜕膜中STAT3的测定,探讨不明原因反复流产患者的流产病因和胚胎、胎盘的生长机制。方法:采用免疫组化法检测40例RSA患者及20例对照组的绒毛和蜕膜组织中STAT3含量。结果:STAT3在RSA患者和正常妊娠妇女孕早期的绒毛和蜕膜中均高表达。RSA组与对照组绒毛中STAT3的表达差异无统计学意义(P>0.05);RSA组与对照组蜕膜中STAT3的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究检测了RSA患者和正常早孕妇女绒毛、蜕膜中STAT3的表达,在胎盘形成过程中STAT3参与、促进滋养细胞的存活、生长和浸润,胚胎生长具有肿瘤的特征。STAT3在RSA患者和正常妊娠妇女孕早期绒毛和蜕膜中的表达差异无统计学意义,STAT3与反复自然流产的关系还需进一步研究。     

p53基因 Arg72Pro 多态性与复发性流产相关性的 Meta 分析

目的：系统地评价 p53基因 Arg72Pro 多态性与复发性流产的相关性。方法计算机检索 PubMed、Chochrane、Medline、CNKI、VIP 和 WanFang Data 数据库,搜集关于 p53基因 Arg72Pro 多态性与复发性流产相关性的研究,检索时限均为从建库至2015年12月3日。由2位研究者独立筛选文献、提取资料和评价纳入研究的偏倚风险后,采用 RevMan 5．3软件进行 Meta 分析。结果最终纳入7个病例对照研究,包括病例组991例,对照组913例。Meta 分析结果显示,p53基因 Arg72Pro 多态性与增加患复发性流产的风险相关（Pro／Pro 与 Arg／Pro ＋Arg／Arg 的OR ＝2．22,95％ CI 为1．27～3．89;Pro／Pro 与 Arg／Arg 的 OR ＝2．23,95％ CI 为1．05～4．73;Pro／Pro 与 Arg／Pro 的OR ＝1.89,95％ CI 为1．36～2．64）。结论 p53基因 Arg72Pro 多态性与复发性流产发病风险增高相关。     

环境致癌剂与p53基因突变

p5 3基因是至今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的基因。它不仅作为抑癌基因发挥作用 ,还参与细胞周期调控、DNA损伤与修复、基因转录及细胞凋亡等多个过程。肿瘤病因学的研究表明 ,6 0 %～ 90 %的人类肿瘤是由环境中的化学致癌物引起。环境中的化学致癌物或前致癌物可以造成p5 3基因突变及蛋白表达的改变 ,且p5 3的突变形式也随着致癌物和肿瘤的类型不同而具有特征性的差异 ,相关研究已成为近年来肿瘤分子生物学的热点。本文综述了苯并 [a]芘、烟草、亚硝胺、黄曲霉毒素和氯乙烯等几种环境中存在的主要化学致癌物质的致癌效应以及对p5 3基因和P5 3蛋白的影响。     

IFN-γ经p21信号通路调节小鼠颗粒细胞凋亡的体外研究

目的探讨IFN-γ经p21信号通路调节小鼠颗粒细胞凋亡机制的初步研究。方法体外分离培养小鼠原代颗粒细胞,给予IFN-γ1000U/mL处理,在第1d和3d时,通过观察细胞形态、Real time PCR和Western Blot检测颗粒细胞p53和p21表达情况。结果镜下观察IFN-γ处理的颗粒细胞形态未见明显变化。Real time PCR和Western Blot结果示1d颗粒细胞p21表达未见明显升高,p53表达显著升高(P<0.05),而3d时颗粒细胞p21和p53表达明显升高(P<0.05)。结论 IFN-γ可能通过p53依赖的方式影响颗粒细胞p21通路的信号转导,从而导致颗粒细胞凋亡。     

