IgG抗-A/BELISA检测方法的初探

目的建立1种IgG抗-A/B ELISA检测方法。方法将唾液血型物质以磷酸盐缓冲液包被酶标板,10%脱脂奶粉磷酸盐缓冲液37℃封闭1 h,洗涤后加入系列稀释的待检血清,37℃孵育30 min,洗涤并加入酶标记羊抗人IgG,37℃孵育30 min,洗涤,TMB显色,2 mol/L H2SO4溶液终止反应,酶标仪读取A450/A630,以P/N≥2.1判为抗体阳性,将抗体阳性的最高稀释度作为血清IgG抗-A/B效价。结果阴性对照血清与反应系统无交叉反应;检测IgG抗-A批内变异2.3%~7.7%,批间变异5.9%~8.1%,IgG抗-B批内变异3.7%~5%,批间变异6.5%~8.7%。ELISA法检测30名孕妇IgG抗-A效价阳性率为26.67%,抗体效价检测结果与抗球蛋白法符合率73.33%;IgG抗-B效价的阳性率和符合率分别为23.33%、76.67%。结论 IgG抗-A/B ELISA检测法特异性强,精密度较高,实现了IgG抗-A/B效价检测方法由定性试验到半定量试验的转变。     

野生树鼩肠道蠕虫感染调查及分析

目的调查野生树鼩(Tupaia belangeri Chinensis)感染肠道蠕虫的主要种类并进行鉴定,为今后树鼩寄生虫检测提供形态学参考,为实验树鼩寄生虫控制提供依据。方法采集203只野外来源的树鼩新鲜粪便,虫卵采用常规粪便直接涂片以及孵化后显微镜观察;绦虫采用压片、固定染色,以及线虫经透明后体视镜观察,虫卵与成虫相对应鉴定。结果野生树鼩肠道蠕虫的总感染率为75.86%,主要感染种类有3种,经鉴定为长膜壳绦虫、奇口线虫和粪类圆线虫,感染率分别为27.67%,30.06%和51.52%。三种蠕虫的混合感染率为4.55%。两种线虫虫卵在树鼩粪便中多为含胚胎形态。结论野生树鼩肠道蠕虫的感染率较高。对野外引入的新种源必须隔离检疫,进行针对性的药物治疗,才能有效地控制肠道寄生虫病的传播。     

肺炎嗜衣原体蛋白酶样活性因子重组蛋白的血清学诊断价值初探

目的克隆、表达肺炎嗜衣原体（Cpn）蛋白酶样活性因子（CPAF）的免疫优势区基因（CPAFm），初步评价其在血清学诊断中的应用价值。方法构建pGEX6p-2／CPAFm重组质粒，诱导表达重组蛋白，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定结果；将纯化蛋白免疫新西兰兔，间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测其免疫原性；与人抗Cpn抗血清反应分析其免疫反应性。间接ELISA法检测Cpn IgG和沙眼衣原体（Ct）阳性血清。结果高效表达和纯化出一相对分子质量约为51.3×10^3的重组蛋白，蛋白质印迹法（Western blot）证明其能与人抗Cpn IgC抗体发生反应；在被免疫的新西兰兔体内，特异性IgG抗体的滴度为1：16000以上，间接ELISA法检测40例Cpn IgG参考血清，阴性和阳性结果的符合率均为100．0%（20／20）；与微量免疫荧光法（MIF）对照，检测300例临床血清标本中的IgG抗体，符合率为98．3％；检测Ct阳性血清未见交叉反应。结论表达的Cpn CPAF免疫优势区重组蛋白具有良好的免疫活性，在Cpn的血清学诊断中具有较高的应用价值。     

血糖对树鼩感染表皮葡萄球菌清除能力及植入性材料细菌黏附性的影响(英文)

背景:高浓度葡萄糖培养条件下,细菌在生物材料表面有较强的生物膜形成能力。目的:观察血糖升高对表皮葡萄球菌在动物体内清除能力及植入性生物材料上细菌生物膜形成的影响。方法:注射链脲佐菌素建立高血糖树鼩模型(血糖≥11.1mmol/L),采用生物膜形成阳性与阴性表皮葡萄球菌感染高血糖与正常对照树鼩,并同时在动物股静脉内植入PVC导管。结果与结论:感染生物膜形成阳性的表皮葡萄球菌株后,血糖≥11.1mmol/L树鼩血液、心脏、肝脏、肾脏、胰腺的细菌感染率及菌落计数较正常对照组高(P<0.05);扫描电镜观察血糖≥11.1mmol/L组植入生物材料上有明显的生物膜形成。感染生物膜形成阴性表皮葡萄球菌株后无论血糖高低,均未观察到生物膜形成。表明血糖升高不仅使植入生物材料树鼩的细菌清除能力下降,同时可诱导细菌在植入生物材料表面形成明显的生物膜。     

