LncRNA DDX11-AS1通过靶向miR-497-5p调控胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的机制研究

背景:LncRNA在胃癌中表达上调或下调,其在胃癌发生、发展中的作用机制尚未完全阐明。目的:探讨LncRNA DDX11-AS1通过靶向miR-497-5p表达来调控胃癌细胞增殖、迁移、凋亡的机制。方法:采用qRT-PCR检测胃癌组织和细胞株中DDX11-AS1和miR-497-5p的表达,Pearson法分析胃癌组织中DDX11-AS1与miR-497-5p的相关性。将胃癌HGC-27细胞随机分为NC组、si-con组、si-DDX11-AS1组、miR-con组、miR-497-5p组、si-DDX11-AS1+anti-miR-con组、si-DDX11-AS1+anti-miR-497-5p组。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况; Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;双萤光素酶报告系统验证DDX11-AS1与miR-497-5p的靶向调节关系;蛋白质印迹法检测cyclin D1、cleaved caspase-3、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:胃癌组织和细胞株中DDX11-AS1表达显著升高(P 0.05),而miR-497-5p表达显著降低(P 0.05),DDX11-AS1与miR-497-5p呈负相关(r=-0.754,P 0.05)。干扰DDX11-AS1表达或上调miR-497-5p表达可显著抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭(P 0.05),诱导细胞凋亡(P 0.05),cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达显著降低(P 0.05),cleaved caspase-3表达显著升高(P 0.05)。双萤光素酶报告实验证明DDX11-AS1可负向调控miR-497-5p的表达和活性。抑制miR-497-5p表达可逆转干扰DDX11-AS1表达对胃癌细胞生物学行为的影响。结论:干扰LncRNA DDX11-AS1表达能通过靶向结合并上调miR-497-5p的表达而抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。     

lncRNA LOXL1-AS1通过靶向miR-142-5p/PIK3CA调控胃癌细胞侵袭、迁移能力

目的探讨lncRNA LOXL1-AS1对胃癌细胞侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法 Transwell小室法检测上调或敲低LOXL1-AS1表达后对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响,生物信息学方法预测LOXL1-AS1和miR-142-5p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验验证两者靶向关系,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测上调或敲低LOXL1-AS1表达对miR-142-5p表达的影响;免疫印迹法检测EMT标志物蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZO-1)表达和PIK3CA表达。结果敲低LOXL1-AS1表达可抑制胃癌细胞侵袭、迁移能力,并抑制胃癌细胞EMT;双荧光素酶实验证实LOXL1-AS1直接靶向作用于miR-142-5p;LOXL1-AS1负调控miR-142-5p表达与活性,并通过miR-142-5p正调控PIK3CA表达;过表达LOXL1-AS1可促进胃癌细胞侵袭和迁移,miR-142-5p可逆转LOXL1-AS1过表达对胃癌细胞侵袭和迁移的促进作用。结论 LOXL1-AS1靶向miR-142-5p/PIK3CA调控胃癌细胞侵袭和迁移能力。     

IL-29通过调控lncRNA DLEU1/miR-149-5p通路影响结肠癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨白介素-29(IL-29)对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法 IL-29诱导SW480细胞,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,qRT-PCR检测lncRNA DLEU1和miR-149-5p表达,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。双荧光素酶实验验证lncRNA DLEU1和miR-149-5p靶向关系。转染DLEU1小干扰RNA或miR-149-5p模拟物至SW480细胞,上述相同方法观察抑制DLEU1表达或过表达miR-149-5p对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结果 IL-29、抑制DLEU1表达或过表达miR-149-5p均可降低SW480细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达(P 0. 05),提高细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达(P 0. 05)。IL-29可降低SW480细胞DLEU1表达(P 0. 05),促进miR-149-5p表达(P 0. 05)。DLEU1靶向负调控miR-149-5p表达。过表达DLEU1可逆转IL-29对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结论 IL-29可能通过调控DLEU1/miR-149-5p通路抑制结肠癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

lncRNA DCST1-AS1靶向miR-874-3p对直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