900 MHz电磁辐射对人胚肺细胞DNA及p53基因蛋白表达的影响

目的 研究900 MHz电磁辐射对人胚肺细胞DNA及p53基因蛋白表达的影响.方法 用900 MHz电磁波辐照细胞.单细胞凝胶电泳实验分为1、2、5、8 mW/cm2 4个暴露组,并设阴性对照组(0mW/cm2)和阳性对照组(0.1 mmol/L重铬酸钾处理),每组2个平行样,暴露时间均为1 h,检测拖尾率和DNA迁移长度.Western Blot实验分为1、2、5、8 mW/cm2 4个暴露组,并设阴性对照组(0 mW/cm2)和阳性对照组(淋巴瘤细胞株Raji),暴露时间均为12 h,检测电磁辐射对p53基因蛋白表达的影响.结果 与阴性对照组(0 mW/cm2)比较,各暴露组的拖尾率和DNA迁移长度差异无统计学意义(P＞0.05).各暴露组和阴性对照组(0 mW/cm2)的细胞中p53蛋白表达为阴性,而阳性对照组检测到了p53蛋白的表达.结论 本实验未观察到900 MHz电磁辐射对人胚肺细胞DNA及p53基因蛋白表达有影响.     

扶正祛瘀中药调控子宫肌瘤模型大鼠p53信号通路基因表达谱的研究

目的:分析扶正祛瘀中药对子宫肌瘤p53信号通路基因表达谱的调控作用。方法:建立子宫肌瘤动物模型,选用功能分类PCR p53信号通路基因芯片,从模型组、扶正祛瘀组大鼠子宫肌瘤组织中进行样品的RNA抽提及纯化,采用紫外吸收测定法及变性琼脂糖凝胶电泳进行RNA质量检测并合成cDNA,最后进行实时定量PCR。结果:采用PCR p53信号通路基因芯片共检测89条基因,扶正祛瘀组与模型组比较,30.3%(共27条)基因表达发生明显变化,其中26条基因表达量明显下降(Fold Down-Regulation-2),1条基因表达量上升(Fold Up-Regulation2)。按功能将其进行大体分类,涉及到细胞凋亡、细胞周期、细胞生长增殖和分化、DNA修复等多方面。结论:扶正祛瘀中药对子宫肌瘤p53信号通路的细胞凋亡、细胞周期、细胞生长增殖和分化、DNA修复等相关基因均有调节作用,说明细胞内外的信号通路介导了子宫肌瘤的发病过程。     

Ku80/p53通路在石英诱导的细胞周期改变中的作用

目的 探讨在石英刺激的人胚肺成纤维细胞(human embryo lung fibroblasts,HELF)中Ku80蛋白表达的变化及Ku80/p53通路在石英诱导的细胞周期改变中的作用.方法 RNAi技术抑制Ku80蛋白表达,流式细胞技术检测细胞周期,免疫印迹技术检测Ku80、p53、p21蛋白的表达及p53-ser15磷酸化水平,并用Image-Pro plus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析.结果 Ku80蛋白表达与石英刺激呈剂量-反应和时间-反应关系;石英刺激阴性对照H-NC细胞,G1期细胞所占比例从89.28%±2.19%下降到68.93%±3.79%;抑制Ku80蛋白表达的HELF细胞(H-Ku80)的G1期细胞所占比例进一步减少,从85.16%±3.73%下降到59.92%±3131%,差异均有统计学意义(P<0.05);抑制Ku80蛋白表达后,石英引起的p53、p21蛋白及p53-ser15磷酸化水平增高受抑制.结论 Ku80对p53、p21蛋白表达及p53-ser15磷酸化水平起调节作用,Ku80/p53通路可能参与了石英诱导的细胞周期改变.

Abstract：

Objective To study the roles of Ku80/p53 pathway in silica-induced cell cycle changes in human embryo lung fibroblasts (HELF). Methods Ku80 siRNA expression vectors were transfected into HELF by lipofectamine. Flow cytometry was used to detect the distributions of cell cycle and western blot assay was used to determine the expression level of Ku80, p53 and p21 proteins or the phosphorylation levels of p53-serl5 after cells were exposed to silica. Results The expression levels of Ku80 protein increased in concentration-dependent and time-dependent manners after cells were exposed to silica. The proportion of G1 phases in H-NC cells (controls) decreased from 89.28%±2.19% to 68.93%±3.79% after exposure to silica, and the proportion of G1 phases in HELF cells (H-Ku80) decreased from 85.16%±3.73% to 59.92%±3.31% after exposure to silica (P<0.05). The expression levels of Ku80, p53 protecns or p21 proteins or phosphorylation level of p53-serl5 were obviously suppressed in H-Ku80, as compared with H-NC. Conclusion Ku80/p53 pathway plays a role in the cell cycle charges induced by silica in human embryo lung fibroblasts.     