量子点标记技术同步检测抗弓形虫IgG和IgM抗体的实验研究

目的建立抗弓形虫(TOX)IgG和IgM抗体同步检测体系。方法分别用不同发射波长的量子点标记羊抗人IgG、羊抗人IgM作为检测抗体,以免疫磁珠作为固相载体,建立抗弓形虫IgG和IgM抗体同步检测体系,并对该检测体系进行了优化;同时检测280份临床血清标本,并与进口酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒进行方法学比较。结果 TOX抗原的最适固化浓度为50μg/mL,固化效率在35%～55%之间。抗TOX IgG、IgM抗体检测结果与进口ELISA试剂盒相比符合率分别为96.4%,97.1%,本体系同时检测两种抗体的阳性检测率达8.2%。结论成功建立了抗TOX IgG和IgM抗体同步检测体系,该体系操作简便快速,灵敏度高,具有有良好的临床应用价值。     

抗瓜氨酸化聚合兔IgG抗体ELISA法的建立及初步应用

目的建立检测血清抗瓜氨酸化聚合兔IgG(citrullinated aggregated rabbit IgG,Cit-AgRIgG)抗体的ELISA方法,探讨其对类风湿关节炎(RA)的诊断价值。方法将兔IgG于62℃加热聚合变性,用肽酰精氨酸脱亚胺酶(PAD)将内含精氨酸催化生成瓜氨酸,制成瓜氨酸化聚合兔IgG(Cit-AgRIgG)。以此作为抗原,包被反应板微孔,建立检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA方法。经方法学考核后,检测临床标本并对结果进行评价。结果 Cit-AgRIgG显示出与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体有较高的结合活性。以其为包被抗原建立的检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA法批内和批间平均变异系数分别为4.5%和9.5%。特异性阻断试验显示,Cit-AgRIgG、AgRIgG与CCP抗原对该抗体的最高抑制率分别为80.0%、65.9%和25.0%。抗Cit-AgRIgG与抗AgRIgG抗体的cut off值分别为0.565和0.459,此时RA患者抗Cit-AgRIgG抗体阳性率显著高于其他疾病和健康人对照组(P均0.01),其诊断RA的敏感性为79.3%,特异性为96.5%,阳性、阴性预测值分别为84.7%和95.1%,阳性、阴性似然比分别为22.66、0.215,Youden指数为0.758,ROC曲线下面积(AUCROC)为0.890。对RA和健康人对照者检查结果显示,抗CitAgRIgG与抗AgRIgG抗体(RF)总符合率97.7%,与抗CCP抗体总符合率91.7%。结论建立的检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA法有良好的稳定性和特异性。抗Cit-AgRIgG抗体兼具RF与抗CCP抗体的双重特性,有可能发展成为RA疾病诊断和病情监测的一种新的参考指标。     

抗人IgG4单克隆抗体用于ELISA法诊断血吸虫病与疗效考核的研究

目的 探讨检测特异性IgG4诊断血吸虫病的效果及疗效考核价值。方法 采用SEA间接ELISA法检测血吸虫病人血清中的特异性IgG4和IgG4抗体及对肺吸虫、肝吸虫病人和健康人血清的交叉反应以及血吸虫病人治疗后不同时期特异性IgG4和IgG4抗体的变化。结果 血吸虫病人血清中IgG4敏感性为93．02％，特异性为100％，而IgG抗体的敏感性为95．35％，特异性为97．62％，IgG4与IgG无论其敏感性还是其特异性差异均无显著性（P＞0．05），与其它寄生虫病的交叉反应，IgG4显著低于IgG且差异显著（P＜0．05），血吸虫病人治后6个月IgG4抗体阴转率显著高于IgG（P＜0．05），治后12个月IgG4的阴转率与IgG比较差异非常显著（P＜0．01）。结论 ELISA法检测特异性IgG的诊断效能与IgG4相似，而特异性IgG4抗体可能系一短程抗体，用于评价疗效更具实际应用价值。     