背景长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)在直肠癌(rectal cancer, RC)中异常表达并可能参与肿瘤发生及发展过程, lnc RNA DCST1-AS1在肿瘤中表达上调,但其在RC发生及发展过程中的作用机制尚未阐明,假设lnc RNA DCST1-AS1在RC细胞中表达水平升高,并可能促进肿瘤发生及发展.目的研究lncRNA DCST1-AS1对RC细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制.方法实时荧光定量聚合酶链式反应检测30例RC组织和癌旁组织中lncRNA DCST1-AS1和miR-874-3p RNA的水平,对RC SW1463细胞进行转染,分为si-NC组、siDCST1-AS1组、miR-NC组、miR-874-3p组、pcDNA组、pcDNA-DCST1-AS1组、si-DCST1-AS1+anti-miR-NC组和si-DCST1-AS1+anti-miR-874-3p组,MTT实验和流式细胞术分别检测各组SW1463细胞增殖光密度(optical density, OD)值和凋亡率, Western blot检测细胞中细胞周期蛋白1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2 (B-cell lymphoma-2, Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白(Bcl-2-associatedXprotein,Bax)表达,双荧光素酶报告系统验证lncR NA DCST1-AS1和miR-874-3p的关系.结果与癌旁组织组相比,在RC组织组中lncRNA DCST1-AS1的含量显著升高(P 0.05), miR-874-3p含量显著降低(P0.05);与对照si-NC和miR-NC组比较, si-DCST1-AS1组和miR-874-3p组RCSW1463细胞的OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白含量均降低,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白含量均升高; lncRNA DCST1-AS1靶向负调控miR-874-3p的表达;与si-DCST1-AS1+anti-miRNC组比较, si-DCST1-AS1+anti-miR-874-3p组SW1463细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白含量升高,细胞凋亡率、p21和Bax含量降低.结论 lncRNADCST1-AS1通过靶向miR-874-3p调控RC SW1463细胞增殖和凋亡, lncRNA DCST1-AS1可能是RC潜在的分子靶点.     

干扰NCK1-AS1抑制乳腺癌细胞发生发展

目的 探索长链非编码RNA(lncRNA)NCK1-AS1在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用和分子机制。方法 定量逆转录PCR(RT-qPCR)和Western印迹检测25例乳腺癌组织和癌旁组织中NCK1-AS1、miR-361-5p与Rho相关蛋白激酶(ROCK)1蛋白的表达。将乳腺癌细胞分为si-NCK1-AS1组、si-NC组、miR-361-5p组、miR-NC组、si-NCK1-AS1+anti-miR-361-5p组和si-NCK1-AS1+anti-miR-NC组，应用细胞计数试剂盒(CCK)-8检测细胞抑制率，集落形成实验检测细胞集落形成数，划痕实验检测细胞迁移距离，Transwell实验检测细胞侵袭。荧光素酶活性检测分析NCK1-AS1与miR-361-5p、miR-361-5p与ROCK1的靶向关系。结果 乳腺癌组织中NCK1-AS1、ROCK1蛋白的表达水平比癌旁组织高，miR-361-5p表达水平比癌旁组织低，差异有统计学意义(P<0.05)。si-NCK1-AS1组乳腺癌细胞miR-361-5p表达水平、抑制率比si-NC组升高，ROCK1蛋白的表达水...     