p53表达在石英诱导的细胞周期改变及DNA损伤修复中的作用

目的 探讨p53表达在石英致人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期改变及DNA双链断裂(DNA double strand breaks,DSBs)修复中的作用.方法 3种方式分组处理细胞:(1)不同浓度(0、25、50、100、200、300、400μg/ml)的石英刺激HELF细胞12 h;(2)200 μg/ml石英刺激HELF细胞O、1、2,6、12、24 h;(3)200μg/ml石英刺激H-CMV和H-p53细胞O、12、24 h.用中性彗星试验检测石英所致的DSBs损伤强度,并计算DNA修复能力(DNA repair compentence,DRC),用免疫印迹法检测蛋白表达和磷酸化水平,用流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 (1)200μg/ml的石英作用HELF细胞不同时间,p53表达及p53-Ser15磷酸化水平随着作用时间的延长逐渐升高,12 h达峰值,24 h较12 h略有降低;不同浓度的石英作用HELF细胞12 h,随着石英浓度的增加,p53表达及p53-Ser15磷酸化水平逐渐增强,呈现剂量-反应关系.(2)石英作用于p53 siRNA的阴性对照细胞H-CMV,DRC为57.19%:石英作用沉默p53表达的H-p53细胞后,DSBs的修复能力增强,DRC为87.68%.(3)石英作用p53siRNA的阴性对照细胞24 h后,S期细胞比例由(24.3±3.8)%增加到(31.8±1.1)%,差异有统计学意义(P<0.05);沉默p53表达后,石英诱导的HELF细胞S期细胞比例[(41.4±0.6)%]与同期对照组[(25.4±1.9)%]相比有明显增加.差异有统计学意义(P<0.05).结论 石英可诱导p53表达及磷酸化水平的增加,p53表达上调可抑制石英所致S期细胞百分比的增加及石英所致DNA双链断裂的修复.     

白血病抑制因子在稽留流产中的表达

目的探讨白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)的表达与稽留流产的关系。方法选择30例稽留流产患者为观察组,同期自愿选择人工流产术终止妊娠的正常早孕妇女30例为对照组,用免疫组化链酶素抗生物蛋白—过氧化物酶连接(streptavidin-perosidase,SP)法检测LIF在两组绒毛及蜕膜组织中的表达情况。结果①LIF在绒毛组织中表达于滋养细胞胞浆中;在蜕膜组织中表达于腺体细胞胞浆。②LIF在两组蜕膜组织中的表达均明显高于绒毛组织,差异有统计学意义(P<0.05)。③LIF在观察组绒毛及蜕膜组织中的表达较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LIF在绒毛及蜕膜组织中的表达强度降低,胚胎着床后发育不良导致稽留流产。     

p53蛋白在苯并(a)芘诱导的p21、E2F-1表达及细胞周期改变中的作用

目的 探讨p53蛋白在苯并(a)芘[benzo(a)pyrene,B(a)P]诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期改变中的作用及其与p21、E2F-1的关系.方法 转染p53 siRNA质粒(p53-H)和载体CMV的HELF细胞(HELF/CMV)无血清培养48 h后,加入2 μmol/L B(a)P作用24 h.用流式细胞仪检测细胞周期的变化.用Western blotting检测细胞中p53、p21蛋白含量的改变,利用细胞核、细胞浆分离技术观察其亚细胞定位.用免疫荧光法观察E2F-1蛋白含量及细胞核、细胞浆分布.利用p53 siRNA质粒和化学抑制剂pifithrin-α(PFT)抑制其表达,观察p53与p21、E2F-1的上下游关系以及其在B(a)P引起的细胞周期改变中的作用.结果 2 μmol/L B(a)P作用24 h后,G1期细胞比例由(71±5)%减少为(39±4)%;p53、p21以及E2F-1蛋白含量增加,并且主要分布在细胞核内.用p53 siRNA质粒和PFT抑制p53表达后,B(a)P诱导的p21高表达被抑制,细胞核内的含量明显减少;B(a)P诱导的E2F-1蛋白含量增加以及细胞周期的改变没有明显变化.结论 B(a)P通过p53非依赖的信号通路引起HELF细胞周期的改变;p53对p21的表达具有调节作用,而对E2F-1的表达不具有调节作用.