血清中IgG红细胞血型抗体定量检测方法初探

目的探索建立同种免疫患者血清中IgG红细胞血型抗体定量的吸收放散-ELISA技术。方法采用阴性红细胞平行操作,作为空白对照,通过吸收、放散纯化血清中IgG抗体,用ELISA方法测定放散液中IgG抗体浓度,换算成血清中抗体浓度。采用该方法对8名孕妇血清中的同种抗体(抗-D、抗-E各4例)进行定量检测。结果ELISA法测定4名孕妇血清中IgG抗-D浓度范围为(1.086—54.712)μg/ml,IgG抗-E浓度范围为(0.080—7.646)μg/ml。结论本研究初步建立的简便、实用的血清IgG红细胞血型抗体定量方法,可用于准确测定孕妇血清中IgG特异性抗体的浓度。     

193份SARS患者血清IgG抗体检测和结果分析

[目的]探讨SARS患者体内抗SARS冠状病毒抗体产生和变化的规律。[方法]用间接ELISA方法进行抗SARS CoV IgG抗体检测。[结果]采用北京华大吉比爱生物技术有限公司研制的抗SARS冠状病毒抗体检测试剂盒对61例临床和实验室确诊住院患者193份血清进行了IgG抗体检测，结果散点图表明大部分病人在病程的第15d左右可检出IgG抗体，最早第7d可检出抗体；其高峰出现在第2d左右。系列血清检测结果表明抗体产生模式呈现多样化趁势。[结论]SARS病人可产生抗SARS冠状病毒IgG抗体，并以多种模式有规律变化。     

布鲁氏菌血清 IgM,IgG 抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及初步临床应用

目的　应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测布鲁氏菌 IgM,IgG 抗体的方法,并进行初步的性能验证。方法　采用枸椽酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记纯化的抗重组布鲁氏菌抗原,将鼠抗人 IgG 抗体、鼠抗人 IgM 抗体和兔抗布鲁氏菌抗体喷在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,对 pH 值和抗体浓度等条件优化;评估试剂盒灵敏度、特异度、交叉反应、准确度、精密度和干扰实验;用该方法对临床的 400 份血清进行检测,试管凝集试验验证其准确性。结果　该试纸条最佳胶体金标记的 pH 值为 7.5,标记重组抗原质量浓度为 30?g/ml。方法的灵敏度和稳定性较好且与其他病原菌无交叉反应。血清总胆红素、血脂和血红蛋白浓度的增高会使试纸条显色结果减弱。对400份临床样本进行检测,其结果与试管凝集试验的符合率为 93.75%。结论　该试验建立的布鲁氏菌 IgM/IgG 抗体的胶体金免疫层析检测方法具有较好的特异度和稳定性,整个检测过程可在 15min 内完成,能够快速检测样品血清,适用于现场快速检测。     

抗IMP1自身抗体IgG在肝癌患者血清中的表达及其与临床病理参数的关系

目的探讨肝癌患者血清中抗胰岛素样生长因子Ⅱ在mRNA结合蛋白1(IMP1)自身抗体IgG的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用ELISA法检测120例肝癌患者(肝癌组)血清抗IMP1自身抗体IgG抗体,并与115例健康者(对照组)检测数据进行比较,分析血清抗IMP1自身抗体IgG抗体水平与肝癌患者临床病理参数的关系。结果肝癌组和对照组的血清抗IMP1自身抗体IgG水平分别为(1.512±0.685)、(1.080±0.301)μg/mL,肝癌组明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.001)。肝癌患者血清抗IMP1自身抗体IgG的表达水平与肿瘤大小、肿瘤分化程度、TNM分级、肝内转移有关(P0.001);与年龄、性别、饮酒、是否感染HBV等无明显关系(P0.05)。结论肝癌患者血清抗IMP1自身抗体IgG表达升高,检测肝癌血清抗IMP1自身抗体IgG有利于判断肝癌的恶性程度。     