沉默lncRNA TPT1-AS1对非小细胞肺癌生物学行为的影响及机制研究

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)TPT1-AS1在非小细胞肺癌组织中的表达及对沉默lncRNA TPT1-AS1非小细胞肺癌生物学行为的影响及机制。方法检测非小细胞肺癌组织和癌旁组织lncRNA TPT1-AS1表达情况,做细胞培养及lncRNA TPT1-AS1转染,分为空白组、过表达组、沉默组,过表达组转染si-TPT1-AS1-NC质粒,沉默组转染si-TPT1-AS1质粒,空白组细胞不做任何处理,转染24h后鉴定转染效率。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及PTEN-PI3K-AKT信号通路蛋白表达情况。结果与癌旁组织相比,癌组织TPT1-AS1 mRNA表达量升高(P0.05)。与空白组相比,过表达组TPT1-AS1 mRNA表达量升高,沉默组TPT1-AS1 mRNA表达量降低(P0.05),说明转染成功。与过表达组相比,沉默组各时间点细胞增殖率、细胞迁移数、侵袭数、p-PI3K、p-AKT、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量降低,凋亡率、PTEN、Bax蛋白表达量升高(P0.05)。结论 lncRNA TPT1-AS1在非小细胞肺癌组织高表达,沉默lncRNA TPT1-AS1可抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进凋亡,其机制可能与调控PTEN-PI3K-AKT信号通路相关。     

长链非编码RNA PCGEM1靶向miR-433-3p调控结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)PCGEM1影响结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法甲四基偶氮唑蓝(MTT)法测定HT-29细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证PCGEM1基因的转录活性,qRT-PCR检测PCGEM1和miR-433-3p mRNA表达。结果 qRT-PCR结果表明,与正常对照NCM460细胞相比,结直肠癌细胞HT-29中PCGEM1表达显著升高(P0.05),miR-433-3p表达显著下降(P0.05);下调PCGEM1表达可以抑制HT-29细胞增殖、迁移和侵袭;过表达miR-433-3p可抑制结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移、侵袭;PCGEM1参与负向调控miR-433-3p的表达;抑制miR-433-3p表达逆转了下调PCGEM1表达对HT-29细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 PCGEM1通过下调miR-433-3p表达诱导结直肠癌HT-29细胞增殖、迁移和侵袭。     

LncRNA FEZF1-AS1靶向miR-1254调控肝癌细胞的生物学行为

背景:肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人们生命健康。目前,越来越多研究证实长链非编码RNA(LncRNA)在癌症发生、进展中的作用。目的:探讨LncRNA FEZF1-AS1靶向miR-1254调控肝癌细胞生物学行为的分子机制。方法:采用qRT-PCR法检测肝癌组织和细胞株中FEZF1-AS1和miR-1254表达。将肝癌Hep3B细胞分为NC组、si-Lnc FEZF1-AS1组、si-con组、miR-1254组、miR-con组、si-Lnc FEZF1-AS1+anti-miR-con组、si-Lnc FEZF1-AS1+anti-miR-1254组。MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双萤光素酶报告基因实验验证FEZF1-AS1与miR-1254的靶向调控关系,蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达。结果:肝癌组织和3种肝癌细胞株中FEZF1-AS1表达显著高于相应癌旁组织和正常细胞,miR-1254表达显著降低。转染si-Lnc FEZF1-AS1或miR-1254 mimics均可显著抑制Hep3B细胞Ki-67、N-cadherin和Vimentin表达,促进cleaved caspase-3和E-cadherin蛋白表达,抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力,抑制EMT发生,促进细胞凋亡。FEZF1-AS1靶向负调控miR-1254表达。转染si-Lnc FEZF1-AS1可抑制PI3K/AKT信号通路活化。转染anti-miR-1254可逆转转染si-Lnc FEZF1-AS1对Hep3B细胞增殖、迁移、侵袭、EMT、凋亡以及PI3K/AKT信号通路的影响。结论:LncRNA FEZF1-AS1在肝癌患者中的表达上调。沉默LncRNA FEZF1-AS1通过靶向miR-1254抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭以及EMT发生,促进细胞凋亡,其机制与抑制PI3K/AKT信号通路活化有关。     

lncRNA CCDC183-AS1通过靶向miR-1301-3p调控胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭

背景长链非编码RNA(long non-coding RNA, lnc RNA)CCDC183-AS1在肝细胞癌中表达上调,促进肝细胞癌进展.但lnc RNA CCDC183-AS1对胃癌的影响及其分子机制还未知. Star Base预测显示, lnc RNA CCDC183-AS1可能靶向结合miR-1301-3p.本研究假设lnc RNA CCDC183-AS1可靶向调控miR-1301-3p影响胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,进而影响胃癌发展进程.目的探讨lnc RNA CCDC183-AS1对胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及其分子机制.方法选取本院30例胃癌组织及匹配的癌旁组织;实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-q PCR)检测lnc RNACCDC183-AS1和miR-1301-3p表达及变化;四甲基偶氮唑盐比色法(methy l thiazolyetelrazlium,MTT)检测细胞增殖, Transwell检测细胞迁移侵袭,蛋白质印迹(Western blot)检测细胞周期素D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2, MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)和p21蛋白的表达; AGS细胞中分别转染si-CCDC183-AS1、miR-1301-3p,并利用上述检测细胞增殖、迁移侵袭能力的变化;Star Base预测显示lnc RNACCDC183-AS1的序列中含有与miR-1301-3p互补的核苷酸序列,双荧光素酶报告实验鉴定其靶向关系.结果与癌旁组织比较,胃癌组织中lnc RNA CCDC183-AS1和miR-1301-3p的表达水平分别显著升高和降低(P 0.05).抑制lnc RNACCDC183-AS1表达或过表达miR-1301-3p后, AGS细胞的增殖和迁移侵袭能力下降, Cyclin D1、MMP-2和MMP-9表达水平降低, p21表达水平升高(P0.05). lnc RNA CCDC183-AS1靶向调控miR-1301-3p表达(P 0.05).下调miR-1301-3p表达逆转了抑制lnc RNA CCDC183-AS1表达对胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论抑制lnc RNA CCDC183-AS1通过靶向上调miR-1301-3p表达调控胃癌AGS细胞的增殖、迁移和侵袭.     

LncRNA ZBTB20-AS1靶向miR-132-3p/MAPT轴影响阿尔茨海默病的发生发展

目的探讨长链非编码(Lnc)RNA锌指蛋白ZBTB20反义RNA1(ZBTB20-AS1)靶向miR-132-3p/微管相关蛋白tau(MAPT)轴对阿尔茨海默病(AD)发生发展的影响。方法采用Aβ_(25～35)(20μmol/L)处理SK-N-SH细胞构建AD细胞模型。将si-con、si-ZBTB20-AS1、miR-con、miR-132-3p mimics、si-MAPT分别转染SK-N-SH细胞,经Aβ_(25～35)处理后,反转录及荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ZBTB20-AS1和miR-132-3p的表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测MAPT、细胞周期蛋白(Cyclin)D1和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase)-3的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证ZBTB20-AS1和miR-132-3p、miR-132-3p和MAPT的靶向关系。结果 AD细胞模型中ZBTB20-AS1和miR-132-3p的表达水平显著升高,MAPT的表达水平显著降低。沉默ZBTB20-AS1、过表达miR-132-3p或沉默MAPT均可促进SK-N-SH细胞增殖,抑制Aβ_(25～35)诱导的细胞凋亡。miR-132-3p是ZBTB20-AS1的靶基因,ZBTB20-AS1可靶向负性调控miR-132-3p表达。MAPT是miR-132-3p的靶基因,miR-132-3p可靶向调控MAPT表达。抑制miR-132-3p表达或过表达MAPT均可逆转沉默ZBTB20-AS1对Aβ_(25～35)诱导的SK-N-SH细胞增殖和凋亡的影响。结论沉默ZBTB20-AS1通过调控miR-132-3p/MAPT轴可促进SK-N-SH细胞增殖,抑制Aβ_(25～35)诱导的SK-N-SH细胞凋亡。     