树鼩肝癌形成过程中凋亡抑制基因的表达及与细胞凋亡的关系

背景：目前对肝细胞癌(HCC)的研究大多数只局限于对人的肝癌及癌旁组织进行研究，这种研究方法的最大缺陷是不能动态观察肝癌形成过程中的不同时期的各种变化。目的：利用实验诱发树鼩向肝癌的动物模型，动态研究在树鼩肝癌形成过程中凋亡抑制基因(survivin)的表达及其抑制凋亡的机制。设计：完全随机对照实验。干预：实验组给予AFB1(黄曲霉毒素B1)105周，然后继续喂正常饲料至150周。对照组动物不喂AFB1，仅按正常饲养方法同样喂至150周。实验期间每隔15周对实验组和对照组动物打开腹腔进行肝组织活检。活检组织用40g／L中性甲醛固定，石蜡包埋。然后将对照组30，60，90周和实验组30，60周及HCC组织的切片，采用免疫组织化学S-P法和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术，进行survivin基因蛋白和凋亡细胞的检测。主要观察指标：树鼩肝细胞癌形成过程中每一阶段的survivin基因蛋白的表达情况和细胞凋亡的情况。结果：survivin基因与HCC的发生有关，在树鼩HCC形成过程中，其表达呈递增趋势。survivin在对照组30，60，90周，实验组30，60周平均得分分别为0．62，0．77，0．92，1．02，1．6，在树鼩HCC组织切片中平均得分为5．34，与各组肝组织中的表达差异有显著性意义(t=3．0580，3．2564，3．0316，4．7715，3．8036，P&;lt;0．01)。结论：survivin表达与凋亡指数呈负相关，survivin表达抑制细胞凋亡。     

久视对实验动物树鼩睫状肌组织的影响

目的：从神经-受体-受体介导睫状肌细胞内反应角度探讨肝劳发生的机制。方法：选用与猿猴解剖特点极其接近的动物树鼩，对其限定照明时间并予以形觉刺激诱视，造成树鼩持续近视状态以模拟肝劳的病理变化。在实验的第3，6，9天分别处死模型组及正常对照组动物，取睫状体检测其中β-肾上腺素受体(β-AR)，环磷酸腺苷(cAMP)，环磷酸鸟苷(cGMP)和Na^ -K^ -ATP酶；以确定造模3，6，9d3个不同时段对动物的影响。结果：造模6d时，树鼩睫状肌中β-AR发生了上行调节；造模6d时，β-AR睫状肌中cAMP含量显著升高，cGMP含量降低；造模6d时，β-AR睫状肌中Na^ -K^ -ATP酶活力升高。结论：持续近视状态下睫状肌双重神经支配的异常为肝劳发病的重要原因之一。     

IgG抗-D合并IgG抗-B所致新生儿溶血病的试验诊断

目的探讨2种抗体同时存在所致新生儿溶血病的试验诊断。方法患儿血液标本进行溶血病3项试验检测、不规则抗体筛查和鉴定试验、血清游离抗体效价测定;产妇血清进行不规则抗体筛查和鉴定试验、血清游离抗体效价测定。结果患儿血液样本直接抗球蛋白试验阳性、游离抗体试验检出IgG抗-B、放散试验检出IgG抗-B和不规则抗体、不规则抗体筛查试验阳性且鉴定为IgG抗-D,血清IgG抗-B效价为8;产妇血清不规则抗体筛查试验阳性且鉴定为IgG抗-D,血清中IgG抗-B效价为128、IgG抗-D效价为32。结论对新生儿溶血病3项试验的结果要综合分析,必要时加做不规则抗体筛查和鉴定试验,避免因抗体的漏检而导致的漏诊。     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgG抗体的研究

[目的]探索并建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgG抗体的方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记鼠抗人IgG单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性IgG抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgG)结合形成肉眼可见的红色线条。[结果]自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标抗-HAV IgG、抗-HEV IgG两法总符合率分别为98．9％、98．9％，检测灵敏度可达1ng／ml。[结论]用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性IgG抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便、快捷，无需特殊仪器设备，有广泛的应用价值。     

不同ELISA系统检测人血清百日咳IgG抗体的比较研究

目的使用A、B、C 3组酶联免疫吸附试验(ELISA)系统进行百日咳疫苗临床血清检测,每组ELISA系统包括至少一种百日咳毒素(PT)、一种丝状血凝素(FHA)和一种黏附素(PRN)包被抗原,其中C组抗原包括2种FHA抗原,酶标二抗是相同的抗人IgG抗体。比较不同包被抗原对百日咳疫苗临床血清中3种IgG抗体检测结果的影响。方法收集164对无细胞百日咳、白喉和破伤风疫苗基础免疫前、免疫后临床血清,使用ELISA法检测和计算血清百日咳IgG抗体的转阳率和单位值。使用χ2检验比较转阳率差异,使用方差分析比较抗体检测结果。结果 A组抗原检测IgG抗体结果为PT 82.19IU/mL,FHA 81.66IU/mL,PRN39.34IU/mL;转阳率均为100.0%。B组抗原检测结果为PT 95.59IU/mL,FHA 57.39IU/mL,PRN 40.76IU/mL;转阳率PT抗体为99.4%,其余为100.0%。C组抗原检测结果为PT 60.74IU/mL,2种FHA分别为29.33IU/mL和53.32IU/mL,PRN 34.05IU/mL,转阳率为99.4%、95.1%、100.0%和98.8%。3组抗原检测的临床血清转阳率经χ2检验FHA差异有统计学意义(P0.05),PT和PRN差异无统计学意义(P0.05);抗体GMC经方差分析,所有组抗原检测3个抗体值之间差异均有统计学意义(P0.05)。结论本次人临床血清抗体转阳率和抗体值达到保护力水平,但是不同抗原检测系统之间差异均有统计学意义,应尽快建立百日咳抗血清IgG检测用抗原试剂国家参考品。     

术前备血检出IgG抗-Lea1例的病例报道

<正>通常来说,抗-Le~a一般为IgM性质的抗体,在37℃一般不发生反应,被认为是没有临床意义的抗体。偶见IgG抗-Le~a漏检引起严重的溶血性输血反应报道,极少见IgG抗-Le~a引起新生儿溶血的报道。笔者在术前备血过程中,检出1例IgG抗-Le~a,现报道如下。     

IgG抗-E合并IgG+IgM抗-Mur致交叉配血不合分析

目的对输血前检测中发现抗-E、抗-Mur的患者进行血型血清学特异性鉴定,分析其在输血中的临床意义。方法采用微柱凝胶法检测患者血清与抗体筛查谱细胞的反应格局,鉴定抗体的种类及特异性。结果 2例患者血清中均存在IgG抗-E合并IgG+IgM抗-Mur 3种抗体。结论抗-E与抗-Mur都易引起溶血性输血反应,准确的抗体鉴定基础上挑选合适的供血者,可为输血安全提供保障。     

SARS抗体检测方法的建立与IgG变化规律

目的 :检测分析SARS患者血清IgG抗体产生情况 ,研究一种新的SARS冠状病毒IgG抗体检测方法的实际效果和临床意义。方法 :利用基因重组SARS冠状病毒核壳抗原 (N )建立间接ELISA法 ,检测SARS确诊、疑似患者及其他呼吸道疾病患者共 3 78份血清标本中的特异性IgG抗体。结果 :以A450 值 =2 1× 2 0 0例健康献血员均值作为抗体阳性判断的临界值 ,IgG的阳性临界值 0 2 3 9,对 160份SARS确诊病人、176份疑似病例和 42例对照病例血清IgG抗体检测结果进行分析 ,对于确诊病例发病 1周内 ,IgG抗体检测阳性率为 5 63 % ,发病第 2周 ,IgG检出阳性率为 62 86% ,第 3周为 92 5 9%。结论 :机体产生针对SARS冠状病毒核壳抗原的IgG抗体 ,在 1周后逐渐升高 ,持续时间长 ,证明在SARS冠状病毒致病转归机制中可能起重要作用 ,并且可作为SARS检测的重要手段。     

血型抗体与新生儿溶血病

目的探讨ABO-HDN血型不合孕妇血清IgG抗A(B)效价与ABO-HDN的关系。方法对1 632例O型孕妇血清IgG抗A(B)效价检测及抗体分型分析。结果1 632例孕妇血清中IgG抗A(B)≥1/64者249例,占15.3%;ABO-HDN发生率随IgG抗A(B)效价升高而上升;HDN与妊娠史的频率有关,随着年龄上升,孕妇个体IgG抗A(B)抗体效价也随之上升。结论夫妇间ABO血型不合者应及时检查产前血型抗体水平;预防不良妊娠的发生;IgG抗A(B)效价的高低与HDN的发病率成正比;孕妇血清IgG抗A(B)效价≥1/64需定期检测抗体效价水平及时用药降低抗体效价,预防新生儿溶血病的发生。