PGM5-AS1抑制miR-4728-5p对宫颈癌细胞侵袭、转移的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)葡萄糖磷酸变位酶样蛋白5反义(PGM5-AS)1对微小RNA(miRNA)-4728-5p的靶向调控及对宫颈癌细胞侵袭、转移的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测宫颈癌组织中PGM5-AS1表达。在宫颈癌SiHa细胞中转染pcDNA3.1-PGM5-AS1或anti-miR-4728-5p。采用噻唑蓝(MTT)法检测SiHa细胞的增殖,平板克隆形成实验分析细胞的克隆形成,Transwell小室法评估细胞的侵袭迁移,Western印迹测定细胞中细胞增殖抗原Ki67、E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达。生物信息学预测与双荧光素酶报告实验验证PGM5-AS1对miR-4728-5p的靶向调控。qRT-PCR检测miR-4728-5p的表达。结果 宫颈癌组织中PGM5-AS1的表达量明显减少(P<0.05)。转染pcDNA3.1-PGM5-AS1显著降低SiHa细胞的细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki67和N-cadherin蛋白水平,并明显提高E-cadherin蛋白...     

lncRNA CBR3-AS1靶向调控miR-5195-3p促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的探讨长链非编码RNA CBR3-AS1(lncRNA CBR3-AS1)是否通过靶向调控miR-5195-3p的表达从而促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法体外培养正常胃上皮细胞GES-1与胃癌细胞系HGC-27、NCI-N87、AGS,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CBR3-AS1、miR-5195-3p的表达量;分别将si-NC、si-CBR3-AS1、si-CBR3-AS1与anti-miR-NC、si-CBR3-AS1与anti-miR-5195-3p转染至AGS细胞;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证CBR3-AS1、miR-5195-3p的靶向关系;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达量。结果与GES-1比较,胃癌细胞系HGC-27、NCI-N87、AGS中CBR3-AS1的表达水平显著升高(P0.05);与si-NC组比较,si-CBR3-AS1组细胞活力显著降低(P0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数显著减少(P0.05),E-cadherin蛋白水平显著升高(P0.05),N-cadherin蛋白水平显著降低(P0.05);双荧光素酶报告实验证实CBR3-AS1可靶向结合miR-5195-3p;与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+anti-miR-5195-3p组细胞活力显著升高(P0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数显著增多(P0.05),E-cadherin蛋白水平显著降低(P0.05),N-cadherin蛋白水平显著升高(P0.05)。结论 CBR3-AS1可能通过抑制miR-5195-3p的表达从而促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-509-3p靶向BCL2基因调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-509-3p(miR-509-3p)调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制。方法 qRT-PCR检测miR-509-3p、B淋巴细胞瘤(BCL)2在乳腺癌组织及不同乳腺癌细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-509-3p与BCL2之间的相互作用;噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测miR-509-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡能力的变化情况;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-509-3p对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭行为的变化情况;Western印迹检测miR-509-3p对BCL2、细胞周期蛋白(CyclinD)1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的调控情况。结果与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中miR-509-3p的表达水平显著下调(P<0.05),与其他乳腺癌细胞相比,乳腺癌MDA-MB-231细胞中miR-509-3p表达最低,而BCL2的表达水平相反;上调miR-509-3p表达MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05),而细胞凋亡水平明显升高(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平明显降低(P<0.05),而p21表达水平明显升高(P<0.05);miR-509-3p可靶向调控BCL2表达;上调BCL2表达可逆转上调miR-509-3p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的作用。结论 miR-509-3p能够靶向抑制BCL2而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。     

miR-660-3p下调REG4对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的研究miR-660-3p对胃癌MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测134例胃癌组织和癌旁组织中miR-660-3p的表达,MTT法和Transwell实验测定过表达miR-660-3p和REG4后MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测REG4、Cyclin D1、p21、E-cadherin和MPP-2蛋白的表达,双荧光素酶报告系统验证miR-660-3p与REG4的调控关系。结果与正常癌旁组织相比,胃癌组织中的miR-660-3p表达量显著降低(P 0. 05);抑制miR-660-3p可抑制MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭,抑制MGC-803中REG4、Cyclin D1和MPP-2表达(P 0. 05),促进p21和E-cadherin表达(P 0. 05); miR-660-3p靶向负调控REG4的表达;过表达REG4可逆转过表达miR-660-3p对MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-660-3p通过靶向REG4抑制MGC-803细胞的增殖、迁移和侵袭。miR-660-3p是胃癌的潜在分子靶点。     

LncRNA FoxP4-AS1靶向miR-136-5p影响人乳腺癌细胞株SKBR-3侵袭与迁移能力

目的 探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)FoxP4-AS1靶向微小核糖核酸(miR)-136-5p对人乳腺癌细胞株SKBR-3侵袭与迁移能力的作用。方法 将处于对数生长期的人乳腺癌细胞株SKBR-3分为FoxP4-AS1下调组(转染si-FoxP4-AS1)、FoxP4-AS1上调组(转染pcDNA-FoxP4-AS1)、FoxP4-AS1对照组(转染FoxP4-AS1-NC)、miR-136-5p下调组(转染miR-136-5p inhibitor)、miR-136-5p上调组(转染miR-136-5p mimic)、miR对照组(转染miR-NC)和空白组(不转染)。Transwell测定细胞侵袭、迁移能力；实时逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测FoxP4-AS1、miR-136-5p表达及迁移侵袭增强因子(MIEN)1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-9信使核糖核酸(mRNA)表达；Western印迹检测MIEN1、E-cadherin、MMP-9蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验验证FoxP4-AS1靶向调控miR-136-5p。结果...     

miR-23a/SATB2信号通路对结直肠癌SW480细胞凋亡和转移的影响

目的探讨miR-23a/SATB2信号通路对结直肠癌SW480细胞凋亡和转移的影响。方法在结直肠癌SW480细胞中转染miR-23a抑制剂(inhibitor),采用定量RT-PCR(qRT-PCR)法检测miR-23a mRNA相对表达量,CCK-8法检测细胞增殖,平板克隆法检测细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移,蛋白质印迹法(Western blotting)检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、剪切的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(C-Caspase-3)蛋白表达水平。靶基因预测软件预测SATB2可能成为miR-23a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在细胞中共转染SATB2小干扰RNA(siRNA)和miR-23a inhibitor,采用上述方法检测细胞增殖、克隆、凋亡、侵袭、迁移和MMP-2、C-Caspase-3蛋白表达水平的变化。结果转染miR-23a inhibitor可明显降低结直肠癌SW480细胞中miR-23a mRNA的相对表达量,抑制细胞增殖、克隆、侵袭、迁移和MMP-2蛋白表达,促进细胞凋亡和C-Caspase-3蛋白表达。SATB2受到miR-23a的靶向负调控作用。SATB2 siRNA可逆转下调miR-23a表达对结直肠癌SW480细胞增殖、克隆、侵袭、迁移的抑制作用和凋亡诱导作用。结论 miR-23a/SATB2信号通路具有调控结直肠癌SW480细胞凋亡和转移的潜能。     

miR-21靶向调控TET1促进结直肠癌HCT15和HT29细胞增殖、侵袭及迁移

目的探究miR-21对结直肠癌细胞生物学行为的影响以及潜在调控机制。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织中miR-21和TET1的表达水平并分析其相关性;利用生物信息学网站预测miR-21潜在靶基因TET1,利用双荧光素酶实验进行验证;利用细胞转染实验对两种结直肠癌细胞株进行miR-21 mimics、miR-21 inhibitor、si-TET1及相关对照的细胞转染,采用CCK-8分析、Transwell实验及细胞划痕实验检测转染后细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化;利用Western blotting实验检测转染后细胞中TET1蛋白的表达。结果 qRT-PCR结果显示,结直肠癌组织中miR-21呈高表达水平,TET1 mRNA呈低表达水平,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示TET1是miR-21的靶基因,miR-21表达引起结直肠癌细胞中TET1表达下调。细胞转染实验结果显示,miR-21促进细胞增殖、侵袭及迁移。Western blotting实验结果显示,转染miR-21 mimics抑制TET1蛋白表达,转染miR-21 inhibitor促进TET1蛋白表达。结论 miR-21通过靶向调控TET1促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移。     

长链非编码RNA CASC2通过靶基因miR-514b-5p调控结直肠癌细胞增殖、侵袭、迁移的作用机制

目的探讨肿瘤易感候选基因(CASC)2对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460和结直肠癌细胞SW480中CASC2和miR-514b-5p的表达水平;将pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-CASC2组(转染pcDNA-CASC2 mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-CASC2组(转染si-CASC2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-514b-5p组(转染anti-miR-514b-5p)、pcDNA-CASC2+miR-NC组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-NC)、pcDNA-CASC2+miR-514b-5p组(共转染pcDNA-CASC2 mimics和miR-514b-5p)、WT-CASC2+miR-NC组(共转染WT-CASC2和miR-NC)、WT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染WT-CASC2和miR-514b-5p mimics)、MUT-CASC2+miR-NC组(共转染MUT-UCA1和miR-NC)、MUT-CASC2+miR-514b-5p组(共转染MUT-CASC2和miR-514b-5p mimics)均用脂质体法转染至SW480细胞;采用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性。结果结直肠癌SW480细胞于正常结肠黏膜上皮细胞NCM460、CASC2的表达水平显著降低,miR-514b-5p的表达水平显著升高(P0.05);过表达CASC2、抑制表达miR-514b-5p均可抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭;CASC2可靶向调控miR-514b-5p的表达。miR-514b-5p过表达可部分逆转CASC2过表达对结直肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论长链非编码RNA CASC2可抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向miR-514b-5p基因有关,将可为结直肠癌的预防和治疗提供新靶点。     

槐角黄酮通过调控miR-188-5p/PRMT5基因表达对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的研究槐角黄酮对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMT)5和miR-188-5p mRNA的表达,Western印迹检测PRMT5、增殖相关蛋白细胞周期蛋白(Cyclin)D1和p21、迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-188-5p与PRMT5的调控关系,流式细胞术检测细胞凋亡。结果槐角黄酮可抑制肺癌细胞A549的侵袭、迁移和增殖,且呈显著的剂量依赖性;槐角黄酮可以促进A549细胞中miR-188-5p表达,抑制PRMT5表达;双荧光素酶报告系统实验结果表明,miR-188-5p靶向调控PRMT5的表达;过表达miR-188-5p和抑制PRMT5均可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;抑制miR-188-5p逆转了槐角黄酮对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论槐角黄酮通过miR-188-5p靶向PRMT5基因抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭。槐角黄酮对肺癌具有潜在治疗作用。     

lncR FOXD2-AS1调控miR-145-5p对非小细胞肺癌细胞生物学特性的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncR)FOXD2-AS1调控微小RNA(miR)-145-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化（EMT）等生物学特性的影响。方法 体外培养人NSCLC细胞系A549、H1299、SK-MES-1及人正常肺支气管上皮细胞系16HBE,应用RT-qPCR检测各细胞系中lncR-FOXD2-AS1和miR-145-5p表达。选取lncR-FOXD2-AS1相对高表达的SK-MES-1作为敲低实验的研究对象,将SK-MES-1细胞按照转染处理的不同分为NC组（转染si-NC）和si-FOXD2-AS1组（转染si-FOXD2-AS1）,转染后,RT-qPCR检测细胞中lncR-FOXD2-AS1、miR-145-5p表达,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Fibronectin蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证lncR-FOXD2-AS1和miR-145-5p的相互关系。结果 与16HBE细胞相比,l...